免疫比浊法和免疫投射比浊法(修改版)

mian对比研究免疫透射比浊法及免疫散射比浊法在血清免疫球蛋白检测中的应用效果【摘要】目的：对比应用免疫散射比浊法、免疫透射比浊法实施血清免疫球蛋白检测的效果。

方法：应用透射比浊法、散射比浊法对2013年5月-2014年9月期间在我院接受健康体检的82例健康人员进行血清免疫球蛋白检测，并对2种方法的检测结果进行比较分析。

结果：2组方法的检测结果较为相似，比较未存在显著性（P＞0.05）。

结论：使用透射比浊法、散射比浊法对患者实施血清免疫球蛋白检测均可取到相似的检测结果，但是免疫透射比浊法具有更好的精密度，检测误差更小。

【关键词】散射比浊法；免疫球蛋白；免疫球蛋白【中图分类号】R446.62 【文献标识码】B 【文章编号】1674-8999（2015）9-0671-02血清免疫球蛋白（Ig）为人体内极为重要的免疫蛋白，因此通过对血清免疫球蛋白进行检测可为人体免疫功能评定提高可靠参考依据[1]。

目前，临床上主要应用的血清免疫球蛋白检测方法主要有两种，分别为透射比浊法和散射比浊法。

本次研究主要对比该2中检测方法在临床应用中的效果，现将研究结果报告如下。

1 资料与方法1.1一般资料选择2013年5月-2014年9月期间在我院接受健康体检的82例健康人员作为研究对象，分别应用免疫透射比浊法、免疫散射比浊法对患者实施血清免疫球蛋白检测。

性别：男性49例，女性33例；年龄：最小为19岁，最大为75岁，平均年龄（37.1±2.8）岁。

1.2方法在研究过程中，分别应用免疫散射比浊法、免疫透射比浊法对82位研究对象的血清免疫球蛋白A、血清免疫球蛋白G、血清免疫球蛋白M进行常规性检测。

然后再使用该两种方法对研究对象的免疫球蛋白G进行精确检测。

本次研究的具体检测操作表现如下：在研究对象空腹的状态下进行静脉血抽取，抽取量为3ml。

在本次研究中，实施免疫透射比浊法检测时所应用的仪器主要为Olym pus AU640型全自动生化分析仪（生产企业：上海执诚生物技术有限公司），实施免疫散射比浊法检测时所使用的仪器主要为man lmmage 800蛋白分析仪（生产企业：上海以达进出口有限公司）。

图18-4 抗原抗体反应曲线在免疫比浊过程中，由于抗原抗体结合的三过程，从而导致光密度与浓度之间不呈线性关系，一般是3次方程曲线关系。

若将抗原与抗体两个变量之间的变动特征恰当地反映出来，需要经过3次方程拟合成近似直线化的曲线方程，再进行运算，免疫比浊中，采用终点法或速率法，用5个或7个不同梯度进行定标，经3次曲线方程求出一条能反映真实情况的浓度与光密度的关系曲线方程，才能作为定量的工作曲线。

二、血清ApoAⅠ（B100）透射比浊测定法脂蛋白抗原在溶液中与相应特异抗体形成抗原抗体复合物的混浊颗粒，分散于溶液介质中，在一定波长下测定其混浊程度，进行ApoAⅠ（B100）的定量测定。

（一）手工操作1．原理血清ApoAⅠ（B100）+抗人ApoAⅠ（B100）→抗原抗体复合物→测定光密度2．试剂（伊利康）（1）Apo缓冲液（RⅠ），含4%PEG6000和表面活性剂ApoAⅠ（B100）+抗人ApoAⅠ（B100）→抗原抗体复合物→测定吸光光密度2．双试剂单（双）波长法（1）试剂（温州伊利康）RⅠ：Apo缓冲液，含4% PEG6000和表面活性。

RⅡ：羊抗人ApoA（B100）稀释抗血清RⅢ：Apo定值血清（2）各试剂及标本用量如下表：项目血清Apo缓冲液（RⅠ）ApoAⅠ抗血清液（RⅡ）ApoB100抗血清液（RⅡ）ApoAⅠ2～5μl300～350μl80～100μlApoB100 2～5μl300～350μl80-100μl（3）定标：以5点Apo梯度浓度，采用免疫定标法按表18-21参数上机定标，如图18-5所示。

图18-5 ApoAⅠ 五点免疫定标曲线图（以CL-7200仪器为例）（4）上机（终点法或两点法）（5）说明：①Apo测定的光密度从340～700nm范围都可采用，多用340nm；②国内已有的Apo试剂盒均无需处理；③血清标本也无需处理，均可直接检测；④本法适用于多种类型的全自动生化分析仪检测，自动扣除空白，快速准确；⑤效价不同的抗血清，其用量应作适当的调整。

免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较刘少华;邓文平;李燕【摘要】目的探讨免疫透射比浊法和免疫散射比浊法测定免疫球蛋白(Ig)水平的关系.方法用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测252例健康体检人群的血清Ig,同时测定IgG高、低值水平,分析两种方法测定结果之间的关系.结果健康体检人群中血清IgG水平免疫透射比浊法[(11.46±4.92)g/L]测定与免疫散射比浊法[(11.85±3.72)g/L]测定相比,差异无统计学意义(P>0.05);免疫透射比浊法IgM[(1.51±1.06)g/L],免疫散射比浊法IgM[(1.60±0.91)g/L]和免疫透射比浊法IgA[(2.08±1.51)g/L],免疫散射比浊法IgA[(2.15±1.19)g/L]水平差异均无统计学意义(P>0.01).高、低值IgG用两种方法均可以测定.结论了解免疫功能水平时,测定Ig用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法均可,但免疫散射比浊法更有利于病情的监测.%Objective To compare transmission turbidity and scatter turbidity method on measuration of serum immunoglobulin (Ig) levels. Methods Serum Ig concentration was measured by transmission turbidity and scatter turbidity method in 252 healthy people. The high level and low level of IgG were also measured. The relationship between the two methods was analyzed. Results The results showed that the levels ofIgG[(11. 46 ±4. 92)g/L,(11. 85 ± 3. 72)g/L] ,IgM[(l. 51 ± 1. 06)g/L,(l. 60 ± 0.91)g/L] and IgA [(2. 08± 1. 51)g/L, (2. 15 ± 1. 19)g/L] had no significant difference in healthy people(P>0. 05) measured by transmission turbidity and scatter turbidity method. High and low level of IgG can detect by transmission turbidity and scatter turbidity method. Conclusion Transmission turbidity and scatter turbidity method can both be used fordetermination of IgG, while immune scatter turbidity method could be beneficial for evaluation of the disease condition.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2012(041)020【总页数】2页(P2034-2035)【关键词】散射测浊法和比浊法;免疫球蛋白【作者】刘少华;邓文平;李燕【作者单位】重庆市涪陵中心医院检验科,408000;重庆市涪陵中心医院检验科,408000;重庆市涪陵中心医院检验科,408000【正文语种】中文人体免疫球蛋白(Ig)测定，是检查人体免疫功能状态最直接而简单的方法，只有选择好的检测方法才能保证检验结果的准确性。

免疫透射比浊法一、原理当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。

这一方法早于1959年Schultre和Schuick等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。

其原理是，利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。

在介质溶液中，抗原与特异性抗体在一定条件下才能形成复合物，一定的条件包括：①对抗体的要求，作为体液或组织中蛋白质种类很多，若要快速特异检测，要求有单价特异抗体才能与抗原形成复合物。

某一种蛋白质，有其特异抗体才能与该抗原结合，形成免疫复合物进行定量，若抗体不纯混杂有另一种或两种少量的抗体，这种免疫复合物就不是单一复合物而是大杂烩，结果偏高；②抗原抗体比例适当，因免疫复合物形成有三个阶段，第一阶段是复合物形成抗原抗体复合物；第二阶段是初步形成抗原抗体复合物，此阶段是复合物交联成大的网格状结构；第三阶段是复合物聚合产生絮状沉淀。

只有在抗原与抗体等价时即无过剩抗体，此时，复合物的结合与解离处于平衡状态，其混浊程度达高峰。

在抗体过量时，随抗原量的增加而复合物形成也增加，其测定只能在反应曲线的左侧进行（见图18-4）；③一般要求溶液中有非离子性亲水多聚体促进免疫复合物的形成，如聚二乙醇6000等。

溶液pH为6.5～8.0之间为宜。

载脂蛋白有形成两性螺旋片（amphipathic helix）的特性，对脂质（特别是磷脂）有高度亲和力，与脂质结合后有时会掩盖抗原位点或构象改变，可以部分或完全丧失对抗血清的特异反应。

为此，载脂蛋白检测过程中有必要先暴露抗原位点，所用试剂有表面活性剂，尿素，盐酸胍和吐温等解离蛋白剂，或用四甲基脲脱脂或有机溶剂脱脂等暴露抗原决定簇等方法，血清脂蛋白颗粒中的载脂蛋白，能在短时间内形成抗原抗体复合物进行定量；④抗原不能过量，因为抗原过量，抗原抗体复合物形成不但不增加，反而会减少，光散射或光吸收减少，检测结果反而偏低。

免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较在临床上，对于人血清内特定蛋白的检测，一般是采取免疫散射比浊法、免疫透射比浊法进行检测;然而，在检测的过程中，如游离血红蛋白、脂蛋白等会对检测的结果带来一定的干扰，继而影响检测结果的准确性[1]。

对此，为保证血清检测的准确性，笔者对免疫透射比浊法、免疫散射比浊法在特定蛋白抗干扰能力的效果进行探讨，具体报道如下。

1.资料与方法1.1对象本次研究的样本源自于某医院门诊与住院患者当天的新鲜血清，其中排除存在脂血、溶血、浑浊等血清。

同时，事前准备好IgM、CRP等浓度不等的混合血清，具体为IgM低浓度1.0～1.5g/L，高浓度大于2.0g/L;CRP低浓度4～10mg/L，高浓度大于100mg/L。

1.2仪器设备选用Dade Behring BNProSpec特定蛋白测定仪、Roche Modular P全自动生化分析仪，试验所用试剂皆为仪器配套试剂。

同时选取三个干扰物，即FBil（游离胆红素）、CH（乳糜）、Hb（血红蛋白），每种干扰物各准备两瓶试剂盒，一瓶作为空白对照使用，另外，干扰物的浓度具体为FBil3280μmol/L、CH15000FTU、Hb49.6μmol/L[2]。

1.3研究方法首先，对混合血清进行制备，之后依据干扰试剂盒上的制备顺序，配制干扰物;将2ml的蒸馏水加入到每一个干扰物与空白对照内，复溶。

然后，按照1：9的比例，把已经准备好的干扰物和混合血清混合在一起，制作成干扰物样本，其中含有干扰物的为样本甲，未加干扰物为样本乙[3]。

把两个样本分别制定浓度不等的若干个样本，具体浓度见下表1所示。

最后采取特定蛋白测定仪与全自动生化分析仪展开特定蛋白的抗干扰试验检测，同时对其干扰率进行计算。

1.4统计学分析本次研究所得全部数据，均采取软件Excel加以分析与处理。

其中，干扰率计算公式为：含有干扰物组的均值减去空白对照组的均值，之后再除以空白对照组的均值。

免疫散射比浊法免疫散射比浊法是一种近年来发展迅速的检测技术，它是一种非常有效的检测方法，能够快速准确地检测出物质的病原体和药物抗体。

本文将重点讨论免疫散射比浊法的工作原理、优缺点以及实际应用。

首先，我们来看看免疫散射比浊法是如何工作的。

散射可以将一个物质分解成一系列衍射线，而比浊法则利用物质的衍射线的强度变化来检测物质的结构。

与其他衍射技术（如X射线衍射）相比，比浊可以更快速地检测物质结构，因为它可以利用衍射瓦数的变化来进行衍射数据的分析。

此外，比浊法也具有更高的灵敏度，因此能够检测出更多的病原体和药物抗体。

免疫散射比浊法的主要优点是检测速度快、灵敏度高、数据分析方便、精度高，能够在短时间内准确地检测出病原体和药物抗体。

另外，由于免疫散射比浊法所分析的数据是不可见的，因此可以有效避免偏见和偶然性，使得结果更加准确可靠。

但是，这种技术也存在一些弊端。

首先，免疫散射比浊仪的费用高昂，这一衍射装置的成本非常高，在普通实验室范围内难以实现；其次，免疫散射比浊法需要高精度的衍射装置，偶尔可能会受到其他衍射技术影响；最后，由于免疫散射比浊法只能检测物质的分子形状，因此无法直接检测物质的化学结构。

免疫散射比浊法在实际应用中被广泛应用于生物学领域，如检测病毒和细菌的形态及分子结构、检测抗体的类型及效力以及检测药物的活性成分以及作用机制等。

例如，近年来研究人员利用免疫散射比浊法成功地检测出了一种新型的HIV拮抗药物，它能够在体外有效抑制HIV病毒的复制。

此外，免疫散射比浊法还可用于分析生物分子活性成分，例如乳糖苷酶等，以及其他药物分子。

综上所述，免疫散射比浊法是一种技术上先进、灵敏度高、数据分析方便、精度高的检测技术，广泛应用于生物学领域，能够快速准确地检测出物质的病原体和药物抗体。

尽管其存在一定的缺点，但是它仍然是检测病原体和药物抗体的理想选择。

比浊法和干式免疫散射法说起比浊法和干式免疫散射法，可能大家的第一反应就是：什么鬼？一听这么长的名字，脑袋里是不是已经开始有点“嗡嗡”的感觉了？别急，今天就带你轻松聊聊这俩方法，保证你不光听得懂，甚至还能给旁边的人科普一下，耶，今天的你又长知识啦！咱们得从“比浊法”说起。

这个名字听起来有点儿“深奥”，但其实也没啥可怕的，简单来说，就是通过“浑浊度”来判断溶液中物质的浓度。

就是这么简单，没错！你想，水里放了一点儿粉末或者其他东西，溶液就会变得有点儿“模糊”起来，或者说，看起来有点儿混混的。

通过测量这个混浊的程度，就能估算出溶液中物质的多少。

想象一下，就像你往水里丢了点儿泥土，水变得又脏又不清澈，咱们就能根据“脏”得有多厉害来判断泥土有多少。

这不就是比浊法的精髓吗？它就是这么靠眼睛和一些简单的仪器来“看”出来东西多少的，感觉是不是挺直观又有趣的？讲讲“干式免疫散射法”。

乍一听，这名字好像有点高大上，但其实它就是把一种叫“免疫反应”的东西给“干”了。

什么意思呢？说白了，就是咱们用一种很特别的反应来检测液体中的某些物质，而且这过程不需要像以前那样把所有东西都弄湿。

想象一下，你要去参加个派对，穿得干干净净，不想弄脏衣服，就通过观察你周围的环境来判断你是不是到达了目标，没弄脏衣服就更省心，是不是？干式免疫散射法就是这么干净利索，反应也非常精准。

它通过免疫反应“接住”了液体中的特定分子，像是一位猎手，精准无误地找到猎物，而这种反应会让溶液的散射光变化。

嘿嘿，通过这种光的变化，我们就能知道溶液里目标物质的浓度啦！可能你又要问了：“那它们到底有啥区别呢？”嗯，这就得看你是更喜欢“眼观六路”式的简单方法，还是想要更精准一点的检测了。

比浊法呢，更依赖肉眼观察和测量，虽然简单，但它的准确性可能就稍差点。

要是溶液特别清澈，或者有其他杂质干扰，可能就得让人头疼了。

比如说，要是你拿的是个特别清透的矿泉水瓶，水一点不浑浊，你怎么知道瓶子里是不是放了你想知道的物质呢？就有点不太好判断了，对吧？不过，干式免疫散射法就不同啦！它可不怕这个。