免疫比浊法和免疫投射比浊法(修改版)
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mian对比研究免疫透射比浊法及免疫散射比浊法在血清免疫球蛋白检测中的应用效果【摘要】目的:对比应用免疫散射比浊法、免疫透射比浊法实施血清免疫球蛋白检测的效果。
方法:应用透射比浊法、散射比浊法对2013年5月-2014年9月期间在我院接受健康体检的82例健康人员进行血清免疫球蛋白检测,并对2种方法的检测结果进行比较分析。
结果:2组方法的检测结果较为相似,比较未存在显著性(P>0.05)。
结论:使用透射比浊法、散射比浊法对患者实施血清免疫球蛋白检测均可取到相似的检测结果,但是免疫透射比浊法具有更好的精密度,检测误差更小。
【关键词】散射比浊法;免疫球蛋白;免疫球蛋白【中图分类号】R446.62 【文献标识码】B 【文章编号】1674-8999(2015)9-0671-02血清免疫球蛋白(Ig)为人体内极为重要的免疫蛋白,因此通过对血清免疫球蛋白进行检测可为人体免疫功能评定提高可靠参考依据[1]。
目前,临床上主要应用的血清免疫球蛋白检测方法主要有两种,分别为透射比浊法和散射比浊法。
本次研究主要对比该2中检测方法在临床应用中的效果,现将研究结果报告如下。
1 资料与方法1.1一般资料选择2013年5月-2014年9月期间在我院接受健康体检的82例健康人员作为研究对象,分别应用免疫透射比浊法、免疫散射比浊法对患者实施血清免疫球蛋白检测。
性别:男性49例,女性33例;年龄:最小为19岁,最大为75岁,平均年龄(37.1±2.8)岁。
1.2方法在研究过程中,分别应用免疫散射比浊法、免疫透射比浊法对82位研究对象的血清免疫球蛋白A、血清免疫球蛋白G、血清免疫球蛋白M进行常规性检测。
然后再使用该两种方法对研究对象的免疫球蛋白G进行精确检测。
本次研究的具体检测操作表现如下:在研究对象空腹的状态下进行静脉血抽取,抽取量为3ml。
在本次研究中,实施免疫透射比浊法检测时所应用的仪器主要为Olym pus AU640型全自动生化分析仪(生产企业:上海执诚生物技术有限公司),实施免疫散射比浊法检测时所使用的仪器主要为man lmmage 800蛋白分析仪(生产企业:上海以达进出口有限公司)。
实验测试方法免疫比浊法原理免疫比浊法(immunoturbidimetry)是一种常用的实验测试方法,用于测定血清或尿液中特定分析物质的浓度。
它基于免疫学原理,通过测量可见光的散射程度来获得目标物质的浓度信息。
在实验中,样品中的目标物质与专门设计的抗原抗体反应,形成可见性沉淀物,从而引起溶液的浑浊程度的变化。
免疫比浊法的原理可以概括为以下几个步骤:1.抗原抗体反应:在实验开始前,需要将抗原抗体组分预先混合。
抗原可以是目标物质的衍生物或合成物,而抗体是特异性识别和结合抗原的蛋白质。
2.沉淀形成:向样品中加入混合的抗原抗体溶液,使其与样品中的目标物质相互作用。
当目标物质存在于样品中时,抗体会识别并与其结合,形成可见性沉淀物。
3.光散射测量:实验中使用的光散射测量器可以测量光线通过沉淀物混浊的溶液时的散射程度。
目标物质的浓度越高,形成的沉淀物越多,溶液的浑浊程度越高,从而引起更强的散射。
4.标准曲线计算:为了准确测量目标物质的浓度,需要根据已知浓度的标准品制备一条标准曲线。
标准品的浓度范围一般从低浓度到高浓度逐步增加。
通过测量标准品和待测样品的散射程度,并使用标准曲线进行外推和内推,可以得出待测样品中目标物质的浓度。
免疫比浊法的优点包括操作简单、结果快速、成本较低和高灵敏度。
然而,它也存在一些限制和注意事项。
由于光散射测量主要基于理论计算,因此需要确保实验中的测量条件如温度、光源强度和检测器的响应都是稳定和准确的。
另外,免疫比浊法在样品中可能存在其他干扰物质时可能会失去灵敏度和特异性。
因此,在进行免疫比浊法实验时,需要进行一系列的控制实验来检测和排除干扰因素。
除了免疫比浊法,还有其他一些常用的免疫学方法,如酶联免疫吸附试验(ELISA)和放射免疫分析(RIA)。
这些方法在分析物质浓度的测量范围、特异性和精确度方面可能略有不同。
因此,在选择适当的实验方法时,需要考虑样品性质、目标物质的特征和实验室的设备和技术条件。
免疫比浊法和免疫投射比浊法1.定义:(1)免疫比浊法:在一定量的抗体中分别加入递增量的抗原,经一定时间后形成抗原抗体复合物,用浊度计测量反应液体的浊度,并由此推算样品中的抗原含量。
(2)免疫投射比浊法:当光线通过一个浑浊介质溶液时,由于溶液中存在混浊颗粒,光线被吸收一部分,吸收的多少与混浊颗粒的量成正比,这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。
一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法,称为免疫透射比浊法。
2.原理(1)免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。
其基本原理是:当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时,形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂(聚乙二醇等)的作用下,自液相析出,形成微粒,使反应液出现浊度。
当抗体浓度固定时,形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加,反应液的浊度也随之增加。
通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照,即可计算出检样中抗原的含量。
(2)免疫透射比浊法是抗原抗体结合后,形成免疫复合物,在一定时间内复合物聚合出现浊度。
当光线通过溶液时,可被免疫复合物吸收。
免疫复合物量越多,光线吸收越多。
光线被吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。
利用比浊计测定光密度值,复合物的含量与光密度值成正比,同样当抗体量一定时,光密度值也与抗原含量成正比。
本法较单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法敏感、快速简便,但要求免疫复合物的数量和分子量达到一定高度,否则就难以测出。
3.关系4.免疫比浊法适用的仪器紫外可见分光光度计全自动生化仪全自动生化仪常见的检测方法终点法连续检测法比浊法均相酶免疫分析。
免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较刘少华;邓文平;李燕【摘要】目的探讨免疫透射比浊法和免疫散射比浊法测定免疫球蛋白(Ig)水平的关系.方法用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测252例健康体检人群的血清Ig,同时测定IgG高、低值水平,分析两种方法测定结果之间的关系.结果健康体检人群中血清IgG水平免疫透射比浊法[(11.46±4.92)g/L]测定与免疫散射比浊法[(11.85±3.72)g/L]测定相比,差异无统计学意义(P>0.05);免疫透射比浊法IgM[(1.51±1.06)g/L],免疫散射比浊法IgM[(1.60±0.91)g/L]和免疫透射比浊法IgA[(2.08±1.51)g/L],免疫散射比浊法IgA[(2.15±1.19)g/L]水平差异均无统计学意义(P>0.01).高、低值IgG用两种方法均可以测定.结论了解免疫功能水平时,测定Ig用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法均可,但免疫散射比浊法更有利于病情的监测.%Objective To compare transmission turbidity and scatter turbidity method on measuration of serum immunoglobulin (Ig) levels. Methods Serum Ig concentration was measured by transmission turbidity and scatter turbidity method in 252 healthy people. The high level and low level of IgG were also measured. The relationship between the two methods was analyzed. Results The results showed that the levels ofIgG[(11. 46 ±4. 92)g/L,(11. 85 ± 3. 72)g/L] ,IgM[(l. 51 ± 1. 06)g/L,(l. 60 ± 0.91)g/L] and IgA [(2. 08± 1. 51)g/L, (2. 15 ± 1. 19)g/L] had no significant difference in healthy people(P>0. 05) measured by transmission turbidity and scatter turbidity method. High and low level of IgG can detect by transmission turbidity and scatter turbidity method. Conclusion Transmission turbidity and scatter turbidity method can both be used fordetermination of IgG, while immune scatter turbidity method could be beneficial for evaluation of the disease condition.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2012(041)020【总页数】2页(P2034-2035)【关键词】散射测浊法和比浊法;免疫球蛋白【作者】刘少华;邓文平;李燕【作者单位】重庆市涪陵中心医院检验科,408000;重庆市涪陵中心医院检验科,408000;重庆市涪陵中心医院检验科,408000【正文语种】中文人体免疫球蛋白(Ig)测定,是检查人体免疫功能状态最直接而简单的方法,只有选择好的检测方法才能保证检验结果的准确性。
免疫透射比浊法一、原理当光线通过一个浑浊介质溶液时,由于溶液中存在混浊颗粒,光线被吸收一部分,吸收的多少与混浊颗粒的量成正比,这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。
这一方法早于1959年Schultre和Schuick等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物,导致浊度的改变,再进行透射比浊测定,一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法,称为免疫透射比浊法。
其原理是,利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物,通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。
在介质溶液中,抗原与特异性抗体在一定条件下才能形成复合物,一定的条件包括:①对抗体的要求,作为体液或组织中蛋白质种类很多,若要快速特异检测,要求有单价特异抗体才能与抗原形成复合物。
某一种蛋白质,有其特异抗体才能与该抗原结合,形成免疫复合物进行定量,若抗体不纯混杂有另一种或两种少量的抗体,这种免疫复合物就不是单一复合物而是大杂烩,结果偏高;②抗原抗体比例适当,因免疫复合物形成有三个阶段,第一阶段是复合物形成抗原抗体复合物;第二阶段是初步形成抗原抗体复合物,此阶段是复合物交联成大的网格状结构;第三阶段是复合物聚合产生絮状沉淀。
只有在抗原与抗体等价时即无过剩抗体,此时,复合物的结合与解离处于平衡状态,其混浊程度达高峰。
在抗体过量时,随抗原量的增加而复合物形成也增加,其测定只能在反应曲线的左侧进行(见图18-4);③一般要求溶液中有非离子性亲水多聚体促进免疫复合物的形成,如聚二乙醇6000等。
溶液pH为6.5~8.0之间为宜。
载脂蛋白有形成两性螺旋片(amphipathic helix)的特性,对脂质(特别是磷脂)有高度亲和力,与脂质结合后有时会掩盖抗原位点或构象改变,可以部分或完全丧失对抗血清的特异反应。
为此,载脂蛋白检测过程中有必要先暴露抗原位点,所用试剂有表面活性剂,尿素,盐酸胍和吐温等解离蛋白剂,或用四甲基脲脱脂或有机溶剂脱脂等暴露抗原决定簇等方法,血清脂蛋白颗粒中的载脂蛋白,能在短时间内形成抗原抗体复合物进行定量;④抗原不能过量,因为抗原过量,抗原抗体复合物形成不但不增加,反而会减少,光散射或光吸收减少,检测结果反而偏低。
免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较在临床上,对于人血清内特定蛋白的检测,一般是采取免疫散射比浊法、免疫透射比浊法进行检测;然而,在检测的过程中,如游离血红蛋白、脂蛋白等会对检测的结果带来一定的干扰,继而影响检测结果的准确性[1]。
对此,为保证血清检测的准确性,笔者对免疫透射比浊法、免疫散射比浊法在特定蛋白抗干扰能力的效果进行探讨,具体报道如下。
1.资料与方法1.1对象本次研究的样本源自于某医院门诊与住院患者当天的新鲜血清,其中排除存在脂血、溶血、浑浊等血清。
同时,事前准备好IgM、CRP等浓度不等的混合血清,具体为IgM低浓度1.0~1.5g/L,高浓度大于2.0g/L;CRP低浓度4~10mg/L,高浓度大于100mg/L。
1.2仪器设备选用Dade Behring BNProSpec特定蛋白测定仪、Roche Modular P全自动生化分析仪,试验所用试剂皆为仪器配套试剂。
同时选取三个干扰物,即FBil(游离胆红素)、CH(乳糜)、Hb(血红蛋白),每种干扰物各准备两瓶试剂盒,一瓶作为空白对照使用,另外,干扰物的浓度具体为FBil3280μmol/L、CH15000FTU、Hb49.6μmol/L[2]。
1.3研究方法首先,对混合血清进行制备,之后依据干扰试剂盒上的制备顺序,配制干扰物;将2ml的蒸馏水加入到每一个干扰物与空白对照内,复溶。
然后,按照1:9的比例,把已经准备好的干扰物和混合血清混合在一起,制作成干扰物样本,其中含有干扰物的为样本甲,未加干扰物为样本乙[3]。
把两个样本分别制定浓度不等的若干个样本,具体浓度见下表1所示。
最后采取特定蛋白测定仪与全自动生化分析仪展开特定蛋白的抗干扰试验检测,同时对其干扰率进行计算。
1.4统计学分析本次研究所得全部数据,均采取软件Excel加以分析与处理。
其中,干扰率计算公式为:含有干扰物组的均值减去空白对照组的均值,之后再除以空白对照组的均值。
免疫透射比浊法一、原理当光线通过一个浑浊介质溶液时,由于溶液中存在混浊颗粒,光线被吸收一部分,吸收的多少与混浊颗粒的量成正比,这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。
这一方法早于1959年Schultre和Schuick 等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物,导致浊度的改变,再进行透射比浊测定,一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法,称为免疫透射比浊法。
其原理是,利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物,通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。
在介质溶液中,抗原与特异性抗体在一定条件下才能形成复合物,一定的条件包括:①对抗体的要求,作为体液或组织中蛋白质种类很多,若要快速特异检测,要求有单价特异抗体才能与抗原形成复合物。
某一种蛋白质,有其特异抗体才能与该抗原结合,形成免疫复合物进行定量,若抗体不纯混杂有另一种或两种少量的抗体,这种免疫复合物就不是单一复合物而是大杂烩,结果偏高;②抗原抗体比例适当,因免疫复合物形成有三个阶段,第一阶段是复合物形成抗原抗体复合物;第二阶段是初步形成抗原抗体复合物,此阶段是复合物交联成大的网格状结构;第三阶段是复合物聚合产生絮状沉淀。
只有在抗原与抗体等价时即无过剩抗体,此时,复合物的结合与解离处于平衡状态,其混浊程度达高峰。
在抗体过量时,随抗原量的增加而复合物形成也增加,其测定只能在反应曲线的左侧进行(见图18-4);③一般要求溶液中有非离子性亲水多聚体促进免疫复合物的形成,如聚二乙醇6000等。
溶液pH为6.5~8.0之间为宜。
载脂蛋白有形成两性螺旋片(amphipathic helix)的特性,对脂质(特别是磷脂)有高度亲和力,与脂质结合后有时会掩盖抗原位点或构象改变,可以部分或完全丧失对抗血清的特异反应。
为此,载脂蛋白检测过程中有必要先暴露抗原位点,所用试剂有表面活性剂,尿素,盐酸胍和吐温等解离蛋白剂,或用四甲基脲脱脂或有机溶剂脱脂等暴露抗原决定簇等方法,血清脂蛋白颗粒中的载脂蛋白,能在短时间内形成抗原抗体复合物进行定量;④抗原不能过量,因为抗原过量,抗原抗体复合物形成不但不增加,反而会减少,光散射或光吸收减少,检测结果反而偏低。
免疫比浊法和免疫投射比浊法
1.定义:
(1)免疫比浊法:在一定量的抗体中分别加入递增量的抗原,经一定时间后形成抗原抗体复合物,用浊度计测量反应液体的浊度,并由此推算样品中的抗原含量。
(2)免疫投射比浊法:当光线通过一个浑浊介质溶液时,由于溶液中存在混浊颗粒,光线被吸收一部分,吸收的多少与混浊颗粒
的量成正比,这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。
一般
采用抗体对抗原定量的透射比浊法,称为免疫透射比浊法。
2.原理
(1)免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。
其基本原理是:当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规
定抗体过量)时,形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促
聚剂(聚乙二醇等)的作用下,自液相析出,形成微粒,使
反应液出现浊度。
当抗体浓度固定时,形成的免疫复合物的
量随着检样中抗原量的增加而增加,反应液的浊度也随之增
加。
通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照,即可计算
出检样中抗原的含量。
(2)免疫透射比浊法是抗原抗体结合后,形成免疫复合物,在一定时间内复合物聚合出现浊度。
当光线通过溶液时,可被免
疫复合物吸收。
免疫复合物量越多,光线吸收越多。
光线被
吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。
利用比浊
计测定光密度值,复合物的含量与光密度值成正比,同样当抗体量一定时,光密度值也与抗原含量成正比。
本法较单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法敏感、快速简便,但要求免疫复合物的数量和分子量达到一定高度,否则就难以测出。
3.关系
4.免疫比浊法适用的仪器
紫外可见分光光度计
全自动生化仪
全自动生化仪常见的检测方法
终点法
连续检测法
比浊法
均相酶免疫分析。