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免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较目的：对免疫透射比浊法与免疫散射比浊法在检测特定蛋白抗干扰能力的效果进行对比。
方法：收集血清样本，且制作浓度不同的特定蛋白混合血清，同时将比例不同的两种干扰物置于混合血清当中，之后再用免疫透射比浊法、免疫散射比浊法对其进行测定，且对干扰率加以计算，以了解两种检测方法的抗干扰能力。
结果：CH在9000与15000时，免疫散射比浊法对IgM进行检测受到干扰;Hb在9.9与29.8浓度时，免疫散射比浊法对高浓度IgM、低浓度CRP检测时受到干扰;采取免疫透射比浊法对三种含有干扰物的特定蛋白进行检测时，未受到任何干扰影响。
结论：在对CH、Hb等干扰物的抗干扰能力方面，免疫透射比浊法比免疫散射比浊法更为优越。
标签：特定蛋白;免疫透射比浊法;免疫散射比浊法在临床上，对于人血清内特定蛋白的检测，一般是采取免疫散射比浊法、免疫透射比浊法进行检测;然而，在检测的过程中，如游离血红蛋白、脂蛋白等会对检测的结果带来一定的干扰，继而影响检测结果的准确性[1]。
对此，为保证血清检测的准确性，笔者对免疫透射比浊法、免疫散射比浊法在特定蛋白抗干扰能力的效果进行探讨，具体报道如下。
1.资料与方法1.1对象本次研究的样本源自于某医院门诊与住院患者当天的新鲜血清，其中排除存在脂血、溶血、浑浊等血清。
同时，事前准备好IgM、CRP等浓度不等的混合血清，具体为IgM低浓度1.0～1.5g/L，高浓度大于2.0g/L;CRP低浓度4～10mg/L，高浓度大于100mg/L。
1.2仪器设备选用Dade Behring BNProSpec特定蛋白测定仪、Roche Modular P全自动生化分析仪，试验所用试剂皆为仪器配套试剂。
同时选取三个干扰物，即FBil（游离胆红素）、CH（乳糜）、Hb（血红蛋白），每种干扰物各准备两瓶试剂盒，一瓶作为空白对照使用，另外，干扰物的浓度具体为FBil3280μmol/L、CH15000FTU、Hb49.6μmol/L[2]。
临床医学检验：临床检验仪器真题1、问答题常用的离心方法分几类？正确答案：常用的离心方法大致可分为平衡离心法、等密度离心法、经典式沉降平衡离心法等三类。
2、问答题简述蛋白质测序仪的主要应用。
正确答案：蛋白质测序仪（江南博哥）获得的蛋白质序列信息主要应用在以下三个方面。
（1）新蛋白质的鉴定：在凝胶电泳中出现的未知条带可以利用蛋白质测序仪来测定其序列，为探索蛋白质的功能提供线索。
（2）分子克隆探针的设计：是蛋白质序列信息的基本用途之一。
用蛋白质序列信息设计PCR引物和寡核甘酸探针。
可以利用这些探针进行cDNA文库或基因组文库的筛选。
（3）抗原的人工多肽合成：由合成多肽免疫产生的抗体常用来证实和纯化新发现的蛋白质。
此外，合成的多肽类似物能够揭示蛋白质重要结构特征和提示蛋白质的功能特性。
3、问答题第三代自动血培养仪有哪些性能特点？正确答案：（1）培养基营养丰富；（2）以连续、恒温、振荡方式培养，细菌易于生长；（3）培养瓶多采用不易碎材料制成，提高了使用的安全性；（4）采用封闭式非侵入性的瓶外监测方式，避免标本交叉感染，且无放射性污染；（5）自动连续监测，缩短了检测时间，阳性标本检测可快速、准确；（6）结果报告及时，85%以上的阳性标本能在48小时内被检出；（7）培养瓶多采用双条形码技术，只需用电脑上的条码阅读器扫描报告单上的条码，就可直接查询到病人的结果及生长曲线；（8）培养瓶可随时放入培养系统，并进行追踪检测；（9）数据处理功能较强，数据管理系统随时监测感应器的读数，依据数据的变化来判定标本的阳性或阴性，并可进行流行病学的统计分析；（10）设有内部质控系统，可保证仪器的正常运转；（11）可进行血液及所有无菌体液的细菌培养检测。
4、单选库尔特原理中血细胞的电阻与电解质溶液电阻的关系是OoA.相等B.大于C.小于D.大于或等于E.小于或等于正确答案：B5、问答题电泳技术根据分离原理如何分类？正确答案：根据分离原理可分为移界电泳、区带电泳、等速电泳、等电聚焦、免疫电泳等。
散射比浊法是指一定波长的光沿水平轴照射，通过溶液使遇到抗原抗体复合物粒子，光线被粒子颗粒折射，发生偏转，光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物颗粒大小和多少密切相关。
散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测抗原越多，形成的复合物也越多，散射光也越强。
散射光的强度还与各种物理因素，如加入抗原或抗体的时间、光源的强弱和波长、测量角度等密切相关。
（一）散射颗粒与散射光悬浮在反应溶液中的分子，无论是固体或胶体粒子都可以是散射中心，当入射光通过时，如果颗粒直径比入射光的波长小很多，则散射光的分布比较均匀，称为Rayleigh散射。
如果颗粒直径接近于入射光的波长，则散射光的分布明显不均匀，称为Mile散射。
（二）反应物含量与散射浊度抗原抗体结合反应中，遵守典型的Heidelberger曲线，即当抗体量恒定时，抗原与抗体结合，形成免疫复合物的反应与散射信号响应值的上升呈正比。
免疫比浊法原理
免疫比浊法是检测类风湿因子的方法，是利用抗原和抗体相互结合，动态测定类风湿因子的方法，基本原理是抗原、抗体在特定稀释系统中反应，比例合适的时候形成可溶性免疫复合物，在稀释系统中的促凝剂作用下，从液体状态析出形成微粒，使反应液混浊，抗体浓度固定的时候形成的免疫复合物量，会随检测样中抗原量增加，反应液混浊度也会随之增加。
通过测定反应液的浊度，与一系列标准品进行对比，可以计算出检测样品中抗原含量。
所以，免疫比浊法是检测类风湿因子的定量检查，有时候在测定类风湿因子的时候会将检测方法写在检查结果后面，有利于临床医生对结果做出比较规范的判断。
在临床上也会采用其他检测方法进行类风湿因子的检测，有的是定性检测，报告只出现阴性、阳性结果，没有具体数值。
免疫比浊法是一种检测类风湿性因子的方法，是利用抗原抗体相互结合，动态测定类风湿因子的方法，其基本原理是：抗原、抗体在特定稀释系统中反应，适当比例后形成可
溶性免疫复合物，在稀释系统中的促凝剂作用下，从液体状态析出形成微粒，使反应液混浊，当抗体浓度固定时，所形成的免疫复合物量，就会随检测样中抗原量增加，反应液混浊度也会随之增加。
用该反应液测定浊度，并与标准系列产品对比，可计算出检测样品中抗原含量。
免疫比浊法和免疫投射比浊法1.定义：（1）免疫比浊法：在一定量的抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间后形成抗原抗体复合物，用浊度计测量反应液体的浊度，并由此推算样品中的抗原含量。
（2）免疫投射比浊法：当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。
一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。
2.原理（1）免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。
其基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。
当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。
通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。
（2）免疫透射比浊法是抗原抗体结合后，形成免疫复合物，在一定时间内复合物聚合出现浊度。
当光线通过溶液时，可被免疫复合物吸收。
免疫复合物量越多，光线吸收越多。
光线被吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。
利用比浊计测定光密度值，复合物的含量与光密度值成正比，同样当抗体量一定时，光密度值也与抗原含量成正比。
本法较单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法敏感、快速简便，但要求免疫复合物的数量和分子量达到一定高度，否则就难以测出。
3.关系4．免疫比浊法适用的仪器紫外可见分光光度计全自动生化仪全自动生化仪常见的检测方法终点法连续检测法比浊法均相酶免疫分析。
高敏C反应蛋白检验方法及原理目前，高敏C反应蛋白（high sensitive C-reaction protein，hs-CRP）的测定以透射比浊法为主，主要在自动生化分析仪上完成。
一、免疫透射比浊法（一）原理用包被有抗人C反应蛋白（C-reaction protein，CRP）抗体的微粒试剂与含有CRP的样品在适宜条件下反应，形成抗原-抗体复合物，导致反应液浊度的增加，导致550nm波长处的吸光度增加，吸光度的增加量与CRP的浓度成比例，根据这一原理即可求得待测样品的浓度。
如测定方法的灵敏度能达到0.3mg/L的高敏感性，可确定CRP 的轻微升高，则称hs-CRP。
（二）主要试剂由试剂盒提供，可能会略有不同，主要包括：包被有抗人CRP抗体的冻干粉、分析缓冲液等。
（三）操作步骤严格按照试剂盒说明书上机操作，主要测定参数如下：①分析方法：两点终点法。
②测光点：15～31。
③样品/R1/ R3：12/240/20。
④波长：546nm。
（四）参考区间0～3.0mg/L。
（五）评价1.首次测定不用稀释，如果测定结果超过测量范围，用0.9%NaCl 稀释并充分混匀后再测定。
2.样品混浊会影响测定，轻微混浊的标本均应2000g离心15分钟后再测定。
下列浓度的干扰物对本法无影响：Hb ≤5g/L，TG≤10mmol/L，TB≤400μmol/L，RF≤500IU/ml。
3.样品可为新鲜或冷冻的血浆或血清，血清和EDTA或肝素抗凝的血浆可于冰箱中保存7天，血清和肝素抗凝的血浆在-20℃可以保存6个月。
二、ELISA法（一）原理双抗体夹心法，参见缺血修饰清蛋白的ELISA法测定。
（二）主要试剂由试剂盒提供，可能会略有不同，主要包括：CRP抗血清、CRP 标准液、酶标抗CRP抗体、包被液、洗涤液、稀释液、底物液、终止液等。
（三）操作步骤严格按照试剂盒说明书操作，主要步骤如下：包被→加样→加酶标记抗体→显色与终止。
第十一章临床免疫检验仪器一、名词解释1.酶免疫分析技术：利用酶的高效催化和放大作用与特异性免疫反应结合而建立的一种标记免疫技术。
2.均相酶免疫分析法：检测过程中抗原抗体反应后，无需分离结合和游离的酶标记物，直接根据反应前后酶活性的改变进行待检物质测定的分析方法。
3.非均相酶免疫分析法：在酶免疫测定中，抗原抗体反应达到平衡后，需分离游离的和与抗原(或抗体)结合形成复合物的酶标记物，然后对经酶催化的底物显色程度进行测定，再推算出样品中待测抗原(或抗体)含量的分析方法。
4.发光免疫分析技术：利用化学发光现象，根据物质发光的不同特征，即辐射光波长、发光的光子数，与产生辐射的物质分子的结构常数、构型、数量等密切相关，通过受激分子发射的光谱、发光衰减常数、发光方向等来判断分子的属性及发光强度进而判断物质的量的免疫分析技术。
5.免疫浊度检测：将液相内的沉淀试验与现代光学仪器和自动分析技术相结合的一项分析技术。
6.放射免疫分析技术：以放射性核素为标记物的标记免疫分析技术。
7.非均相荧光免疫测定法：抗原抗体反应后，先把Ab*Ag 与Ab*分离，然后测定Ab*Ag 或A b*中的标记物的量，从而推算出标本中的A g 量的方法。
8.均相荧光免疫测定法：抗原抗体反应后，Ab*Ag 中的标记物失去荧光特性，不需进行A b*Ag 与A b*的分离直接测定游离的A b*量，从而推算出标本中的A g 量的方法。
9.闪烁体：是将核辐射能激发分子转化成可探测闪光的荧光物质。
常用的有有机闪烁体、无机闪烁体和特殊闪烁体等。
10.时间分辨荧光免疫分析：时间分辨荧光免疫测定是用镧系稀土元素及其螯合物(如 Eu3+螯合物) 作为示踪物标记抗原、抗体、核酸探针等物质，检测标本中的相应抗原或抗体的荧光免疫测定技术。
11.化学发光免疫技术：在检测化学反应中，某些化学基团被氧化后形成激发态，并在返回基态的同时发射一定波长的光子。
仪器利用这种化学基团标记在免疫分析的抗原或抗体上所建立起来的免疫分析为化学发光免疫分析。
免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较刘少华;邓文平;李燕【摘要】目的探讨免疫透射比浊法和免疫散射比浊法测定免疫球蛋白(Ig)水平的关系.方法用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测252例健康体检人群的血清Ig,同时测定IgG高、低值水平,分析两种方法测定结果之间的关系.结果健康体检人群中血清IgG水平免疫透射比浊法[(11.46±4.92)g/L]测定与免疫散射比浊法[(11.85±3.72)g/L]测定相比,差异无统计学意义(P>0.05);免疫透射比浊法IgM[(1.51±1.06)g/L],免疫散射比浊法IgM[(1.60±0.91)g/L]和免疫透射比浊法IgA[(2.08±1.51)g/L],免疫散射比浊法IgA[(2.15±1.19)g/L]水平差异均无统计学意义(P>0.01).高、低值IgG用两种方法均可以测定.结论了解免疫功能水平时,测定Ig用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法均可,但免疫散射比浊法更有利于病情的监测.%Objective To compare transmission turbidity and scatter turbidity method on measuration of serum immunoglobulin (Ig) levels. Methods Serum Ig concentration was measured by transmission turbidity and scatter turbidity method in 252 healthy people. The high level and low level of IgG were also measured. The relationship between the two methods was analyzed. Results The results showed that the levels ofIgG[(11. 46 ±4. 92)g/L,(11. 85 ± 3. 72)g/L] ,IgM[(l. 51 ± 1. 06)g/L,(l. 60 ± 0.91)g/L] and IgA [(2. 08± 1. 51)g/L, (2. 15 ± 1. 19)g/L] had no significant difference in healthy people(P>0. 05) measured by transmission turbidity and scatter turbidity method. High and low level of IgG can detect by transmission turbidity and scatter turbidity method. Conclusion Transmission turbidity and scatter turbidity method can both be used fordetermination of IgG, while immune scatter turbidity method could be beneficial for evaluation of the disease condition.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2012(041)020【总页数】2页(P2034-2035)【关键词】散射测浊法和比浊法;免疫球蛋白【作者】刘少华;邓文平;李燕【作者单位】重庆市涪陵中心医院检验科,408000;重庆市涪陵中心医院检验科,408000;重庆市涪陵中心医院检验科,408000【正文语种】中文人体免疫球蛋白(Ig)测定，是检查人体免疫功能状态最直接而简单的方法，只有选择好的检测方法才能保证检验结果的准确性。
免疫透射比浊法一、原理当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。
这一方法早于1959年Schultre和Schuick等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。
其原理是，利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。
在介质溶液中，抗原与特异性抗体在一定条件下才能形成复合物，一定的条件包括：①对抗体的要求，作为体液或组织中蛋白质种类很多，若要快速特异检测，要求有单价特异抗体才能与抗原形成复合物。
某一种蛋白质，有其特异抗体才能与该抗原结合，形成免疫复合物进行定量，若抗体不纯混杂有另一种或两种少量的抗体，这种免疫复合物就不是单一复合物而是大杂烩，结果偏高；②抗原抗体比例适当，因免疫复合物形成有三个阶段，第一阶段是复合物形成抗原抗体复合物；第二阶段是初步形成抗原抗体复合物，此阶段是复合物交联成大的网格状结构；第三阶段是复合物聚合产生絮状沉淀。
只有在抗原与抗体等价时即无过剩抗体，此时，复合物的结合与解离处于平衡状态，其混浊程度达高峰。
在抗体过量时，随抗原量的增加而复合物形成也增加，其测定只能在反应曲线的左侧进行（见图18-4）；③一般要求溶液中有非离子性亲水多聚体促进免疫复合物的形成，如聚二乙醇6000等。
溶液pH为6.5～8.0之间为宜。
载脂蛋白有形成两性螺旋片（amphipathic helix）的特性，对脂质（特别是磷脂）有高度亲和力，与脂质结合后有时会掩盖抗原位点或构象改变，可以部分或完全丧失对抗血清的特异反应。
为此，载脂蛋白检测过程中有必要先暴露抗原位点，所用试剂有表面活性剂，尿素，盐酸胍和吐温等解离蛋白剂，或用四甲基脲脱脂或有机溶剂脱脂等暴露抗原决定簇等方法，血清脂蛋白颗粒中的载脂蛋白，能在短时间内形成抗原抗体复合物进行定量；④抗原不能过量，因为抗原过量，抗原抗体复合物形成不但不增加，反而会减少，光散射或光吸收减少，检测结果反而偏低。
免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较在临床上，对于人血清内特定蛋白的检测，一般是采取免疫散射比浊法、免疫透射比浊法进行检测;然而，在检测的过程中，如游离血红蛋白、脂蛋白等会对检测的结果带来一定的干扰，继而影响检测结果的准确性[1]。
对此，为保证血清检测的准确性，笔者对免疫透射比浊法、免疫散射比浊法在特定蛋白抗干扰能力的效果进行探讨，具体报道如下。
1.资料与方法1.1对象本次研究的样本源自于某医院门诊与住院患者当天的新鲜血清，其中排除存在脂血、溶血、浑浊等血清。
同时，事前准备好IgM、CRP等浓度不等的混合血清，具体为IgM低浓度1.0～1.5g/L，高浓度大于2.0g/L;CRP低浓度4～10mg/L，高浓度大于100mg/L。
1.2仪器设备选用Dade Behring BNProSpec特定蛋白测定仪、Roche Modular P全自动生化分析仪，试验所用试剂皆为仪器配套试剂。
同时选取三个干扰物，即FBil（游离胆红素）、CH（乳糜）、Hb（血红蛋白），每种干扰物各准备两瓶试剂盒，一瓶作为空白对照使用，另外，干扰物的浓度具体为FBil3280μmol/L、CH15000FTU、Hb49.6μmol/L[2]。
1.3研究方法首先，对混合血清进行制备，之后依据干扰试剂盒上的制备顺序，配制干扰物;将2ml的蒸馏水加入到每一个干扰物与空白对照内，复溶。
然后，按照1：9的比例，把已经准备好的干扰物和混合血清混合在一起，制作成干扰物样本，其中含有干扰物的为样本甲，未加干扰物为样本乙[3]。
把两个样本分别制定浓度不等的若干个样本，具体浓度见下表1所示。
最后采取特定蛋白测定仪与全自动生化分析仪展开特定蛋白的抗干扰试验检测，同时对其干扰率进行计算。
1.4统计学分析本次研究所得全部数据，均采取软件Excel加以分析与处理。
其中，干扰率计算公式为：含有干扰物组的均值减去空白对照组的均值，之后再除以空白对照组的均值。
免疫透射比浊法一、原理当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。
这一方法早于1959 年Schultre 和Schuick 等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。
其原理是，利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。
在介质溶液中，抗原与特异性抗体在一定条件下才能形成复合物，一定的条件包括：①对抗体的要求，作为体液或组织中蛋白质种类很多，若要快速特异检测，要求有单价特异抗体才能与抗原形成复合物。
某一种蛋白质，有其特异抗体才能与该抗原结合，形成免疫复合物进行定量，若抗体不纯混杂有另一种或两种少量的抗体，这种免疫复合物就不是单一复合物而是大杂烩，结果偏高；②抗原抗体比例适当，因免疫复合物形成有三个阶段，第一阶段是复合物形成抗原抗体复合物；第二阶段是初步形成抗原抗体复合物，此阶段是复合物交联成大的网格状结构；第三阶段是复合物聚合产生絮状沉淀。
只有在抗原与抗体等价时即无过剩抗体，此时，复合物的结合与解离处于平衡状态，其混浊程度达高峰。
在抗体过量时，随抗原量的增加而复合物形成也增加，其测定只能在反应曲线的左侧进行（见图18-4 ）;3—般要求溶液中有非离子性亲水多聚体促进免疫复合物的形成，如聚二乙醇6000等。
溶液pH为6.5〜8.0之间为宜。
载脂蛋白有形成两性螺旋片（amphipathic helix ）的特性, 对脂质（特别是磷脂）有高度亲和力，与脂质结合后有时会掩盖抗原位点或构象改变，可以部分或完全丧失对抗血清的特异反应。
为此，载脂蛋白检测过程中有必要先暴露抗原位点，所用试剂有表面活性剂，尿素，盐酸胍和吐温等解离蛋白剂，或用四甲基脲脱脂或有机溶剂脱脂等暴露抗原决定簇等方法，血清脂蛋白颗粒中的载脂蛋白，能在短时间内形成抗原抗体复合物进行定量；④抗原不能过量，因为抗原过量，抗原抗体复合物形成不但不增加，反而会减少，光散射或光吸收减少，检测结果反而偏低。
免疫透射比浊法一、原理当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。
这一方法早于1959 年Schultre 和Schuick 等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。
其原理是，利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。
在介质溶液中，抗原与特异性抗体在一定条件下才能形成复合物，一定的条件包括：①对抗体的要求，作为体液或组织中蛋白质种类很多，若要快速特异检测，要求有单价特异抗体才能与抗原形成复合物。
某一种蛋白质，有其特异抗体才能与该抗原结合，形成免疫复合物进行定量，若抗体不纯混杂有另一种或两种少量的抗体，这种免疫复合物就不是单一复合物而是大杂烩，结果偏高；②抗原抗体比例适当，因免疫复合物形成有三个阶段，第一阶段是复合物形成抗原抗体复合物；第二阶段是初步形成抗原抗体复合物，此阶段是复合物交联成大的网格状结构；第三阶段是复合物聚合产生絮状沉淀。
只有在抗原与抗体等价时即无过剩抗体，此时，复合物的结合与解离处于平衡状态，其混浊程度达高峰。
在抗体过量时，随抗原量的增加而复合物形成也增加，其测定只能在反应曲线的左侧进行（见图18-4 ）;3—般要求溶液中有非离子性亲水多聚体促进免疫复合物的形成，如聚二乙醇6000等。
溶液pH为6.5〜8.0之间为宜。
载脂蛋白有形成两性螺旋片（amphipathic helix ）的特性, 对脂质（特别是磷脂）有高度亲和力，与脂质结合后有时会掩盖抗原位点或构象改变，可以部分或完全丧失对抗血清的特异反应。
为此，载脂蛋白检测过程中有必要先暴露抗原位点，所用试剂有表面活性剂，尿素，盐酸胍和吐温等解离蛋白剂，或用四甲基脲脱脂或有机溶剂脱脂等暴露抗原决定簇等方法，血清脂蛋白颗粒中的载脂蛋白，能在短时间内形成抗原抗体复合物进行定量；④抗原不能过量，因为抗原过量，抗原抗体复合物形成不但不增加，反而会减少，光散射或光吸收减少，检测结果反而偏低。
STAGO全自动血凝仪的原理及3例故障维修贾岩;左智【摘要】本文主要阐述了血凝仪的检测原理分类,以及在使用中出现的故障及解决方法.【期刊名称】《中国医疗设备》【年(卷),期】2011(026)008【总页数】2页(P148-149)【关键词】凝血仪;原理;医疗设备维修【作者】贾岩;左智【作者单位】新疆自治区人民医院,设备科,新疆,乌鲁木齐,830001;新疆自治区人民医院,设备科,新疆,乌鲁木齐,830001【正文语种】中文【中图分类】TH776随着现代医学对止血与血栓形成机制认识的不断深入，加之计算机技术的广泛应用，血凝仪也得到了迅速的发展。
血凝仪不但为血栓与出血性疾病的诊断、治疗和预后分析提供了较多的实验指标，也大大提高了工作效率和测定结果的可靠性。
STAGO Compact血凝仪是用于试管检验设计的全自动实验室装置，是目前较为先进的全自动血凝仪，可用于凝固法和免疫比浊法进行血浆样品测试。
现对STAGO Compact血凝仪的原理和在使用中遇到的故障进行总结和分析。
1.1 凝固法的检测原理STAGO Compact凝固法的检测原理是在被测血浆粘度不断增加的基础上进行的。
检测杯两侧设有线圈，检测杯中放入血浆和磁珠，检测杯下方有一感应线圈，当磁珠运动时，感应线圈切割磁力线产生感应电流，并且感应电流的强度和磁珠的运动速度呈正相关。
仪器通电后产生磁场，磁珠在磁场力的驱动下，沿检测杯底部弯曲的轨道做谐振运动。
随着血浆粘度增加，磁珠的运动阻力也随之增大，使运动速度减慢，振幅减小。
因此，感应线圈切割磁力线的速度也减小，导致感应电流也相应减弱。
所以，通过测定感应电流可以间接地反应出血液凝固的情况。
检测电路检测出磁珠从开始运动的振幅到振幅减弱一半时所用的时间，即为血浆凝固时间。
电磁场的能量分弱磁场和强磁场2种。
纤维蛋白原检测使用弱磁场，而其他检测使用强磁场。
1.2 免疫比浊法检测原理STAGO Compact免疫比浊法检测的原理是通过透射比浊或散射比浊。
免疫透射比浊法一、原理当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。
这一方法早于1959年Schultre和Schuick 等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。
其原理是，利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。
在介质溶液中，抗原与特异性抗体在一定条件下才能形成复合物，一定的条件包括：①对抗体的要求，作为体液或组织中蛋白质种类很多，若要快速特异检测，要求有单价特异抗体才能与抗原形成复合物。
某一种蛋白质，有其特异抗体才能与该抗原结合，形成免疫复合物进行定量，若抗体不纯混杂有另一种或两种少量的抗体，这种免疫复合物就不是单一复合物而是大杂烩，结果偏高；②抗原抗体比例适当，因免疫复合物形成有三个阶段，第一阶段是复合物形成抗原抗体复合物；第二阶段是初步形成抗原抗体复合物，此阶段是复合物交联成大的网格状结构；第三阶段是复合物聚合产生絮状沉淀。
只有在抗原与抗体等价时即无过剩抗体，此时，复合物的结合与解离处于平衡状态，其混浊程度达高峰。
在抗体过量时，随抗原量的增加而复合物形成也增加，其测定只能在反应曲线的左侧进行（见图18-4）；③一般要求溶液中有非离子性亲水多聚体促进免疫复合物的形成，如聚二乙醇6000等。
溶液pH为6.5～8.0之间为宜。
载脂蛋白有形成两性螺旋片（amphipathic helix）的特性，对脂质（特别是磷脂）有高度亲和力，与脂质结合后有时会掩盖抗原位点或构象改变，可以部分或完全丧失对抗血清的特异反应。
为此，载脂蛋白检测过程中有必要先暴露抗原位点，所用试剂有表面活性剂，尿素，盐酸胍和吐温等解离蛋白剂，或用四甲基脲脱脂或有机溶剂脱脂等暴露抗原决定簇等方法，血清脂蛋白颗粒中的载脂蛋白，能在短时间内形成抗原抗体复合物进行定量；④抗原不能过量，因为抗原过量，抗原抗体复合物形成不但不增加，反而会减少，光散射或光吸收减少，检测结果反而偏低。
图18-4 抗原抗体反应曲线在免疫比浊过程中，由于抗原抗体结合的三过程，从而导致光密度与浓度之间不呈线性关系，一般是3次方程曲线关系。
若将抗原与抗体两个变量之间的变动特征恰当地反映出来，需要经过3次方程拟合成近似直线化的曲线方程，再进行运算，免疫比浊中，采用终点法或速率法，用5个或7个不同梯度进行定标，经3次曲线方程求出一条能反映真实情况的浓度与光密度的关系曲线方程，才能作为定量的工作曲线。
二、血清ApoAⅠ（B100）透射比浊测定法脂蛋白抗原在溶液中与相应特异抗体形成抗原抗体复合物的混浊颗粒，分散于溶液介质中，在一定波长下测定其混浊程度，进行ApoAⅠ（B100）的定量测定。
（一）手工操作1．原理血清ApoAⅠ（B100）+抗人ApoAⅠ（B100）→抗原抗体复合物→测定光密度2．试剂（伊利康）（1）Apo缓冲液（RⅠ），含4%PEG6000和表面活性剂（2）羊抗人ApoAⅠ（B100）抗体液（RⅡ）：监用前取抗血清200μl，加0.9%NaCl液700μl，混匀，待用，置冰箱一周内有效。
（3）ApoAⅠ（B100）参考血清（RⅢ）3．操作（1）按ApoAⅠ抗血清液或ApoB100抗血清100μl，加相应的Apo缓冲液0.9ml的比例混合成单一试剂（Apo抗体液）。
最好临用前配制当天用量。
（2）各试剂用量如下表ApoAⅠApoB100标准管测定管空白管标准管测定管空白管参考血清5μl5μl待测血清5μl5μlApoAⅠ抗体液 1.0ml 1.0ml 1.0mlApoB100抗体液 1.0ml 1.0ml 1.0ml 混匀各管，37℃保温10min，波长340min，于半自动分析仪上先吸入空白管液，再吸入标准管，仪器根据光密度及参考值得出一换算系数，再吸入测定管，仪器内根据光密度及系数进行运算，打印结果。
（3）定标方法，根据免疫比浊法原理，应取多点（3～9点），按y=a+bx+cx2+dx3的3次方程回归曲线进行定标，制作参考工作曲线。
①校正工作曲线的绘制：配制抗血清稀释工作液：按RⅠ试剂0.9ml，加RⅡ试剂100μl的比例（Apo抗体液）混匀，待用。
制备5点校正液：取RⅢ（参考血清），用0.9%生理盐水倍比稀释成5个浓度，第5管为原参考血清浓度，其他4管分别为第5管的1/2、1/4、1/8、1/16（或浓度为0即0.9%NaCl）。
表18-20 标准曲线制备的各管（点）浓度管号 1 2 3 4 51号管（0）（μl） 52号管（1/8）（μl） 53号管（1/4）（μl） 54号管（1/2）（μl） 55号管（1/1）（μl） 5Apo抗体液（ml） 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 混匀各管，置37℃水浴保温10min，按程序上机作工作曲线。
②标本测定：吸待测血清（测定管）5μl，加上述稀释抗血清工作液1.0ml，于37℃水浴保温10min，上机读数，打印结果。
③如测定值超过工作曲线上限值，仪器会打印显示“过高”，此时，将待测标本稀释1倍再测。
④每批号的抗血清应作一次多点定标，即测定标本的抗血清应与定标的抗血清是同一批号抗血清。
（二）生化分析仪测定1．原理脂蛋白抗原在溶液中与相应特异抗体形成抗原抗体复合物的混浊颗粒分散于溶液介质中，在一定波长下测定其混浊程度，进行ApoAⅠ（B100）的定量测定。
ApoAⅠ（B100）+抗人ApoAⅠ（B100）→抗原抗体复合物→测定吸光光密度2．双试剂单（双）波长法（1）试剂（温州伊利康）RⅠ：Apo缓冲液，含4% PEG6000和表面活性。
RⅡ：羊抗人ApoA（B100）稀释抗血清RⅢ：Apo定值血清（2）各试剂及标本用量如下表：项目血清Apo缓冲液（RⅠ）ApoAⅠ抗血清液（RⅡ）ApoB100抗血清液（RⅡ）ApoAⅠ2～5μl300～350μl80～100μlApoB1002～5μl300～350μl80-100μl （3）定标：以5点Apo梯度浓度，采用免疫定标法按表18-21参数上机定标，如图18-5所示。
图18-5 ApoAⅠ五点免疫定标曲线图（以CL-7200仪器为例）（4）上机（终点法或两点法）（5）说明：①Apo测定的光密度从340～700nm范围都可采用，多用340nm；②国内已有的Apo试剂盒均无需处理；③血清标本也无需处理，均可直接检测；④本法适用于多种类型的全自动生化分析仪检测，自动扣除空白，快速准确；⑤效价不同的抗血清，其用量应作适当的调整。
(5)计算△A=A2-A1,以△A值采用免疫定标自动运算。
3.单一试剂单波长法(1)试剂同双试剂法(2)标本及试剂用量:按ApoAⅠ抗血清液或ApoB抗血清液(RⅡ)100μl,加相应的Apo缓冲液(RⅠ)0.3m l的比例混合成单一试剂(Apo抗体液)。
最好临用前配制当天用量,此抗体液置2～8℃保存一周有效。
（3）定标：按五点梯度稀释定值血清（见表18-21），以终点法或两点法进行免疫定标。
（4）按以下步骤操作：（5）以△A=A2-A1值按免疫定标自动运算。
（6）说明：①该法一般用半自动生化分析仪；②通过设延迟时间以扣除空白；③RⅠ、RⅡ试剂以临用时混合为好，未用完的混合试剂应置于2～8℃冰箱保存，只允许使用一周；④血清标本无需再处理。
4.ApoAⅠ、AⅡ、B、CⅡ、CⅢ和E的全自动生化分析仪检测的有关数据。
（1）上机参数（以CL-7200型为例）如表18-21所示。
表18-21 自动生化分析仪检测Apo有关参数ApoAⅠAⅡ B CⅡCⅢ E反应类型终点法样品量3μl3μl3μl8μl3μl5μl600nm（第一）数据数据700nm 700nm 700nm测量波长700nm（第二）数据数据340nm 340nm 340nm第一波长5min 数据数据数据数据数据反应时间第二波长4.99min 数据数据数据数据数据试剂Ⅰ350μl290μl350μl300μl290μl350μl试剂Ⅱ100μl75μl100μl50μl75μl50μl单位g/L g/L g/L mg/dl mg/dl mg/dl标准浓度点数 5 5 5 5 5 5（2）标准曲线制备参数如表18-22所示。
表18-22 生化分析仪检测Apo的定标浓度标准管号 1 2 3 4 5 6稀释倍数0 1：2 1：4 1：8 1：16 0ApoAⅠ度数(g/L) 172 86 43 21.5 10.8 0ApoAⅡ度数(g/L) 36 18 9 4.5 2.25 0ApoB浓度(g/L) 180 91 45.5 22.6 11.3 0ApoCⅡ浓度(mg/dl) 4 2 1 0.5 0.25 0ApoCⅢ浓度(mg/dl) 5 2.5 1.25 0.63 0.31 0ApoE浓度(mg/dl) 10 5 2.5 1.25 0.625 0 5．单一试剂和双试剂检测方法的比较单一试剂和双试剂在全自动生化分析仪测定的光密度变化过程，如图18-6所示。
从理论上考虑任何一种生化测定方法的试剂，临用时混合最好，可以消除试剂各种成份的自身化学变化和相互影响。
而在实际工作中，是不可能的，只能是将几种不会起化学反应而又无相互影响的试剂配制成2～4种，临用时按一定比例配制使用。
临床化学试剂盒，目前主要以1或2种试剂形式供医学检验使用，即单一试剂和双试剂两种形式。
笔者认为双试剂比单一试剂好，尤其是含酶试剂和免疫试剂以双试剂包装形式为好，有利于对酶的活性或抗体效价的保存。
单一试剂是所有试剂混合在一起，存放过程中，有可能因化学物质的存在而损害试剂中的工具酶或抗体，存放时间越长，损害可能性越大，然而双试剂不存在这一问题。
对脂质的测定双试剂法更显其优越性，因为血清中脂质与载脂蛋白是以脂蛋白的形式存在，当测定试剂与血清标本混合后，首先解联脂蛋白，让其释放出脂质和载脂蛋白，。
作为免疫测定试剂还兼有使载脂蛋白抗原决定簇暴露的作用。
当R1试剂作用完后，加进第二试剂（R2）后，使其抗体适应抗原决定簇的要求，达到抗原抗体结构呈完全的互补状态，从而产生最大的抗原抗体结合量，达到定量的目的。
双试剂测定法，既能自动扣去空白，又能使化学反应快速进行，从而迅速地完成检测的全过程。
图18-6 单双试剂法反应过程的光密度变化曲线图A：双试管法；B：为单一试剂法（贺小玲胡汉宁）参考文献1．刘秉文.血浆载脂蛋白的免疫测定及应用，见王克勤主编，脂蛋白与动脉粥样硬化，北京：人民卫生出版社，1995：3622．Fager G.Wiklund O.et al.Serum apolipoprotein livels in realtion to acute myocardical infarct ion and its risk factors.Atherosclerosis,1984,36:67743．Maviejko J,Holmes R,Kottke BA,et al.Apolipoprotein AI as a marker of angiographically ass essed artery,N Engl J Med,1983,309:385-3894．Vander GL,Barbank J,Sasse EA,Correlateion of the extent of a new enzyme immunoassay techique for ApoB.Atherosclerosis,1984,50:29-335．Campeau L,Eryallbert M,Lesperance J,et al.The relation of risk factors to the development of atheroscierosis in saphenous vein by pass gratts and proression of disease in the native population .N Engl J Med ,1984,3111:1329-13326．Koren E,Puchois P,Alaupovic ,et al Quantification of two different type of apolipoprotein AI containing lipoprotein aprtices in plasma by enzyme linded differenteal antibody immunosorbent as say,Clin Chem,1987,33:38-417．王抒，李健斋，赵淑华等，血清载脂蛋白参考值.中华医学检验杂志，1996，19：343～348 8．李健斋.血清载脂蛋白免疫测定及其标准化问题.中华医学检验杂志，1992，15：58-709．Marvovina SM,Albere JJ,Dati F,et al International federation of clinical chemistry standardiz ation project for meanurements of apolipoprotein AI and B,Clin Chem,1991,37:1676 10．陶义训主编.免疫学和免疫学检验，北京：人民卫生出版社，198911．刘秉文.载脂蛋白AⅠ及B测定标准化问题第一次调查报告.生命的化学，1991，11：4112．钱士匀，周新.光谱技术.见：王霞文主编.临床生化检验技术.南京：南京大学出版，1995，1～15 13．贺小玲等.双试剂双波长检测载脂蛋白AⅠ，B-100、CⅡ的方法学探讨，中国实验临床免疫学杂志，199714．Edward SG.Immunology a synthesis.New York:sinarer associates,Inc ,Pubishers.1987。
