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园艺园林 282023.01蝴蝶兰组织培养技术要点分析张 婷(广东省惠州市农业科学研究所，广东 惠州 516000)摘要：近年来蝴蝶兰开始频繁出现在各地区的花卉市场中，因此，相关科研单位、企业开始逐渐增加对其生产投入以及组织培养力度。
但是，现阶段蝴蝶兰生产所有的组织培养基配方、培养环境以及规格苗生产中栽培基质等尚未与国际先进水准齐平，导致蝴蝶兰产业在实际发展中受到严重限制。
本文主要是对蝴蝶兰组织培养技术要点进行分析。
关键词：蝴蝶兰；组织培养技术；原球茎本文研究了蝴蝶兰组织培养的相关技术，通过实验论证了在散射光环境下幼叶诱导蝴蝶兰原球茎能够达到最佳效果。
最佳培养基为MS+6-BA6毫克/升水解乳蛋白500毫克/升+蔗糖5克/升（pH=5.4）；最适增殖培养基为MA+6-BA2毫克/升+NAA1毫克/升+水解乳蛋白500毫克/升+蔗糖25克/升+琼脂5克/升（pH=5.4）；最适生根长苗培养基为1/2MS+IBA1.5毫克/升+NAA0.05毫克/升+0.3%活性炭+蔗糖25克/升+琼脂5克/升（pH=5.4）。
1 蝴蝶兰组织培养技术的注意事项1.1 培养基添加物对蝴蝶兰增值与分化的影响一般可以在蝴蝶兰组织培养中添加适量天然物质，能够供给蝴蝶兰幼苗微量营养成分、生长激素等，像是在其中加入120毫克/升香蕉泥，就能够对原有pH值进行缓冲，以此达到壮苗与生根作用。
相关资料指出，在培养基中加入适量椰乳或香蕉泥，能够促进原球茎的增值。
在蝴蝶兰丛生芽中加入一定的添加物，能够促进和诱导幼苗生根。
而在其内加入高浓度活性炭，能够促进原球茎增值。
1.2 原球茎继代中褐化的防治蝴蝶兰与其他兰科植物类似，原球茎状体在继代培养过程中易褐变死亡，很难增值。
通过将1克/升活性炭加入到培养基中，并在合适时间内将原球茎褐化的部分进行切除，并重新配置新鲜的培养基，防治外植体出现褐变死亡，将10%椰子水加入培养基中，能够让原球茎更快生长，在其增值环节中有效抑制褐变现象。
蝴蝶兰的组织培养技术蝴蝶兰的组织培养技术蝴蝶兰为兰科多年生附--生草本，又名蝶兰，是兰科植物中栽培最为广泛的种类之一，主要分布在热带及亚热带地区。
其花形奇特，色彩艳丽，花期持久，素有“兰中皇后”的美誉，具有极高的观赏和经济价值，在国内外花卉市场上极受欢迎。
蝴蝶兰是单茎气生兰，植株上极少发育侧枝，比其他种类的兰花更难于进行常规无性养殖。
组织培养是建立蝴蝶兰快速养殖无性系的重要手段。
1 外植体的选择蝴蝶兰的茎尖、茎段、叶片、花梗侧芽、花梗节间、根尖等部位都已有培养成功的报道，方法各异，难度各有高低。
蝴蝶兰不同外植体的成活率有差异，其中花梗侧芽的成活率最高，达75%；其次为花梗，成活率为 62.5%；叶片和根尖最差，分别为12.5%和 7.5%。
针对不同外植体，取材方法也不同，通常取花梗节之间1~2cm长的幼嫩部分，切取长 2~3mm 的切段作为外植体。
2 基本培养基的选择蝴蝶兰组织培养所采用的基本培养基包括 MS、1/2MS、VW、B5、KC、花宝及其改良型等，其中1/2MS对蝴蝶兰原球茎增殖效果最好。
3 外源激素的选择目前常使用的外源激素主要是生长素类（如IAA、2,4-Ｄ和NAA）和细胞分裂素类（如BA、ZT、KT）。
蝴蝶兰组织培养中常用的细胞分裂素为 6-BA，较高浓度（1~8mg/L）的 6-BA 能促进蝴蝶兰原球茎增殖，较低浓度（0.1~0.5mg/L）的 6-BA 则能促进原球茎分化。
适宜浓度的 6-BA 配合较低浓度的 NAA，更有利于原球茎的增殖，2.0mg/L 6-BA 和 0.3mg/L NAA配合使用是蝴蝶兰原球茎增殖的最佳组合。
4 培养基添加物对蝴蝶兰增殖和分化的影响蝴蝶兰组织培养中常加入一些天然物质如椰乳、香蕉泥、番茄汁、苹果汁等，这些物质能提供一些必要的微量营养成分、生理活性物质和生长激素等，如加入100~200mg/L香蕉泥，具有较大的 pH 缓冲作用，有利于兰科植物的壮苗和生根。
蝴蝶兰的组织培养蝴蝶兰属单茎类兰花,其常规繁殖方法有分株法和播种法。
在常规繁殖中，有三个难以解决的问题：第一，用分株繁殖方法增殖缓慢，不利于新品种的推广；第二，种子繁殖困难，因兰花种子十分微小，胚很细弱，种子中几乎没有贮藏营养物，在自然条件下，绝大多数种子会在发芽过程中夭折，只有少数种子遇到菌根才能萌芽；第三，病毒感染严重，降低种性。
采用无菌播种和组织培养的方法进行蝴蝶兰的无性系繁殖，可以在一定程度上解决上述三个问题，成为目前大量繁殖蝴蝶兰的主要途径。
外植体的选择和消毒取蝴蝶兰花梗在自来水下用细软毛刷轻刷表面，并吸干表面水分，剪成2一3cm长的茎段。
在工作台上按以下程序进行灭菌处理：将材料放入经高温灭菌过的烧杯中；加入70％的酒精浸泡20秒；0.1％的HgCl消毒8分钟，分2次进行，每次4分钟，灭菌后用无菌水冲洗5次，每次2分钟；用解剖刀切除坏死部分后，接入培养基。
用此方法既能有效地消毒又不会对培养材料产生毒害，培养材料接入培养基后无褐化坏死现象出现。
无菌材料的试管培养培养材料的选择是蝴蝶兰组培决繁的关键。
腋芽节位以下第3、4节花梗芽是最适宜的外植体，而谷胧甘肽200mg/L既能很好地抑制褐化，又能促进试管苗的生长和分化，是蝴蝶兰组织培养中最合适的褐化抑制剂。
B5+GA32.0mg/L＋NAAO.lmg/L是较适宜的愈伤组织诱导培养基，B5+6BA1.0mg/L＋NAAO.2mg/L是较适宜的分化培养基，1/2MS+IBA1.2mg/L＋NAA0.05mg/L及2%蔗糖是较适宜的生根培养基。
将消毒后的无菌培养材料接种在愈伤组织诱导培养基上，其培养基为B5+GA32.0mg/L＋NAAO.lmg/L，培养基pH调至5.8，培养室温度控制在24士2℃。
接种后遮光放置4一5天，而后每天光照12小时，2周后，切口处开始膨大，产生淡绿色瘤状愈伤组织，并不断增大。
4周后将愈伤组织切下转接到分化培养基B5+6BA1.0mg/L＋NAA0.2mg/L上，转瓶后愈伤组织的体积和重量成指数级增加，4周左右愈伤组织表面出现较大绿色颗粒，并形成芽点，继而分化出丛生芽。
