甲基绿-派洛宁染色液

实验室规那么和要求一般规定1.上课第一天请先熟悉环境，牢记“平安〞是进展任何实验最重要的事项。

2.在实验室内请穿著实验衣〔最好长及膝盖下〕，防止穿著凉鞋、拖鞋〔脚趾不要裸露〕。

留有长发者，需以橡皮圈束于后，以防止引火危险或污染实验。

3.在实验室内制止吸烟、吃东西、饮食、化装、嚼口香糖、嬉戏奔跑，食物饮料勿存放于实验室的冰箱中，实验桌上勿堆放书包、书籍、衣服外套及杂物等。

4.所有实验仪器、耗材、药品等均属实验室所有，不得携出实验室外。

每组分配之仪器、耗材请在课程开场前确定清点与保管，课程完毕后如数清点缴回。

公用仪器请善加爱惜使用。

实验前后，请把工作区域清理擦拭，并随时保持环境清洁。

5.实验前详阅实验内容，了解实验细节的原理及操作，注意上课所告知的考前须知。

实验进展中有任何状况或疑问，随时发问，切勿私自变更实验程序。

打翻任何药品试剂及器皿时，请随即清理。

实验后，适切记下自己的结果，严禁抄袭，确实关闭不用之电源、水、酒精灯及瓦斯等。

6.身体不适、睡眠缺乏、精神不济或注意力无法集中，请立即停顿实验。

实验时间假设延长，请注意时间的管制及自身的平安，不可自行逗留实验室。

7.实验完毕，请清理实验室、倒垃圾、灭菌、关闭灯光及冷气，离开实验室前记得洗手。

8.任何意外事件应立即报告教师或实验室管理人员，并应熟知相关之应变措施。

药品1.使用任何药品，请先看清楚标示说明、考前须知，翻阅物质平安资料，查明是否对人体造成伤害，使用完毕请放回原位。

2.新配制的试剂请清楚注明内容物、浓度、考前须知及配制日期，为防止污染，勿将未用完的药剂倒回容器内。

3.挥发性、腐蚀性、有毒溶剂〔如甲醇、丙酮、醋酸、氯仿、盐酸、硫酸、-巯基乙醇、甲醛、酚等〕要在排烟柜中戴手套量取配制，取用完应随即盖好盖子，假设不小心打翻试剂，马上处理。

4.有毒、致癌药剂例如丙稀酰胺〔神经毒〕、溴化乙啶〔突变剂〕、SDS〔粉尘〕请戴手套及口罩取用，并勿到处污染，脱下手套后，养成洗手的好习惯。

❖ 显示脂类的基本原理 ：用易溶于脂类的染料, 使之溶于所检的脂质(如脂滴)中,使组织内的 脂类着色.
❖ 常用方法： 苏丹黑B法、油红O法、硫酸尼 罗蓝法 、苏丹Ⅲ染色法等
❖ 基本要求 ⑴ 不用石蜡切片. ⑵ 固定剂一般用Formalin保存磷脂较好. ⑶ 方法: ① 物理法:脂溶性染料,不溶于水,属 偶 氮染料.常用苏丹Ⅲ,Ⅳ,苏 丹黑 ,油红O等. ② 化学方法:硫酸尼罗蓝显示脂肪酸. ③ 选择 性提取法(对照)
❖ 差不多与此同时(1900-1935年)，发现疾病组织中出 现的物质变化，更促进了化学技术在病理学染色方法 中的应用，也丰富了在显微镜下显示无机物、色素、 脂类、糖类、蛋白质、核酸等物质的组织化学内容， 此后又出现了酶的组织化学等。由此可见，“组织化 学”一词的含意是随时代而变化的，由定位趋向于与 定量相结合的研究。
❖ 3、灌注固定法：从心血管途径将固定剂灌注到全 身或某一个器官，使细胞保持生活时的状态而不发 生移位，固定后再迅速取材。
三、制 片
❖ 涂片法、石蜡切片法、冰冻切片法 ❖ 最常使用的为恒冷箱冰冻切片法。
四、注意事项
❖ 1、实验所用的器械、器皿都必须清洁无污染。 ❖ 2、配制试剂时应使用双蒸馏水。 ❖ 3、固定、取材都应在冷的环境下进行。 ❖ 4、各种试剂的pH值都要调准，否则影响反应结果。 ❖ 5、所用试剂要纯，都必须达到分析纯(A·R级)。 ❖ 6、同时、同条件情况下做阴性和阳性对照。 ❖ 7、了解和掌握被检组织中所要测定的化学物质或
❖ 以下介绍McGee-Ruseell核固红法。 ❖ 1、操作步骤 ❖ (1) 石蜡切片常规脱蜡至水。 ❖ (2)核固红染液染色2一10分钟。 ❖ 核固红染液的配制：核固红2g，蒸馏水100ml洗涤2次，剩

实验二 Feulgen反应显示DNA
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一、学习目的
1. 了解DNA染色的多种方法、原理和应用。 2. 掌握Feulgen反应的原理及操作步骤。 3. 观察细胞中DNA的分布，巩固所学的理论知识。 4. 了解实验中设计对照组的重要性。 5. 熟练掌握移液器等常用仪器的使用方法。
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二、实验原理
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• 将流体喷射技术、激光技术、空气技术、γ射线能谱术及 电子计算机等技术与显微荧光光度计密切结合的一种非 常先进的检测仪器。
• 通过测量细胞及其他生物颗粒的散射光和标记荧光强度，
来快速分析颗粒的物理或化学性质，并可以对细胞进行
分类收集。 • 特点：
流式细胞仪
单个细胞或微粒分析； 同时多参数分析； 速度快、精度高、准确性号； 统计学意义：提供细胞群体的均值和
少，可呈现粗细不等红色
颗粒、块状物或均匀红色。
此法又称为糖原染色。
肝组织切片的PAS反应
混合染料甲基绿-哌洛宁（Unna试剂）处理细胞后，由于DNA、RNA对染 料的亲和力不同， 而使 DNA被甲基绿染成绿色，RNA被哌洛宁染成红色 。 优点：可同时显示DNA和RNA
缺点：专一性不强 本节内容结束
1、甲基绿、派若宁均为碱性 染料，甲基绿单独使用时能使 DNA和RNA均染成蓝绿色，派洛 宁单独使用时能使DNA和RNA均 染成红色。 2、甲基绿同时可染其他物质 如粘液。
蟾蜍血细胞的的Brachet反应
常用于染色体染色。以发明者古斯塔夫·吉姆沙命名。 Giemsa染料是一种复合染料，含天青、伊红等，可与DNA
选取 移液
枪
调节 刻度
安装 枪头
吸液
排液
卸枪 头
调至 最大 刻度

前言一、医学细胞生物学实验课的目的和要求医学细胞生物学实验课是医学细胞生物学教学的重要组成部分，它既与医学细胞生物学课堂讲授的理论部分密切联系，同时又有它独特的目的和要求：1. 实验是科学理论的实践与论证，通过实验，使学生从感性认识加深对课堂所获得的理性知识的认识和理解。

2. 通过光学显微镜的使用，临时标本的制作、细胞培养等技术操作，使学生掌握医学细胞生物学的基本实验方法和技能。

3. 通过实验，培养同学观察、比较、分析、综合等科学思维方法、独立工作能力和实事求是的科学态度。

4. 通过实验，使学生获得书写细胞生物实验报告、绘图、制表等方面的基本知识和技能训练。

二、医学细胞生物学实验报告的写作实验报告是科学研究的记录，同学们必须学会客观地、真实地记载实验过程和结果。

实验报告的形式一般可分以下三种：1. 文字报告：要求学员将观察所得和实验结果客观地用文字给以准确、详细的描述和记录。

文字力求简洁明了，条理清楚。

2. 绘图: 绘图是医学细胞生物学实验中常用的报告形式之一, 它既是根据所观察标本的真实记录和研究资料, 又可通过描绘学习更精细观察描述。

医学生物学实验绘图不同于一般艺术性绘图。

医学细胞生物学绘图的基本要求: ①绘图前应对标本加以仔细观察研究，并在正确的理解后方可动手绘制。

图中各种结构的大小应与实物成比例，力求准确，明暗之处以点疏密表示，切勿以铅笔涂施阴影；②绘图要求洁净明了，整齐有序，图的位置大小，要求分配适宜，线条力求匀整；③图绘好后，各部结构要用铅笔详细标注名称，标注的方法是：由所标注的部位引出直线，并将其名称注于线的末端，所引的线条应与报告纸上下沿平行，书写字应当横排，字迹要求端正。

3. 制表：将观察所得或实验结果，设计一表格，将有关结果逐项填入，表示其相应关系。

三、实验室规则1. 做好课前预习：实验课前，要认真阅读实验指导及与教材的有关内容，明确实验目的、要求和注意事项，了解实验内容、方法和步骤。