吡罗红甲基绿染色剂染色的原理

考点06 观察DNA和RNA在细胞中的分布高考频度：★★☆☆☆难易程度：★★☆☆☆1．实验原理(1)甲基绿和吡罗红对DNA和RNA的亲和力不同：甲基绿＋DNA→绿色；吡罗红＋RNA→红色。

(2)盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时可使染色质中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA和染色剂结合。

2．实验步骤考向“观察DNA和RNA在细胞中的分布”的实验原理和操作1．下列关于“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验的说法，正确的是A．甲基绿和吡罗红对DNA和RNA的亲和力不同，实验中应分别加入甲基绿和吡罗红B．盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞C．该实验用口腔上皮细胞而不用叶肉细胞，是因为叶肉细胞不含RNAD．盐酸有利于染色质中DNA与蛋白质分开，不利于DNA与染色剂结合【参考答案】B【试题解析】甲基绿和吡罗红对DNA和RNA的亲和力不同，实验中应用吡罗红甲基绿混合染色剂染色，故A错误；实验中加入质量分数为8%的盐酸的作用有：一是改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞；二是使染色质中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合，故B正确、D错误；叶肉细胞中含有叶绿体，绿色会干扰实验结果，因此不用叶肉细胞作实验材料，故C错误。

易错警示观察DNA和RNA在细胞中的分布实验的注意事项(1)吡罗红甲基绿染色剂：混合使用，且现用现配。

(2)DNA和RNA在细胞核和细胞质中均有分布，只是量不同，故强调“主要”而不能说“只”存在于细胞核或细胞质中。

2．在“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验中，将口腔上皮细胞置入8﹪的盐酸溶液中水解的主要目的是A．利用盐酸改变细胞壁的通透性，加速染色剂进入细胞B．使染色体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合C．使细胞中物质全部水解D．使细胞中的DNA水解成脱氧核苷酸【答案】B【解析】在“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验中，质量分数为8%的盐酸的作用是改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，使染色体上的DNA和蛋白质分离，有利于染色剂与DNA结合，故B 正确。

实验：观察DNA和RNA在细胞中的分布（1）实验原理：甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈绿色，吡罗红使RNA呈红色。

(2)实验材料：人的口腔上皮细胞或洋葱鳞片叶内表皮细胞(3)实验步骤是：制片—水解—冲洗涂片—染色—观察(4)载玻片上滴0.9%的NaCl溶液的作用：是保持口腔上皮细胞的正常形态；(5)水解时用到8%的盐酸的作用：①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，②同时使染色体中 DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合；(6)用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片：是为了防止细胞被水流冲走；（7）实验结果：绿色明显集中且接近细胞中央，绿色周围的红色范围较广；说明DNA主要分布于细胞核中，RNA主要分布于细胞质。

实验：观察DNA和RNA在细胞中的分布（1）实验原理：甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈绿色，吡罗红使RNA呈红色。

(2)实验材料：人的口腔上皮细胞或洋葱鳞片叶内表皮细胞(3)实验步骤是：制片—水解—冲洗涂片—染色—观察(4)载玻片上滴0.9%的NaCl溶液的作用：是保持口腔上皮细胞的正常形态；(5)水解时用到8%的盐酸的作用：①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，②同时使染色体中 DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合；(6)用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片：是为了防止细胞被水流冲走；（7）实验结果：绿色明显集中且接近细胞中央，绿色周围的红色范围较广；说明DNA主要分布于细胞核中，RNA主要分布于细胞质。

实验：观察DNA和RNA在细胞中的分布（1）实验原理：甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈绿色，吡罗红使RNA呈红色。

(2)实验材料：人的口腔上皮细胞或洋葱鳞片叶内表皮细胞(3)实验步骤是：制片—水解—冲洗涂片—染色—观察(4)载玻片上滴0.9%的NaCl溶液的作用：是保持口腔上皮细胞的正常形态；(5)水解时用到8%的盐酸的作用：①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，②同时使染色体中 DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合；(6)用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片：是为了防止细胞被水流冲走；（7）实验结果：绿色明显集中且接近细胞中央，绿色周围的红色范围较广；说明DNA主要分布于细胞核中，RNA主要分布于细胞质。

观察DNA和RNA在细胞中的分布实验的过程一、问题研究1、原理与解析(1)真核细胞的DNA主要分布在细胞核内，RNA 主要分布在细胞质中。

(2)甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA 的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA显现出绿色，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红色。

用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。

(3)盐酸的作用①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；②盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合。

注意事项1.材料的选择①选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察；②常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞(为避免原有颜色的干扰，不可使用紫色表皮细胞)2.取材要点①取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；②取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。

3.冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗。

4.安全要点①用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂；②烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却1分钟。

5.换用高倍镜观察材料时，只能用细准焦螺旋进行调焦，切不可动粗准焦螺旋。

主要步骤(以观察口腔上皮细胞为例)1.取材①滴：在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液；②刮：用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下；③涂：将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中；④烘：将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。

2.水解①解：将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解；②保：将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。

3.冲洗涂片①冲：用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟；②吸：用吸水纸吸去载玻片上的水分。

4.染色①染：用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色5分钟；②吸：吸去多余染色剂；③盖：盖上盖玻片。

高中生物必修一重要实验work Information Technology Company.2020YEAR实验一检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质（必修一P18）一．实验目的：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质二．实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。

1．可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu 2O沉淀。

如：加热葡萄糖+ Cu ( OH ) 2 葡萄糖酸 + Cu 2O↓（砖红色）+ H 2O，即Cu ( OH ) 2被还原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。

2．脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色）。

淀粉遇碘变蓝色。

3．蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。

（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH 溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。

）三．实验材料1．做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。

（因为组织的颜色较浅，易于观察。

）2．做脂肪的鉴定实验。

应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。

3．做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。

四、实验试剂斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液）、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）、体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。

五、方法步骤：（一）可溶性糖的鉴定操作方法注意问题解释1. 制备组织样液。

（去皮、切块、研磨、过滤）苹果或梨组织液必须临时制备。

因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。

2. 取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。

3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。

微专题05观察DNA和RNA在细胞中的分布1．实验原理（1）甲基绿和吡罗红对DNA和RNA的亲和力不同：甲基绿＋DNA→绿色；吡罗红＋RNA→红色。

（2）盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时可使染色质中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA 和染色剂结合。

2．实验步骤：（1）取口腔上皮细胞制片：①载玻片上滴一滴质量分数为0.9％的NaCl溶液；②消毒牙签刮口腔内侧壁，然后涂抹在液滴中；③载玻片在酒精灯上烘干。

（2）水解：①将载玻片放入盛有30mL质量分数为8％的盐酸的小烧杯中；②大烧杯中加入30℃温水；③小烧杯放入大烧杯中保温5min。

例1．“观察DNA和RNA在细狍中的分布”实验中，需用质量分数为8%的盐酸，下列关于盐酸的作用的叙述中，错误的是（）A．增大细胞膜的通透性B．加速染色剂进入细胞C．提供酸性环境D．加速核蛋白的水解，使DNA和蛋白质分离【答案】A（3）冲洗涂片：用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10s。

（4）染色：①用吸水纸吸去载玻片上的水分；②用吡罗红甲基绿染色剂2滴染色5min；③吸去多余染色剂，盖上盖玻片。

（5）观察：①低倍镜观察：选择染色均匀、色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调清晰；②高倍镜观察：调细准焦螺旋，观察细胞核、细胞质的染色情况。

例2．下列关于“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验的说法，正确的是（）A．甲基绿和吡罗红对DNA和RNA的亲和力不同，实验中应分别加入甲基绿和吡罗红B．盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞C．该实验用口腔上皮细胞而不用叶肉细胞，是因为叶肉细胞不含RNAD．盐酸有利于染色质中DNA与蛋白质分开，不利于DNA与染色剂结合【答案】B3．实验注意事项（1）吡罗红甲基绿染色剂：混合使用，且现用现配。

（2）DNA和RNA在细胞核和细胞质中均有分布，只是量不同，故强调“主要”而不能说“只”存在于细胞核或细胞质中。

２０１９年第５４卷第１１期生物学通报４３吡罗红、甲基绿与核酸染色反应实验探究

敖兰１郝连振１王红蕊２（１保定市第一中学河北保定０７１０００２石家庄第十五中学河北石家庄０５００００）

摘要对人教版必修１“观察ＤＮＡ和ＲＮＡ在细胞中的分布”的实验，从以下方面进行改进：降低药品浓度、改变药品配方和实验类型、简化操作步骤、更换实验材料，从而使实验现象更清晰，更易于学生操作，成功率更高。关键词Ｂｒａｃｈｅｔ反应ＤＮＡ和ＲＮＡ的分布实验改进中国图书分类号：Ｑ一３３文献标识码：Ｂ

人教版生物必修１《分子与细胞》中，第２章“组成细胞的分子”第３节安排了一个实验——“观察ＤＮＡ和ＲＮＡ在细胞中的分布”。该实验实现了从初中宏观、个体层面的教学到高中微观、分子水平的教学转折，但在实际教学中该实验的开出率及成功率都不尽人意。本文在大量实验探究的基础上，进行了４个方面的改进：降低药品浓度、改变药品配方和实验类型、简化操作步骤、更换实验材料，从而使实验现象更清晰，更易于学生操作，成功率更高。１改进原因该实验源自大学生物学专业（尤其是医学专业）的一个常规实验——“Ｂｒａｃｈｅｔ（布拉奇特）反应”，吡罗红和甲基绿的混合染液称为“Ｕｎｎａ（温纳）”试剂。该方法出现于１９０１年，ＵｎｎａＥ¨在１９１０年又对试剂进行了改良，使实验效果更加明显，所以这是个成熟的实验。自２００４年选人高中生物学教材以来，有关该实验改进的文章也频频出现，但对该实验在高中阶段的开展都没有实质性的影响。１．１教材描述不清楚教材是这样表述的：“吡罗红甲基绿染色剂取Ａ液２０ｍＬ、Ｂ液８０ｍＬ配成染色剂，使用时现用现配。Ａ液：取吡罗红甲基绿粉１ｇ，加入１００ｍＬ蒸馏水中溶解，放入棕色瓶备用。”这段描述只说吡罗红甲基绿粉１ｇ，没说明吡罗红甲基绿的比例，而通常购买的是分装的吡罗红粉和甲基绿粉。１．２实验费用偏高以上海ＲｅｇａｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｍｐａｎｙ提供的报价来看，该实验所需的２种药品的价格分别为：５ｇ吡罗红３７０元、１０ｇ甲基绿１７８元，这２种药品在高中生物学常规实验中是费用最高的。按照教材配方，假定吡罗红甲基绿的比例是１：１，Ａ液２０ｍＬ、Ｂ液８０ｍＬ配成染色剂，每瓶吡罗红（５ｇ）和甲基绿（１０ｇ）能配５０００ｍＬ

生物染色剂斐林试剂：检测可溶性还原糖（葡萄糖、果糖、麦芽糖），沸水浴加热，出现砖红色沉淀。

苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ：检测脂肪，苏丹Ⅲ遇到脂肪出现橘黄色，苏丹Ⅳ遇到脂肪出现红色。

双缩脲试剂：检测蛋白质，出现紫色甲基绿：检测DNA在细胞中分布，遇到DNA出现绿色。

吡罗红：检测RNA在细胞中分布，遇到RNA出现红色。

二苯胺：检测DNA的存在，DNA遇到二苯胺，水浴加热出现蓝色。

健那绿：检测细胞中的线粒体，线粒体遇到健那绿呈现蓝绿色。

碘液：检测淀粉，淀粉遇到碘液出现蓝色。

澄清石灰水：检测CO2，二氧化碳可以使澄清的石灰水变浑浊。

溴麝香草酚蓝水溶液：检测二氧化碳，二氧化碳可以使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝色变成绿色再变成黄色。

重铬酸钾溶液：检测酒精，可以在酸性条件下与酒精发生反应出现灰绿色。

龙胆紫或者醋酸洋红：检测细胞核中的染色质，可以将染色质染成深色。

高中生物学重要的酶（部分）限制性核酸内切酶：将DNA分子的双链骨架切割，一种限制性核酸内切酶识别一种序列，而且从特定的位点切割。

限制性核酸内切酶破坏DNA分子的骨架上的磷酸二酯键。

DNA连接酶：将被限制酶切割的双链DNA片断连接起来。

DNA连接酶连接DNA分子的骨架上的磷酸二酯键。

DNA聚合酶：在DNA复制的时候需要，将单个脱氧核苷酸一个一个的连接起来，DNA聚合酶连接DNA骨架上的磷酸二酯键。

解旋酶：将DNA的双螺旋解开，解旋酶破坏的是氢键。

（也可以用高温解旋）RNA聚合酶：催化DNA转录为mRNA分子。

胰蛋白酶：将动物细胞间隙的蛋白质水解，使组织分散成游离细胞。

逆转录酶：催化RNA逆转录形成DNA分子。

生物染色剂高中几种染色剂的使用原理、使用方法归纳1。

甲基绿和吡罗红：实验原理:甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿使DNA呈现绿色,吡罗红使RNA呈现红色.利用甲基绿,吡罗红混合染色剂将细胞染色,可以显示DNA和RNA在细胞中的分布.试剂及配制方法（1）试剂质量分数为0.9%的NaCl溶液，质量分数为8%的盐酸，乙酸钠，乙酸，蒸馏水，吡罗红甲基绿混装粉。