中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)

中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色偶氮偶联法[原理]中性粒细胞胞浆中的碱性磷酸酶在碱性环境中，能水解磷酸萘酚钠，释放的萘酚与重氮盐作用生成不溶性有色的偶氮染料，定位于胞浆中。

[试剂](1)固定剂，为40％甲醛25m1，加无水乙醇至100m1。

(2)丙二醇缓冲液。

①贮备液(0．2mol/L 2—氨基-2-甲基-1，3-丙二醇液)为2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇10．5g，蒸馏水加至500ml。

②应用液(0.05mol/L pH9.75)，为0．2mol/L贮备液25m1， o.1mol/L盐酸 5m1，蒸馏水加至100m1。

(3)基质孵育液pH9.5-9．6(用前临时配制)，α—磷酸萘酚钠20mg溶于0.05mol/L丙二醇缓冲液20m1，再加坚牢蓝RR(或坚牢紫酱)20mg，混合后用滤纸过滤，立即应用。

(4)10g/l亮绿。

[操作](1)新鲜血片或骨髓片用4-10℃的固定剂固定30秒。

(2)、在涂片上滴加新配过滤的孵育液，在室温下作用10-15分钟。

(3)水洗，10g/L亮绿复染2分钟。

(4)水洗，晾干镜检。

[结果观察](-)：阴性反应。

(+)：胞浆中含少量紫黑色，无紫黑色颗粒或红色物质。

(++)：胞浆中含有中等量紫黑色颗粒或呈弥漫红色。

(+++)：胞浆中有丰富的紫黑色颗粒或弥漫较深红色。

(++++)：有极丰富的大紫黑色颗粒或弥漫深红色。

[参考值]中性粒细胞碱性磷酸酶活性积分值为10—50分。

[临床意义]基本同改良Gomor；氏钙钻法。

编写：谢平制定日期：2011.12.1[附注](1)若涂片不能及时测定，可固定干燥后放冰箱4℃保存。

(2)在甘油磷酸钠和巴比妥钠应临用前称取，分别为0．38和0．28，再加蒸馏水20m1即配成。

配制后的β-甘油磷酸钠不宜久放。

(3)涂片从孵育液拿出可不用水洗，直接加硝酸钻，但与硝酸钴作用后，应反复水洗，以免残留的硝酸钻与硫化胺作用后使整个涂片变黑，造成假阳性。

中性粒细胞碱性磷酸酶积分参考值
中性粒细胞碱性磷酸酶积分是需要了解，因为偏高或者偏低，都可能是一些疾病的征兆表现，通常阳性率10-40%，积分值
40-80，了解NAP阳性率及积分，可以帮助有效地诊断和辨别一
些疾病。

1、中性粒细胞碱性磷酸酶积分正常值范围是5O~12O分，其临床化验意义1.有助于慢性粒细胞白血病与感染或类白血病反
应的诊断与鉴别诊断。

2.有助于骨髓增生性疾病的鉴别诊断。

2、碱性磷酸酶主要存在于成熟阶段的中性粒细胞，其他细
胞均呈阴性反应。

阳性反应为在胞质中出现灰色到棕黑色颗粒，反应强度分为5级，即-、+、2+、3+、4+。

反应结果以阳性反应细胞的百分率和积分值来表示。

血涂片经染色反应后，在油镜下，
连续观察100个成熟中性粒细胞，记录其阳性反应细胞所占的百分率即为阳性率；并对所有阳性反应细胞逐个按其反应强度作出+~4+的分级，将各级所占的百分率乘以级数，然后相加，即为积分值。

3、参考值：阳性率10-40%，积分值40-80。

中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）是中性粒细胞的标志酶，主要存在于成熟中性粒细胞内，是其胞质特殊颗粒释放的一种在碱性条件（pH9.3～9.6）能催化各种醇和酚的单磷酸酯水解的非特异性水解酶。

NAP 活力可反映成熟粒细胞的成熟程度和功能，随着细胞的成熟，酶的活性也逐渐增强。

4、当中性粒细胞活化后，NAP阳性率及积分升高在病理情况下，NAP活性的变化常有助于某些疾病的诊断和鉴别诊断。

中性粒细胞碱性磷酸酶染色液（NAP）预期用途：供骨髓细胞图片及血液细胞图片染色检查检验原理：本染色方法为偶氮偶联法，在PH9.2-9.8的碱性环境下，细胞中的碱性磷酸酶能将底物磷酸萘酚AS-BI水解，生成α-萘酚，再以稳定的重氮盐与萘酚偶联生成不溶性有色偶氮染料沉淀，定位于细胞浆中主要组成成分：储存条件：本试剂盒应储存于2℃-8℃低温环境。

样本要求：新鲜骨髓细胞涂片及血液细胞涂片（切勿使用抗凝血）检验方法：一、工作液配制（一）、浸染工作液配制（一份浸染工作量是43ml,至少可同时放置8-10张涂片）1、重氮盐溶液的准备：B液1ml与C液1ml彻底混匀，静置2分钟；2、染缸（自备染液缸）内加入蒸馏水40ml；3、将重氮盐溶液倒入染缸内，混匀4、再加D液1ml入染缸内，轻轻混匀（二）滴染工作液配制（一份滴染工作液是2.15ml）使用器材：一次性塑料试管、微量移液器，一次性吸嘴，滴管。

操作：取B液50μl,C液50μL混匀，静置2分钟，再加蒸馏水2ml，D液50μl,混匀，二、染色步骤1、干燥涂片，滴加A液固定剂（用前恢复室温，并充分摇匀）固定约30-60秒，蒸馏水冲洗，甩干；2、滴加或浸入工作液15分钟，蒸馏水冲洗2-3分钟，甩干3、E液(使用前务必摇匀！)复染1-2分钟，蒸馏水冲洗，干后镜检4、计算积分：反应结果以积分值报告，油镜下计数100个中性杆状核、分叶核粒细胞，分别记录其分级情况，所有阳性细胞积分相加即为积分。

如：参考范围：阳性反应主要见于成熟中性粒细胞（杆状及分叶核粒细胞）中，健康成人一般的中性粒细胞碱性磷酸酶积分值为13-130，但各个实验室条件各异，实验室应有自己的参考值。

检验结果的解释NAP阳性颗粒为蓝色检验方法的局限性仅限于形态学染色观察使用注意事项1、5Tests只限滴染使用2、使用前应恢复室温，用前请摇匀试剂；B,C液请充分混匀，所用容器必须洁净，工作液颜色为金黄色3、应采用新鲜涂片作NAP染色,放置过久则酶的活性会降低；使用抗凝血涂片染色阳性结果不稳定4、工作液配制以后应在十分钟以内使用5、需用感染发热病人或正常人外周血涂片作为阳性对照6、每次试剂使用后，请迅速盖好密封保存，以免挥发及影响效果7、本品应由专业人士使用及进行结果的判读7、使用前应详细阅读使用说明书及产品包装标识，在有效期内使用，并做好个人卫生防护8、生产批号、效期见外包装9、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。

中性粒细胞碱性磷酸酶在妇科疾病诊断中的应用
陈永琴;袁慧琴
【期刊名称】《现代中西医结合杂志》
【年(卷),期】2008(017)007
【摘要】中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）是中性粒细胞重要的酶标志之一，其活性测定已广泛应用于临床，常用于一些血液病的鉴别诊断，但在妇科疾病诊断中的应用及相关报道未见。

笔者观察了NAP在妇科疾病诊断中的应用价值和妇科肿瘤化疗患者中细菌感染诊断中的临床价值，现将结果报道如下。

【总页数】1页(P997-997)
【作者】陈永琴;袁慧琴
【作者单位】湖州师范学院附属中心医院,浙江湖州,313000;湖州师范学院附属中心医院,浙江湖州,313000
【正文语种】中文
【中图分类】R446.1
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碱性磷酸酶染色（NAP）碱性磷酸酶染色（NAP）在临床的应用基本属于常规筛查的染色法。

（1）原理（偶氮偶联法）：血细胞内的碱性磷酸酶在pH 9.4～9.6的条件下将基质液中的α-磷酸萘酚钠水解，产生α-萘酚与重氮盐偶联形成不溶性灰黑色沉淀，定位于酶活性所在之处。

（2）结果判断：阳性结果为胞质内出现灰褐色至深黑色颗粒状或片状沉淀①（一）灰褐色沉淀，为0分。

②（+）胞质出现灰褐色沉淀，为1分。

③（++）胞质深褐色沉淀，为2分。

④（+++）胞质中已基本充满棕黑色颗粒状沉淀，但密度较低，为3分。

⑤（++++）胞质全被深黑色团块沉淀所充满，密度高，甚至遮盖胞核，为4分。

（3）参考值：成熟中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）的积分值为7～51。

由于各实验室的实验条件不同，正常值也有差异，应建立本实验室的正常值。

这里的正常值仅供参考。

（4）临床意义:①生理变化：①年龄变化：新生儿NAP活性增高，以后下降。

儿童期各年龄大致相似，成年期较儿童期活性减低，老年期更低。

②应激状态下的变化：紧张、恐惧、激烈运动等NAP活性可增高。

③月经周期中的变化：经前期增高，行经后降低，经后期恢复。

④妊娠期的变化：妊娠2～3个月的NAP积分值轻度增高，以后逐月增高，分娩时达高峰，产后则恢复正常。

②病理性变化：①感染：细菌性感染时NAP积分值增高。

在细菌性感染中球菌性感染较杆菌性感染为高；在球菌性感染中，急性较慢性为高。

病毒性感染时，NAP积分值一般无明显变化。

因此本染色法有时可帮助鉴别细菌性感染和病毒性感染；②血液病：慢性粒细胞白血病的NAP积分值明显减低，常为“0”，缓解时NAP积分值上升到正常。

类白血病反应时的NAP积分值明显增高，中性杆状核粒细胞的碱性磷酸酶活性增强，甚至中性晚幼粒细胞也呈阳性反应。

因此本法常用来鉴别慢粒和类白血病反应及观察慢粒疗效的指标之一；急性粒细胞白血病时NAP 积分值减低，急性淋巴细胞白血病时NAP积分值一般增高，因此本法可作为鉴别急粒和急淋的方法之一；急性单核细胞白血病时NAP积分值一般减低，有时可正常；粒细胞白血病合并细菌性感染时NAP积分值可增高，但不如单纯细菌性感染增高的明显；再生障碍性贫血的NAP积分值增高，当病情好转时，NAP积分值可下降，完全缓解时NAP活性可恢复到正常，因此本法对再障的诊断、疗效观察和估计病情均有一定意义；阵发性睡眠性血红蛋白尿的NAP积分值减低，因此本法可作为鉴别阵发性睡眠性血红蛋白尿和再生障碍性贫血的方法之一；真性红细胞增多症的NAP积分值升高，而继发性红细胞增多症的NAP积分值无明显变化。

临床医学检验：造血检验真题1、单选中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色最佳pH为()A．8.0～8.4B．8.4～8.8C．8.9～9.3D．9.4～9.8E．9.9～10.3正确答案：D2、名词解释（江南博哥）分选正确答案：流式细胞仪可将样本中所需要的细胞亚群从群体细胞中分离出来，即所谓分选。

3、单选下列哪项描述不符合染色体超微结构中的异染色质()A．主要分布在核周的核膜内缘B．相当于染色体的螺旋部分C．电子密度较低D．随着细胞成熟异染色质不断增多E．原始细胞中异染色质的量一般没有常染色质丰富正确答案：C4、名词解释核内小体正确答案：位于核的中部或靠近边缘部位，没有界膜，四周被环形纤维状染色质包围，它由一丝细丝状物质和少量颗粒组成，电子密度较低。

5、单选临床上应用较少的细胞化学染色方法是()A．过氧化物酶染色B．酸性磷酸酶染色C．铁染色D．中性粒细胞碱性磷酸酶染色E．非特异性酯酶染色正确答案：B6、填空题6p23表示_________________________；del(11)(q23)表示_________________________。

正确答案：第6号染色体短臂2区3带；11号染色体长臂2区3带断裂末端缺失7、多选过碘酸-雪夫反应(PAS)呈强阳性的是()A．戈谢细胞B．尼曼-匹克细胞C．巨核细胞D．骨髓转移性腺癌细胞E．Reed-Steinberg细胞正确答案：A, C, D8、单选下列叙述不符合原粒细胞在透射电镜下的结构的是()A．表面平滑，微绒毛很少B．胞核常染色质占优势，异染色质少C．高尔基体较少，发育差D．线粒体少，随细胞成熟其数量越来越多E．胞质少，内有大量的游离核糖体正确答案：D9、填空题脾脏在第3个月时，首先以产生_____为主，以后产生_____，在胎儿第5个月时，产生淋巴细胞和单核细胞，而红细胞和粒细胞的产生开始减少，至出生时已成为产生淋巴细胞的器官。

正确答案：红细胞；粒细胞10、单选下列叙述不符合淋巴细胞在透射电镜下的特点的是()A．细胞表面有少量短小微绒毛B．核内有时可见核仁C．核糖体丰富，线粒体较少D．高尔基复合体发育较差E．核内常染色质多，异染色质少正确答案：E11、单选对慢性粒细胞性白血病的诊断有参考价值的细胞化学染色是() A．糖原染色B．非特异性酯酶染色和NaF抑制试验C．中性粒细胞碱性磷酸酶染色D．氯醋酸AS-D萘酚酯酶染色E．过氧化物酶染色正确答案：C12、多选下列细胞化学染色原理相同的是()A．苏丹黑(SBB)染色B．过氧化物酶(POX)染色C．中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色D．酸性磷酸酶(ACP)染色E．氯醋酸AS-D萘酚酯酶(AS-DNCE)染色正确答案：A, C, E13、填空题通过体外造血细胞半固体培养、甲基纤维素培养以及Dexter培养系统，证实了三种早期的祖细胞，它们是___________、_______________、_____________。