中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白
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本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断人(Human)中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪(450nm)2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、7.5、15、30、60、120ng/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白化学发光定量免疫分析方法的建立及临床应用周齐洋1,廉倩倩2,梁 辰3,冯 杰3,颜光涛3(1.江苏省医疗器械检验所,江苏南京210012;2.苏州长光华医生物医学工程有限公司,江苏苏州215163;3.解放军总医院第一医学中心医学检验中心,北京100853)DOI:10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2020.10.026收稿日期:2020 04 19;修回日期:2020 07 09基金项目:国家科技支撑计划(编号:2015BAK45B01)通讯作者:颜光涛,研究员。
研究方向:标记免疫分析技术。
E mail:ygt301@163.com摘要:目的 建立一种双抗体夹心法定量检测人尿液中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophilgelatinaseassociatedlipocalin,NGAL)的化学发光免疫分析方法。
方法 以磁颗粒 链酶亲和素 生物素为固相分离系统,生物素标记1株鼠单抗NGAL,吖啶酯标记另1株鼠单抗 NGAL,建立NGAL定量免疫分析方法。
结果 此分析方法功能灵敏度高于3ng/mL;批内不精密度不超过5%,批间不精密度不超过8%;线性范围为10~1500ng/mL;参考区间上限为130ng/mL;尿液样本中可能存在的干扰物如丙酮、白蛋白、胆红素等对结果的干扰不超过5%;尿液样本2~8℃常规储存1~3周检测水平变化幅度小于20%;与Abbott的NGAL免疫试剂相比,斜率达0.9611,相关系数0.9938。
结论 该NGAL化学发光定量检测方法,性能优良,适合临床推广使用。
关键词:中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白; 急性肾损伤; 肌酐; 尿样储存稳定性中图分类号:R 331 文献标识码:ATheEstablishmentandClinicalApplicationofChemiluminescenceQuantitativeImmunoassayforNeutrophilGelatinaseAssociatedLipocalinZHOUQiyang1,LIANQianqian2,LIANGChen3,FENGJie3,YANGuangtao3(1.JiangsuInstituteofMedicalDeviceTesting,Nanjing210012,China;2.SuzhouHybiomeBiomedicalEngineeringCo.,LTD,Suzhou215163,China;3.DepartmentofClinicalLaboratoryMedicine,TheFirstMedicalCenterofthePLAGeneralHospital,Beijing100853,China)Abstract:ObjectiveTodevelopadoubleantibodysandwichchemiluminescencequantitativeimmunoassayforneutrophilgelatinaseassociatedlipocalininhumanurinesamples.MethodsUsingmagneticparticle streptavidin biotinasthesolid phaseseparationsystem,onemousemonoclonalantibody NGALwaslabeledwithbiotin,whileanothermousemonoclonalantibody NGALwaslabeledwithacridineester,andaquantitativeimmunoassaymethodforNGALwasestablished.ResultsThefunctionalsensitivityofthisassaywasbelow3ng/mL,theintra batchandtotalprecisionwerelessthan5%and8%,thelinearrangewas10 1500ng/mL,andtheupperlimitofreferenceintervalwas128ng/mL.Increasedconcentrationsofothercomponents(acetone,albumin,bilirubin,etc)inurinesamplescausednomorethan5%cross interference.Therangeofthevariationofurinesamplesdetectionconcentrationwaslessthan20%undertheconditionof2 8℃for1 3weeks.WhencomparedwiththeresultsofAbbottNGALassay,theslopewas0.9611andthecorrelationcoefficientwasover0.9938.ConclusionThestudiedNGALchemiluminescencequantitativedetectionmethodhasanexcellentperformanceandissuitableforclinicalapplications.Keywords:Neutrophilgelatinaseassociatedlipocalin; Acutekidneyinjury; Creatinine; Urinesamplestoragestability6571LabeledImmunoassays&ClinMed,Oct.2020,Vol.27,No.10 急性肾损伤(acutekidneyinjury,AKI)是指各种原发性或继发性损伤因素导致的肾脏结构的改变、肾功能下降以及最终肾衰竭的整个过程。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白在妇产科领域的研究进展作者:姜亚倩毛冰昆付安冉卢克新来源:《中国现代医生》2022年第05期[摘要] 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)是一种敏感的早期疾病预测指标,在急慢性肾损伤方面作用尤为突出,属于脂质运载蛋白lipocalin家族中的一员,且该指标已逐渐用于临床。
NGAL与机体的多种生理病理过程联系紧密,与炎症免疫应答、信号转导、细胞分化及肿瘤的发生发展、胰岛素抵抗等过程密切相关。
近年来,国内外研究学者在实验中发现NGAL与子痫前期(PE)、妊娠糖尿病(GDM)、早产等妊娠相关疾病有着密切相关性,考虑其发生发展可能与机体的炎症反应、糖脂代谢及胰岛素抵抗有关。
因此类妊娠疾病对母儿影响较大,该指标的应用将有助于疾病的早发现早治疗,从而改善母婴结局。
本文现将中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)在妇产科领域的研究进展作一综述。
[关键词] 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白;子痫前期;妊娠糖尿病;早产[中图分类号] R446.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2022)05-0189-03[Abstract] Neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) is a sensitive predictor for early disease. As a member of lipocalin family, NGAL plays a prominent role in acute and chronic kidney injury and has been gradually used in clinical practice. NGAL is closely related to a variety of physiological and pathological processes in human body, and is closely related to processes such as inflammatory immune response, signal transduction, cell differentiation, tumorigenesis and progression, and insulin resistance. In recent years, domestic and foreign researchers have found in experiments that NGAL is closely related to pregnancy-related diseases such as preeclampsia (PE), gestational diabetes mellitus (GDM), and premature delivery. It is considered that its occurrence and development may be related to the body’s inflammatory response, glucose and lipid metabolism and insulin resistance. Therefore, pregnancy-like diseases have a greater impact on mothers and children, and the application of this predictor will help early detection and treatment of diseases, thereby improving the outcome of mothers and babies. This article reviews the research progress of NGAL in the field of obstetrics and gynecology.[Key words] Neutrophil gelatinase-associated lipocalin; Preeclampsia; Gestational diabetes mellitus; Premature delivery中性粒細胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)作为脂质运载蛋白lipocalin家族的新成员,是一种新型炎症指标,也是一种脂肪细胞因子。
中性粒细胞明胶酶脂质运载蛋白(NGAL)检测的临床应用中性粒细胞明胶酶脂质运载蛋白(NGAL)是lipocalin家族新成员,NGAL 浓度越高急性肾损伤(AKI)越严重,随着血NGAL浓度的下降,AKI也得到恢复;同时在慢性肾损伤中,尿NGAL可以成为肾小管间质损害的早期标志物;通过NGAL检测可明确反映中性粒细胞活化、内皮细胞受损等病理过程,对于ICU患者常见危重病症发展有相应指示作用。
本文就NGAL在临床诊断中的应用研究近况作一综述。
标签:中性粒细胞明胶酶脂质运载蛋白(NGAL);急性肾损伤(AKI);慢性肾损伤;重症监护室(ICU)中性粒细胞明胶酶脂质运载蛋白(NGAL)1993年在人中性粒细胞中被发现,是细胞化学趋化物N-甲基蛋异亮苯丙肽受体之一,是可正常表达于中性粒细胞、肾小管上皮细胞、肝实质细胞、血管上皮细胞等的一种分泌性糖蛋白。
研究表明[1],NGAL是诊断肾损伤最有效的生物学标志之一,肾损伤时由肾小管上皮细胞所分泌,其分泌量与各种肾脏疾病相关。
本文现就NGAL在临床诊断中的应用研究近况综述如下。
1 在急性肾损伤(AKI)诊疗中的应用正常生理情况下NGAL水平较低,肾缺血或毒素急性损伤肾小管时,NGAL 高表达从而诱导肾小管-间质中浸润的中性粒细胞发生凋亡,以保护肾组织免受攻击。
高水平的NGAL促进肾小管上皮细胞再生修复,使肾功能得以恢复。
AKI 患者肾皮质小管、血和尿液中均发现大量NGAL堆积,可在损伤后3h的血和尿液中检测到,早于尿N-乙酰-β-葡萄糖苷酶、β2微球蛋白及血肌酐的改變。
被认为是AKI一种新的预测标志物,对于早期诊断、评估疾病严重程度、治疗监测有重要临床价值[2]。
1.1在冠状动脉搭桥手术后AKI中的应用冠状动脉搭桥手术后肾脏并发症及病死率较高,AKI发生率为 1.4%~19.50%,一旦发生肾衰竭,病死率高达15%~30%,围术期对肾损害早期诊疗十分重要[2]。
中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白———早期诊断急性肾损伤的生物标志物梁冰红△(综述),何敏华3(审校)(大理学院附属医院儿科,云南大理671000)中图分类号:R692 文献标识码:A 文章编号:100622084(2009)2323540203 摘要:急性肾损伤即以往的急性肾衰竭,具有高发病率及病死率,干预时机的掌握对其转归及预后起着重要影响;但目前缺少有效的早期诊断方法。
本文对早期诊断急性肾损伤最有前景的生物标志物之一,中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白进行综述,主要介绍它的生物学性质、对早期诊断的作用及其存在的局限性,旨在为临床早期预测提供帮助。
关键词:急性肾损伤;中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白;生物标志物Neutroph il Gel a ti n a se2a ssoc i a ted L i poca li n:an Early D i a gnosis B i omarker of Acute K i dney I n jury L I ANG B ing2hong,HE M in2hua.(D epart m ent of Pediatrics,the Affiliated Hospital of D ali U niversity,D ali 671000,China)Abstract:Acute kidney injury,als o named acute kidney failure in the past,has high morbidity and mor2 tality,Opportune intervene of the disease is i m portant f or its p r ognosis,however,effective method for early di2 agnostic is lacking.This paper p r ovides a brief revie w of the research p r ogress in the r oles of neutr ophil gelati2 nase2ass ociated li pocalin,one of the most p r om ising bi omarkers,for the early diagnosis of acute kidney inju2 ry.This p r ovides assistance for the early p redicti on of the disease in clinic.Key words:Acute kidney injury;Neutr ophil gelatinase2ass ociated li pocalin;B i omarker 急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)以往被称为急性肾衰竭,是住院患者的常见并发症,其发病率逐年上升。
(本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断!)产品货号:E-EL-H6127产品规格:96T/48T/24T/96T*5Elabscience®人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书Human NGAL(Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin) ELISA Kit使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题,请通过以下方式联系我们:销售部电话************,************技术部电话************具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签),以便我们更高效地为您服务。
用途该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其它相关生物液体中NGAL浓度。
检测原理本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。
用抗人NGAL抗体包被于酶标板上,实验时样品(或标准品)中的人NGAL会与包被抗体结合。
后依次加入生物素化的抗人NGAL抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素,抗人NGAL抗体与结合在包被抗体上的人NGAL结合,生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。
加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。
用酶标仪在450 nm波长处测OD值,NGAL浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中NGAL 的浓度。
试剂盒组成及保存未拆封的试剂盒可在2-8℃保存一周;如果一周以后才使用试剂盒,请拆开试剂盒并按照下表中的条件分别保存各组分。
试剂体积以实际发货版说明书为准。
相关试剂在分装时会比标签上试验所需自备物品1.酶标仪(450 nm波长滤光片)2.高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL3.37℃恒温箱,4.双蒸水或去离子水5.吸水纸6.加样槽样品收集方法(具体处理方法可参考官网:/List-detail-241.html) 1.血清:全血样品于室温放置1小时或2-8℃过夜后于2-8℃,1000×g离心20分钟,取上清即可检测。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白怎么样?中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白是怎么样?一个人如果拥有了健康的体魄、心理和文化,是值得非常自豪的事情。
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拥有健康的身体,应该从一点一滴做起!如:不偏食、不厌食、不挑食!并且要做到每天体育锻炼!还有多喝水,多吃水果。
下面为大家介绍中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白怎么样?中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白是在包括肾小管在内的一些组织器官的中性粒细胞和上皮细胞中表达的小分子蛋白。
NGAL在肾脏中的表达会因不同原因的肾损伤而显著升高,并且释放到尿液和血液中。
NGAL水平可在肾损伤的2小时内升高,因此被作为早期敏感的肾损伤生物标志物。
目的探讨中性粒细胞明胶酶脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)在体外循环术后急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)早期诊断中应用。
方法选择120例进行体外循环手术的先天性心脏病患者,体外循环结束后第一个12 h内采集尿样及血样1次/2 h,此后3 d 内采集1次/12 h,采用ELISA方法对尿样中NGAL进行定量分析,同时测定血清肌酐基线水平,并在术后相应时间点检测血清肌酐水平,血清肌酐比基线水平增加50%以上为发生AKI的标准。
结果术后3 d内有21例发生不同程度AKI,发生率17.5%,AKI组在体外循环术后各时间点尿NAGL浓度都显著升高,以术后2~6 h最为显著,两组比较有显著性差异,对术后2 h的尿NAGL浓度在界限值为100μg/L时进行ROC分析,尿NAGL在AKI诊断中的敏感性和特异性分别为96%和93%。
结论尿NAGL可以作为体外循环术后AKI的预测指标,在诊断AKI时较血清肌酐早,有利于早期对AKI进行预防和干预。
急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)作为体外循环术后常见的严重的并发症之一,其发生率为6%~15%,而一旦发生AKI,其中需要透析治疗患者病死率达20%~60%[1]。
临床肾小管损伤标志物、肾小管功能标志物、肾脏炎症标志物、纤维化标志物等诊断急性肾损知识要点一、肾小管损伤标志物1、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)NGAL 广泛存在于人体的肾脏、肺、小肠等器官,正常时表达量低,肾小管损伤时显著升高。
诊断价值:其在 AKI 发生后 2 小时内即可在尿液中检测到升高,比血清肌酐和尿量更早反映损伤,且能监测疾病严重程度与预后。
2、尿肾损伤分子-1(KIM-1)KIM-1 由肾近曲小管上皮细胞合成和分泌,在人体正常肾脏组织中表达极低,而在肾毒性药物及肾缺血引起损伤后,在肾小管上皮细胞产生并持续高表达。
诊断价值:对 AKI 诊断具有重要作用,但早期预警效能相对较差,可作为诊断依据之一。
3、金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)和胰岛素样生长因子结合蛋白-7(IGFBP-7)TIMP-2 是 TIMP 家族成员之一,1 种相对分子质量为 21000 的金属蛋白酶抑制剂,参与肾脏病理的发生过程,包括肾小管与肾间质损伤、肾脏纤维组织增生与癌变。
IGFBP-7 是胰岛素样生长因子结合蛋白超家族成员,相对分子质量为29000 的分泌蛋白,广泛表达于机体多个器官组织,包括脑、肺、前列腺、胃肠道等,作为生长因子抑制剂参与如凋亡、细胞增殖、肿瘤抑制等多个生理病理过程。
IMP-2 与 IGFBP-7 均为肾小管损伤早期细胞应激反应标志物,参与细胞 G1 期阻滞。
诊断价值:尿液中 TIMP-2 与 IGFBP-7 的乘积在脓毒症所致 AKI 中有较好预测效能,可识别危重症合并 AKI 患者。
二、肾小管功能标志物1、胱抑素C(CysC)胱抑素 C(Cystatin C, CysC)是一种由 120 个氨基酸组成的低分子量(相对分子质量为 13000)、碱性非糖化蛋白质。
它的一个重要特性是,其水平主要受肾小球滤过率的影响,但不受肌肉含量、性别和年龄等因素的影响。
这使得 CysC 在评估肾功能时具有更高的准确性和稳定性,尤其是在老年人、肌肉量变化较大或存在肌肉疾病的患者中。
一种新的肾损伤标志物—中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的临床意义中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白( neutrophil gelatinaseassociated lipocalin,NGAL) ,又称人脂质运载蛋白2( lipocalin 2,Ln2) 或噬铁蛋白( siderocalin) ,是人脂质运载蛋白家族中的一个新成员。
近年来,NGAL 作为一种新的肾损伤标志物倍受关注。
1、NGAL 的生物学特性NGAL 是1993 年Kjeldsen 等[1]研究中性粒细胞时发现的一种特殊颗粒组分,与明胶酶B 即基质金属蛋白酶9( matrixmetalloproteinase-9,MMP-9) 密切相关。
人类NGAL 基因定位于第9 号染色体长臂( 9q34) ,全长5 869 bp,包括1 695bp 的5'端非转录区、178 bp 的3'端非转录区及由7 个外显子和6 个内含子构成的3 696 bp 的原初转录区; 其相对分子质量为25 000 bp。
血小板活化因子( PAF) 、白三烯-B4( LT-B4)和N-甲酸基-甲硫氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸( N-formyl-Met-Leu-Phe) 等是NGAL 的配体[2]。
在生理状态下,中性粒细胞、肾小管上皮细胞、肺泡巨噬细胞、支气管上皮黏液细胞等分泌少量NGAL,而脑和周围神经、结肠、子宫和卵巢、胎盘、甲状腺等组织细胞中NGAL 的表达呈阴性。
NGAL 的生理功能尚不完全清楚,可能参与不同的生理、病理过程,涉及胚胎发育、细胞分化、肿瘤的发生发展、细胞凋亡、炎症免疫应答、脂质代谢等。
在胚胎期,NGAL 发挥类似生长因子的作用,参与各类组织发育、生长及分化,促进乳腺癌、食管癌等肿瘤细胞增殖。
NGAL 与MMP-9 以二硫键形成12 500 bp 的复合物,延长MMP 的蛋白水解活性,促进MMP-9 对细胞基底膜的降解,从而浸润周围基质,介导癌细胞转移。