线粒体染色液(Altmann 法)
简介：
线粒体是细胞能量的来源，其形态可以有较大的变化(从杆状到圆形)。线粒体体积很小，只有借助电子显微镜才能观察到。线粒体包含遗传性母体DNA 。其数量、大小和形状根据动物细胞类型而有差异。观察线粒体的最佳方式是用电子显微镜， 组织病理学方法如Altmann 技术是有帮助的。用组织化学方法成功显示线粒体取决于以下几个因素：组织必须新鲜固定，切片薄(2~3μm)。由于当细胞缺氧或死亡后线粒体是发生退行性变最早的细胞器之一，快速固定至关重要。
线粒体染色以Champy-Kull 方法结果最好，但是染色技术较复杂，Heidenhain 铁苏木素方法需要精确分化。Leagene Altmann 品红方法较简单，但也应注意控制分化的程度。
组成：
自备材料：
1、固定液：Champy 固定液或Helly 固定液
2、自来水
3、无水乙醇
操作步骤(仅供参考)：
1、 组织固定，推荐使用Champy 固定液，但Helly 固定液效果也较好。
2、 切片脱蜡至水。
3、 将切片浸泡于Aniline 品红染色液, 稍微加热切片至有热气出现。
4、 自来水冲洗切片。
5、 用Aniline 分化液A 分化至过染的红色褪去。
6、 用Aniline 分化液B 分化，应显微镜下控制染色程度。
7、 无水乙醇快速脱水。
8、 二甲苯透明，非水溶性封片剂封片。
染色结果：
编号 名称
DZ0012 3×50ml Storage
试剂(A): Aniline 品红染色液 50ml RT 避光 试剂(B): Aniline 分化液A 50ml RT 试剂(C): Aniline 分化液B 50ml
RT 使用说明书
1份
线粒体红色
红细胞和细胞核红色
背景黄色
注意事项：
1、应仔细分化，以使背景呈黄色。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：
编号名称
CA0075 青霉素-链霉素混合溶液(100×双抗)
DC0032 Masson三色染色液
DF0111 中性福尔马林固定液(10%)
DG0005 糖原PAS染色液
DM0002 姬姆萨染色液(1:9)
PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)
TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)
细菌的常用染色技术 简单染色法：利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。例如番红。 1．涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜。 2．干燥：可自然晾干，或将涂片置于火焰高处微热烘干，但不能直接在火焰上烘烤。 3．固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过迅速通过火焰2-3次（用手指触涂片反面，以不烫手为宜）。 4．染色：加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液)，染l～2min。5．水洗：用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止。 6．干燥 7．镜检 复染色：利用用两种以上染料对细菌进行染色。例如革兰氏染色法。 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，需要碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）。 碱性染料初染液的象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine ）是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95%的酒精（ethanol）。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，而且将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液为番红。 1.载玻片固定。在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。 2.草酸铵结晶紫染1分钟。 3.自来水冲洗，去掉浮色。 4.用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。 5.用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。 6.用番红染液或者沙黄复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。
病理技术组特殊染色PDCA 循环 问题描述： 2018年4月诊断医师反应科室刚果红染色效果不佳影响疾病诊断，主要表现在淀粉样着色和纤维组织的着色不易区别，质控小组统计了上半年连续四个月特染结果数据（表一及图一 ），1-3月特染切片优良率统计均符合三级甲等医院要求（优秀率≥90%；优良率≥98%），而4月份统计数据显示该月特染质量明显下降且低于规范要求（优秀率84%；优良率90%），已经严重影响病理诊断的及时性和准确性。 表一 图一 75 80 85 90 95 100 一月 二月 三月 四月 优秀率 优良率
原因分析： 对2018年4月所有特染切片染色项目构成和评分结果为乙、丙、丁的染色项目进行统计，数据显示影响特染优良率的主要因素是刚果红染色和MASSON 染色（表二，图二），其中又主要是刚果红染色结果对优良率影响最大（表三，图三），因此最快时间内使优良率达到相关规范要求，可通过改进刚果红染色来实现。 表二. 图二 表三 图三 质控小组组织阅片医师及病理技师集体讨论和分析刚果红染色不合格的可能原因： 1.试剂原因：科室刚果红染色为手工染色法，所有试剂均为手工配制，由于标本量较小，染液用量不大且周期较长，很可能是刚果红染液近效期或过期导致试剂失效； 2.人员原因：该岗位人员是否依据SOP 操作；责任心；实践及理论培训是否合格； 3.方法学：本科室刚果红染色项目开展时间不长（2年），目前的方法学选择在当时并未经过严密的论证，且因为标本量很少，在阅片和染色两方面均没有积累太多经验，所以
不排除方法学本身的不足导致染色失败。 图四 预期改进目标： 制定改进计划措施并实施，在本年度5月底使特殊染色优良率≥98%，优秀率≥90。改进计划（PLAN）： 专业组全体人员就解决方案进行分析和讨论，针对不同的原因给出针对性的解决方案并明确责任人和实施时间表： 1.制度和规范因素排查：5月3-4日，实验室主任和专业组长一起核查刚果红染色所涉及的方法学及仪器设备SOP的书写和操作步骤规定是否存在错误和不当，如有不当和错误则进行全员讨论并进行更正（XX、XX、XX）。 2.试剂因素排查：5月3-11日由XX、XX、XX通过查阅试剂配制记录表及现场查看对刚果红染色所涉及的试剂有效期进行确认； 3.环境及仪器因素排查：5月7-9日，XX、XX、XX通过查阅室内温湿度记录表排除环境因素；对试剂配制中用到的玻璃器皿，试管等按规范进行彻底清洗。 4.人员因素排查：5月14-18日由XX替代当班特染操作者XX进行刚果红染色；如结果无变化则重新更换所有液体两人同时对标本进行染色。 5.方法学因素排查：如以上各因素均排查完毕但染色结果无改进则应该考虑方法学本身的问题，5月14-18日，XX、XX、XX分别通过查阅电子文献、纸质版文献书籍及同行求教等方式确定新的刚果红染色方法并进行方法学验证。 计划实施(DO)： 1.人员因素：XX代替XX对标本进行刚果红染色，染色结果与之前相比没有改进，因
【实验题目】小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 【实验目的】 1、掌握线粒体的超活染色原理及方法。 2、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。 【实验材料与用品】 1.试剂：%的詹纳绿B染液、Ringer试剂 2.器具：解剖盘、镊子、剪刀、双凹片、小烧杯、载玻片、盖玻片、胶头滴管、显微镜等 3.材料：小鼠 【实验原理】 I.线粒体 线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包裹的细胞器，直径在微米左右；线粒体是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷的主要场所，为细胞的活动提供了能量，有“细胞动力工厂”之称。 线粒体在代谢活动旺盛的细胞，如肌肉细胞，肝细胞，神经细胞等中大量存在；线粒体的数量差异巨大，如在肝脏细胞中有1000-2000个线粒体，而有些细胞只有一个线粒体，如酵母菌细胞的大型分支线粒体，大多数哺乳动物成熟红细胞不具有线粒体。 线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基端，在精子中分布在鞭毛中区。 II.超活染色实验原理 超活染色也称活体染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法；超活染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡。应用活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态。
活体染色根据染色剂的性质和染色方法不同分为：体内活染（注入、固定、堆积）、体外活染（分离、浸染、固定） 1）体内活染：是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的作用。 2）体外活染：又称超活染色，它是由活的动植物分离出的细胞或组织小块，以染料溶液浸染，燃料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 活体染色之所以能固定，堆积在细胞内某些特殊部分，主要是染料的“电化学”特性起到 重要作用；碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染液的胶粒表面带阴离子，被染的部分本身也是具有阳离子或阴离子，这样它们彼此之间就发生了吸引作用，从而使样品着色。不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料。 活体染色剂的选择原则： 1、对细胞无毒性或毒性极小的染剂 2、具有电化学特性 3、配成稀淡的溶液来使用 4、具有专一性（特异性） 5、一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。 本实验采用的活体染色剂---詹纳斯绿B 詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性的对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态--蓝绿色）；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原呈无色的色基（即无色状态）。 另外，中性红也属于碱性染料，对植物液泡系的染色有专一性。 【实验步骤】 一、大体流程 剪下合适大小的肝组织小块洗净 用詹纳斯绿B 染色20-30min 取着色部分加 Ringer 溶液制成悬 液 制片，高倍镜观察 断头法处死小 白鼠取肝组织
微生物实验报告——细菌鞭毛染色及活菌运动观察摘要 关键词 前言 实验目的 实验原理 A.细菌鞭毛染色法的基本原理 B.压滴法观察活菌运动的基本原理实验器材 实验内容 (一)压滴法观察活菌运动 (二)细菌鞭毛染色 实验结果
参考文献 报告编写人：张行润 生命科学学院生科四班 200900140177 细菌鞭毛染色及活菌运动观察 摘要 鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的位置和数目是细茵的一项重要形态特征．细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0 . 01 ~0.02um ，所以，除了很少数能形成毛束（由许多根鞭毛构成）的细菌可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用电子显微镜观察．要用普通光学显微镜观查细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。 细菌形态学观察包括细菌染色标本检查法和不染色标本检查法。压滴法属于最常用的不染色标本检查法，主要用于检查细菌的运动性。 关键词 鞭毛（flagellum）细菌（bacteria）鞭毛染色法（flagellum staining） 光学显微镜（Optical microscope）压滴法（Pressure drop method） 前言 细菌的鞭毛极细，直径一般为10—20nm，只有用电子显微镜才能观察。但是由于设备限制，我们希望能够在普通的光学显微镜下就能够看见细菌鞭毛。于是，便产生了鞭毛染色法。1958年Rhodes根据Fontana的螺旋体改良镀银染色法，建立了一种细菌鞭毛镀银染色法。试剂分为媒染剂和银染剂。但是试剂的稳定性低，容易变质。2002年谷海瀛发明了一种新的细菌鞭毛镀银染色法。该法将媒染剂分为A、B两种。A液为酸化FeCl3溶液，B液为15%单宁酸，含甲醛1 ml，用时A、B液等量混合，轻微加热，染片40s，再用银染液涂片加热至微冒蒸汽，染色10 s。这种方法不仅染色效果好，而且解决了试剂稳定性差的问题，此种试剂常温下至少可保存1年。通过鞭毛染色，可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一，根据鞭毛的这些特征，可将有动力细菌分为单端极鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌。有了这种简易的鞭毛染色方法，对于我们的细菌研究来说就更加方便容易了。 一．实验目的 1、学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征
实验四线粒体的活体染色 实验目的： 1.掌握线粒体的活体染色原理及方法。 2.熟悉在耳缘静脉用空气栓塞法处死兔子的方法。 3.了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。 实验原理： 线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。 不同细胞中线粒体的形态和数目不同。在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。 线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。 实验用品： 一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。 二、器材和仪器普通光学显微镜、手术器材一套、解剖盘、腊盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、20ml注射器、吸管。 三、试剂l／300詹纳斯绿B染液、0.9%Ringer氏液(哺乳类用)。 实验内容和方法： 一、兔肝细胞线粒体的活体染色 （一）方法 1.用空气栓塞法处死兔子（见图4-1），置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（约2～3mm3大小）。 2.放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，再用吸管吸去Ringer 氏液。 3.在平皿内滴加1／300詹纳斯绿B（Janus green B）染液，，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。当组织块边缘染成蓝色时即可，一般需要染色30分钟。染色期间翻动组织块几次，使其各表面均有机会接触空气和染液。 4. 染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，去除大组织块，就会
线粒体(Mitochondrion)的活体染色 及电镜照片观察 【实验目的】 掌握一种活体染色方法,了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。 【实验用品】 一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。 二、器材和仪器显微镜、手术器材一套、解剖盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、10ml 注射器、吸管。 三、试剂 l／300詹纳斯绿B染液、Ringer氏液(哺乳类用)。 【实验内容】 一、兔肝细胞线粒体的活体染色 （一）原理 线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。 （二）方法 用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。 染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。 将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。 (三)结果 显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。 二、线粒体的光镜切片观察 用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。 三．线粒体的电镜照片观察 不同细胞中线粒体的形态和数目不同。线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。 线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。 这有三张线粒体超薄切片的电镜照片：第一张是小鼠肾小管上皮细胞中线粒体的电镜照片，可见线粒体呈椭圆形和杆状，由双层膜包围，内膜向内突起成平板状脊，脊与线粒体长
细菌的鞭毛染色和形态观察 胡雪芳 201300261033 【实验目的】 1.学习掌握鞭毛染色方法，观察鞭毛形态特征。 2.巩固显微镜的使用和无菌操作技术。 3.观察细菌的运动特征。 【实验原理】 1.鞭毛 鞭毛（flagellum）在某些细菌菌体上具有细长而弯曲的丝状物，称为鞭毛。鞭毛的长度常超过菌体若干倍。在某些菌体上附有细长并呈波状弯曲的丝状物，少则1-2根，多则可达数百根。这些丝状物称为鞭毛，是细菌的运动器官。 细菌鞭毛极纤细，直径一般为0.01-0.02μm，只有用电子显微镜才能观察到。但如采用特殊的染色法，则普通光学显微镜下也能看到。 2.鞭毛的分类 通常根据鞭毛的位置可 以将鞭毛分为两大类：端生 鞭毛和周生鞭毛，端生鞭毛 又可以细分为端生单鞭毛， 单端丛生鞭毛和两端丛生图1.鞭毛的种类鞭毛。形态如图1所示。 A端生单鞭毛，B单端丛生鞭毛，C两端丛生鞭毛，D周生鞭毛。
3.鞭毛染色法 鞭毛染色法的基本原理是：即在染色前先用媒染剂（丹宁酸或明矾钾）处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。 采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，但此法既费时又麻烦。如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用悬滴法或压滴法直接在光学显微镜下检查活细菌是否有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛。 悬滴法就是将菌液滴加在洁净的盖玻片中央，在其周边涂上凡士林，然后将它倒盖在有凹槽的载玻片中央，即可放置在普通光学显微镜下观察。 压滴法是将菌液滴在普通的载玻片上，然后盖上盖玻片，置显微镜下观察。 【实验材料】 1.菌株及其培养条件 本次实验采用的是不同鞭毛着生方式的细菌，具体见表1。 表1. 不同鞭毛着生方式的细菌。
mydye 发表于 2006-3-4 14:37:00 AgNOR染色法: 1、试剂配制： （1）AgNOR染色液： 甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。 乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。 （2）AgNOR工作液 取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。 2、步骤： （1）切片脱蜡至水 （2）双蒸水洗2次 （3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）（4）双蒸水洗3次 （5）脱水,透明,封固 3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色， AgNOR呈棕黑色颗粒状。 B 鞭毛染色法: １．试剂配制： 甲液：丹宁酸５克 氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克 福尔马林（１５％）２．０毫升 氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升 乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克 蒸馏水１００毫升 制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。 ２．染色方法： （１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。 （２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。 （３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。 （４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。
细菌鞭毛染色 一、实验目的 学习并掌握鞭毛染色方法，并观察鞭毛的形态。 二、实验原理 细菌的鞭毛极纤细，直径一般为0.1—0.2um，只有用电子显微镜才能观察到。但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。 鞭毛染色的基本原理：即在染色前先用媒染剂(如单宁酸或明矾钾)处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色（如碱性复红、硝酸银、结晶紫）。常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。（本次实验用硝酸银当染色剂） 三、实验器材及试剂 1.菌种：枯草芽孢杆菌（鞭毛周生）、铜绿假单胞菌（鞭毛端生）。 2.溶液和试剂：硝酸银鞭毛染色剂A液和B液、95%乙醇、蒸馏水。 3.仪器和其他物品：载玻片、酒精灯、显微镜、双层瓶、擦镜纸、接种环、镊 子、电热炉、大烧杯、洗衣粉 四、实验步骤 鞭毛染色——硝酸银染色法 1.载玻片准备：将载玻片用洗衣粉洗涤后，置于95%的乙醇溶液中浸泡20min，使用时取出再火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。 2.制片：取一块载玻片，在一端滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作从枯草芽孢杆菌（铜绿假单孢菌)斜面上挑取菌种在载玻片液滴上轻轻蘸一下，使液滴表面形成一薄层菌膜，随后倾斜玻片，使悬菌液缓慢流向另一端，用吸水纸在载玻片边缘处吸去多余菌悬液，自然干燥。 3.染色：滴加硝酸银染液A液覆盖菌面3-5min后用蒸馏水充分洗去A液，之后用B液洗去残留水分，再滴加B液覆盖菌面数秒至1min，其间可用微火加热，当菌面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗，自然干燥。 4.镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜检查，菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。
四、实验结果记录 枯草芽孢杆菌鞭毛染色观察图 铜绿假单胞菌鞭毛染色观察图 五、实验结果分析 1.理论结果： 2.实验结果：
实验三 1实验目的与原理 1.1实验目的： 观察植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布；掌握一些细胞活体染色的原理和技术。 1.2实验原理： 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。中性红为弱碱性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。 2实验材料与方法 2.1实验材料： 洋葱鳞茎内表皮 2.2洋葱鳞茎细胞液泡的活体染色： 撕取洋葱鳞茎内表皮→中性红溶液染色5~10min→吸去染液，滴加Ringer液→盖上载玻片，显微镜观察。 2.3洋葱鳞茎细胞线粒体的活体染色：
撕取洋葱鳞茎内表皮→詹纳斯绿B溶液染色10min→吸去染液，滴加Ringer 液→盖上载玻片，显微镜观察。 3实验结果 图1中性红染色洋葱内表皮细胞图2詹纳斯绿染色洋葱内表皮(X100) (X100) 在图1中性红染色的洋葱鳞茎内表皮细胞中可见表皮细胞中央液泡所占据被染至砖红色，细胞核被挤至旁边 图2是经詹纳斯绿B染色的洋葱鳞茎内表皮细胞，图中细胞被染成蓝色可以看见有许多蓝色颗粒状物体，这就是经染色的线粒体。
?检测技术? 细菌鞭毛镀银染色法的创新 谷海瀛 【摘要】 目的 发明一种新的细菌鞭毛镀银染色方法。方法 染色媒染剂由A 、B 2种溶液组成,A 液是酸化的FeCl 3溶液,B 液是含有甲醛的丹宁酸溶液,A 、B 液混合后,微加热,染涂片50s ,洗净涂片后镀银染色。共有19属34种228株细菌,每株菌都进行固体培养和液体培养进行鞭毛染色,并采用West 氏评分法对鞭毛染色质量进行评价。结果 鞭毛形态及其在菌体的位置极易观察。228株细菌获得良好的鞭毛染色质量,血琼脂平板培养平均每株菌获得4.7分,肉汤培养获得4.6分。与一些肠杆菌株不同,100株非发酵菌血琼脂平板培养鞭毛染色均获得5分,而99株肠杆菌肉汤培养鞭毛染色获得4分以上。一些弧菌科细菌鞭毛位置分布因这2种培养方法的不同而有差异。并发现1株非O1群霍乱弧菌有单侧毛和亚极端毛。结论 这种鞭毛染色方法操作简单、快速,试剂稳定,重复性好。由于可靠性好,可以作为常规方法。非发酵菌适合于固体培养进行鞭毛染色获得最佳效果,液体培养对于一些肠杆菌鞭毛染色更为适合。 【关键词】 细菌;鞭毛;镀银染色;媒染剂;培养基 A new silver 2plating method for staining flagella G U Haiying.Clinical Laboratory Department ,Hainan Provincial People ’s Hospital ,Haikou 570311,P.R.China (E 2mail :clinmicrobiollab @https://www.doczj.com/doc/cc3321293.html, ) 【Abstract 】 Objective T o develope a new technique for bacterial flagella staining.Methods Reagent A was acidized ferric chloride s olution and B was tannic acid containing formalin.The mixture of A and B was heated slightly ,the smears were covered with the cooling mixture for 50sec.Washed gently with distilled water ,the smears were stained with silver s olution.228strains of 19genera 34species were dem onstrated for flagella.Each culture was incubated into a tube of flagella broth medium and onto a sheep blood agar (S BA )plate.All stained smears were rated by WEST ′s method.R esults The flagella and their position on the bacteria were easily dis 2cerned under the microscope ,228strains of organism growing on S BA plates and in broth medium had the highly ratings with the mean of 4.7and 4.6,each rating of 100cultures of non fermentative rods grown on S BA was highly scored 5different from that of 104cultures of enterobacteria grown in flagella broth medium with rating score above 4.As to s ome strains of Vibrioraceae ,flagellar arrangement may differ with the tw o kinds of incubation media.S in 2gle lateral flagellum and subterminal flagellum were dem onstrated in 1strain of V.cholerae non 2O1.Conclusions This simple and fast method with the stable m ordant was g ood in reliability.This technique overcomed alm ost all the difficulties in flagella staining and s o can be used as a routine method.N on fermentative bacilli growing on s olid medium and enterobacteria growing in flagella broth were m ore suitable for flagella 2staining. 【K ey w ords 】 Bacteria ;Flagella ;S ilver stain ;M ordant ;Culture 作者单位:570311海口,海南省人民医院检验科(E 2mail :clinmi 2 crobiollab @https://www.doczj.com/doc/cc3321293.html, ) 细菌侧毛作为细菌分类主要依据之一〔1〕,说明细菌鞭毛染色在细菌鉴定中是很重要的技术。细菌 鞭毛染色的方法文献有很多报道,但基本方法可以 归纳为:Leifs on 法〔2〕、G ray 法〔2〕、镀银法〔3〕、Ryu 法〔4〕 ,但这些方法操作复杂或染液不稳定或着色欠佳,尽管科赫(K och )在一个世纪前就发明了细菌鞭毛染色技术,但至今仍没有一个稳定而简易可推行的方法。本文报告一种新的细菌鞭毛镀银染色方法,通过19属34种228株细菌鞭毛染色证实该方法操作简单、快速,可作为常规方法推广。 材料和方法 标准菌株(13株):E.coli ATCC25922、P.aerugi 2nosa ATCC27853(ATCC43088)、L.monocytogenes ATCC15313、V.parahaemolyticus ATCC17802、P.shigel 2loides ATCC14029、A.hydrophila ATCC7966、A.caviae ATCC 15468、V.mimicus ATCC33653、V.vulnificus ATCC 27562、B. pickettii ATCC27511、E.cloacae ATCC43091、P.mirabilis ATCC7002。 质控菌株(18株):P.penneri 、S.maltophilia 、S. putref aciens 、A.veronii biovar sobria 、P.pseudoalcali 2genes 、P.stutzeri 、S.enterica subsp.arizonae 、A.hy 2drophila 、A.caviae 、P.pudida 、B.cereus 、B.cepacia 、A.
染色液的配制 一、吕氏(Loeffler)碱性美蓝染液 A液：美蓝(methylene blue) 0．6g 95%酒精 30ml B液：KOH 0．01g 蒸馏水 100ml 分别配制A液和B液，配好后混合即可。 二、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液 A液：碱性复红(basic fuchsin) 0．3g 95%酒精 10ml B液：石炭酸 5．0g 蒸馏水 95ml 将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%酒精，继续研磨使其溶解，配成A 液。 将石炭酸溶解于水中，配成B液。 混合A液及B液即成。通常可将此混合液稀释5—10倍使用，稀释液易变质失效，一次不宜多配。 三、革兰氏(Gram)染色液 1．草酸铵结晶紫染液 A液：结晶紫(crystal violet) 2g 95%酒精 20ml B液：草酸铵(ammonium oxalate) 0．8g 蒸馏水 80ml 混合A、B二液，静置48小时后使用。 2．卢戈氏(Lugol)碘液
碘片 1．0g 碘化钾 2．0g 蒸馏水 300ml 先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。 3．95%的酒精溶液。 4．番红复染液 番红(safranine O) 2．5g 95%酒精 100ml 取上述配好的番红酒精溶液10ml与80ml蒸馏水混匀即成。 四、芽孢染色液 1．孔雀绿染液 孔雀绿(malachite green) 5g 蒸馏水 100ml 2．番红水溶液 番红 0．5g 蒸馏水 100ml 3．苯酚品红溶液 碱性品红 11g 无水酒精 100ml 制法取上述溶液10ml与100ml5%的苯酚溶液混合，过滤备用。 4．黑色素(nigrosin)溶液 水溶性黑色素 10g 蒸馏水 100ml 称取10g黑色素溶于100ml蒸馏水中，置沸水浴中30分钟后，滤纸过滤
线粒体染液-詹姆斯绿B Janus green B的使用及其原理60 JanusgreenB中文名称：詹纳斯绿B英文名；小鼠肝细胞线粒体的JanusgreenB染色及观；1.实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯；（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、；（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿；（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细；目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命；应用：研究 Janus green B 中文名称：詹纳斯绿B 英文名称：Janus green B 别名：健那绿；双氮嗪绿。苏铁木精英文别名: Janus green；Diazine green；Diazine green S 。化学式：C30H31N6Cl 定义：主要用于生物活体染色的一种碱性偶氮吖嗪染料。能穿过细胞膜，进入细胞特异地显示线粒体。詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态（即有色状态）呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于0℃～4℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。Cas 编号: MDL 编号: 分子式: 中文别名: 2869-83-2 MFCD00011758 C30H31ClN6 EINECS 编号: 220-695-6 Beilstein 编号: 分子量: 511.06 詹姆斯绿B，健那绿，健那绿B，双氮嗪绿，真那氏绿，詹姆斯绿，烟鲁绿，3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基)苯基]偶氮]-5-苯基吩嗪翁氯化物3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylphenazinium 英文别名: chloride Diazin Green S Union Green B C.I. 11050 棕色呈深棕色结晶性粉末，溶于水呈蓝色，微溶于醇。常用作线粒体专一性活体性状: 染色剂. 线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态. 用途: 贮存: 联合国编号: Risk: Safety: Hazard: 用于线粒体活体染色，真菌和原虫染色，胚胎切片染色，以及用作氧化还原指示剂和铜的电镀添加剂。密封干燥保存。S24/25 小鼠肝细胞线粒体的Janus green B染色及观察 1. 实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。 2. 实验用品： （1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双
细菌的鞭毛染色和形态观察 胡雪芳201300261033 【实验目的】 1.学习掌握鞭毛染色方法，观察鞭毛形态特征。 2.巩固显微镜的使用和无菌操作技术。 3.观察细菌的运动特征。 【实验原理】 1.鞭毛 鞭毛（flagellum）在某些细菌菌体上具有细长而弯曲的丝状物，称为鞭毛。鞭毛的长度常超过菌体若干倍。在某些菌体上附有细长并呈波状弯曲的丝状物，少则1-2根，多则可达数百根。这些丝状物称为鞭毛，是细菌的运动器官。 细菌鞭毛极纤细，直径一般为0.01-0.02μm，只有用电子显微镜才能观察到。但如采用特殊的染色法，则普通光学显微镜下也能看到。 2.鞭毛的分类 通常根据鞭毛的位置可以 将鞭毛分为两大类：端生鞭 毛和周生鞭毛，端生鞭毛又 可以细分为端生单鞭毛，单 端丛生鞭毛和两端丛生图1.鞭毛的种类鞭毛。形态如图1所示。 A端生单鞭毛，B单端丛生鞭毛，C两端丛生鞭毛，D周生鞭毛。
3.鞭毛染色法 鞭毛染色法的基本原理是：即在染色前先用媒染剂（丹宁酸或明矾钾）处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。 采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，但此法既费时又麻烦。如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用悬滴法或压滴法直接在光学显微镜下检查活细菌是否有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛。 悬滴法就是将菌液滴加在洁净的盖玻片中央，在其周边涂上凡士林，然后将它倒盖在有凹槽的载玻片中央，即可放置在普通光学显微镜下观察。 压滴法是将菌液滴在普通的载玻片上，然后盖上盖玻片，置显微镜下观察。 【实验材料】 1.菌株及其培养条件 本次实验采用的是不同鞭毛着生方式的细菌，具体见表1。 表1. 不同鞭毛着生方式的细菌。
淀粉样物质染色液(Bennhold 刚果红法) 简介： 淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质，可存在于不同的组织、器官，导致的疾病称为淀粉样变。淀粉样物质主要是由蛋白质构成，该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结构。在电子显微镜下淀粉样物质呈原纤维排列，病例材料中为大量细胞外的不分支的细丝，大多随机排列。用于识别淀粉样物质的组织学方法有甲紫染色、刚果红染色、偏振光显微镜观察等。目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差，经典的而且有效的方法是刚果红染色，1922年Bennhold 发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别，并应用到组织切片。 Leagene 淀粉样物质染色液(Bennhold 刚果红法)主要由刚果红染色液、苏木素染色液等组成。其染色原理在于淀粉样物质对刚果红比其他的组织结构具有更大的亲和力，其羟基与刚果红的氨基结合，从而使淀粉样物质染成红色。该染色法性能稳定，是非常经典的淀粉样物质染色的方法。 组成： 自备材料： 1、10%中性福尔马林固定液 2、蒸馏水 3、系列乙醇 操作步骤(仅供参考)： 1、常规固定，常采用中性福尔马林，常规脱水包埋。 2、切片厚度，常规脱蜡至水。 3、入Bennhold 苏木素，浸染。 4、酸性乙醇分化，立即入水终止分化，水洗后镜下控制至恰当程度。 编号 名称 DG0021 5×50ml Storage 试剂(A): Bennhold 苏木素染色液 50ml RT 避光 试剂(B): 酸性乙醇分化液 50ml RT 试剂(C): Scott 蓝化液 50ml RT 试剂(D): 刚果红染色液 50ml RT 避光 使用说明书 1份
细胞生物学实验报告 小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 1. 实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿 B 给小鼠的肝细胞线粒体染色。 2. 实验用品： （1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴 管、双凹载玻片 （2）实验药品：蒸馏水、Ringer 液、詹纳斯绿 B 染液 （3）实验材料：小鼠 3. 实验原理： （1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法。这种染色方法常用的是化学染料。 目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化 学变化以致细胞的死亡。 应用：研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。 （2）通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料 被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。活体染料之所以能固定、堆积在细胞内 某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学”特性。碱性染料的胶粒表面带阳离 子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子， 这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但并非任何染料均可用于活体染色，理论 上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。一 般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质( 如卵磷脂、 胆固醇等) 的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B(Janus green B) 和中性红(neutral red) 两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别 具有专一性。 （3）选择活体染料的原则： ①性质：有电化学特性 ②低毒、无毒 ③低浓度：如实验中使用的是1/5000 的詹纳斯绿 B 染液 ④专一、特异性：中性红可特异性地对植物液泡染色 ⑤常以碱性染料为主，因为碱性染料多可溶于类脂，容易穿膜。 4. 实验步骤： （1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。剪开腹腔，取出肝脏。选取边缘较薄 2 的肝组织0.5cm 放入小烧杯中，用Ringer 液冲洗去血污。 （2）滴加1/5000 的詹纳斯绿 B 染液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净肝组织移入染液染色20~30mins。以组织边缘被染成蓝绿色为准。 （3）吸去染液，重新把组织置于小烧杯中。滴加Ringer 液约0.5mL，用剪刀充
结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法 蓝色：胶原和网状纤维 淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质 红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒 橘红色：髓鞘、红细胞 图表A 1.1.Mallory染色，显示胶原纤维，A组排列规则
1.2. Masson三色染色法 绿色：胶原纤维 红色：肌纤维 橘红色：红细胞 图表B 1.2 Mssson三色法 图表C 1.2.Masson三色染色胃癌组织中血管平滑肌
1.3. 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法红色：胶原纤维 黑色：网状纤维 绿色：弹性纤维 淡黄色：肌肉、红细胞 图表D 4.Weigert间苯二酚法
二、胶原纤维染色法 2.2. Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法 鲜红色：胶原纤维 黄色：肌纤维、细胞质、红细胞 蓝褐色：胞核 图表E 2.胶原纤维，Van Gieson(V.G.)苦味酸-酸性品红法 图心肌梗塞myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。
2.1 天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)红色：胶原纤维 绿色：细胞核 黄色：其他
3.1 Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）黑色：网状纤维 红色：胞核（核固红复染） 黄棕色：胶原纤维 淡红色：细胞质（红液复染） 图表F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法 3.2 Gomori氏银氨液配制法 图表G Gomori氏银氨液配制法
实验一线粒体的活体染色与观察 一、实验目的 1．观察动物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。 2．学习一些细胞器的活体染色技术。 二、实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。体内活染是将胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。 线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。 詹纳斯绿B（Janus green B）是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。 三、实验仪器、材料和试剂 1．仪器：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、