液泡系和线粒体的活体染色及观察

实验二线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的：（1）观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。

（2）学习一些细胞器的超活染色技术。

二、实验原理：线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。

詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

中性红为弱碱性染料，对液泡系（即高尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。

三、实验用品：1、材料：人口腔上皮细胞。

小麦种子或黄豆幼根根尖。

2、试剂：（1）Ringer溶液：氯化钠—0.85g氯化钾—0.25g氯化钙—0.03g蒸馏水—100ml（2）1%，1/3000中性红溶液（已配好）（3）1%，1/5000詹纳斯绿B溶液（已配好）3、器材：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸等四、实验方法：1、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察：（1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。

（2）实验者用牙签宽头在自己口腔颊黏膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的黏液状物放入载玻片的染液滴中，染色10-15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。

2、植物细胞液泡系的超活染色与观察：（1）用双面刀片把初生的小麦或黄豆幼苗根尖（1-2cm长）小心切一纵切面，放入载玻片中的1/3000中性红染液滴中，染色5-10分钟。

（2）吸去染液，滴一滴Ringer 液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。

实验二液泡系和线粒体的活体染色法实验二液泡系和线粒体的活体染色法一、液泡系的活体染色液泡系（vacouome）是细胞内一种重要的细胞器，它普遍存在于动植物细胞。

动物细胞液泡系是法国学者M．Parat继Dangeard发现植物细胞液泡系之后于1924年第一次发现的。

在一切动物细胞内皆有。

通常为圆形泡状，数目多少不定。

除少数例外，腺细胞和幼年的细胞，通常有极性，皆集中在核的顶部上方，位于细胞的中央部分。

液泡系和线粒体（mitochondria）组成一个特殊的区域名高尔基区。

液泡是细胞内浓缩产品的重要场所，有十分重要的生理功能。

动物细胞内的液泡因为很小，如果不经过活体染色，就很难显示出来。

在有些细胞（如胰脏细胞）可用相差显微镜观察到液泡系。

根据中性红活体染色的结果，可知液泡系分为大、中、小三种类型的液泡。

小液泡被中性红染成均匀一致的深红色，即为“含浆液泡”（Vacuoles Plasmoccrines）。

经中性红染色后呈橙红色，有的边缘呈深红色新月形或环形，这是中等的“含分泌粒液泡”（Vacuoles rhagiocrines）。

含成熟分泌颗粒的大液泡因已全部蛋白质化，所以不再被中性红染色，只有液泡的残余部分（新月形或环形）被染成红色。

中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核绝对不被染色。

如果细胞死亡，细胞质及核才被中性红染成弥散的红色。

此时，液泡染色消失，液泡开始毁坏。

为了保证观察材料处于生活状态，要求一定的细胞环境条件——适宜的温度、渗透压、PH值、营养成分等。

因此观察时室温不要过高或过低，显微镜灯要有必要的滤热装置。

细胞材料要浸泡在生理盐水中。

长期观察还要注意防止因生理盐水蒸发而改变渗透压，并供给所需的养分等。

（一）仪器设备和材料1．复式显微镜（ X10、 X40及油镜头），擦镜纸2．解剖器，载玻片，盖玻片，吸管，吸水纸。

3．实验材料（1）黄豆幼苗根尖（绿豆或水稻也可），把黄豆培育在培养皿中潮湿的滤纸上，使其发芽，直到胚根伸长到一厘米以上。

实验三线粒体和液泡系的超活染色与观察实验目的一、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。

二、学习一些细胞器的超活染色技术。

实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞舶死亡。

活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。

体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学，，特性起重要作用。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。

一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。

詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

实验用品一、器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀、载玻片、凹面载玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。

二、试剂1．Ringer溶液氯化钠 0.85g(变温动物用0.65g)氯化钾 0.25g氯化钙 0.03g蒸馏水 100ml2. 10％、1／3 000中性红溶液称取0.5g中性红溶于50 ml Ringer液，稍加热(30~40'C)使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。

实验八线粒体和液泡系的超活染色与观察实验目的1.观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。

2.学习一些细胞器的超活染色技术。

实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类，体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学“特性起重要作用。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用；一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。

詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。

中性红为弱碱性染料，对液泡系(即高尔基体)的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关实品验用一、材料人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞二、器材显微镜、恒温水浴锅、表面皿，吸管、牙签、吸水纸三、试剂1．Ringer溶液氯化钠 0.85g (变温动物用0.65g)氯化钾 0.25g氯化钙 0.03g蒸馏水 100ml2.1%詹纳斯绿B溶液（原液）称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加微热(30~40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。

细胞生物学实验四液泡系和线粒体的活体染色【实验目的】1.通过制片掌握活体染色方法2.熟悉在耳缘静脉用空气栓塞处死兔子的方法3.了解线粒体及液泡系在光镜及电镜下的基本形态结构【理论基础】1.活体染色的基本概念和实际应用，常见的活体染色剂2.生物体内线粒体的基本形态与功能（特别是线粒体所含的酶类），重点联系理论课“线粒体”一章中结构与功能部分3.液泡系的组成及在光镜和电镜下的形态特点，可参照理论课“细胞的内膜系统”的内容【实验内容】（一）兔肝细胞线粒体的活体染色[操作技能要求]1.学会静脉空气栓塞处死兔子的方法2.熟悉线粒体活体染色方法及注意事项[讲解和明确的内容]1.詹纳斯绿B进行线粒体活体染色的原理2.用詹纳斯绿B进行染色时为何让组织块上表面露在染液外面3.为什么要取兔肝边缘较薄的肝组织4.空气栓塞处死兔子的要点：注意兔子的固定方法，耳缘静脉的选择，注射的方向，针头进入血管的标志，注射的空气量以及注射器的选择[观察要点]1.注意观察光镜下肝脏线粒体的形状与分布2.观察电镜照片上线粒体嵴的数目与分布方式（二）蟾蜍胸骨剑突软骨细胞液泡系活体染色及观察[操作技能要求]1.捣髓法处死蟾蜍的方法2.学会液泡系的活体染色方法[讲解和明确的内容]1.为什么要选取蟾蜍胸骨剑突软骨最薄部分的一小片2.中性红作为液泡系活体染色剂的特点：在生活状态下中性红染色可能与液泡中的蛋白有关[观察要点]注意观察软骨细胞液泡系的形态及与周围软骨细胞的区别[相关理论内容]1.光镜下观察到的液泡系包括哪些细胞内结构2.细胞内膜系统的组成（三）依据提纲讲解线粒体及溶酶体的理论内容。

实验三线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的：（1）观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。

（2）学习一些细胞器的超活染色技术。

二、实验原理：活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无害毒的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通过把活体染色分为体内活染与体外活染两类。

体内活染是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

詹纳斯绿B(Janus peen B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。

詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

中性红为弱碱性染料，对液泡系（即高尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。

三、实验用品：1、材料：人口腔上皮细胞、洋葱磷茎内表皮细胞蟾蜍胸骨剑突软骨细胞、小麦种子或黄豆幼根根尖。

2、试剂：（1）Ringer溶液：氯化钠—0.85g氯化钾—0.25g氯化钙—0.03g蒸馏水—100ml（2）1%，1/3000中性红溶液（已配好）（3）1%，1/5000詹纳斯绿B溶液（已配好）3、器材：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸等四、实验方法：（一）线粒体的超活染色与观察1、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察：（1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。

实验三线粒体和液泡系的超活染色与观察实验目的一、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。

二、学习一些细胞器的超活染色技术。

实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞舶死亡。

活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。

体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学，，特性起重要作用。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。

一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。

詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

实验用品一、器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀、载玻片、凹面载玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。

二、试剂1．Ringer溶液氯化钠0.85g(变温动物用0.65g)氯化钾0.25g氯化钙0.03g蒸馏水100ml2. 10％、1／3 000中性红溶液称取0.5g中性红溶于50 ml Ringer液，稍加热(30~40'C)使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。

中国海洋大学实验报告姓名：常天易系年级：海洋生命学院2012级专业：生物科学科目：分子细胞生物学实验学号：12050011006线粒体与液泡系的超活染色与观察一、实验目的1、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布；2、学习一些细胞器的超活染色技术。

3、观察豆芽根部细胞的液泡分布二、实验原理１、詹纳斯绿B染液被线粒体中的细胞色素氧化酶氧化而呈现蓝绿色，在细胞的其他部位因保持还原状态而呈现无色。

２、中性红染液为一种碱性染液，易随外周染液进入液泡，因液泡内环境偏酸性，所以使液泡被染上红色。

三、实验材料黄豆幼根根尖、人口腔上皮细胞，Ringer试剂，詹纳斯绿B染色液，中性红染液四、实验方法黄豆幼根根尖的超活染色（1）、使用中性红染液将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的中性红染液中染色１０分钟用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察（２）、使用詹纳斯绿B染液将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的詹纳斯绿B染液中染色10分钟盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察（３）、使用詹纳斯绿B和中性红染液混合染色①先加詹纳斯绿B，后加中性红染液将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的詹纳斯绿B染液中染色10分钟向载玻片上的标本滴加中性红染液再染色１０分钟用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察②、使用詹纳斯绿B和中性红染液同时染色将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的詹纳斯绿B染液和中性红染液的混合物中染色10分钟用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察人口腔上皮细胞的超活染色（1）、使用詹纳斯绿B染色用消毒牙签的钝端在口腔上皮轻轻地挂取部分上皮细胞在载玻片上滴加詹纳斯绿Ｂ染液，将牙签上的内容物在染液中混匀染色10分钟后，在显微镜下观察（２）、使用中性红染色用消毒牙签的钝端在口腔上皮轻轻地挂取部分上皮细胞在载玻片上滴加中性红染液，将牙签上的内容物在染液中混匀，染色10分钟用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，在显微镜下观察五、实验结果1、观察根尖的染色情况图1、根部伸长区的切片及其在中性红染色下显示的液泡。