实验五线粒体和液泡系的超活染色与观察

实验一：线粒体和液泡系的超活染色与观察【课前预习】1．什么是液泡系？2．为什么不能用一种活体染料同时观察多种细胞器？【目的要求】1. 观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、发育和分布2. 了解细胞和细胞器的超活染色技术【基本原理】线粒体是细胞内一种重要细胞器，细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。

活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。

詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活细胞染色剂，毒性很小，属于碱性染料，解离后带正电，由电性吸引堆积在线粒体膜上。

线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，从而使线粒体显色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。

中性红对液泡系的染色具有专一性，将活细胞中的液泡系染成红色。

【实验用品】1. 器材：显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖刀、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸2. 试剂：Ringer 液、1/5000 詹纳斯绿B、1/3000 中性红3. 材料：人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞、小麦（或绿豆）幼根根尖【方法步骤】1．线粒体的超活染色与观察1）口腔上皮细胞线粒体的超活染色：1/5000 詹纳斯绿B1-2 滴，口腔上皮细胞（牙签刮取），载玻片于37℃恒温染色10-15min，显微镜下观察。

2）洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察：1/5000 詹纳斯绿B 溶液1-2 滴，洋葱鳞茎内表皮，载玻片于37℃恒温水浴染色10-15min，显微镜下观察。

2．小麦（或绿豆）幼根根尖液泡系的中性红染色观察小麦（或绿豆）幼苗根尖（1-2cm）纵切面切片，1/3000 中性红溶液1 滴染色5-10min，载玻片于37℃恒温水浴，盖上盖玻片压扁根尖，显微镜下观察。

【实验结果】口腔上皮细胞的线粒体分布洋葱内表皮细胞线粒体分布植物根尖液泡的中性红染色【实验报告】1．绘出人口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布并简要分析。

【实验目的】掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。

【实验原理】活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。

体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。

一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。

詹纳斯绿 B（ Janus green B）和中性红（ neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。

詹纳斯绿 B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

【实验用品】1、材料：小白鼠肝脏、睾丸2、试剂：Ringer 溶液： NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl 2 0.03g + 蒸馏水 100ml；1%、1/5000 詹纳斯绿 B 溶液：称取 50mg 詹纳斯绿 B 溶于 5ml Ringer 溶液中， 30-40 ℃加热，使之溶解，用滤纸过滤后，即为 1%原液。

实验五：小鼠肝细胞线粒体超活染色及观察一、实验目的1、掌握解剖小鼠的基本技术与方法；2、掌握线粒体的超活染色原理及方法；3、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。

二、实验原理1、线粒体线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。

细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。

活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。

詹纳斯绿B（JanusgreenB）是线粒体的专一性活体染色剂。

线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

不同细胞中线粒体的形态和数目不同。

在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。

线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。

线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。

2、活体染色活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。

活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。

碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。

但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。

一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。

线粒体和液泡系的超活染色与观察实验报告实验目的：
1. 了解超活染色的原理；
2. 掌握超活染色的方法；
3. 观察线粒体和液泡系的结构特点；
4. 学习常用的显微镜操作技巧。

实验步骤：
1. 取一份新鲜叶片，用透明胶带轻轻压住叶片，将透明胶带带上的叶片剥离下来。

2. 将剥离下的叶片放在载玻片上，加一滴超活染色溶液，并用盖玻片盖住。

3. 用粗目显微镜观察叶片上染色体的变化情况，观察细胞器的数量和形态特征，用细目显微镜进行进一步观察和记录。

实验结果：
经过超活染色处理后，我们可以清晰地观察到叶片细胞的结构特点。

其中，线粒体是细胞内重要的细胞器之一，其形态大小各异，常常呈圆柱状，且有许多线粒体。

而液泡是细胞内的囊状体，它可以储存水分、营养物质、色素等，体积大小不一，可见度较低，需要用高倍显微镜进行观察。

实验分析：
超活染色是一种能够使细胞有机物分解的过程中的酶不会破坏细胞结构和细胞器的染色方法。

该方法对细胞膜和细胞器的染色效果非常好，有助于观察和研究细胞的生理和功能，尤其是在细胞形态变化研究和药物筛选方面有着广泛的应用。

实验总结：
本次实验，通过超活染色，我们成功地观察到了植物叶片细胞内线粒体和液泡系的形态特点。

同时，我们也掌握了常用的显微镜操作技巧，对现代生命科学领域中细胞结构和功能的研究提供了帮助。

实验2线粒体和液泡系的超活染色与观察中国海洋大学实验报告姓名：常天易系年级：海洋生命学院2012级专业：生物科学科目：分子细胞生物学实验学号：12050011006线粒体与液泡系的超活染色与观察一、实验目的1、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布；2、学习一些细胞器的超活染色技术。

3、观察豆芽根部细胞的液泡分布二、实验原理１、詹纳斯绿B染液被线粒体中的细胞色素氧化酶氧化而呈现蓝绿色，在细胞的其他部位因保持还原状态而呈现无色。

２、中性红染液为一种碱性染液，易随外周染液进入液泡，因液泡内环境偏酸性，所以使液泡被染上红色。

三、实验材料黄豆幼根根尖、人口腔上皮细胞，Ringer试剂，詹纳斯绿B染色液，中性红染液四、实验方法黄豆幼根根尖的超活染色（1）、使用中性红染液将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的中性红染液中染色１０分钟用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察（２）、使用詹纳斯绿B染液将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的詹纳斯绿B染液中染色10分钟盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察（３）、使用詹纳斯绿B和中性红染液混合染色①先加詹纳斯绿B，后加中性红染液将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的詹纳斯绿B染液中染色10分钟向载玻片上的标本滴加中性红染液再染色１０分钟用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察②、使用詹纳斯绿B和中性红染液同时染色将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的詹纳斯绿B染液和中性红染液的混合物中染色10分钟用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察人口腔上皮细胞的超活染色（1）、使用詹纳斯绿B染色用消毒牙签的钝端在口腔上皮轻轻地挂取部分上皮细胞在载玻片上滴加詹纳斯绿Ｂ染液，将牙签上的内容物在染液中混匀染色10分钟后，在显微镜下观察（２）、使用中性红染色用消毒牙签的钝端在口腔上皮轻轻地挂取部分上皮细胞在载玻片上滴加中性红染液，将牙签上的内容物在染液中混匀，染色10分钟用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，在显微镜下观察五、实验结果1、观察根尖的染色情况图1、根部伸长区的切片及其在中性红染色下显示的液泡。

线粒体及液泡系的活体染色一、实验目的掌握动、植物细胞活体染色的原理和技术。

掌握各种染料的染色原理。

使我们对细胞中的线粒体及液泡系有一定的了解。

二、实验原理a)活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害或毒性很小的一种染色方法。

它的目的是在保持细胞活性的前提下，显示细胞内的某些特定结构。

b)线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随物种、组织器官和生理状态的不同而发生变化。

健纳绿可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。

c)中性红为弱碱性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。

d)亮焦油紫可用于活体染色，中性红用于染液泡系，健纳绿用于线粒体染色，次甲基蓝可用于染神经组织，尼罗蓝可用于染原生动物的大核。

三、实验试剂及器材a)实验试剂i.0.04%中性红生理盐水溶液：先配成1%中性红水溶液，再用0.65%氯化钠溶液将1%中性红水溶液稀释成0.04%溶液，盛于棕色瓶中，暗处保存。

ii.0.02%健纳绿生理盐水溶液：先配成1%健纳绿水溶液，再用0.9%氯化钠将1%健纳绿水溶液稀释成0.02%溶液，盛于棕色瓶中，暗处保存。

b)实验器材青菜叶、人口腔黏膜上皮细胞、载玻片、盖玻片、牙签、普通光学显微镜、刀片四、实验步骤a)口腔黏膜上皮细胞线粒体的染色观察i.取清洁载玻片，滴2滴0.02%健纳绿生理盐水溶液。

ii.用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中，搅匀。

（注意事项：应稍用力刮取口腔颊粘膜处上皮细胞，否则无活细胞染色不能成功。

）iii.染色10－l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)。

iv.盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察，拍照。