下载文档原格式
实验八线粒体和液泡系的超活染色与观察活体染色是能使生活有机体的细胞或组织特异性着色但对活样品又没有毒害作用的一种活体染色方法,其目的是显示生活细胞内的某些结构,而不影响细胞的生命活动和产生任何物理,化学变化以致引起细胞的死亡.活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理,病理状态.通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类.体外活体染色又称超活染色,它是由活的动,植物分离出部分细胞或组织小块,以染料溶液浸染,染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色.活体染料之所以能固定,堆积在细胞内某些特殊的部分,主要是靠染料的"电化学"特性.碱性染料的胶粒表面带阳离子,酸性染料的胶粒表面带有阴离子,而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子,这样,它们彼此之间就发生了吸引作用.但并非任何染料均可用于活体染色,理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料,且使用时需要配成稀淡的溶液.一般说来,最为适用的是碱性染料,这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂,胆固醇等)的特性,易于被细胞吸收.詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料,对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性.实验目的1,观察动,植物活细胞内线粒体,液泡系的形态,数量与分布;2,学习一些细胞器的超活染色技术.实验原理线粒体是细胞内一种重要细胞器,是细胞进行呼吸作用的场所.细胞的各项活动所需要的能量,主要是通过线粒体呼吸作用来提供的.活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法.詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂.线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态.中性红为弱碱性染料,对液泡系(即高尔基体)的染色有专一性,只将活细胞中的液泡系染成红色,细胞核与细胞质完全不着色,这可能是与液泡中某些蛋白质有关.实验用品1,器材显微镜,恒温水浴锅,解剖盘,剪刀,镊子,双面刀片,解剖盘.载玻片,凹面载玻片,盖玻片,表面皿,吸管,牙签,吸水纸.2,试剂(1)Ringer溶液:氯化钠 0.85g (变温动物用0.65g)氯化钾 0.25g氯化钾 0.25g氯化钙 0.03g蒸馏水 100ml(2)10%,1/3000中性红溶液:称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液,稍加热 (30~40?)使之很快溶解,用滤纸过滤,装入棕色瓶于暗处保存,否则易氧化沉淀,失去染色能力.临用前,取已配制的1%中性红溶液1ml,加入29ml Ringer溶液混匀,装入棕色瓶备用.(3) 1%,1/5000詹纳斯绿B溶液称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中,稍加微热(30~40?),使之溶解,用滤纸过滤后,即为1%原液.取1%原液l ml加入49ml Ringer溶液,即成1/5000工作液装入瓶中备用.最好现用现配,以保持它的充分氧化能力.实验材料人口腔上皮细胞,小麦种子或黄豆幼根根尖.实验方法1,人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察?清洁载玻片放在37?恒温水浴锅的金属板上?滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液?用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞?刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中?染色10~l5min(注意不可使染液干燥,必要时可再加滴染液) ?盖上盖玻片,显微镜下观察2,植物细胞液泡系的超活染色与观察取豆芽的根尖?用刀片纵切根尖?放入中性红染液滴中,染色5~10min. ?吸去染液,滴一滴Ringer液?盖上盖玻片进行镜检(镊子轻轻地下压盖玻片,使根尖压扁,利于观察)实验结果在高倍镜下,先观察根尖部分的生长点的细胞,可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡,这是初生的幼小液泡.然后,由生长点向延长区观察,在一些已分化长大的细胞内,液泡的染色较浅,体积增大,数目变少.在成熟区细胞中,一般只有一个淡红色的巨大液泡,占据细胞的绝大部分,将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处.实验报告(1). 绘口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布(2). 绘蟾蜍胸骨剑突软骨细胞示液泡系的形态与分布线粒体的最新知识线粒体为线状、长杆状、卵圆形或圆形小体，外被双层界膜。
差速离心法分离线粒体课程名称： 细胞生物学 指导老师： 成绩：__________________ 实验名称： 差速离心法分离线粒体 同组学生姓名： 喻儿一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填）五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的1.学会差速离心方法及活体染色一般方法。
2.掌握鼠肝线粒体的分离与鉴定方法二、实验原理1.差速离心法:在一定的离心场中，大小不一的颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的粘度。
在一个均匀悬浮介质中离心一定时间，组织匀浆中的各种细胞器及其它内含物由于沉降速度不同而停留在高低不同的位置。
依次增加离心力和离心时间，就能够使这些颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部，从而分批收集。
细胞器中最先沉淀的是细胞核，其次是线粒体，其它更轻的细胞器和大分子可依次再分离。
2.悬浮介质的选择：通常用缓冲的蔗糖溶液，它比较接近细胞质的分散相，在一定程度上能保持细胞器的结构和酶的活性，在pH7.2 的条件下，亚细胞组分不容易重新聚集，有利于分离。
离心力 RCF=1.119 ⨯ 10-5 ⨯ r ⨯ n2 （单位：重力常数 g ； r 离心场半径；n 转速）3. 詹纳斯绿活染法鉴定线粒体： 线粒体内的细胞色素氧化酶能使詹纳斯绿染料始终保持在氧化状态而呈现蓝色；而在周围的细胞质内，这些染料被还原成为无色。
在进行线粒体的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染液中染色15min 以上，才能放上盖玻片，以便材料经过氧化（即与空气接触）后，线粒体被染色。
活性样品检测的关键环节：整个操作过程应注意使样品保持4℃，避免酶失活。
三、实验材料与试剂材料：小白鼠肝脏器材：玻璃匀浆器，高速冷冻离心机，普通离心机，剪刀，镊子，小烧杯，离心管，载玻片，盖玻片，滴管，普通光学显微镜，试剂：匀浆介质；詹纳斯绿染色液四、实验步骤I 差速离心法分离线粒体1．小白鼠断颈致死，用75%乙醇消毒外部 皮肤后，剖腹取肝；2．用预冷至0℃的匀浆介质洗肝，干净滤纸 吸干水分后称重；3．往平皿中先加入适量匀浆介质，将肝剪 碎，按每克肝组织加8mL 匀浆介质，加至10mL 玻璃匀浆器中，在冰浴中匀浆；4．待肝组织基本碎裂后，将匀浆液移至10mL 离心管中，平衡后， 4℃下4800rpm 离心15min ，吸取上清液；（染色观察）；5.将1mL 上清液转移至Eppendorf (EP)管 中，4℃，11000rpm(10000g)离心 20min ；(位置)6．转移上清液至新EP 管中；7．沉淀以适量匀浆介质悬浮制成线粒体悬 浮液。
版本：A2 修改日期：2023.12.18 詹纳斯绿B 染色液(1%)产品简介：詹纳斯绿B(Janus Green B)又称健那绿，是一种活体染色剂，专一用于线粒体、细胞核的染色，也可判定细胞存活情况。
染色原理是与线粒体中细胞色素C 氧化酶结合，从而出现蓝绿色。
Leagene 詹纳斯绿B 染色液(1%) 由詹纳斯绿B 、Ringer 液配制而成。
染色过程中务必保持标本的活性，并且迅速操作，当细胞死亡或开始死亡时，随着酶的失活，细胞质和细胞核也被染色，呈不同程度的绿色。
在取材时要准确、快速；染色时，组织块表面暴露在染液外面，使细胞内线粒体的酶可以充分进行氧化，保持染料的氧化状态。
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成：操作步骤(仅供参考)：1、 取新鲜较薄的动物组织(2~3mm 3)，用Ringer 液清洗3次，去除血液，用滤纸吸干。
2、 组织上滴加詹纳斯绿B 染色液(1%)，根据不同样本染色而异。
3、 组织移至载玻片上，用镊子将其拉碎后，去除组织块，留下细胞，再滴加一滴 Ringer液，盖上盖玻片，滤纸从侧面吸去多余的液体。
镜下观察。
注意事项：1、 詹纳斯绿有微弱毒性，染色时间过长，有可能导致线粒体形成空泡，操作中应注意。
2、 染色的组织应是新鲜的，尽快染色，一般2h 内全部完成。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4、 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
有效期：12个月有效。
常温运输，4℃保存。
编号 名称 DZ0007 Storage 詹纳斯绿B 染色液(1%) 10ml 4℃ 避光 使用说明书1份。
小鼠肝线粒体的分离与观察生科三班2011/5/2实验目的1 了解提取线粒体的基本原理及其过程，掌握差速离心法分离细胞器。
2 通过光学显微镜的观察了解体外分离的线粒体的一般形态。
3 巩固普通染色步骤及注意事项。
实验原理线粒体是细胞中重要的细胞器，存在于绝大多数生活细胞中，它的主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。
正由于这样，对线粒体膜，呼吸链酶及线粒体DNA等成分的结构，功能以及物理化学性质的研究已经成为细胞生物学研究中的重要课题，所以提取线粒体的技术已经成为线粒体研究中必不可少的手段，线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中，如动物的心肌，肝，肾等器官和组织的细胞中，大量置备线粒体就是从这些器官组织中提取，当所用样品较少时（如电镜和光镜的观察）可采用从组织培养细胞中提取。
本实验是介绍从小鼠肝细胞中提取线粒体并在光镜下观察的方法。
线粒体（mitochondria）是真核细胞特有的，是能量转换的重要细胞器。
细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。
对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。
制备线粒体采用组织匀浆在悬浮介质中进行差速离心。
在一给定的离心场中，球形颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的粘度。
在均匀悬浮介质中离心一定时间内，组织匀浆中的各种细胞器及其它内食物，由于沉降速度不同将停留在不同的位置。
依次增加离心力和离心时间，就能够使这些颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部，从而分批收集。
细胞器中最先沉淀的是细胞核，其次是线粒体，其他更轻的细胞器和大分子可一次再分离。
悬浮介质通常用缓冲的蔗糖溶液，它比较接近细胞的分散相，在一定程度上能保持细胞器的结构和酶的活性，在pH7.2的条件下，亚细胞组分不容易重新聚集，有利于分离。
整个操作过程注意使样品保持4℃，避免酶失活。
本实验用的是Ringer缓冲液作为悬浮介质。
线粒体的鉴定用詹纳斯绿活染法，詹纳斯绿B(Janus green B)是对线粒体专一的活细胞染料毒性很小，属于碱性染料，解离后带正电，由此吸引堆积在线粒体膜上，线粒体 cell色素氧化酶，使该料保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而使线粒体显色，而胞质中的染料被还原成无色。
Cas 编号: 2869-83-2 EINECS 编号: 220-695-6 MDL 编号: MFCD00011758 Beilstein 编号:分子式: C30H31ClN6 分子量: 511.06中文别名:詹姆斯绿B，健那绿，健那绿B，双氮嗪绿，真那氏绿，詹姆斯绿，烟鲁绿，3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基)苯基]偶氮]-5-苯基吩嗪翁氯化物3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylphenazinium chloride小鼠肝细胞线粒体的Janus green B染色及观察1. 实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。
2. 实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双凹载玻片（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿B染液（3）实验材料：小鼠3. 实验原理：（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法。
这种染色方法常用的是化学染料。
目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化学变化以致细胞的死亡。
应用：研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。
（2）通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。
体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学”特性。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。
一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。
线粒体染液-詹姆斯绿B Janus green B的使用及其原理60JanusgreenB中文名称：詹纳斯绿B英文名；小鼠肝细胞线粒体的JanusgreenB染色及观；1.实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯；（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、；（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿；（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细；目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命；应用：研究Janus green B 中文名称：詹纳斯绿B 英文名称：Janus green B 别名：健那绿；双氮嗪绿。
苏铁木精英文别名: Janus green；Diazine green；Diazine green S 。
化学式：C30H31N6Cl 定义：主要用于生物活体染色的一种碱性偶氮吖嗪染料。
能穿过细胞膜，进入细胞特异地显示线粒体。
詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。
它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。
原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态（即有色状态）呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。
通常，需要把生物材料置于0℃～4℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。
Cas 编号: MDL 编号: 分子式: 中文别名: 2869-83-2 MFCD00011758 C30H31ClN6 EINECS 编号: 220-695-6 Beilstein 编号: 分子量: 511.06 詹姆斯绿B，健那绿，健那绿B，双氮嗪绿，真那氏绿，詹姆斯绿，烟鲁绿，3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基)苯基]偶氮]-5-苯基吩嗪翁氯化物3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylphenazinium 英文别名: chloride Diazin Green S Union Green B C.I. 11050 棕色呈深棕色结晶性粉末，溶于水呈蓝色，微溶于醇。
健那绿健那绿，即Janus green B 染液，原来也曾译为詹纳斯绿B，常用作线粒体专一性活体染色剂。
【中文别名】健那绿；詹纳斯绿；双氮嗪绿。
苏铁木精.【英文别名】Janus green；Diazine green；Diazine green S 。
分子式C30H31ClN6 分子量511.07【原理】线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态.线粒体能在健那绿染液中维持活性数小时,通过染色,可以在高倍显微镜下观察到生活状态的线粒体的形态和分布.【配制】配制质量分数为1%健那绿染液:将0.5g健那绿溶解于50mL生理盐水中,加温到30-40摄氏度,使其充分溶解.健那绿染液可以将线粒体染成蓝色。
甲基绿可以将DNA染成绿色。
所以细胞核可以呈现绿色。
同时线粒体和叶绿体中也含有DNA但一般看不出来。
因为比较小，而且叶绿体本身就是绿色的。
高考生物实验冲刺专题15 安徽二轮实验专题15 第六部分实验专题测试一一、选择题（共20题，共40分）1．观察黑藻叶中叶绿体的实验时，下列操作不正确的是A．制作临时装片时，先在载玻片中央滴一滴健那绿染液B．先在低倍镜下找到细胞，再用高倍镜观察C．随时保持临时装片中有水状态D．若视野比较暗，可调节反光镜和增大光圈【答案】Ａ2．生物学研究中，经常使用染色剂对生物体的结构或物质染色，以便观察和鉴定。
下列有关叙述中正确的是A．观察线粒体时用健那绿染色，线粒体被染成蓝黑色B．鉴定蛋白质时用斐林试剂，混合后加热变成砖红色c．使用甲基绿和吡罗红染色，细胞核变红色，细胞质变绿色D．观察染色体的形态，用0．02g／ml的龙胆紫将染色体染成深色【答案】Ｄ3．在探究不同的温度对酶活性的影响实验中，温度和pH值分别属于A．自变量和因变量B．因变量和无关变量C．自变量和无关变量D．自变量和对照变量【答案】Ｃ4．斐林试剂可以鉴定麦芽糖，是由于麦芽糖具有A．醛基B．肽键C．酮基。
线粒体染液-詹姆斯绿B Janus green B的使用及其原理60JanusgreenB中文名称：詹纳斯绿B英文名；小鼠肝细胞线粒体的JanusgreenB染色及观；1.实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯；（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、；（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿；（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细；目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命；应用：研究Janus green B 中文名称：詹纳斯绿B 英文名称：Janus green B 别名：健那绿；双氮嗪绿。
苏铁木精英文别名: Janus green；Diazine green；Diazine green S 。
化学式：C30H31N6Cl 定义：主要用于生物活体染色的一种碱性偶氮吖嗪染料。
能穿过细胞膜，进入细胞特异地显示线粒体。
詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。
它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。
原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态（即有色状态）呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。
通常，需要把生物材料置于0℃～4℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。
Cas 编号: MDL 编号: 分子式: 中文别名: 2869-83-2 MFCD00011758 C30H31ClN6 EINECS 编号: 220-695-6 Beilstein 编号: 分子量: 511.06 詹姆斯绿B，健那绿，健那绿B，双氮嗪绿，真那氏绿，詹姆斯绿，烟鲁绿，3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基)苯基]偶氮]-5-苯基吩嗪翁氯化物3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylphenazinium 英文别名: chloride Diazin Green S Union Green B C.I. 11050 棕色呈深棕色结晶性粉末，溶于水呈蓝色，微溶于醇。
常用作线粒体专一性活体性状: 染色剂. 线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态. 用途: 贮存: 联合国编号: Risk: Safety: Hazard: 用于线粒体活体染色，真菌和原虫染色，胚胎切片染色，以及用作氧化还原指示剂和铜的电镀添加剂。
密封干燥保存。
S24/25小鼠肝细胞线粒体的Janus green B染色及观察1. 实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。
2. 实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿B染液（3）实验材料：小鼠 3. 实验原理：（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法。
这种染色方法常用的是化学染料。
目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化学变化以致细胞的死亡。
应用：研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。
（2）通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。
体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学” 特性。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。
一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。
詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性。
（3）选择活体染料的原则：① 性质：有电化学特性② 低毒、无毒③ 低浓度：如实验中使用的是1/5000的詹纳斯绿B染液④ 专一、特异性：中性红可特异性地对植物液泡染色⑤ 常以碱性染料为主，因为碱性染料多可溶于类脂，容易穿膜。
4. 实验步骤：（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。
剪开腹腔，取出肝脏。
选取边缘较薄的肝组织0.5cm2放入小烧杯中，用Ringer液冲洗去血污。
（2）滴加1/5000的詹纳斯绿B染液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净肝组织移入染液染色20~30mins。
以组织边缘被染成蓝绿色为准。
（3）吸去染液，重新把组织置于小烧杯中。
滴加Ringer液约0.5mL，用剪刀充分剪碎组织制成悬液。
（4）静置上述悬液1~2mins，取静置好的悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。
5. 实验结果：视野中可见比较大的、呈圆形的肝细胞，此种细胞内有一些小颗粒被染成蓝绿色，就是线粒体。
视野中也有一些较小的细胞，有些可看到红色，是血细胞。
10*40显微镜下6. 分析与讨论（1）结果分析：部分肝细胞的线粒体被染成绿色（2）注意事项① 取肝组织：取肝组织时，应注意选择肝的边缘部分，这一部分组织的厚度差比分剪碎组织制成悬液。
（3）静置上述悬液1~2mins，取静置好的悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。
5. 实验结果：视野中可见比较大的、呈圆形的肝细胞，此种细胞内有一些小颗粒被染成蓝绿色，就是线粒体。
视野中也有一些较小的细胞，有些可看到红色，是血细胞。
10*40显微镜下观察：6. 分析与讨论GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂是一种旨在通过一种毒性较小的碱性染料特异性地使具有活性功能的线粒体呈现蓝绿色，从而判断线粒体功能的完整性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种线粒体（动物、人体、植物、昆虫等）制备物的功能检测。
产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简捷，性能稳定。
技术背景线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。
线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中，如动物的心肌、肝、肾等器官和组织的细胞中。
大量制备线粒体就是从这些器官组织中提取，或从组织培养细胞中提取。
在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。
詹纳斯绿B（Janus green B），是一种毒性较小的碱性染料。
它可以对活细胞进行直接染色，在细胞质内可以看到被染成蓝绿色的线状或颗粒小体的线粒体。
线粒体所以能显示出蓝绿色，是由于线粒体中具有细胞色素氧化酶系统，它是染料始终处于氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中的染料被还原呈无色。
产品内容GENMED保存液（Reagent A）毫升GENMED染色液（Reagent B）毫升GENMED清理液（Reagent C）毫升保存方式保存在－20℃冰箱里；GENMED染色液(Reagent B)，避免光照；有效保证6月用户自备毫升离心管：用于线粒体染色的容器光学显微镜：用于线粒体染色观察分析实验步骤实验开始前，将℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（Reagent B）置于冰槽里融化，并放在暗室里。
然后进行下列操作。
一、纯化线粒体染色1．从纯化的线粒体样品中移出至微升（含细胞中提取的线粒体）到新的预冷的毫升离心管，置于冰槽里（注意：线粒体须均匀分布，没有聚集成团）。
2．加入等量微升的GENMED染色液（Reagent B），轻柔混匀。
3．放进暗室里，在室温下孵育1分钟。
4．即刻移取微升到载玻片上，放上盖玻片。
5．在光学显微镜油镜下进行观察：功能完整的线粒体呈现蓝绿色圆形或椭圆形颗粒（注意：可见蓝绿色渐渐变淡现象）。
6．篮绿色强度显著减弱或呈现无色，表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失。
二、活体细胞染色1．将待测细胞（X 细胞）移入到1.5毫升离心管2．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为500g（或2000RPM；例如eppendorf 5415）3．小心抽去上清液4．加入微升GENMED清理液（Reagent C）或GENMED保存液（Reagent A）5．加入微升GENMED染色液（Reagent B），充分混匀6．放进暗室里，在冰槽里孵育分钟7．即刻移取微升到载玻片上，放上盖玻片8．在光学显微镜油镜下进行观察：功能完整的线粒体呈现蓝绿色线状或颗粒小体。
9．篮绿色强度显著减弱或呈现无色，表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失。
注意事项1．本产品为20次（活体细胞）或400次（纯化线粒体）操作2．所有操作均须无菌状态下进行3．线粒体样品操作须在低温下进行，且操作快速4．操作时，须戴手套5．建议染色完成后，即刻进行显微镜观察分析6．孵育时，须避免光照7．本公司提供系列线粒体试剂产品兔肝细胞线粒体的活体染色（一）原理线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B是线垃体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
（二）方法用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。
当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。
染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。
将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。
(三)结果显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。
线粒体的光镜切片观察用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。
线粒体的电镜照片观察不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
