实验三 线粒体活体染色

线粒体(Mitochondrion)的活体染色及电镜照片观察【实验目的】掌握一种活体染色方法,了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。

【实验用品】一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。

二、器材和仪器显微镜、手术器材一套、解剖盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、10ml 注射器、吸管。

三、试剂 l／300詹纳斯绿B染液、Ringer氏液(哺乳类用)。

【实验内容】一、兔肝细胞线粒体的活体染色（一）原理线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。

细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。

活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。

詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂。

线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

（二）方法用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。

当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。

染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。

将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。

(三)结果显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。

二、线粒体的光镜切片观察用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。

三．线粒体的电镜照片观察不同细胞中线粒体的形态和数目不同。

线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。

线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。

液泡的活体染色与观察实验报告线粒体和液泡系的超活染色与观察实验报告海南师范大学生命科学学院实验报告（2012——1013学年度第一学期）生物科学系2010 级一班姓名：学号：科目：细胞及遗传学实验实验项目：线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的：（1）观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。

（2）学习一些细胞器的超活染色技术。

二、实验原理：线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。

詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

三、实验用品：1、材料：人口腔上皮细胞。

2、试剂：1%，1/5000詹纳斯绿B溶液四、实验方法：1、取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。

2、实验者用牙签宽头在自己口腔颊黏膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的黏液状物放入载玻片的染液滴中，染色10-15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。

五、实验结果：1、在显微镜下观察，可以看到口腔上皮细胞一个个分散的被染成淡蓝色的细胞在细胞中可以看到在核周围有被染成深蓝色的颗粒状结构，即是线粒体。

六、实验结果分析：因为特定的活体染色剂特异地针对某种细胞器的生理生化特点起作用。

例如詹纳斯绿B只对线粒体具有专一性；而中性红则只对液泡系具有专一性。

因此，只用一种活性染色剂很难同时观察到多种细胞器。

用詹纳斯绿B就可以观察到线粒体了。

篇二：实验五：线粒体与液泡系的超活染色与观察实验五：线粒体与液泡系的超活染色与观察一、实验目的：1、观察动物、植物活细胞内的线粒体、液泡系的形态、数量与分布。

2、了解细胞的超活染色技术。

实验一荧光显微镜的原理和使用实验二叶绿体的分离与荧光观察实验三线粒体的活体染色与观察实验四细胞膜的通透性实验五 DNA的细胞化学——Feulgen反应实验六植物染色体标本的制备和观察实验七细胞计数实验八植物细胞骨架的光学显微镜观察实验九植物原生质体的分离和活性鉴定实验十环境因素诱变染色体改组的观察实验一荧光显微镜的原理和使用一、实验目的了解荧光显微镜的构造及其维护方法；掌握荧光显微镜的使用方法和使用中的注意事项。

二、实验原理荧光显微镜是选择由高压汞灯或类似光源发出一定波长的激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，观察细胞某种特异成分的分布状态的显微镜。

与普通光学显微镜一样，荧光显微镜也有物镜、目镜、调焦装置、光源、聚光器、载物台、镜身等组成部分。

所不同的是，荧光显微镜增加了激发光源和滤片系统，它投射到样品上的是特定波长的激发光而不是普通的可见光。

在激发光的作用下，样品中的荧光物质产生图1荧光显微镜发射光（即荧光）。

因此，荧光显微镜观察到的是样品中能产生荧光的部分所呈现的荧光映象，普通光学显微镜则是整个样品的可见光透射和折射影像。

某些物质在—定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。

若停止供能荧光现象立即停止。

有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光（或直接荧光），如叶绿素的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。

有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光（或间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。

利用荧光显微镜对可发荧光物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。

因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。

三、实验用品荧光显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、解剖刀、0.01%吖啶橙染色液（acridine orange）、蒸馏水、水葫芦叶片四、实验内容与方法（一）荧光显微镜的构造1、基本装置荧光显微镜的基本装置是由普通光学显微镜加上一些附件（如荧光光源、激发滤片、二向色镜和阻断滤片等）的基础上组成的。

实验三、线粒体的超活染色与观察
一、实验目的:
利用显微镜观察染色体形态。

二、实验原理:
活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

根据染料的“电化学”特性, 碱性染料的胶体表面带阳离子, 酸性染料的胶体表面带阴离子, 可与被染部分的阴或阳离子相互吸引发生结合。

Jann ' s green是毒性较小的碱性染料，可专一对线粒体进行超活染色，由于线粒体中的细胞色素氧化酶系的作用,使染色始终保持氧化状态（即绿色;而线粒体周围的细胞质中则被还原成无色的色基（即无色。

三、实验用品:
0.03%的JgB 染液,人口腔上皮细胞
四、超活染色与观察:
标本制作（人口腔黏膜上皮细胞临时涂片:在载玻片上滴一滴JgB ,用牙签在口腔面颊刮取细胞,涂于染液中0.5—1min ,加盖玻片观察。

五、作业:
绘口腔上皮细胞线粒体形态与分布。

线粒体活体染色原理线粒体是一个重要的细胞器，它主要负责细胞的能量代谢和呼吸作用。

为了更好地研究线粒体的结构和功能，科学家们研发了一种叫做线粒体活体染色的技术。

线粒体活体染色是一种基于荧光的显微镜技术，可以用于研究线粒体在细胞内的位置、数量、形态和功能等方面。

它利用荧光分子特异性地结合到线粒体的表面或内部，使其发出荧光信号，并可以通过显微镜观察到。

线粒体活体染色的原理和方法有很多，下面详细介绍几种常见的：1. MitoTracker活体染色法MitoTracker是一种荧光染料，它会在细胞内结合到活性线粒体的膜上，发出可见荧光信号。

利用MitoTracker染色，可以标记线粒体的数量、形态、分布和运动等特征，还可以用于研究线粒体的功能状态和代谢活动。

2. JC-1活体染色法JC-1是一种荧光染料，它可以通过荧光共振能量转移的机制来标记线粒体的膜电势。

当线粒体的膜电势较高时，JC-1会形成线粒体聚集物，发出红色荧光信号。

而当膜电势降低时，JC-1会分散在细胞质中，发出绿色荧光信号。

利用JC-1染色，可以通过红/绿荧光比值来评估线粒体的膜电势变化，进而研究线粒体的活性和代谢功能。

3. TMRE活体染色法TMRE是一种可选择性地结合到线粒体膜上的荧光染料，它可以发出红色荧光信号。

利用TMRE染色，可以标记活性的线粒体，并且通过红色荧光密度来反映线粒体的数量和质量。

总之，线粒体活体染色技术是一种极为有用的工具，可以帮助科学家们更好地了解线粒体在细胞生物学中的作用和机制。

随着技术的不断改进和发展，相信这种技术将会被广泛应用于各种疾病的诊断和治疗中。

线粒体活体染色及观察小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察一、实验目的掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。

二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织着色但又无害的一种染色法。

它的目的是显示生活细胞内某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

詹纳斯绿B（Janus green B）是毒性较小的碱性染料，可专一的对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

三、实验用品1.材料：小白鼠肝脏2.试剂：Ringer溶液：NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl2 0.03g + 蒸馏水100ml1%、1/5000詹纳斯绿B溶液：称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，30-40℃加热，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。

取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即为1/5000工作液装入棕色瓶中备用。

3.器材：显微镜、解剖盘、剪刀、吸管、载玻片、盖玻片、擦镜纸四、实验步骤1.用断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取出肝脏，选取边缘较薄的肝组织0.5cm2，放入小烧杯中，用Ringer液冲洗去血污。

2.滴加1/5000詹纳斯绿B溶液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净肝组织移入染液，染色20-30分钟，以细胞块边缘被染成蓝绿色为准。

（注意：染色时要使组织块上面部分半露在染液外，不可完全淹没，以便使线粒体酶系得到氧化）3.吸去染液，将肝组织重置小烧杯中，滴加Ringer溶液0.5ml，用剪刀将组织充分剪碎制悬液。

4.取上述细胞悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。

五、实验结果在高倍镜下观察到了小鼠肝细胞，每个细胞中都有一些被染成蓝绿色的球状结构，为线粒体。

如下页图所示：高倍镜下线粒体超活染色图六、分析与讨论1.在取肝脏时要注意大小，大概为指甲盖的1/3左右为宜，且不宜太厚，防止里面的线粒体不宜被染色，影响实验结果的观察。

实验三线粒体和液泡系的超活染色与观察实验目的一、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。

二、学习一些细胞器的超活染色技术。

实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞舶死亡。

活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。

体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学，，特性起重要作用。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。

一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。

詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

实验用品一、器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀、载玻片、凹面载玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。

二、试剂1．Ringer溶液氯化钠0.85g(变温动物用0.65g)氯化钾0.25g氯化钙0.03g蒸馏水100ml2. 10％、1／3 000中性红溶液称取0.5g中性红溶于50 ml Ringer液，稍加热(30~40'C)使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。