实验六 线粒体的活体染色和观察

线粒体活染色实验报告实验目的通过活染色技术观察和研究线粒体在细胞中的形态结构、数量和分布情况，进一步了解线粒体在细胞生物学过程中的功能和作用。

实验原理活染色是一种通过活体显微镜观察染色物在细胞中的分布和变化情况。

线粒体是细胞中重要的能量产生器，通过染色可以更直观地观察和研究线粒体的特征和状态。

本实验使用的线粒体活染色试剂为Mitotracker，它是一种荧光染料，可选择性地标记线粒体。

Mitotracker可以通过细胞膜进入细胞内，随着线粒体的活动而移动，通过检测荧光信号的分布和强度，可以直接观察线粒体在细胞中的运动和分布情况。

实验步骤1. 培养细胞：选择合适的细胞系，将其培养在含有适宜培养液的培养皿中，使细胞处于良好的生长状态。

2. 处理细胞：将培养好的细胞分为两组，一组为实验组，一组为对照组。

实验组细胞加入适量的Mitotracker活染试剂，对照组细胞不添加Mitotracker。

3. 孵育：将培养皿放入恒温培养箱中，以37C恒温孵育2小时，使Mitotracker 能充分进入细胞内，与线粒体结合。

4. 观察：将培养皿取出，用荧光显微镜观察细胞的荧光信号分布，并拍摄图像进行记录。

5. 分析：对实验组和对照组的观察结果进行比较分析，观察线粒体的数量、形态结构和分布情况变化。

实验结果通过荧光显微镜观察，我们发现实验组细胞中线粒体呈现出强烈的红色荧光信号，分布均匀且较为集中。

而对照组细胞中，没有观察到红色荧光信号，线粒体无特别明显的分布。

实验讨论1. 通过荧光显微镜观察线粒体荧光信号的数量、分布和形态结构变化，我们可以初步推测线粒体的活动程度和数量是否发生变化。

2. 通过与对照组细胞的比较，我们可以更准确地判断线粒体的特征和状态是否发生了变化。

3. 本实验结果表明，线粒体活染色技术可以用于研究线粒体在细胞功能和生物学过程中的作用和功能。

实验总结线粒体活染色技术是一种快速、准确的观察线粒体形态和特征的方法。

观察线粒体实验报告观察线粒体实验报告线粒体是细胞中的一个重要细胞器，它在细胞内扮演着能量生产的关键角色。

为了深入了解线粒体的结构和功能，我们进行了一系列的线粒体实验观察。

本报告将详细介绍我们的实验过程和观察结果。

实验一：线粒体的形态观察我们首先使用显微镜对线粒体进行了形态观察。

通过细胞染色和显微镜放大，我们清晰地观察到了细胞质中的线粒体。

线粒体呈椭圆形或长圆形，大小约为1-10微米。

我们还发现，线粒体表面覆盖着一层光滑的膜，使其在细胞内具有良好的运动能力。

实验二：线粒体的功能观察为了进一步了解线粒体的功能，我们进行了线粒体的呼吸作用实验。

通过添加适当的底物和试剂，我们观察到线粒体产生了大量的ATP分子，这是细胞内能量的主要来源。

这表明线粒体在细胞内起着重要的能量转换作用。

实验三：线粒体与细胞凋亡的关系线粒体在细胞凋亡过程中也发挥着重要作用。

我们进行了线粒体与细胞凋亡关系的实验观察。

通过添加特定的药物，我们诱导了细胞凋亡，并观察到线粒体内的某些蛋白质释放到细胞质中。

这些蛋白质的释放触发了一系列的细胞凋亡信号，导致细胞死亡。

这个实验结果进一步证明了线粒体在细胞凋亡中的重要性。

实验四：线粒体与遗传疾病的关系线粒体还与一些遗传疾病的发生有关。

我们进行了一项实验，观察了线粒体DNA的突变对细胞功能的影响。

通过引入突变的线粒体DNA到细胞中，我们观察到细胞的能量代谢受到了明显的影响，导致细胞功能异常。

这一实验结果揭示了线粒体突变与一些遗传疾病的关联。

实验五：线粒体与老化的关系线粒体在细胞老化过程中也扮演着重要角色。

我们进行了一项实验，观察了线粒体功能与细胞老化之间的关系。

通过测量线粒体的呼吸作用和ATP产量，我们发现随着细胞的老化，线粒体功能逐渐下降，导致细胞能量供应不足。

这一实验结果进一步证明了线粒体在细胞老化中的重要性。

总结：通过一系列的线粒体实验观察，我们深入了解了线粒体的结构和功能。

线粒体不仅在细胞能量代谢中起着重要作用，还与细胞凋亡、遗传疾病和细胞老化等过程密切相关。

线粒体(Mitochondrion)的活体染色及电镜照片观察【实验目的】掌握一种活体染色方法,了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。

【实验用品】一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。

二、器材和仪器显微镜、手术器材一套、解剖盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、10ml 注射器、吸管。

三、试剂 l／300詹纳斯绿B染液、Ringer氏液(哺乳类用)。

【实验内容】一、兔肝细胞线粒体的活体染色（一）原理线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。

细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。

活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。

詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂。

线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

（二）方法用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。

当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。

染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。

将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。

(三)结果显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。

二、线粒体的光镜切片观察用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。

三．线粒体的电镜照片观察不同细胞中线粒体的形态和数目不同。

线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。

线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。

【实验目的】掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。

【实验原理】活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。

体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。

一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。

詹纳斯绿 B（ Janus green B）和中性红（ neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。

詹纳斯绿 B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

【实验用品】1、材料：小白鼠肝脏、睾丸2、试剂：Ringer 溶液： NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl 2 0.03g + 蒸馏水 100ml；1%、1/5000 詹纳斯绿 B 溶液：称取 50mg 詹纳斯绿 B 溶于 5ml Ringer 溶液中， 30-40 ℃加热，使之溶解，用滤纸过滤后，即为 1%原液。

本实验旨在通过一系列实验方法，监测线粒体的活性，了解线粒体在细胞代谢中的作用，并探讨影响线粒体活性的因素。

二、实验原理线粒体是细胞内的能量工厂，通过氧化磷酸化过程产生ATP，为细胞提供能量。

线粒体活性可以通过检测其呼吸链酶活性、线粒体膜电位、ATP产生量等指标来评估。

三、实验材料与仪器1. 材料：- 人胚胎肾细胞（HEK293）- 胰蛋白酶- DMEM培养基- 胰岛素-转铁蛋白-硒（ITS）混合维生素- 胰岛素- 转铁蛋白- 硒- 健那绿染液- 线粒体呼吸链复合体活性测试盒- ATP检测试剂盒2. 仪器：- 倒置显微镜- 流式细胞仪- 分光光度计- 离心机- 细胞培养箱1. 细胞培养：将HEK293细胞接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养。

2. 线粒体活性检测：- 线粒体呼吸链复合体活性检测：使用线粒体呼吸链复合体活性测试盒，通过测定细胞内NADH脱氢酶和细胞色素c氧化酶的活性，评估线粒体呼吸链复合体的活性。

- 线粒体膜电位检测：使用流式细胞仪，通过检测细胞内线粒体膜电位的变化，评估线粒体膜电位的变化情况。

- ATP产生量检测：使用ATP检测试剂盒，通过测定细胞内ATP的产生量，评估线粒体的ATP产生能力。

3. 影响因素研究：- 温度对线粒体活性的影响：将细胞置于不同温度下培养，检测线粒体活性指标的变化。

- 药物对线粒体活性的影响：使用不同药物处理细胞，检测线粒体活性指标的变化。

五、实验结果1. 线粒体活性检测：- 线粒体呼吸链复合体活性检测结果显示，细胞内NADH脱氢酶和细胞色素c氧化酶的活性均较高，表明线粒体呼吸链复合体的活性较好。

- 线粒体膜电位检测结果显示，细胞内线粒体膜电位较为稳定，表明线粒体膜电位较好。

- ATP产生量检测结果显示，细胞内ATP的产生量较高，表明线粒体的ATP产生能力较强。

2. 影响因素研究：- 温度对线粒体活性的影响：在较低温度下，线粒体活性下降；在较高温度下，线粒体活性上升。

线粒体和液泡系的超活染色与观察活体染色是能使生活有机体的细胞或组织特异性着色但对活样品又没有毒害作用的一种活体染色方法，其目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。

体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学” 特性。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。

但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。

一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。

詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(ne utral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性。

1．实验目的1．1. 观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布；1．2. 学习一些细胞器的超活染色技术。

2．实验原理线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。

细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。

活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。

詹纳斯绿B是线垃体的专一性活体染色剂。

线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

中性红为弱碱性染料，对液泡系(即高尔基体)的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。

线粒体和液泡系的超活染色与观察实验报告实验目的：
1. 了解超活染色的原理；
2. 掌握超活染色的方法；
3. 观察线粒体和液泡系的结构特点；
4. 学习常用的显微镜操作技巧。

实验步骤：
1. 取一份新鲜叶片，用透明胶带轻轻压住叶片，将透明胶带带上的叶片剥离下来。

2. 将剥离下的叶片放在载玻片上，加一滴超活染色溶液，并用盖玻片盖住。

3. 用粗目显微镜观察叶片上染色体的变化情况，观察细胞器的数量和形态特征，用细目显微镜进行进一步观察和记录。

实验结果：
经过超活染色处理后，我们可以清晰地观察到叶片细胞的结构特点。

其中，线粒体是细胞内重要的细胞器之一，其形态大小各异，常常呈圆柱状，且有许多线粒体。

而液泡是细胞内的囊状体，它可以储存水分、营养物质、色素等，体积大小不一，可见度较低，需要用高倍显微镜进行观察。

实验分析：
超活染色是一种能够使细胞有机物分解的过程中的酶不会破坏细胞结构和细胞器的染色方法。

该方法对细胞膜和细胞器的染色效果非常好，有助于观察和研究细胞的生理和功能，尤其是在细胞形态变化研究和药物筛选方面有着广泛的应用。

实验总结：
本次实验，通过超活染色，我们成功地观察到了植物叶片细胞内线粒体和液泡系的形态特点。

同时，我们也掌握了常用的显微镜操作技巧，对现代生命科学领域中细胞结构和功能的研究提供了帮助。

线粒体和液泡系的超活染色与观察XXX,YYY,ZZZ一、实验目的：1、观察动物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。

2、观察植物细胞内液泡系的形态、数量与分布。

3、学习一些细胞器的超活染色技术。

二、实验原理：线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态、数量随不同物种、不同组织器官和不同生理状态而发生变化。

詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内地细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

中性红为弱碱性染料，对液泡系（即高尔基体、内质网、溶酶体以及细胞内的运输小泡）的染色具有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中的某些酸性蛋白质有关。

三、实验用品：1、材料：人口腔上皮细胞、黄豆幼根根尖。

2、试剂：（1）Ringer溶液：氯化钠0.85g（变温动物用0.65g）氯化钾0.25g氯化钙0.03g蒸馏水100mL（2）1%，1/3000中性红溶液：称取0.5g中性红溶于50mLRinger液，稍加热（30~40℃）使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。

临用时取已配制的1%中性红原液1mL，加入29mLRinger溶液混匀，即为1/3000工作液，装入棕色瓶备用。

（3）1%，1/5000詹纳斯绿B溶液：称取50mg詹纳斯绿B溶于5mLRinger溶液中，稍加热（30~40℃），使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。

取1%原液1mL加入49mLRinger溶液，即成1/5000工作液，装入瓶中备用。

最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。

3、器材：普通光学显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。

四、实验方法：1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体地的超活染色与观察：（1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。

实验五：线粒体与液泡系的超活染色与观察一、实验目的：1、观察动物、植物活细胞内的线粒体、液泡系的形态、数量与分布。

2、了解细胞的超活染色技术。

二、实验原理：活体染色是使生活有机体的细胞或组织进行特异性着色但对样品又没有毒害作用的一种活体染色方法，既可以显示生活细胞内的某些特定结构又不会影响细胞的生活状态和造成细胞死亡。

通常分为体内活体染色和体外活体染色。

体外活体染色又称为超活染色。

活体染料主要是靠染料的“电化学”特性。

例如碱性燃料就是靠表面带有的阳离子与被染的细胞部分的阴离子相互吸引而着色。

詹纳斯绿B和中性红即是最常用的两种。

前者是线粒体的专一活性染色剂，线粒体中的氧化酶使染料氧化即有色状态（蓝绿色），而在周围空间中染料仍保持还原即无色状态。

中性红对液泡系的染色有专一性，而对核与胞质不着色。

三、实验用品：1 器材：显微镜，恒温水浴锅，刀片，镊子，载玻片，盖玻片，吸管，吸水纸。

2 试剂：Ringer溶液（NaCl 0.85g，KCl 0.25g，CaCl20.03g，加蒸馏水100ml）；10%、1/3000中性红溶液：称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液，稍加热(30~40℃)使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存。

临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。

1%、1/5000詹纳斯绿B溶液：称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加微热(30~40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。

取1%原液l ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液装入瓶中备用。

最好现用现配。

3 实验材料：人口腔上皮细胞，黄豆根尖。

四、实验方法：1 人口腔上皮细胞线粒体超活染色与观察将清洁载玻片放在37度恒温水浴锅的金属板上，滴加2滴1/5000詹纳斯绿B溶液，随后用牙签在口腔颊或者上颚处刮取上皮细胞放在载玻片的染液滴中，并搅动几下。

细胞生物学实验报告小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察1.实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。

2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双凹载玻片（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿B染液（3）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法。

这种染色方法常用的是化学染料。

目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化学变化以致细胞的死亡。

应用：研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。

（2）通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。

体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学” 特性。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。

但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。

一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。

詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性。

（3）选择活体染料的原则：①性质：有电化学特性②低毒、无毒③低浓度：如实验中使用的是1/5000的詹纳斯绿B染液④专一、特异性：中性红可特异性地对植物液泡染色⑤常以碱性染料为主，因为碱性染料多可溶于类脂，容易穿膜。

4.实验步骤：（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。

剪开腹腔，取出肝脏。