蛋白水解度测定方法

蛋白质水解度的简易测定方法蛋白质水解度是指蛋白质在特定条件下被水解的程度。

测定蛋白质水解度的主要方法之一是采用“肽键长度”测定法。

以下是测定蛋白质水解度的简易方法及步骤：一、准备相关试剂和器材1.蛋白质溶液：你需要准备一定浓度的蛋白质溶液，以便进行后续的测定。

2.氢氧化钠溶液：用于中和蛋白质溶液中的酸。

3.茚三酮溶液：用于与肽键发生反应，生成紫色产物。

4.醋酸溶液：用于调节溶液的pH值。

5.滴定管和滴定剂：用于滴定蛋白质溶液中的游离氨基。

二、测定步骤1.调节溶液的pH值：用醋酸溶液调节蛋白质溶液的pH值至4.5～5.0之间。

这个pH范围是蛋白质中肽键与茚三酮反应的最佳条件。

2.加入茚三酮：向蛋白质溶液中加入一定量的茚三酮溶液，充分混合后静置10～15分钟。

3.加热：将混合液加热至100℃左右，保持加热状态数分钟，使反应完全。

4.中和：待混合液冷却后，用氢氧化钠溶液调节pH值至9～10之间，使混合液呈现碱性。

此时，未水解的氨基与茚三酮反应生成的产物会转变为黄色。

5.滴定：使用滴定管，用已知浓度的盐酸滴定混合液中的游离氨基，直至颜色变化为粉红色。

这个过程需要耗费一定的时间。

6.计算肽键长度：通过滴定所消耗的盐酸浓度和体积，可以计算出混合液中游离氨基的浓度。

再根据蛋白质中氨基酸的结构通式，可以计算出肽键长度。

三、注意事项1.在调节pH值时，要注意细致地使用精密的pH试纸或酸度计进行测量，以保证结果的准确性。

2.在加入茚三酮后，要充分混合并静置一段时间，以确保反应完全。

3.在加热过程中，要确保混合液受热均匀，并保持适当的加热时间以确保反应完全。

4.在滴定过程中，要保证滴定管的清洁度，避免因滴定剂污染而影响结果的准确性。

同时，需要多次摇晃混合液，以确保滴定剂与游离氨基充分反应。

5.在计算肽键长度时，需要考虑到蛋白质中不同氨基酸的构象和结构通式。

同时，还要注意温度和离子强度等因素对肽键长度的影响。

综上所述，测定蛋白质水解度的简易方法是可行的。

蛋白质水解物水解度的测定
蛋白质水解物水解度是指蛋白质的分解能力，反映其特定化学和物理状态的能力。

它是饮食营养研究，氨基酸、肽链分离研究，腺体功能研究以及蛋白质工程及其他各种研究的重要指标。

因此，测定蛋白质水解物水解度对科学技术和医药卫生研究有着重要的意义。

蛋白质水解物水解度的测定主要是利用蛋白质的有机化学性质，用吡咯烷醇法、酸碱回流法或乙溴脩乙腈法等有效分析方法进行测定，因而在分析中不仅要测定蛋白质溶液中含有量有多少，还要根据技术参数判断抽样物质的水解情况。

吡咯烷醇法测定蛋白质水解物水解度通常是先用乙酸乙酯将抽取物中粗品脂肪
酯化，然后用硫酸银电泳池分别测定溶液中的可混溶蛋白和不混溶蛋白，最后利用其峰图的光谱图所显示的结论，来评定蛋白质水解物的水解度。

酸碱回流法测定蛋白质水解物水解度，主要是用恒定pH值的溶液将抽取物溶解，通过混合溶液中可溶蛋白和不溶蛋白，在紫外分光光度计上测定混合液中可溶性蛋白含量，来评价蛋白质水解物的水解度。

乙溴脩乙腈法测定蛋白质水解物水解度，主要是先使抽取物经过乙溴脩乙腈处理，将不溶性蛋白和其有机混合物分流，再用阴离子交换树脂将其树脂柱状分离，最后通过吸光度光谱测定乙溴脩乙腈处理后，抽样物质的可混溶蛋白含量，以评定其水解度。

以上是蛋白质水解质水解度测定方法，它是检测蛋白质结构及其分解情况的有
效方法，是蛋白质工程与医药生物技术研究的重要参考。

因此，正确准确的测定技术必须被正确使用，以确保研究成果的可靠性。

文章编号:10083464(2002)02011303蛋白质水解度的简易测定方法袁斌1,吕桂善2,刘小玲2(1深圳市成业冷冻有限公司,广东深圳518019;2广西大学生物技术与糖业工程学院,广西南宁530004)摘要:介绍了一种比较简单可行的蛋白质水解度的测定方法,该方法基于国外通用的pH ST A T 法,不需要特别的仪器,化学试剂耗量少,测定结果可靠,便于实验室和工业化生产使用。

关键词:蛋白质;水解度;pH ST A T 法中图分类号:T Q 936.1 文献标识码:AThe simple method of determining for the degree ofhydrolysis of proteinsYU ANG Bin 1,LU Gui shan 2,LIU Xiao ling2(1Shenzhen Cheng ye Freeze Cor por ation Limited,Shenzhen 518019,China;2Biotechnolog y and Sug ar Engineering Colleg e ,Guangx i U niv .,Nanning 530004,China )Abstract :A simple and w orkable method ,w hich w as based o n pH STAT method ,fo r deter-mining the deg ree of hydr olysis o f pro tein ,was intr oduced in the present paper.This metho d can be used in lab and food industry w ith g ood results and little reagents consumptions.Key words :pro tein;deg ree of hydr olysis;pH ST AT Method蛋白质是人体必不可少的营养素,在人体的代谢和生长过程中起着十分重要的作用。

蛋白水解度测定方法蛋白水解度（Protein Hydrolysis）是指蛋白质在特定的水解条件下被分解的程度。

测定蛋白水解度的方法有很多种，以下是其中几种常见的方法：1.肽图分析法（Peptide Mapping）肽图分析法是一种通过蛋白质在特定条件下水解得到的肽片段的分离和鉴定，来推断蛋白质序列和结构信息的方法。

该方法的原理是，不同的肽片段与固定相的结合能力不同，从而可以在色谱柱上分离出不同的肽片段。

通过对这些肽片段的分析，可以得到蛋白质的一级结构信息，进而计算出蛋白质的水解度。

2.游离氨基含量法（Free Amino Acid Content）游离氨基含量法是通过测定蛋白质水解液中游离氨基的含量，来计算蛋白质的水解度。

该方法的基本原理是，蛋白质水解后生成的游离氨基酸与某些特定的试剂反应，生成有色产物，通过测定有色产物的吸光度，可以得出游离氨基酸的含量。

根据游离氨基酸的含量，可以计算出蛋白质的水解度。

3.肽谱法（Peptide Mass Spectrometry）肽谱法是通过分析蛋白质水解液中肽片段的质量，来推断蛋白质的序列和结构信息。

该方法的基本原理是，不同的肽片段在质谱仪中碎裂后产生不同的离子峰，通过对这些离子峰的分析，可以得出肽片段的质量。

根据肽片段的质量，可以推断出蛋白质的序列和结构信息，进而计算出蛋白质的水解度。

4.生物化学法（Biochemical Methods）生物化学法是通过研究蛋白质在生物体内的代谢过程，来推断蛋白质的水解度。

该方法的基本原理是，蛋白质在生物体内的代谢过程受到许多因素的影响，如酶的活性、底物的浓度、代谢途径等。

通过对这些影响因素的研究，可以推断出蛋白质的水解程度。

5.免疫学法（Immunological Methods）免疫学法是通过检测蛋白质在生物体内的免疫原性，来推断蛋白质的水解度。

该方法的基本原理是，蛋白质在生物体内的免疫原性与其分子量、构象等因素有关。

DOI ：10.16465/431252ts.201705104种大米蛋白水解度测定方法比较李皖光，汪桃花，王新文，季一顺（安徽省粮油产品质量监督检测站，合肥安徽230031）Science and Technology and Economy［摘要］采用pH-stat 法、甲醛滴定法、茚三酮比色法和TCA 指数法4种方法，检测了碱性蛋白酶在一定底物浓度和工艺条件下大米蛋白水解度的变化，并进行了较为深入的对比。

结果表明：在固定水解条件下，4种方法检测结果所反映蛋白质水解度的变化规律均符合碱性蛋白酶的酶解变化过程。

4种检测方法中，TCA 指数法测定的水解度偏高，与其他3种方法的差异较大，而pH-stat 法、甲醛滴定法和茚三酮比色法的结果相差不大，均具有较高的准确度。

［关键词］碱性蛋白酶；大米蛋白；水解度；pH-stat 法；甲醛滴定法；茚三酮比色法；TCA 指数法收稿日期：2017-09-02作者简介：李皖光，男，硕士，工程师，主要从事粮食安全与质量检测工作。

通信作者：季一顺，男，教授级高级工程师，主要从事粮油食品安全卫生指标研究。

大米蛋白具有合理的氨基酸组成，较高的生物利用率及低过敏性等特点，受到科研人员的高度重视，各种针对大米蛋白的提取方法和应用方法层出不穷，相关的功能产品也被不断的开发。

其中，使用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶等在一定条件下水解大米蛋白，使其转换为可溶性的肽，提高了蛋白质的溶解性，成为大米蛋白研究的主流方向之一[1]。

蛋白质经酶水解有助于改善其营养价值和功能特性，在水解过程中，产物的质量控制对其应用特性的影响是极为重要的。

为了获得理想的特殊风味和功能特性，需要严格控制大米蛋白的水解程度。

蛋白质水解度是衡量蛋白质水解程度的重要指标[2]。

目前测定蛋白质水解度的方法主要有pH-stat 法[3]。

甲醛滴定法[4—5]和茚三酮比色法[6]等。

不同的检测方法导致最终结果的偏差较大，有关几种检测方法的对比和差异少有报道。

食用蛋白质水解度的改良测定方法摘要：当制备水解蛋白的时候，测定水解度（DH）是至关重要的。

已建立的三硝基苯磺酸（TNBS）发被认为是测定酶水解度的常用方法。

然为，三硝基苯磺酸法费时费力，不能连续的测定水解反应程度，并且需要使用有危险不安全的化学试剂。

本文阐述了一种基于基本氨基酸与邻苯二甲醛（OPA）反应的水解度测定方法。

结论是使用OPA法测定蛋白质的水解度更准确，方便，迅速，有更为广泛的使用范围，并且较之TNBS方法更环保。

关键词：水解度，食用蛋白，水解，蛋白质水解，测定介绍在蛋白质水解物当中，检测反应的一个关键参数就是水解度（DH）。

DH值呗定义为断开的肽键的百分比：DH=h/h tot*100%试中htot是每蛋白质当量中肽键总数，h是被水解的肽键数。

Htot是取决于原料的氨基酸组成。

在各种文献中，人们已经建立了几种测定蛋白质水解物DH值的方法，例如pH-stat法，渗压法，可溶性氮法以及三硝基苯磺酸（TNBS）法。

pH-stat法（Jacobsen 等，1957）测定DH值是基于一种基准物（或是由于水解物pH值变化产生的酸）来保持水解过程中的pH值。

基准物质的使用量与DH值是成比例的。

在实际的蛋白质水解试验中，Ph-stat法的使用仅限于pH略高于7的条件下（Adler-Nissen,1986）。

当水解反应的DH值达到约30%时，采用Ph-stat法来测定水解度并不经济可行，在pH>7的单一酶反应系统中使用该方法是不可取的。

这将使最适pH值低于7的酶不适用Ph-stat法。

另外，在水解反应当中添加基准物可能会导致最终产物的使用不尽如人意。

在水解反应当中，混合物冰点的降低值可以通过渗压计（冰点测定器）来测得。

这与DH值是相关的（Adler-Nissen,1984）.渗压法是一种可以在多种反应当中使用的快速方法。

这种方法的限制之处就在于它不能测定粘度大的溶液及溶质溶解度高的溶液，例如在长期反应当中作为防腐剂的盐。

第20卷第6期长春大学学报V o.l20N o.6 2010年6月J OU RNAL OF CHANGCHUN UN I VER SI TY June2010一种测定大豆蛋白质水解度的简易方法邹险峰,陈星,高长城(长春大学农产品深加工吉林省普通高校重点实验室,吉林长春130022)摘要:介绍了一种新的测定大豆蛋白质水解度的方法,G-25色谱层析法。

该方法利用快速蛋白纯化系统将大豆蛋白水解多肽溶液进行G-25色谱层析,根据蛋白峰和肽峰面积计算蛋白质的水解度,并与甲醛滴定法进行了比较。

结果表明,G-25色谱层析法测定的大豆蛋白水解度略低于甲醛滴定法。

该方法快速、简便,可以普遍适用于各种蛋白质水解度的测定。

关键词:大豆蛋白质;水解度;G-25色谱层析中图分类号:S56511;Q51文献标志码:A文章编号:1009-3907(2010)06-0025-04大豆蛋白质是目前最重要的植物蛋白源,含有人体需要的全部8种必需氨基酸,且比例合理,氨基酸含量与动物蛋白相似,特别是赖氨酸含量可达到动物蛋白水平。

但是,大豆蛋白质分子量大,溶解度低,含有腹胀因子、胰蛋白酶抑制剂、血球凝集素等抗营养因子,易受温度、酸碱度等理化因素影响,且有一定的抗原性,消化率和生物利用率都远远不及鸡蛋和牛奶等动物蛋白质。

大豆多肽是大豆蛋白质经蛋白酶水解而成的多种低分子量多肽混合物,通常由3~6个氨基酸组成,其分子量主要分布在1000Da左右。

大豆多肽具有与大豆蛋白质相同的氨基酸组成,消除了对人体有害的各种抗营养因子,抗原性更低,溶解性极佳,易吸收,还具有提高免疫力、抗疲劳、降低胆固醇等多种生理功能。

因此,大豆多肽正在被广泛研究并应用。

在实际生产过程中,采用水解度(Degree ofH ydrlysis,DH)来反映大豆蛋白质的水解程度,作为重要的产品质量检定标准。

水解度通常定义为:DH=h/h tot@100%式中h为水解后每克蛋白质被裂解的肽键毫摩尔数(m#m o l/g),h to t为每克蛋白质的肽键毫摩尔数(m#m o l/g)。