蛋白质水解物水解度的测定_赵新淮
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第42卷第5期2017年10月f t飧种政G ra in Science and Te c h n o lo g y and E c o no m yV〇l.42,N〇.5Oct. 2017DOI:10.16465/431252ts.201705104种大米蛋白水解度测定方法比较李皖光,汪桃花,王新文,季一顺(安徽省粮油产品质量监督检测站,合肥安徽230031)[摘要]采用pH-stat法、甲醛滴定法、茚三酮比色法和TCA指数法4种方法,检测了碱性蛋白酶在一定底物 浓度和工艺条件下大米蛋白水解度的变化,并进行了较为深入的对比。
结果表明:在固定水解条件下,4种方 法检测结果所反映蛋白质水解度的变化规律均符合碱性蛋白酶的酶解变化过程。
4种检测方法中,TCA指数 法测定的水解度偏高,与其他3种方法的差异较大,而pH-stat法、甲醛滴定法和茚三酮比色法的结果相差 不大,均具有较高的准确度。
[关键词]碱性蛋白酶;大米蛋白;水解度;pH-stat法;甲醛滴定法;茚三酮比色法;TCA指数法大米蛋白具有合理的氨基酸组成,较高的生物 利用率及低过敏性等特点,受到科研人员的高度重 视,各种针对大米蛋白的提取方法和应用方法层出 不穷,相关的功能产品也被不断的开发。
其中,使用 木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶等在一定条 件下水解大米蛋白,使其转换为可溶性的肽,提高 了蛋白质的溶解性,成为大米蛋白研究的主流方向之一一咱1暂。
蛋白质经酶水解有助于改善其营养价值和功能 特性,在水解过程中,产物的质量控制对其应用特性 的影响是极为重要的。
为了获得理想的特殊风味和 功能特性,需要严格控制大米蛋白的水解程度。
蛋白 质水解度是衡量蛋白质水解程度的重要指标[2]。
目前测定蛋白质水解度的方法主要有pH-stat法咱3]。
甲醛滴定法咱4一5暂和茚三酮比色法[6]等。
不同的检测方法 导致最终结果的偏差较大,有关几种检测方法的对 比和差异少有报道。
核桃蛋白水解物水解度测定方法比较
周慧江;朱振宝;易建华
【期刊名称】《粮食与油脂》
【年(卷),期】2012(025)002
【摘要】为比较测定核桃分离蛋白(WPI)水解物水解度最佳方法,采用Alcalase 2.4L、Protamex水解WPI,对不同时间段核桃蛋白水解液水解度测定方法进行比较.结果表明,采用内切蛋白酶Alcalase 2.4L水解WPI时,pH-Stat法和TNBS法测定结果基本一致,而甲醛滴定法测定结果偏低;而用复合蛋白酶Protamex水解WPI时,pH-Stat法和甲醛滴定法测定结果接近,但且均低于TNBS法,TNBS法测定结果与另外两法差异显著(p<0.05).由于制备核桃多肽主要采用内切蛋白酶,所以可认为pH-Stat法测定WPI水解液水解度较为准确.
【总页数】3页(P28-30)
【作者】周慧江;朱振宝;易建华
【作者单位】陕西科技大学生命科学与工程学院,陕西西安710021;陕西科技大学生命科学与工程学院,陕西西安710021;陕西科技大学生命科学与工程学院,陕西西安710021
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.2+1
【相关文献】
1.棉籽蛋白水解物水解度3种测定方法的比较 [J], 林虬;黄薇;宋永康;姚清华;颜孙安;钱爱萍
2.蛋白水解物水解度测定方法的研究 [J], 罗艳华;王全杰;陈沛海;高翔
3.乳清蛋白水解物游离氨基浓度测定方法比较 [J], 冯岩;冯志彪;王楠
4.乳清蛋白水解物水解度3种测定方法的比较 [J], 李晓东;牛治霞;张柏林
5.水稻秸秆木质纤维素水解物中糖的测定方法比较 [J], 张薇;姚青;王明远;苏小军;熊兴耀
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木瓜蛋白酶与中性蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究钟振声,陈钰,文锡莲(华南理工大学化学与化工学院,广东广州 510640)摘要:研究了大豆分离蛋白经过加热预处理后用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解的可行性。
以水解度(DH)为指标,考察了单因素水解条件得出:木瓜蛋白酶水解反应的最佳条件为反应底物浓度3.0%,pH 7.0,反应温度55 ℃,酶用量30 μg/g;中性蛋白酶水解反应的最佳条件为反应底物浓度5.0%,pH 7.0,反应温度55 ℃, 酶用量40 μg/g。
在此条件下,大豆分离蛋白水解度分别为3.69%和9.80%。
在一定条件下复合酶分步水解优于单一酶水解。
关键词:木瓜蛋白酶;中性蛋白酶;大豆分离蛋白;水解反应;水解度中图分类号:Q814;文献标识码:A;文章篇号:1673-9078(2009)09-1039-05Hydrolysis of Soybean Protein Isolate by Papain and NeutralProteaseZHONG Zhen-sheng, CHEN Yu, WEN Xi-lian(School of Chemistry and Chemi cal Engineering, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China) Abstract: The feasibility of hydrolysis of heat-treated soybean protein isolate (SPI) by papain and neutral protease was studied. Single factor experiment showed that the optimum conditions for papain catalyzed hydrolysis of SPI were as follows: papain dosage 30 μg/g, mass concentration of substrate 3.0%, hydrolysis temperature 55 ℃ and pH 7.0. For neutral protease catalyzed hydrolysis of SPI, the best conditions were neutral protease dosage 40μg/g, mass concentration of substrate 5.0%, hydrolysis temperature 55 ℃, and pH 7.0. Under the above-mentioned two kinds of conditions the hydrolysis degree of protein reached 3.69% and 9.80%, respectively. It was also found that hydrolysis by mixed enzymes was more efficient than that by single enzyme.Key words: papain; neutral protease; soybean protein isolate; hydrolysis reaction; hydrolysis degree大豆分离蛋白的蛋白质含量高达85%-90%,含有丰富的赖氨酸、亮氨酸、苏氨酸和色氨酸等八种人体必需的氨基酸[1],应用前景十分广阔。
4种大米蛋白水解度测定方法比较
李皖光;汪桃花;王新文;季一顺
【期刊名称】《粮食科技与经济》
【年(卷),期】2017(042)005
【摘要】采用pH-stat法、甲醛滴定法、茚三酮比色法和TCA指数法4种方法,检测了碱性蛋白酶在一定底物浓度和工艺条件下大米蛋白水解度的变化,并进行了较为深入的对比.结果表明:在固定水解条件下,4种方法检测结果所反映蛋白质水解度的变化规律均符合碱性蛋白酶的酶解变化过程.4种检测方法中,TCA指数法测定的水解度偏高,与其他3种方法的差异较大,而pH-stat法、甲醛滴定法和茚三酮比色法的结果相差不大,均具有较高的准确度.
【总页数】3页(P35-37)
【作者】李皖光;汪桃花;王新文;季一顺
【作者单位】安徽省粮油产品质量监督检测站,合肥安徽 230031;安徽省粮油产品质量监督检测站,合肥安徽 230031;安徽省粮油产品质量监督检测站,合肥安徽230031;安徽省粮油产品质量监督检测站,合肥安徽 230031
【正文语种】中文
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1.棉籽蛋白水解物水解度3种测定方法的比较 [J], 林虬;黄薇;宋永康;姚清华;颜孙安;钱爱萍
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食品科学
(总
二号”西瓜前后两次糖耐量试验的血糖面积
和胰岛素面积均无明显差异(和且与BMI无关(p>65)所以从群体上说正常人和叫IDDM病人吃西瓜对血糖和胰岛B细胞功能无有害影响从MDDM个体系分析本次临床实验结果可见有6人吃西瓜餐其血糖面积下降10%以卜平均F降23土82%有5人血糖面积上升10%以上平均上升177士39%比人血糖面积在士10%以内波动将西瓜餐血糖面积下降的6人和上升的5人的有关因素进行单因素的分析可见胰岛素面积平均血糖面积的变化与年龄病程BMI无关而与下列因素有关1西瓜品种血糖降低组的6例均食“京欣一号”西瓜;上升的5例中有3例食“丰收二号”p互瓜2例食“京欣一号”西瓜因此从我们l均实际可见”京欣一号”与降低血糖有
关(x,二495P<005)这是否与此种西瓜含糖量少有关有待于进一步研究2与每日摄入的热量有关血糖降低
组
的每日实际摄入热量明显高于标准的摄入量(P<005)可能由于平日热量摄入较多一次
吃50`g)去皮西瓜不至于影响血糖水平从本实验中J玉发现血糖降低组的标准热量摄入要求明
显低:于血糖上升组(P<001)原因不明
奋考文献
l、们10xEeprtComiteon助a加estHelitusTechnica
l
肛妙tse
ries6一6{wHoeenere1950
2邝安荃编糖尿病在中国湖南科学技术出版社
1989295~296
蛋白质水解物才长解度的测定
赵新淮冯志彪标北农学院
15
0030
摘要利几f茹三酮显色法及甲醛固定法对蛋云白质的水解度进行测定并进行了比较结果表明二法是
一
致的蛋白质:水解度的测定为蛋白质水解程居贬的控制提供了必需的手段关健词水解蛋白水解度
A加traCtThedesreeofh}’drolysis(DH)ofh夕drolysedproetinwasmeasuredbyninh州rineOlorimetriemethod
andformaldellydetitrationmethodandobtainO3resul。wereeom附redItwasShownthatreSults0ftheWtome
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odsweresameThedetermimationofDHof卜一ydroly,derPoteincanProvideanesntialmehtdofrQcontrolli
n
gthe
extentofenzy一nichdyrolysisofProteinseKywords卜ydrolysed讲oteindegreeof分玉ydr(以ys1
5
前言
蛋白质的水解就是利用化学方法或酸会去对天然蛋白质进布寸催化水解水解后的蛋白)责其功能性质发生J改变如溶解性了几化性质刃发泡性质等等囚而J“泛地用于食品J二业尤其是酸法水解由于其反应条件温和对`效省鉴酸破坏少的优点而倍受青睐但在蛋白质的酶水解过程中蛋白质水解程度的控制是十分重要的因为过度的水解会产生苦味肤使蛋白质的风味改变影响水解蛋白在食品中的应用因此
国外的科学家提出了水解度
(eDgr
eofhydr
ofy
is“DH)
的概念它定义为
:
DH=h/h,X100%食品科学Fd总式中水解后每蛋白被裂解的肤键毫摩尔数每原料蛋白质的肤键毫摩尔翻刃即原料蛋自质中肤键被裂解的毛了分数表示蛋白质被酶催化水解的程度显然丑受白质全部水解生成游离氨基酸时DH一10%没有水解时DH=0ht,:对于某特定的蛋白质来讲是一个常数它可以由组成该蛋白质的氨基酸的含最计算出例如对于大豆蛋自其h。一7smmof/:所以只要测出水解后蛋白质麒裂解的肤键数h(值)就可以计算出相应的DH值山于每裂想之个肤键就同时新生成一个一NHZ从和一Co()H基所以只要定量地测出蛋自质水解后新生成的一NHZ墓一c00H基的址就可以求得h值测定蛋白质的一NH:一COoH从含量的方法主要有三硝基苯磺酸(TNBs))法茹二酮法甲醛法常用的是TNBS法但该法『!,所需的试剂在一般实验室中不太常见测定时间也较长相对来讲命一二酮法及甲醛法更为方便本文利用茹三内同法测定水解蛋自质的一NH:基含抢并同甲醛固定法进行比较得到了致的结果可以方便地用于水解蛋白质DH的测定为水解程度的控制提供了必要的手段材料和方法21水解蛋白液:在不同条f牛下酶水解大豆分离蛋白灭活后离心分离得到的清液即为水解蛋白液主要试剂:()]荣三酮显色剂(苟三酮059果糖039NaHpo书10HZo10g及KH:Po;69定容至100ml)(2)40%乙醇溶液(乙醇:水一40:60v/v)(3)甲醛溶液(预先中和)(4)甘氨酸(5)标准NaoH溶液(0lmol/L)(6)2%硼酸溶液(w/,)等及有关指示剂所用试剂均为分析纯级22主要仪器:721分光光度计(上海产)精密pH计(匕海产),半自动凯氏定氮仪(江苏宜兴产)磁力搅拌器(卜海产)23标准曲线的绘制:取010009干燥过的甘氨酸溶解后定容至10nil取出
2
0ITd定
容至10ml得2009/ml的熔液取此液再分别稀释成含量为2一20赔/ml的溶液用于标准曲
线绘制取20oml测定用稀释液于试管中加入10ml显色剂混匀后沸水浴中加热巧min同时作空白试验;然
后
冷水冷却
加入
5001川40%乙醉溶液混匀放置15min后
用1
cm比色杯以空白管调零于570nm处
测定A
了汽
24水解蛋白液中一NH
:
基的测定
241茹三酮法:取水解蛋自液050ml定容
至50ml取040ml稀释液于试管中并加入
160ml蒸馏水10ml显色剂
混匀后
置
沸
水浴中加热15min同时作空白试验以后操作同标准曲线利用标准曲线计算水解蛋白液
中一NHZ的含量(。mol/ml)
242甲醛固定法:取水解蛋白液50ml于
小烧杯中加入60ml去CO:水;磁力搅拌并用
精密pH指示其PH值先用01mofL/标准
卜`aoH滴定pH=52时加入己中和好的甲醛
格t液20ml记录将其pH值滴乞92时所消耗的01mol/LNaoH济液的体羽廷然后计算其一,呵HZ从的含最(。mol/ml)25水解蛋自液中蛋白质含量的测定:取
10Olm水解液进行湿法消化处理然
后在蒸
馏仪L蒸馏并人工滴定定氮蛋白质的含量表示为N
火625m
g/ml
结果与讨论测定蛋白质中的一NH:基茹三酮法是种常用的非常灵敏的方法但是一般配制成的
显色剂徐定性较差不能较长时间贮存利用AO气
(C川80版)中采用的显色荆则可弥补这个
不足气该、显色剂在棕色瓶中冰和放置1周仍可使用避免了现配现用的问题用此组成的显色剂对甘氨酸标准溶液进行显色时其AC关
系如几岌1医可1所示:食品科学总
表不同浓度的甘扭酸溶液关系
协名
平均值
图标准曲线的关系
因甘氨酸的分子量为所以可
将其换算成一NHZ基的林mof数的A一C关系
:
C=195X10一“+02793A(拼mol/ml)原料蛋白质中还有游离的一NHZ基故此
在计算水解蛋白的h值时要考虑它的影响否则所算出的DH值偏大取原料大豆蛋白测量
发现其一NH:的含量为03mmol/g
该值与
氮
基酸组成分析结果中赖氨酸的含量十分接近
所以在计算大豆水解蛋白的h值时必须扣除此值表2列出了茹三酮法及甲醛法测定大豆水
解蛋白中一NH:的含量结果比较表2中的结果可以两法的测定结果基本一致(B
~
09
583D
+2545r=0972a<001)
故此二法中的任
何一法均可用于水解蛋白质中NH:含量的测
定但以甲醛固定法更为简便利用上述结果以及所测得的蛋白质相应含
量就可以计算出每一个水解大豆蛋白样相应的
DH
值
:
DH一
NH:的含量伽mol/m
l)
625N
78(mmol/g)
(mg/ml)
x10
0
%
033`mm。
,/g,
〕
、
表2不同大豆水解蛋白中一NH的含t(。mol/ml平均值、
NH基含量
样号
1夕34567
苟三酮法(D)
甲醛法(B)424544483026328943494095SQ62
5284616263024706441436213820
表3不同水解大豆蛋白液的DH值
样号一NH:含量
(林mol/ml)N含量(mg/ml)DH(%)42453026434950626021024937478526162100947063621723585
85
4结论
41利用AOAC(1980版)中采用的显色剂
及
常用的甲醛固定法可以准确地测定蛋白质酶水
解物的水解程度两法结果基本一致
42计算水解蛋白的水解度(DH)时必
须考虑
原料蛋白质中游离一NH:的影响否则会使得所测DH值偏大
43DH
的测定将为蛋白质酶水解程度的控
制提供必需的手段参考文献
1AscooffAnalChemist(AOAC)1980Mehtdo
10179WashingtonDCAsso`offA刀iaC
he
m
ist
2Adler一NisenJ1979JAgrieFO7
l此3~1262
3GB500939一85