cDNA反转录试剂盒

3
04 379 012 001
Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit y Version 6.0
1. What this Product Does, continued
Vial/ Cap
Label
Store the kit at ؊15 to ؊25°C N Store Control RNA (vial 7 in
Cat. No 04 379 012 001) at —70°C or below.
y Version 6.0
Content version: September 2010
9 (7 for b,c) colorless
Water, PCR-grade
Content
a) Cat. No. 04 379 012 001 b) Cat. No. 04 896 866 001 c) Cat. No. 04 897 030 001
a) 1 vial, 1 ml b) 2 vials, each 1ml c) 3 vials, each 1 ml
L In Cat. No. 04 896 866 001 and Cat. No. 04 897 030 001 the control reagents (vial 7 and 8) are not included. Therefore, in these kits vial 7 is Water, PCR Grade.
Random Hexamer Primer
a) 1 vial, 100 ␮l (600 ␮M) b) 1 vial, 200 ␮l (600 ␮M) c) 2 vials, each 200 ␮l (600 ␮M)

产品信息Thermo ScientificMaxima第一链cDNA合成试剂盒（适用于RT-qPCR）#K1641，#K1642/onebio分析证书经验证，在两步法RT-qPCR中，对于不同起始量（5 ng-0.5 fg）的RNA逆转录产物，使用Thermo Scientific Maxima SYBR Green/ROX qPCR 预混液进行qPCR扩增。

其反应效率在90-110％之间，曲线斜率在-3.09和-3.58之间，且相关系数>0.99。

质量授权人：Jurgita Zilinskiene目录页码试剂盒组分 (4)贮存条件 (4)产品描述 (4)重要提示 (5)RT-qPCR实验方案 (6)对照反应 (6)疑难解答 (7)参考文献 (8)试剂盒组分贮存条件所有试剂盒成分都应贮存于-20 °C。

产品描述Thermo Scientific Maxima第一链cDNA合成试剂盒是合成cDNA第一链的方便系统，适用于两步法实时定量RT-PCR（RT-qPCR）中的cDNA合成。

试剂盒采用先进的Maxima 反转录酶（RT），该酶源自M-MuL V 逆转录酶的体外进化。

这种酶相比M-MuL V逆转录酶热稳定性高，扩增效果强劲且具有更高的cDNA合成效率。

Maxima第一链cDNA合成试剂盒能够在较高温度下（55-65℃），在很宽的总RNA量范围内（从1 pg到5 μg）合成cDNA。

合成反应能在15-30分钟内完成。

Maxima第一链cDNA合成试剂盒的各组分经预混合，以节约时间和减少移液错误。

试剂盒由Maxima Enzyme Mix、5×反应混合液、无核酸酶的水三部分组成。

Maxima Enzyme Mix包含Maxima反转录酶和Thermo Scientific Ribolock RNase抑制剂。

重组的Ribolock RNase抑制剂能有效保护RNA模板在高于55℃时不被RNase A、B和C降解。

产品信息Thermo ScientificMaxima第一链cDNA合成试剂盒（适用于RT-qPCR）#K1641，#K1642/onebio分析证书经验证，在两步法RT-qPCR中，对于不同起始量（5 ng-0.5 fg）的RNA逆转录产物，使用Thermo Scientific Maxima SYBR Green/ROX qPCR 预混液进行qPCR扩增。

其反应效率在90-110％之间，曲线斜率在-3.09和-3.58之间，且相关系数>0.99。

质量授权人：Jurgita Zilinskiene目录页码试剂盒组分 (4)贮存条件 (4)产品描述 (4)重要提示 (5)RT-qPCR实验方案 (6)对照反应 (6)疑难解答 (7)参考文献 (8)试剂盒组分贮存条件所有试剂盒成分都应贮存于-20 °C。

产品描述Thermo Scientific Maxima第一链cDNA合成试剂盒是合成cDNA第一链的方便系统，适用于两步法实时定量RT-PCR（RT-qPCR）中的cDNA合成。

试剂盒采用先进的Maxima 反转录酶（RT），该酶源自M-MuL V 逆转录酶的体外进化。

这种酶相比M-MuL V逆转录酶热稳定性高，扩增效果强劲且具有更高的cDNA合成效率。

Maxima第一链cDNA合成试剂盒能够在较高温度下（55-65℃），在很宽的总RNA量范围内（从1 pg到5 μg）合成cDNA。

合成反应能在15-30分钟内完成。

Maxima第一链cDNA合成试剂盒的各组分经预混合，以节约时间和减少移液错误。

试剂盒由Maxima Enzyme Mix、5×反应混合液、无核酸酶的水三部分组成。

Maxima Enzyme Mix包含Maxima反转录酶和Thermo Scientific Ribolock RNase抑制剂。

重组的Ribolock RNase抑制剂能有效保护RNA模板在高于55℃时不被RNase A、B和C降解。

11-05
高效率逆转录试剂盒 First Strand cDNA Synthesis Kit
ReverTra Ace -α-
(Code No. FSK-100,FSK-101)
使用说明书
科研用
TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN
目录
※ 除Positive Control RNA外，所有组分请均保存在-20℃条件下；Positive Control RNA请保存于-80℃条件下。
※ Positive Control RNA 由于运输过程中不能一直保证 -80℃条件，在运输过程中可能 降解。建议用户选择人、鼠来源的 Total RNA 作为 Control RNA。
G3PDH mRNA
Primer F 559
intron
Size(bases)
1634
1237
1110 Primer R
90 129 90 92 k-193 104
图 2. Control Primer F，R 的 location
[Positive Control RNA]
本 试 剂 盒 作 为 Positive Control 用 RNA ， 添 附 有 Human G3PDH (Glyceraldehyde 3-Phosphate Dehydrogenase)遗传基因的 in vitro 转录产物。 （在 3’末端添加了 22mer 的 Poly（A）tail）（请参照图 3）。
※ 组分中的 5×RT Buffer 在溶解时，可能会出现白色沉淀现象，但不影响其品质。此时， 请使用振荡器等仪器使其混合均匀，等完全溶解后再使用。
[各引物的序列]

RACE cDNA反转录说明书1.准备cDNA合成反应液2.0 ul 5×First-Strand Buffer1.0 ul DTT (20uM)1.0 ul dNTP Mix (10mM)总共体积：4ul2.准备以下试剂：5’-RACE-cDNA: 1.0—2.75ul RNA, 1.0ul 5’-CDS Primer A3’-RACE-cDNA: 1.0—3.75ul RNA, 1.0ul 5’-CDS Primer AControl-cDNA: 只需要1ul mouse heart total RNA（1ug/ul）3.加入H2O于上一步反应液至5’-RACE为3.75ul，3’-RACE为4.75ul，然后轻轻吸打混匀。

4.放入PCR仪反应：72℃3min,42℃2min然后14000g离心10s。

5.对于5’-RACE-cDNA的合成，加入1ul SMARTerⅡA oligo至4.75ul。

6.配混合液： 4.0ul Buffer mix from step 10.25ul RNase inhibitor (40U/ul)1.0ul SMARTScribe reverse transcriptase (100U)总体积：5.25ul7.将第6步混合液加入第2步微离心管中，使总体积达到10ul。

用枪轻轻吸打混匀。

8.42℃反应90min，然后70℃反应10min。

9.用Tricine-EDTA buffer稀释反应产物：如果：起始RNA<200ng,加入20ul；起始RNA>200ng,加入100ul；Poly A+ RNA，加入250ul。

10. 将稀释好的cDNA模板保存于-20℃，最长时间达3个月。

适用范围
RT延伸。
注意事项
1. 下列操作步骤适用于模板量为50 ng-2 μg的总RNA，如果总RNA量大于2 μg，请按比例扩 大反应体系。
2. 在冰上进行操作，防止RNA发生降解。 3. 不需分开变性和退火两个步骤。但是对于二级结构很复杂的RNA模板，推荐使用变性步
KR116-0μl 25 μl 50 μl 1 ml
KR116-02 (100 rxn)
200 μl 200 μl 100 μl 200 μl 2×1 ml
KR116-03 (1000 rxn) 10×200 μl 10×200 μl 10×100 μl 10×200 μl 10×2×1 ml
操作步骤
使用快速反转录试剂盒合成第一链cDNA
50 ng-2 μg总RNA可建立20 μl反应体系。
1. 将模板RNA在冰上解冻；5×gDNA Buffer、FQ-RT Primer Mix、10×King RT Buffer、 RNase-Free ddH2O在室温（15-25℃）解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液 涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体。
以下操作步骤请在冰上进行。为了保证反应液配制的准确性，进行各项反应时，应先配 制成Mix，然后再分装到每个反应管中。
2. 按照表1的基因组DNA的去除体系配制混合液，彻底混匀。简短离心，并置于42℃，孵育 3 min。然后置于冰上放置。
表1 gDNA去除反应体系
组成成分
使用量
5×gDNA Buffer
产品特点
反转录效率高：反转录效率可达95%以上； 操作简单快速：反应体系配制简单，21 min完成cDNA第一链的合成； 通读复杂模板：能够作用于GC含量高，二级结构复杂的RNA模板； 样品普适性高：对不同物种来源及杂质较多的RNA模板的适用性高； 后续兼容性好：后续配合荧光定量检测产品，灵敏度高、稳定性好。

takara反转录试剂盒说明书说明书一、产品简介takara反转录试剂盒是一种高效、可靠的反转录试剂盒，适用于转录RNA为cDNA的实验操作。

本试剂盒由takara公司制造，经过严格的质量控制，确保产品的稳定性和可靠性。

二、试剂盒组成本试剂盒包含以下组分：1. 反转录酶：高效反转录酶，能在广泛的实验条件下进行反转录反应。

2. 基质：提供反应所需的核酸和其他辅助物质。

3. 标记物：用于标记反转录产物的荧光染料或放射性同位素。

4. 缓冲液：维持试剂盒中酶的活性，调节反应条件的缓冲体系。

5. 控制样品：用于检验试剂盒的反应效果和稳定性。

三、实验操作1. 准备工作在进行实验前，请准备所需的实验仪器和试剂，确保实验环境的清洁和无菌，避免污染对实验结果的影响。

2. RNA提取使用适当的方法提取目标RNA样本，并在提取过程中避免RNA的降解。

3. 反转录反应将提取的RNA样本与反转录试剂盒中的反转录酶、基质和缓冲液按推荐比例混合，并在适当的温度下进行反应。

反应时间根据样本的RNA含量和实验要求确定。

4. 停止反应通过停止反应来终止反转录反应，一般使用热敏感性酶来达到这个目的。

5. 产物处理反转录产物可以直接用于下游实验，如实时定量PCR、聚合酶链式反应等，也可以进行储存和后续处理。

四、实验结果解读根据试剂盒的使用目的和实验设计，对反转录产物进行相应的分析和解读。

常见的分析方法有凝胶电泳、实时定量PCR和测序等。

根据实验结果，可以得到RNA的表达情况、差异表达基因等相关信息。

五、注意事项1. 试剂保存：请按照试剂盒上的说明保存试剂，避免暴露在高温、冻融循环和光照等不利条件下。

2. 操作规范：请按照本说明书中提供的实验操作步骤进行操作，避免实验误差对结果的影响。

3. 质量控制：在每次实验中，请使用合适的阳性和阴性对照样品，以确保实验结果的准确性和可靠性。

4. 废弃物处理：请将使用过的试剂和实验废弃物按照相关规定进行处理，避免对环境造成污染。

反应次数目录号反应次数04 379 012 00150次，包括10次对照反应04 896 866 001100次04 897 030 001200次试剂盒包装与含量小瓶/瓶盖标签适用于a) 04 379 012 001 b) 04 896 866 001 c) 04 897 030 0011红色TranscriptorReverseTranscriptase（逆转录酶）a) 1瓶，25 μl (20 U/μl)b) 1瓶，50 μl (20 U/μl)c) 2瓶，各50 μl (20 U/ μl)储存缓冲液：200 mM 磷酸钾，2 mM 二硫苏糖醇，0.2% Triton X-100(v/v)，50% 甘油(v/v)，pH 约为7.2∙2无色Transcriptor RTReaction Buffer(5×)（逆转录缓冲液）a) 1瓶，1 mlb) 1瓶，1 mlc) 2瓶，各1 ml5×浓度：250 mM Tris/HCl，150 mM KCl，40 mM MgCl2，pH约为8.5(25°C)∙3无色ProtectorRNase Inhibitor（RNase抑制剂）a) 1瓶，50 μl(40 U/μl)b) 1瓶，100 μl(40 U/μl)c) 2瓶，各100 μl(40 U/μl)储存缓冲液：20 mM Hepes-KOH，50 mM KCl，8 mM 二硫苏糖醇，50 % 甘油(v/v)，pH 约为7.6 (4°C)∙4黄色/ 紫色Deoxynuc-leo-tideMix（dNTP）a) 1瓶，100 μl(黄色瓶盖)b) 1瓶，200 μl(紫色瓶盖)c) 2瓶，各200 μl(紫色瓶盖)dATP, dCTP, dGTP, dTTP各10 mM∙5蓝色Anchored-oligo(dT)18Primer（锚定oligo(dT)18引物）a) 1瓶，100 μl(50 μM)b) 1瓶，200 μl(50 μM)c) 2瓶，各200 μl(50 μM)6Random Hexamera) 1瓶，100 μl(600 μM)蓝色Primer（随机引物）b) 1瓶，200 μl(600 μM)c) 2瓶，各200 μl(600 μM)7绿色Control RNA（对照RNA）a) 1瓶，20 μl(50 ng/μl)包含提取于永生细胞系(K562)的总RNA 片段稳定溶液∙8绿色Control Primer Mix PBGD（对照基因引物）a) 1瓶，40 μl5 μM 人类PBGD特异性正向与反向引物∙9(b和c为瓶7)无色Water, PCR-gradea) 1瓶，1 mlb) 2瓶，各1 mlc) 3瓶，各1 ml注意：货号为04 896 866 001和04 897030 001的产品不含有control试剂(瓶7和瓶8)，因此瓶7即为Water, PCR-grade。

2．PCR 反应 ① 按下列组成配制 PCR 反应液，全量 50 μl。
试剂名称 上述 cDNA 溶液 dNTP Mixture（各 2.5 mM） Forward Primer（10 μΜ） Reverse Primer（10 μΜ） 10×LA PCR Buffer II（Mg2＋ Plus） TaKaRa LA Taq®（5 U/μl） dH2O
-2-
④ 在上述 Microtube 管中配制下列反转录反应液。 试剂名称
上述模板 RNA/引物变性溶液 5×M-MLV Buffer dNTP Mixture（各 10 mM） RNase Inhibitor（40 U/μl） RTase M-MLV（RNase Hˉ）（200 U/μl） Total Volume
6. 70℃保温 15 分钟后冰上冷却，得到的 cDNA 溶液可直接用于 2nd-Strand cDNA 的合成或者 PCR 扩增等，PCR 扩增时 cDNA 溶液的使用量建议使用 1 μl～5 μl。
●使用λRNA 进行 RT-PCR 反应的实验例
本实验中使用的λRNA 为带有 Poly(A)的λDNA 的转录产物。本实验中分别扩增了 1 kbp、3 kbp、 5 kbp、8 kbp 和 10 kbp 的目的 DNA 片段。
50 % 0.01 %
●起 源： Purified from an E.coli strain expressing a recombinant enzyme.
●活性定义 以Poly（rA）·Oligo（dT）为模板/引物，在 37℃、10 分钟条件下，掺入 1 nmol的 [3H] dTTP所需
要的酶量定义为 1 个活性单位（U）。
使用量 7 μl 2 μl

cDNA的制备与检测
[实验原理]
总RNA，经寡聚(d丁)纤维素亲和层析柱分离出mRNA，以寡聚(d丁)为引物，经反转录合成双链cDNA。

先用反转录酶合成第一条cDNA链；经碱降解作用除去RNA模板后用大肠杆菌DNA聚合酶，以第一条链cDNA的3’末端结构为引物合成第二链，最后形成双链cDNA。

[仪器、材料与试剂]
(一)仪器和材料
紫外线透射仪、移液枪、琼脂糖凝胶电泳系统
(二)试剂
特异引物、逆转录试剂盒
[实验步骤]
（一）cDNA的合成
1、取约9uL mRNA，依次加入：第一链缓冲液4uL，RNA酶抑制剂1 uL，Oligo(dT)引物2uL，dNTP混合液2uL AMV逆转录酶2uL，混匀，离心10min，42℃水浴1h。

2、在冰上于第一链反应产物中，加入以下试剂：第二链缓冲液然40uL，RNA 酶H 1uL，大肠杆菌DNA聚合酶5uL，DEPC处理过的水至100uL，混匀，离心10s，12℃、22℃、65℃水浴各1h。

3、加入T4DNA聚合酶，振荡混匀后离心10s，37℃水浴10min。

4、加入10uL 200mmol／L EDTA和2ul SDS（10%，W/V）
5、加入80uLTE，20uL 3mol／L醋酸钠，400uL乙醇，-20℃放置15min。

6、15000rpm 离心15min。

7、弃上清，稍晾干至无乙醇味，加40uLTE溶解沉淀，即为合成的cDNA。

（二）cDNA电泳检测
取约5ul反应产物，在1%琼脂糖凝胶上电泳，EB染色，紫外灯下检测，呈现出大小在200—10Kb的拖带，其中重心区域小1—4Kb之间，这说明反转录完全，
得到了高质量的cDNA。

Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit 逆转录步骤1，使用前解冻结冰的试剂2，将试剂短暂离心3，冰上操作：（操作RNA实验需要戴手套）将模板与引物在PCR管上混合试剂体积最终浓度细胞总RNA 或 1 ug 总RNA 或10ng多聚尾(A)+m RNA 多聚尾(A)+ mRNA任选其中一个引物:Anchored-oligo(dT)18 Primer, 1 ul 2.5 uM50 pmol/ul (vial 5)或Random Hexamer Primer, 2ul 60uM600 pmol/ul (vial 6)或 Sequence-Specific Primer 可变0.5-2.5 uM1%DEPC水, (vials 7 or 9) 可变使总体积为 13 ul总体积13ul注：以上为初次实验的推荐浓度。

总RNA的适用浓度为10ug到5ng，以及mRNA的适用浓度为1到100ng,当RNA模板浓度较低时添加10ug/ml 的MS2 RNA* 来稳定模板RNA。

4，（可选）65度水浴上述混合物10分钟，使模板引物混合物变性（确保失活RNA二级结构），水浴后立即冰浴至少一分钟5，往上述混合物继续加入以下试剂（冰上操作）试剂体积最终浓度.Transcriptor Reverse Transcriptase 4 ul 1×(8 mM MgCl2) Reaction Buffer, 5× conc. (vial 2)Protector RNase Inhibitor, 0.5 ul40 U/ul (vial 3)20 U Deoxynucleotide Mix, 2 ul 每个1 mM 10 mM each (vial 4)Transcriptor Reverse 0.5 ul 10U Transcriptase, 20 U/ul (vial 1)最终体积20 ul注：小心混合上述试剂，不要振荡，短暂离心使试剂沉在管底6，将PCR管放在PCR仪上孵育，孵育条件如下：使用的引物目标mRNA长度孵育温度与时间Anchored-oligo(dT)18 不大于4kb 55度30分钟大于4kb 50度60分钟primer, 50 pmol/ul 或Sequence–specific primerRandom hexamer primers, 不大于4kb 25度10分钟，然后55度30分钟600pmol/ul 大于4kB 25度10分钟，然后50度60分钟6,85℃水浴5分钟灭活逆转录酶8、－20℃保存，或立即进行PCR。

成功的 cDNA 合成来自高质量的 RNA。高质量的 RNA 至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如 EDTA 或 SDS。用于
cDNA 合成反应的溶液试剂尽可能用 DEPC 进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，首先用经为了增加贮存 RNA 样品的稳定性，可 以将 RNA 溶解在去离子的甲酰胺中，存 于-70℃。用 于保存 RNA 的甲酰胺一定不能含有降解 RNA 的杂物。 来源于胰脏的 RNA 至少可以在甲酰胺中保存一年。当准备使用 RNA 时，可以使用下列方法沉淀 RNA：加入 NaCl 至 0.2 M 及 4 倍体积的乙醇，室温放置 3-5 min，10,000 rpm 离心 5 min。
东盛生物出产的 M-MLV 是由一个 71kDa 的单亚基组成的重组型 DNA 逆转 录聚合酶。可以催化以 RNA 或 DNA：RNA 杂交链为模板的互补 DNA 的聚 合反应。本酶经修饰 RNaseH 活性比普通的逆转录酶要弱很多，因此在合成第 一链 cDNA 的过程中，可保证 RNA 的降解程度较低，从而使得率提高。
逆转录系列
RT-PCR Kit（逆转录试剂盒）
产品组分 组分 M-MLV（200 U/μl） RNase（40 U/μl） Oligo（dT）15（50 μM） Random primer（50 μM） 5×first-strand buffer RNase-free ddH2O dNTPs（10 mM each） 说明书
20 次逆转录反应，R1012 可进行 100 次逆转
录反应（20 μl 标准 PCR 反应体系，每次使用 M-MLV 1 μl）。
M-MLV 储存液 20 mM Tris-HCl (pH 7.5) 200 mM NaCl 0.1 mM EDTA 1 mM DTT 0.01% NP-40 50% glycerol 5xfirst-strand buffer 成分 250 mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25 ℃) 375 mM KCl 15 mM MgCl2 50 mM DTT 保存条件 各组分均-20℃保存，避免反复冻融。

第1篇一、实验目的1. 学习反转录技术的原理和操作方法；2. 掌握从RNA模板合成cDNA的第一链的方法；3. 熟悉反转录试剂盒的使用。

二、实验原理反转录（Reverse Transcription）是指将RNA模板逆转录成cDNA的过程。

反转录酶是一种RNA指导的DNA聚合酶，可以在RNA模板的指导下合成cDNA。

反转录技术在分子生物学研究中具有重要作用，如基因克隆、基因表达分析等。

三、实验材料1. 实验试剂：反转录试剂盒、RNA提取试剂、DEPC水、引物、dNTPs、RNase抑制剂等；2. 实验仪器：离心机、PCR仪、恒温水浴锅、电泳仪、凝胶成像系统等；3. 实验样本：含有目的RNA的细胞或组织。

四、实验步骤1. RNA提取：按照RNA提取试剂说明书操作，提取细胞或组织中的RNA；2. RNA浓度测定：使用紫外分光光度计测定RNA的浓度和纯度；3. 反转录反应：按照反转录试剂盒说明书进行操作，将提取的RNA作为模板，在特定条件下合成cDNA第一链；4. cDNA纯化：使用柱式或磁珠纯化cDNA，去除未反应的RNA、dNTPs、RNase抑制剂等杂质；5. PCR扩增：将纯化的cDNA作为模板，进行PCR扩增，验证反转录结果；6. 电泳检测：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察扩增结果。

五、实验结果与分析1. RNA提取：成功提取出目的RNA，A260/A280比值在1.8-2.2之间，表明RNA纯度较高；2. cDNA合成：反转录反应完成后，在特定条件下进行PCR扩增，成功扩增出目标片段；3. 电泳检测：PCR产物在琼脂糖凝胶上呈现清晰的条带，表明反转录和PCR反应均顺利进行。

六、实验结论1. 成功从RNA模板合成cDNA的第一链，为后续的基因克隆、基因表达分析等研究提供了基础；2. 反转录技术操作简便，结果可靠，适用于分子生物学研究。

七、实验注意事项1. 实验操作过程中应避免RNA降解，使用DEPC水处理实验器材和试剂；2. 操作过程中应严格按照试剂说明书进行，避免人为误差；3. 实验结果可能受到RNA质量、反转录酶活性、引物设计等因素的影响，需进行多次实验验证。

行业文档TaKaRa Code：DRR014APrimeScript™ RT-PCR Kit(50次量)目录内容页码●制品说明 1●制品内容 1●保 存 2●原 理 2●试剂盒特点 3●RNA样品制备 3●使用注意 4●反转录引物的选择 5●实验操作 5●实验例 7 ●Q&A8●制品说明PCR（Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应）是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。

虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA 后，PCR法便可应用于RNA的解析了。

迄今为止，此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。

PrimeScript™ RT-PCR Kit是具有良好的延伸性能与高扩增效率的2 Step RT-PCR试剂盒。

反转录反应使用了TaKaRa独自开发的新型反转录酶PrimeScript™ RTase；PCR反应使用了扩增性能良好的Hot Start 型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq TM HS。

本试剂盒具有以下优点：1.进行高效的RT-PCR扩增。

2.在标准的RNA反转录反应温度（42℃）下，便可使具有复杂结构的RNA进行良好的延伸，可以避免RNA在高温条件下的降解。

3.能有效抑制非特异性的PCR扩增。

4.使用本试剂盒扩增得到的目的产物3′端附有一个A碱基，可以直接克隆于T-Vector中。

本试剂盒含有反转录反应及PCR扩增反应所需的全部试剂。

●制品内容（50次量*1）1.PrimeScript™ RTase（for 2 Step）2.5×PrimeScript™ Buffer3.RNase Inhibitor（40 U/μl）4.dNTP Mixture（10 mM each）5.Oligo dT Primer（2.5 μM）6.Random 6 mers（20 μM）7.TaKaRa Ex Taq TM HS（5 U/μl）8.10×PCR BufferⅡ9.Control F-1 Primer*2（20 μM）10.Control R-1 Primer*3（20 μM）11.Positive Control RNA（2×105 copies/μl）12. RNase Free dH2O25 μl 200 μl 25 μl 150 μl 50 μl 50 μl 25 μl 250 μl 10 μl 10 μl 20 μl 1 ml*1 反转录反应20 μl 、PCR反应50 μl体系时可使用50次。

本公司利用基因工程学的方法改变了来自 MMLV (Molony murine leukemia virus) 的逆转录酶，使阻碍合成长链 cDNA 的 RNase H失活，成功 开发了大幅度提高 cDNA合成能力的改良型酶ReverTra Ace 。
ReverTra Ace -α-(Code No.:FSK-100,FSK-101)是以ReverTra Ace为核 心酶的First strand cDNA合成试剂盒。由于本试剂盒包含了RT用引物及Positive Control，所以能够简单地进行逆转录反应。也可以应用于手头上各种DNA聚合 酶的PCR反应模板的制备。例如，通过和High fidelity PCR用酶，Long PCR用 酶等的结合，能够进行目的性更强的RT-PCR。
【 保存 】
•除Positive Control RNA以外，其他组分请均保存于-20℃条件下。 •Positive Control RNA请保存于-80℃条件下。 ※ Positive Control RNA由于运输过程中不能一直保证-80℃条件，在运输过
程中可能降解。建议用户选择人、鼠来源的Total RNA 作为Control RNA。 •为了保证实验效果，请在收到产品的一年之内使用完毕。
G3PDH 基因是在各种哺乳类组织上表达的“管家基因”。其 mRNA 表达水 平不受一部分细胞因子和含有 Tumor-promoting Phorbol Esters 等的诱导物质 的影响，并且，在几乎所有组织上都是恒定的。因此，使用从各种组织中抽提出 来的 RNA 样品的时候，可以作为最合适的对照而使用。
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4℃、5 min.
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瞬间离心
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USuperRT cDNA KitSuperRT cDNA 第一链合成试剂盒Cat. No.WD3126保存：-20℃组分说明产品简介本产品包含从RNA 模板逆转录成cDNA 第一链所需的所有试剂，其中包括高效逆转录酶、反应缓冲液、引物、dNTP等。

经过重组表达的SuperRT 逆转录酶RNase H 活性缺失，减少了逆转录反应中RNA 的降解，更易获得全长的cDNA。

该逆转酶逆转录效率高，可对少量RNA 模板进行良好的逆转录反应。

SuperRT 逆转录酶与RNA 亲合性高，能通读GC 含量高，二级结构复杂的RNA 模板，获得高产量的cDNA。

适用于第一链cDNA 的合成、RT-PCR、Real-Time PCR 以及全长cDNA 文库的构建等。

注意事项1.在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1％DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时，并高压灭菌30分钟后使用。

2.本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。

所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。

3.若起始RNA的量小于50 ng，建议加入RNA酶抑制剂（RNasin）。

本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购.使用方法注意：1 ng-5 µg总RNA可建立20 µl反应体系，如果总RNA量大于5 µg，请按比例扩大反应体系。

ⅰ逆转录操作步骤：1.将RNA 模板、Primer Mix、dNTP Mix、RT Buffer、SuperRT 和RNase-Free Water 溶解并置于冰上备用。

2.根据以下表格配置反应体系，总体积为20 μl。

注意：若起始RNA的量小于50 ng，则建议加入RNA酶抑制剂（RNasin）本试剂盒并未提供，。

takara反转录试剂盒说明书关键信息项：1、试剂盒名称：Takara 反转录试剂盒2、适用样本类型：＿___________________________3、反应体系：＿___________________________4、反应条件：＿___________________________5、储存条件：＿___________________________6、有效期：＿___________________________1、产品简介11 Takara 反转录试剂盒是一种用于将 RNA 反转录为 cDNA 的高效、可靠的工具。

111 本试剂盒经过精心设计和优化，能够提供高质量的反转录产物，适用于各种下游分子生物学实验。

2、试剂盒组成21 反转录酶211 具有高活性和热稳定性，确保反转录反应的高效进行。

22 反转录缓冲液221 包含各种必要的成分，为反转录反应提供适宜的环境。

23 RNA 酶抑制剂231 有效抑制 RNA 酶的活性，防止 RNA 降解。

24 随机引物或 oligo(dT)引物241 可根据实验需求选择合适的引物进行反转录。

25 dNTP 混合物251 提供四种脱氧核糖核苷酸，用于 cDNA 合成。

3、适用样本类型31 总 RNA311 包括从细胞、组织、血液等样本中提取的总 RNA。

32 mRNA321 经过纯化或富集的 mRNA 样本。

4、反应体系41 建议的反应体系如下：411 RNA 模板：X μL（根据 RNA 浓度和实验需求确定）412 随机引物或 oligo(dT)引物：Y μL413 dNTP 混合物：Z μL414 反转录缓冲液：A μL415 RNA 酶抑制剂：B μL416 反转录酶：C μL417 无 RNase 水：补充至总体积D μL5、反应条件51 反转录反应的温度和时间可根据引物类型和RNA 质量进行调整。

511 使用随机引物时，反应条件通常为：25°C 孵育 10 分钟，然后42°C 孵育 30 60 分钟。