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通用型一步法RT-PCR试剂盒说明书前言本试剂盒适用于对各种动、植物、病毒RNA进行PCR 检测。
用户可根据被分析基因，配合一对引物，或同时采用Taqman 荧光探针，先将提取的RNA反转录(reverse transcription).成cDNA，再经过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)技术对特异性片段进行扩增，进行电泳或实时荧光分析。
一步法RT-PCR可使RT及PCR过程在单管中完成，比分开进行RT及PCR更方便。
由于不需要在RT完成后打开反应管，尽可能地避免了样品间的相互污染。
规格20人份适用仪器适用于各种普通PCR仪器和实时荧光PCR仪器。
试剂盒组成试剂准备根据下表配制反应液：振荡混匀后，按每管 40 μl(可根据需要调整)分装，备用。
PCR扩增将均一化后的RNA提取样本10 μl加入各反应管，混匀、离心后，置普通PCR仪器或实时荧光PCR仪器上进行扩增及实时检测。
结果判断扩增产物可直接进行电泳检测；实时荧光检测可根据相应仪器的配套软件进行结果分析。
保存及有效期-20℃保存，有效期为6个月。
注意事项1. 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。
2. 整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增（荧光检测）应分区进行以避免污染。
3. 操作人员应戴口罩，经常更换一次性手套，以避免RNA酶的污染；实验中所用器具均应经过除RNA酶处理。
4. 试剂盒组成中的试剂使用前应充分融化并混匀。
5. 进行实时荧光分析时，应使用透光性能较好的一次性薄壁离心管；.荧光探针应避光保存，加入缓冲液中后，应尽快进行扩增。
6. 注意适当处理检测中遗留的样品、扩增产物及可能被污染的试剂。
生产企业：上海蓝创生物科技发展有限公司。
一步法RT-PCR 检测试剂盒 (一步法RT-PCR 扩增试剂盒)(目录号HS0612-2)产品包装保存条件-20℃产品简介本试剂盒是专为一步法RT-PCR 实验研制，逆转录和PCR 在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，在避免污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。
本试剂盒包括全新高效逆转录酶、快速热启动DNA 聚合酶，同时包含适用于逆转录和PCR 扩增的反应缓冲液和实验中所必需的反应组分。
经过重组表达的SuperRT 逆转录酶RNase H 活性缺失，减少了逆转录反应中RNA 的降解，更容易获得全长的cDNA 。
该逆转酶逆转录效率高，可对少量 RNA 模板进行良好的逆转录反应。
SuperRT 逆转录酶与RNA 亲合性高，能通读GC 含量高，二级结构复杂的RNA 模板，获得高产量的cDNA 。
PCR 反应使用的DNA 聚合酶具有扩增效率高、延伸速度快的优良性能。
独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。
使用该试剂盒能够方便快捷的在同一个反应管内完成逆转录和PCR 扩增反应。
使用本试剂盒扩增得到的目的产物3′端附有一个″A ″碱基，可直接用于T/A 克隆。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 效率高，可以高效转录GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。
2. 耐热性及稳定性强。
3. 操作简单迅速,最大限度的避免污染。
4. 独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。
使用方法1）一般PCR实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为20 ~ 30秒，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2）延伸时间根据所扩增的片段大小设定，本产品中所包含的DNA Polymerase的扩增效率为1 kb/30s。
3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。
b、按以下条件进行PCR反应94℃3m i n94℃30s25-35循环***37℃-65℃**30s72℃****45s-7min72℃5min注：*RT产物可增加至5μl 。
**退火温度根据引物Tm值调整，一般为Tm-5℃。
Control引物退火温度为55℃。
*** 当实验样品RNA特别稀少时，可将循环数增加至40-45循环。
**** 延伸时间根据PCR产物大小确定，一般1kb/min 。
Control引物延伸时间45s。
c、反应结束后，取3-5 μl PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，确认PCR反应产物。
如果此PCR产物需用于以后实验，应将PCR产物冷冻保存。
RNA control反应时，退火温度55度，30个循环，扩增片段大小为500bp。
使用提示1. RNA模板可以采用总RNA或mRNA，建议使用Biozol(BSC51M1)制备高质量RNA；2. RT实验应避免RNase污染，可采用以下措施：1）因人的皮肤表面和唾液都有RNase，因此实验中应戴一次性手套和口罩；2） RT实验应使用专门的仪器和耗材，建议在专门区域操作RNA；3） RT实验相关耗材应使用干热灭菌（180℃，60分钟）或用0.1％ DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时后在121℃高压灭菌30分钟；3. AMV逆转录酶，DNA聚合酶和RNase抑制剂在取用之前应离心后再吸取，吸取时动作要慢，使用后应尽快放回-20℃；4. dNTP应避免反复冻融以免失效；5. 引物的选择可根据具体情况，Oligo-dT适用于具有PolyA尾的RNA(一般是真核生物的mRNA)，Random Hexamer Primer适用于所有RNA(包括mRNA,rRNA,tRNA等)，尤其适用于有复杂二级结构的RNA，特异性引物适用于已知模板序列的RNA；6. PCR反应中MgCl2浓度可依据不同条件进行调整，当目的片段长度大于2kb时，我们建议增加MgCl2浓度，以0.5mM间隔梯度增加。
TaqMan One Step RT-qPCR Kit（Probe qRT-PCR）货号：T2210规格：50T/200T（25μl体系为例）试剂组成：25×One Step RT-qPCR RTase mix5×One Step RT-qPCR Buffer保存：-20℃保存长期保存，使用前应混匀，避免反复冻融。
产品说明：TaqMan One Step RT-qPCR kit（qRT-PCR Probe）是一步法（One Step）RT-PCR荧光定量探针法定性、定量反应的专用试剂，反应过程在同一管内连续进行，避免开管，能有效防止污染。
本品含有高温反转录酶（RNase H-）和新型热启动酶，具有更高的反转录和PCR扩增效率，适合于低浓度RNA模板的高灵敏度扩增。
本试剂采用优化配方的专用Buffer，可以在较宽的定量区域内得到良好的标准曲线，准确进行定量，并与多数厂家的荧光定量PCR仪兼容，如Applied Biosystems、Eppendorf、Bio-Rad和Roche等。
试剂原理：TaqMan One Step RT-qPCR kit首先利用反转录酶RTase将RNA反转录成cDNA，再以cDNA为模板通过热启动DNA扩增酶在单管闭管反应体系中连续进行PCR扩增反应，利用荧光标记探针（Probe）水解发光，并对发光信号进行检测。
1.RT-PCR首先采用反转录酶以RNA为模板合成cDNA，然后再以合成的cDNA为模板，经过PCR扩增反应的热变性、引物退火、链延伸三个步骤循环往复，在短时间内扩增得到大量DNA片段。
2.荧光检出TaqMan探针法是使用5’端带有荧光物质，3’端带有淬灭物质的TaqMan探针进行荧光检测的方法。
在探针没有被Taq酶分解时，5’端的荧光物质受到3’端淬灭物质的制约，不能发出荧光。
而当TaqMan探针被分解后，5’端的荧光物质便会游离出来，发出荧光。
通用型一步法RT-PCR试剂盒说明书前言本试剂盒适用于对各种动、植物、病毒RNA进行PCR 检测。
用户可根据被分析基因，配合一对引物，或同时采用Taqman 荧光探针，先将提取的RNA反转录(reverse transcription).成cDNA，再经过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)技术对特异性片段进行扩增，进行电泳或实时荧光分析。
一步法RT-PCR可使RT及PCR过程在单管中完成，比分开进行RT及PCR更方便。
由于不需要在RT完成后打开反应管，尽可能地避免了样品间的相互污染。
规格20人份适用仪器适用于各种普通PCR仪器和实时荧光PCR仪器。
试剂盒组成试剂准备根据下表配制反应液：振荡混匀后，按每管 40 μl(可根据需要调整)分装，备用。
PCR扩增将均一化后的RNA提取样本10 μl加入各反应管，混匀、离心后，置普通PCR仪器或实时荧光PCR仪器上进行扩增及实时检测。
结果判断扩增产物可直接进行电泳检测；实时荧光检测可根据相应仪器的配套软件进行结果分析。
保存及有效期-20℃保存，有效期为6个月。
注意事项1. 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。
2. 整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增（荧光检测）应分区进行以避免污染。
3. 操作人员应戴口罩，经常更换一次性手套，以避免RNA酶的污染；实验中所用器具均应经过除RNA酶处理。
4. 试剂盒组成中的试剂使用前应充分融化并混匀。
5. 进行实时荧光分析时，应使用透光性能较好的一次性薄壁离心管；.荧光探针应避光保存，加入缓冲液中后，应尽快进行扩增。
6. 注意适当处理检测中遗留的样品、扩增产物及可能被污染的试剂。
生产企业：上海蓝创生物科技发展有限公司。
2012年5月30日星期三•实验流程：•一、RNA的提取•二、反转录（RT-PCR）•三、荧光定量PCR（qPCR）•四、数据分析•实验注意事项：实验方法：异硫氰酸胍-酚-氯仿（三试剂）单步总RNA提取方法——Trizol法实验所需试剂：推荐BIO-RAD的Aurum TM基于膜总RNA试剂盒或PureZol TM RNA分离试剂Aurum TM总RNA小型试剂盒PureZol TM RNA分离试剂可以从广泛的样本，如培养细胞、细菌、酵母PureZol TM RNA分离试剂操作是Chomczynski 动物和植物组织中，提取无DNA污染的总RNA。
试和Sacchi的快速、广泛使用的有效RNA分离方法基剂盒采用严格配比的含有异硫氰酸胍和巯基乙醇的试础上改进而得。
PureZol TM RNA分离试剂是一种剂，高效裂解样品并快速灭活RNA酶，然后通过离心苯酚和促溶剂异硫氰酸胍的液相混合物，简单的或抽真空对离心柱硅质膜上的RNA进行纯化。
这个试一步法就可以高效地完成细胞和组织溶解、去除剂盒也可以用于RNA净化和脱盐。
RNA蛋白和灭活的内源核酸酶。
DNA和蛋白通过液相分层，有效地与RNA分离。
形式：小柱过滤（抽真空或离心）形式：单一有机溶液分离方法：硅质膜分离方法：有机提取* RNA提取实验结束后，请验证RNA的纯度和完整性：1、OD260/OD280=1.8～2.0，表示RNA质量好，没有蛋白和苯酚的污染。
2、通过琼脂糖凝胶电泳来验证RNA是否降解实验所需试剂：推荐BIO-RAD iScript cDNA Synthesis Kit该试剂盒组成优化好的5×iScript反应混合液Mix除RNA模板以外所需所有成分的反转录酶混合液缓冲液纯化的iScript RNase H加MMLV反转录酶Oligo(dT) 防止RNA模板非选择性降解的RNase抑制剂随机引物dNTP稳定剂和增强剂iScript cDNA 合成试剂盒的特点★试剂中既有oligo(dT)，也有随机引物——保证各种RNA模板均能正常反应★预混的优化好的组分——使操作非常便捷，减少了交叉污染，也减少了操作误差，节约了时间★优化的反应条件，高的反转录效率，宽的RNA模板范围——100fg-1ug★带有高活性的iScript RNaseH+MMLV反转录酶和用于保护RNA模板的RNase抑制剂，满足不同用户需求★Sensitive detection from 1 pg to 1mg of input RNAiScript cDNA Synthesis Kit，BIO-RAD To a 0.2-ml tube add:4 ul 5X cDNA Synthesis System1 ul iScript enzyme mixx ul nuclease-free waterx ul RNA sample20 ul final volume SuperScript II First-Strand Synthesis System for RT-PCR, InvitrogenTo a 0.2-ml tube add:0.5 ul oligo(dT)12-18, 500 mg/ml 0.5 ul Random hexamers, 50 ng/ml 2 ul 10X buffer4 ul 25 mM MgCl21 ul 10 mM dNTP2 ul 0.1M DTT1 ul RNaseOUT (40U/ml)1 ul SuperScript II RT (50 U/ml) x ul DEPC-treated waterx ul RNA sample20 ul final volumeiScript cDNA 合成试剂盒——试剂成分比较iScript cDNA Synthesis Kit5 min at 25o C30 min at 42o C5 min at 85o CHold at 4o CTotal time: 45 minutesWith iScript –just set-up the thermal cycler and walk away!SuperScript II First-Strand Synthesis System for RT-PCR, Invitrogen5 min at 65o CQuick chill on iceAdd more itemsMix and incubate for 2 min at 42o CAdd SuperScript enzymeIncubate for 50 min at 42o CHeat kill 15 min at 70o CTotal time: 85 to 90 minutesWith SuperScript, you’re tied to the bench AND you’ll be waiting for your cDNA longer!iScript cDNA 合成试剂盒——Protocol 比较市面上几款反转录试剂对比Poor sensitivity even though its protocol time is only 25min!Bio-Rad Quanta Invitrogen Invitrogen ABI Stratagene Qiagen iScriptqscriptSuperscript III for qPCR VILOHigh-capacity kits Affinity Script QuantitectStep 1 -Priming 25°C –5 min 22°C –5 min 25°C –10 min 25°C –10 min 25°C –10 min 25°C –10 minStep 2 -Incubation42°C –30 min 42°C –30 min 50°C –30 min 42°C –60 min 37°C –120 min 42°C –55°C –60 min 42°C –15 min Step 3 -Denaturation 85°C –5 min85°C –5 min85°C –5 min 85°C –5 min85°C –5 sec70°C –15 min95°C –3 min Step 4 –RnaseH treatment 37°C –20 minStep 5•数据来源：中科院遗传与发育研究所•使用机型：Bio-Rad CFX96•对比产品：Bio-Rad公司iScript cDNA synthesis kit，Invitrogen的superscript III，Promega的GoScript，Roche的Transcriptor High Fidelity cDNA Synthesis Kit•反馈信息：使用者首先对总RNA进行10倍梯度稀释（1ug,100ng,10ng,1ng），再分别使用不同公司的产品做反转录，然后用Bio-Rad CFX96进行定量实验，定量试剂为Bio-Rad公司的SsoFast EvaGreen超混液，目的基因为actin。
非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒（一步法）说明书和内包装标签（一）非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒（一步法）说明书【兽药名称】通用名非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒（一步法）商品名无英文名African Swine Fever Virus Real - time PCR Test Kit （One - step）汉语拼音Feizhouzhuwenbingdu Yingguang PCR Jiance Shijihe （Yibufa）【主要成分与含量】编号试剂盒组分装量用法ASFV01 -qf50缓冲液Bl5ml/瓶直接使用ASFV 02 - qf50缓冲液B25ml/瓶直接使用ASFV 03 - qf50PCR反应液900叱管直接使用ASFV 04 - qf50阳性对照1ml /管直接使用ASFV 05 - qf50阴性对照1ml /管直接使用【作用与用途】用于全血、血清、血浆、淋巴结、脾脏、肾脏、扁桃体和肌肉等样品中的非洲猪瘟病毒核酸的检测。
【用法与判定】1用法1.1样品处理1.1.1全血、血清、血浆直接进行下一步试验。
淋巴结、脾脏、肾脏、扁桃体、肌肉等组织样品取0.1〜0.2g,置研钵充分研磨，加入10倍体积约1〜2ml生理盐水，混匀；或置研磨管中，加入10倍体积约1〜2ml生理盐水及研磨珠，用组织研磨仪匀浆。
以5000转/分钟离心5分钟，留上清，即为组织匀浆液。
1.1.2取1.5ml离心管加入100川缓冲液B1,每管分别加入10可全血（EDTA抗凝剂）或20m组织匀浆液、血清、血浆样品、阳性对照和阴性对照混匀。
室温3分钟内涡旋混匀3〜5次。
1.1.3每管加入100W缓冲液B2,涡旋混匀，12000转/分钟离心1分钟，上清为待检核酸。
1.2扩增试剂准备取18WPCR反应液至PCR反应管；依次分别加入2囚阴性对照、样品和阳性对照待检核酸，盖紧管盖，每个反应管内反应体积为20N。
1.3将PCR反应管瞬时离心，置荧光PCR仪内，进行如下反应：1） 95℃预变性20秒；2）95c变性10秒，58c延伸20秒，共40个循环；设置58c收集FAM 荧光信号。
一步法实时RTPCR 检测试剂盒（SYBR 一步法荧光定量PCR 试剂盒）(目录号HS0614)产品包装保存条件-20℃避光保存。
产品简介本产品是一步法Real-Time qRT-PCR 专用试剂盒。
所含的SYBR Green I 荧光染料可以与所有的双链DNA 相结合，使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。
使用本产品进行Real Time qRT-PCR 反应，逆转录和定量PCR 在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。
本试剂盒中包含全新高效逆转录酶，具有与RNA 高亲和性的特点，能通读GC 含量高、二级结构复杂的RNA 模板；所包含的经化学修饰的热启动DNA 聚合酶最大限度的减少PCR 扩增全程中的非特异性扩增产物的产生，极大提高了荧光定量PCR 反应的精确性；所包含的缓冲系统使以上两种酶同时发挥最大的功效，提高效率。
所含的ROX 染料调节PCR 反应过程中管与管之间的加样误差，适用于以ROX 作为校正染料的所有荧光定量PCR 仪。
北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 反转录和PCR在一个反应管中完成，方便快捷，最大限度的避免污染。
2. 与RNA具有高亲和性，能通读GC含量高、二级结构复杂的RNA模板。
3. 热启动酶有效抑制非特异性扩增，极大提高了荧光定量PCR反应的精确性。
产品应用基因表达分析；拷贝数分析。
使用方法1. 将RNA 模板、引物、2×UltraSYBR One Step RT-qPCR Buffe（r With ROX）、SuperEnzyme Mix 和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2. PCR 反应体系：•注意：通常引物浓度以0.2 uM可以得到较好结果，可以终浓度0.1 ~ 0.5 uM作为设定范围的参考。
