逆转录试剂盒( transcriptor first strand cdna synthesis kit )操作步骤

逆转录试剂盒( transcriptor first strand cdna synthesis kit ) 说明书

3
04 379 012 001
Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit y Version 6.0
1. What this Product Does, continued
Vial/ Cap
Label
Store the kit at ؊15 to ؊25°C N Store Control RNA (vial 7 in
Cat. No 04 379 012 001) at —70°C or below.
y Version 6.0
Content version: September 2010
9 (7 for b,c) colorless
Water, PCR-grade
Content
a) Cat. No. 04 379 012 001 b) Cat. No. 04 896 866 001 c) Cat. No. 04 897 030 001
a) 1 vial, 1 ml b) 2 vials, each 1ml c) 3 vials, each 1 ml
L In Cat. No. 04 896 866 001 and Cat. No. 04 897 030 001 the control reagents (vial 7 and 8) are not included. Therefore, in these kits vial 7 is Water, PCR Grade.
Random Hexamer Primer
a) 1 vial, 100 ␮l (600 ␮M) b) 1 vial, 200 ␮l (600 ␮M) c) 2 vials, each 200 ␮l (600 ␮M)

PROMEGA逆转录试剂盒说明书

Reverse Transcription System
INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCT A3500.
1. Description..........................................................................................................1 2. Product Components and Storage Conditions ............................................2 3. Reverse Transcription Protocol.......................................................................2
Printed in USA. Revised 3/09 Part# TB099 Page 1
2.
Product Components and Storage Conditions
Size 100 reactions Cat. # A3500
Product Reverse Transcription System
3.A. Reverse Transcri magnesium concentration may be optimized for any given sequence to achieve better yields. **Final concentration of reaction components: 5mM MgCl2; 1X Reverse Transcription Buffer (10mM Tris-HCl [pH 9.0 at 25°C]; 50mM KCl; 0.1% Triton® X-100); 1mM each dNTP; 1u/μl Recombinant RNasin® Ribonuclease Inhibitor; 15u/μg AMV Reverse Transcriptase (High Conc.); 0.5μg Oligo(dT)15 Primer or Random Primers per microgram RNA; 50ng/μl 1.2kb Kanamycin Positive Control RNA, poly(A)+ mRNA or total RNA.

通用反转录试剂盒(M-MLV)

通用反转录试剂盒(M-MLV)货号：RP1105规格：50T/100T保存：-20℃保存，避免反复冻融，复检期为1年。

产品内容：试剂盒组成50次100次M-MLV(200U/μL)50μL50μL×25×M-MLV Buffer200μL400μLOligo(dT)(10uM)100μL200μL16RNasin(40U/μL)25μL50μLdNTPs(10mM)50μL100μLO1mL1mL×2RNase-free ddH2说明书1份1份产品简介：本试剂盒适用于各种RNA制品的反转录反应。

它采用M-MLV进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物用于后续的PCR扩增和分子克隆实验。

操作步骤：一、反转录反应1、在冰浴的无RNase的离心管中加入如下反应成分：1-5μg总RNA或50-500ng mRNA或2pmole基因特异性引物2μL Oligo(dT)16O至14.5μL补RNase-free ddH22、70℃保温5min后迅速在冰上冷却2min，简短离心收集反应液后加入以下各组分：4μL5×M-MLV Buffer1μL dNTPs0.5μL RNasin1μL M-MLV3、42℃温浴60min，如果是用随机引物，请先将离心管置25℃温浴10min，再42℃温浴60min。

4、95℃加热5min终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃保存。

5、若用于后续PCR扩增,用RNase-free ddH2O将反应体系稀释到50μL，取2-5μL作为PCR反应模板。

注意事项：1、用于cDNA合成反应的相关试剂和耗材尽可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。

有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。

2、试剂盒的各组分应在-20℃保存，避免反复冻融，有效期12个月。

3、RNA样品要避免反复多次冻融，应使RNA在冰浴中处于融化状态。

东洋纺反转录试剂盒

11-05
高效率逆转录试剂盒 First Strand cDNA Synthesis Kit
ReverTra Ace -α-
(Code No. FSK-100,FSK-101)
使用说明书
科研用
TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN
目录
※ 除Positive Control RNA外，所有组分请均保存在-20℃条件下；Positive Control RNA请保存于-80℃条件下。
※ Positive Control RNA 由于运输过程中不能一直保证 -80℃条件，在运输过程中可能降解。建议用户选择人、鼠来源的 Total RNA 作为 Control RNA。
G3PDH mRNA
Primer F 559
intron
Size(bases)
1634
1237
1110 Primer R
90 129 90 92 k-193 104
图 2. Control Primer F，R 的 location
[Positive Control RNA]
本试剂盒作为 Positive Control 用 RNA ，添附有 Human G3PDH (Glyceraldehyde 3-Phosphate Dehydrogenase)遗传基因的 in vitro 转录产物。（在 3’末端添加了 22mer 的 Poly（A）tail）（请参照图 3）。
※ 组分中的 5×RT Buffer 在溶解时，可能会出现白色沉淀现象，但不影响其品质。此时，请使用振荡器等仪器使其混合均匀，等完全溶解后再使用。
[各引物的序列]

takara反转录试剂盒说明书

Code No. RR047A 研究用PrimeScript™RT reagent Kitwith gDNA Eraser(Perfect Real Time)说明书目录内容页码●制品说明1●制品内容 1 ●试剂盒外必备材料 1 ●保存 1 ●特长 2 ●使用注意 2 ●操作方法 2 ● Real Time PCR 4 ●实验例 6 ●附录7 ●关联产品8●制品说明为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。

为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。

但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。

在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。

而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。

PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。

Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。

同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。

使用本制品合成的cDNA适用于SYBR® Green分析法和TaqMan®探针分析法，可以根据实验目的，选择与SYBR Premix Ex Taq™ II（Tli RNaseH Plus）（Code No. RR820Q/A/B）、Probe qPCR Mix（Code No. RR391S/A/B）组合使用。

东盛生物 RT-PCR Kit（逆转录试剂盒）说明书

0.6 μl RNasin , M-MLV ；按下列条件进行反转录反应 42℃ 温浴 60 min（随即引物 37℃ 温浴 60 min）； 5 终止反应 70℃ 温浴 5 min 终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃ 保存。 6 用 RNase-free ddH2O 将反应体系稀释到 50 μl ，取 2-5 μl 进行 PCR 扩增反应。
20 次逆转录反应，R1012 可进行 100 次逆转
录反应（20 μl 标准 PCR 反应体系，每次使用 M-MLV 1 μl）。
M-MLV 储存液 20 mM Tris-HCl (pH 7.5) 200 mM NaCl 0.1 mM EDTA 1 mபைடு நூலகம் DTT 0.01% NP-40 50% glycerol 5xfirst-strand buffer 成分 250 mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25 ℃) 375 mM KCl 15 mM MgCl2 50 mM DTT 保存条件各组分均-20℃保存，避免反复冻融。
●
在逆转录反应中经常加入 RNase 抑制剂以增加 cDNA 合成的长度和产量。RNase 抑制剂要在第一链合成反应中，在缓冲
液和还原剂（如 DTT）存在的条件下加入，因为 cDNA 合成前的过程会使抑制剂变性，从而释放结合的可以降解 RNA 的 RNase。蛋白 RNase 抑制剂仅防止 RNase A，B，C 对 RNA 的降解，并不能防止皮肤上的 RNase，因此尽管使用了这些抑制剂，也要小心不要从手指上引入 RNase。
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------广州东盛生物科技有限公司电话：020-87791356 传真：020-87791381 网址：

使用快速反转录试剂盒合成第一链cDNA

适用范围
RT延伸。
注意事项
1. 下列操作步骤适用于模板量为50 ng-2 μg的总RNA，如果总RNA量大于2 μg，请按比例扩大反应体系。
2. 在冰上进行操作，防止RNA发生降解。 3. 不需分开变性和退火两个步骤。但是对于二级结构很复杂的RNA模板，推荐使用变性步
KR116-0μl 25 μl 50 μl 1 ml
KR116-02 (100 rxn)
200 μl 200 μl 100 μl 200 μl 2×1 ml
KR116-03 (1000 rxn) 10×200 μl 10×200 μl 10×100 μl 10×200 μl 10×2×1 ml
操作步骤
使用快速反转录试剂盒合成第一链cDNA
50 ng-2 μg总RNA可建立20 μl反应体系。
1. 将模板RNA在冰上解冻；5×gDNA Buffer、FQ-RT Primer Mix、10×King RT Buffer、 RNase-Free ddH2O在室温（15-25℃）解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体。
以下操作步骤请在冰上进行。为了保证反应液配制的准确性，进行各项反应时，应先配制成Mix，然后再分装到每个反应管中。
2. 按照表1的基因组DNA的去除体系配制混合液，彻底混匀。简短离心，并置于42℃，孵育 3 min。然后置于冰上放置。
表1 gDNA去除反应体系
组成成分
使用量
5×gDNA Buffer
产品特点
反转录效率高：反转录效率可达95%以上；操作简单快速：反应体系配制简单，21 min完成cDNA第一链的合成；通读复杂模板：能够作用于GC含量高，二级结构复杂的RNA模板；样品普适性高：对不同物种来源及杂质较多的RNA模板的适用性高；后续兼容性好：后续配合荧光定量检测产品，灵敏度高、稳定性好。

罗氏第一链cDNA合成试剂盒Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit 中文说明书

反应次数目录号反应次数04 379 012 00150次，包括10次对照反应04 896 866 001100次04 897 030 001200次试剂盒包装与含量小瓶/瓶盖标签适用于a) 04 379 012 001 b) 04 896 866 001 c) 04 897 030 0011红色TranscriptorReverseTranscriptase（逆转录酶）a) 1瓶，25 μl (20 U/μl)b) 1瓶，50 μl (20 U/μl)c) 2瓶，各50 μl (20 U/ μl)储存缓冲液：200 mM 磷酸钾，2 mM 二硫苏糖醇，0.2% Triton X-100(v/v)，50% 甘油(v/v)，pH 约为7.2∙2无色Transcriptor RTReaction Buffer(5×)（逆转录缓冲液）a) 1瓶，1 mlb) 1瓶，1 mlc) 2瓶，各1 ml5×浓度：250 mM Tris/HCl，150 mM KCl，40 mM MgCl2，pH约为8.5(25°C)∙3无色ProtectorRNase Inhibitor（RNase抑制剂）a) 1瓶，50 μl(40 U/μl)b) 1瓶，100 μl(40 U/μl)c) 2瓶，各100 μl(40 U/μl)储存缓冲液：20 mM Hepes-KOH，50 mM KCl，8 mM 二硫苏糖醇，50 % 甘油(v/v)，pH 约为7.6 (4°C)∙4黄色/ 紫色Deoxynuc-leo-tideMix（dNTP）a) 1瓶，100 μl(黄色瓶盖)b) 1瓶，200 μl(紫色瓶盖)c) 2瓶，各200 μl(紫色瓶盖)dATP, dCTP, dGTP, dTTP各10 mM∙5蓝色Anchored-oligo(dT)18Primer（锚定oligo(dT)18引物）a) 1瓶，100 μl(50 μM)b) 1瓶，200 μl(50 μM)c) 2瓶，各200 μl(50 μM)6Random Hexamera) 1瓶，100 μl(600 μM)蓝色Primer（随机引物）b) 1瓶，200 μl(600 μM)c) 2瓶，各200 μl(600 μM)7绿色Control RNA（对照RNA）a) 1瓶，20 μl(50 ng/μl)包含提取于永生细胞系(K562)的总RNA 片段稳定溶液∙8绿色Control Primer Mix PBGD（对照基因引物）a) 1瓶，40 μl5 μM 人类PBGD特异性正向与反向引物∙9(b和c为瓶7)无色Water, PCR-gradea) 1瓶，1 mlb) 2瓶，各1 mlc) 3瓶，各1 ml注意：货号为04 896 866 001和04 897030 001的产品不含有control试剂(瓶7和瓶8)，因此瓶7即为Water, PCR-grade。

PROMEGA逆转录试剂盒说明书

4. Composition of Buffers and Solutions .........................................................5 5. References ...........................................................................................................5 6. Related Products ................................................................................................5 1. Description
PRINTED IN USA. Revised 3/09
Promega Corporation · 2800 Woods Hollow Road · Madison, WI 53711-5399 USA Toll Free in USA 800-356-9526 · Phone 608-274-4330 · Fax 608-277-2516 · Part# TB099
For Laboratory Use. Each system contains sufficient reagents for 100 reactions, processing 1μg of RNA per reaction. Includes:
• • • • • • • • •
1,500u 2,500u 50μg 50μg 5μg 320μl 1.4ml 1.2ml 13ml
Reverse Transcription System

takara反转录试剂盒说明书

Code No. RR047A 研究用PrimeScript™RT reagent Kitwith gDNA Eraser(Perfect Real Time)说明书目录内容页码●制品说明1●制品内容 1 ●试剂盒外必备材料 1 ●保存 1 ●特长 2 ●使用注意 2 ●操作方法 2 ● Real Time PCR 4 ●实验例 6 ●附录7 ●关联产品8●制品说明为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。

为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。

但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。

在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。

而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。

PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。

Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。

同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。

使用本制品合成的cDNA适用于SYBR® Green分析法和TaqMan®探针分析法，可以根据实验目的，选择与SYBR Premix Ex Taq™ II（Tli RNaseH Plus）（Code No. RR820Q/A/B）、Probe qPCR Mix（Code No. RR391S/A/B）组合使用。

ezbioscience逆转录说明书

ezbioscience逆转录说明书全文共四篇示例，供您参考第一篇示例：引言逆转录酶（Reverse Transcriptase，简称RT）是一种能够将RNA 模板转录成相应的DNA的酶，是分子生物学领域中重要的工具。

ezbioscience作为生物技术公司，在逆转录领域有着丰富的经验和专业知识，推出了一系列高质量的逆转录试剂盒，提供给研究人员用于RNA分析和cDNA合成等领域的研究。

一、产品介绍ezbioscience的逆转录试剂盒是基于反转录酶的高效逆转录反应而设计的，具有以下几个特点：1. 高效性：采用高纯度反转录酶，能够在较短的时间内完成RNA 到cDNA的反转录反应。

2. 稳定性：试剂盒中的反转录酶具有较高的热稳定性，确保反应过程的可靠性和稳定性。

3. 专业性：组合了ezbioscience多年的技术积累和经验，能够适应各种不同的RNA模板，并且适用于多种不同类型的研究。

4. 灵敏度：能够在低浓度的RNA模板下进行高效的反转录反应，满足研究需要。

二、使用说明1. 样品处理：将待逆转录的RNA样品进行完整性检测和质量评估，确保样品的纯度和完整性。

2. 试剂配置：按照说明书中的配方准备反转录体系，将RNA模板与反转录酶和其它试剂按比例混合。

3. 反转录反应：将混合好的反转录体系进行反转录反应，根据实验要求设置反应时间和温度。

4. cDNA纯化：反应后的产物进行纯化处理，去除杂质和未反应的物质。

5. cDNA合成：根据实验需求，将反转录得到的cDNA进行进一步的合成和扩增。

三、应用领域ezbioscience的逆转录试剂盒适用于多种生物学研究领域，包括但不限于：1. 基因表达分析：用于将RNA转录成相应的cDNA，进一步进行基因表达分析、PCR扩增等实验。

2. miRNA研究：在miRNA研究中，可用于构建miRNA的cDNA 文库，用于miRNA的表达定量、功能研究等方面。

3. 转录组学：在RNA测序、差异基因表达分析等领域发挥着重要作用。

RevertAid 逆转录试剂盒说明书

! Prepare the following reaction mixture in a tube on ice: template RNA*: total RNA 0.1-5µg + or poly(A) RNA 10ng-0.5µg or speciﬁc RNA 0.01pg - 0.5µg primer: oligo(dT)18 primer (0.5µg/µl) 1µl or random hexamer primer (0.2µg/µl) 1µl or sequence-speciﬁc primer 15–20pmol DEPC-treated water to 12µl Mix gently and spin down for 3-5sec. in a microcentrifuge. " Incubate the mixture at 70°C for 5min, chill on ice and collect drops by brief centrifugation. # Place the tube on ice and add the following components in the indicated order: 5x reaction buffer 4µl RiboLock™ Ribonuclease Inhibitor (20u/µl) 1µl 10mM dNTP mix 2µl Mix gently and collect drops by brief centrifugation. $ Incubate at 37°C for 5min (at 25°C for 5min if random hexamer primer is used).
Kit is designed for preparation of full-length ﬁrst strand cDNA from RNA templates. The RevertAid™ ﬁrst strand cDNA synthesis kit relies on a genetically engineered version of the Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase (RevertAid™ M-MuLV RT) with low RNase H activity. This allows the synthesis of full-length cDNA from long templates (up to 13 kb). RevertAid™ M-MuLV RT synthesizes ﬁrst strand cDNA at sites determined by the type of primer used: • random hexamer primer: at non-speciﬁc points along an RNA template. In this case, all RNA’s in a population are templates for cDNA synthesis. • oligo(dT)18 : at the 3’-end of poly(A)+ mRNA. In this case, only mRNA’s with 3’-poly(A) tails are templates for cDNA synthesis. • sequence speciﬁc primer: at a primer-binding site. First strand cDNA synthesized with this system can be used as a template in the polymerase chain reaction (PCR)*. As the reaction conditions of cDNA synthesis and PCR are compatible, cDNA reaction mixture can be added directly to a PCR mixture. The ﬁrst strand cDNA synthesized can also be used as a template for second strand synthesis. Radiolabeled DNA can be used as a probe in hybridization experiments. 1.1 kb RNA with 3’-poly(A) tail is provided 3

东洋纺反转录试剂盒

本公司利用基因工程学的方法改变了来自 MMLV (Molony murine leukemia virus) 的逆转录酶，使阻碍合成长链 cDNA 的 RNase H失活，成功开发了大幅度提高 cDNA合成能力的改良型酶ReverTra Ace 。
ReverTra Ace -α-(Code No.:FSK-100,FSK-101)是以ReverTra Ace为核心酶的First strand cDNA合成试剂盒。由于本试剂盒包含了RT用引物及Positive Control，所以能够简单地进行逆转录反应。也可以应用于手头上各种DNA聚合酶的PCR反应模板的制备。例如，通过和High fidelity PCR用酶，Long PCR用酶等的结合，能够进行目的性更强的RT-PCR。
【保存】
•除Positive Control RNA以外，其他组分请均保存于-20℃条件下。 •Positive Control RNA请保存于-80℃条件下。 ※ Positive Control RNA由于运输过程中不能一直保证-80℃条件，在运输过
程中可能降解。建议用户选择人、鼠来源的Total RNA 作为Control RNA。 •为了保证实验效果，请在收到产品的一年之内使用完毕。
G3PDH 基因是在各种哺乳类组织上表达的“管家基因”。其 mRNA 表达水平不受一部分细胞因子和含有 Tumor-promoting Phorbol Esters 等的诱导物质的影响，并且，在几乎所有组织上都是恒定的。因此，使用从各种组织中抽提出来的 RNA 样品的时候，可以作为最合适的对照而使用。
↓
99℃、5 min. *****
↓
4℃、5 min.
↓
瞬间离心
5

反转录试剂盒TAKARA6210A操作步骤

反转录试剂盒TAKARA6210A操作步骤Code No. 6210A 研究⽤PrimeScript? II 1st StrandcDNA Synthesis Kit说明书⽬录内容页码●制品说明 1 ●制品内容 1 ●保存 1 ●1st-strand cDNA合成反应 2 ●RT-PCR反应 2 ●RNA样品的制备 3 ●相关产品 3●制品说明本制品是使⽤PrimeScript II RTase从Total RNA或Poly (A)＋ mRNA合成1st Strand cDNA的试剂盒。

含有1st Strand cDNA合成所需的全部试剂。

以结构复杂的RNA或长链RNA为模板进⾏cDNA合成时，cDNA合成受到抑制的主要原因是RNA⾼级结构与反转录酶的⾮特异性结合。

并且，由于反转录酶的错配引起的⾮特异性延伸，对RT-PCR或全长cDNA的合成极为不利。

PrimeScript II RTase是对PrimeScript RTase进⾏进⼀步改良的反转录酶，本反转录酶可以极⼤限度地抑制RNA⾼级结构与反转录酶的⾮特异性结合。

本制品使⽤了PrimeScript II RTase，利⽤Oligo dT从PolyA开始进⾏延伸反应，使⽤标准反转录温度42℃，不仅能维持PrimeScript RTase原有的卓越的cDNA合成效率和cDNA合成速度，同时可以合成本底低、纯度⾼、完整性好的cDNA。

另外，反转录反应液配制时所产⽣的⾮特异性延伸是抑制cDNA合成的主要原因，本制品能有效控制这⼀现象。

反应液配制后，冰上放置直⾄反转录反应开始，不会发⽣抑制cDNA合成的现象。

合成的1st Strand cDNA可⼴泛应⽤于2nd Strand cDNA合成、杂交、PCR法扩增等。

特别适⽤于全长cDNA⽂库制作、⾼纯度全长cDNA合成等。

●制品内容(50次量)PrimeScript II RTase (200 U/µl) 50 µl5×PrimeScript II Buffer 200 µl RNase Inhibitor (40 U/µl) 25 µl dNTP Mixture (10 mM each) 50 µl Oligo dT Primer (50 µM) 50µl Random 6 mers (50 µM) 100 µl RNase free dH2O 1 ml【各种引物序列】* 该序列与RNA PCR Kit (AMV) Ver. 3.0 (Code No. RR019A)中的Oligo dT Adaptor Primer不同，不含有与M13 Primer M4匹配的序列。

TaKaRa逆转录试剂盒

*1 Random 6 mers 和 Oligo dT Primer 同时使用，可有效地将全长 mRNA 反转录成
cDNA。使用单引物进行反转录时，使用量分别如下：
Random 6 mers（100 μM） 2.0 μl（200 pmol）
Oligo dT Primer（50 μM）
0.5 μl（25 pmol）
热循环仪（或 37℃、42℃水浴和 85℃加热块）反转录反应所用 0.2 ml 和 1.5 ml 的微量反应管微量移液器和枪头（高压灭菌）
● 保存： -20℃。
●特长
1．可以快速、高效合成 Real Time PCR 用 cDNA，是进行 2 Step Real Time RT-PCR 反应的最佳试剂。
2．含有 Oligo dT Primer 和 Random 6 mers 两种反转录引物，可根据实际情况区别使用。反转录反应可以使用 Random 6 mers 或 Oligo dT Primer，也可以 Oligo dT Primer 和 Random 6 mers 同时使用。只扩增一种目的基因时，也可以使用 Specific Primer 作为反转录引物。
● 使用注意
以下为使用本试剂盒时的注意事项，使用前一定认真阅读。 1．当同时需要进行数次反应时，应先配制各种试剂的混合液（Master Mix；其中包括 RNase Free dH2O、
Buffer、酶等），然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。 2． PrimeScript RT Enzyme Mix I 使用前要小心地离心收集到反应管底部。由于酶保存液中含有 50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。同时，要使用精确、量程适合的移液枪，并且不要使 Tip 插入液面过深，否则会因 Tip 壁粘着造成损失。 3．分装试剂时务必使用新的枪头（Tip），以防止样品间污染。

takara反转录试剂盒说明书

Code No. RR047A 研究用PrimeScript™RT reagent Kitwith gDNA Eraser(Perfect Real Time)说明书目录内容页码●制品说明1●制品内容 1 ●试剂盒外必备材料 1 ●保存 1 ●特长 2 ●使用注意 2 ●操作方法 2 ● Real Time PCR 4 ●实验例 6 ●附录7 ●关联产品8●制品说明为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。

为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。

但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。

在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。

而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。

PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。

Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。

同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。

使用本制品合成的cDNA适用于SYBR® Green分析法和TaqMan®探针分析法，可以根据实验目的，选择与SYBR Premix Ex Taq™ II（Tli RNaseH Plus）（Code No. RR820Q/A/B）、Probe qPCR Mix（Code No. RR391S/A/B）组合使用。

Taka逆转录试剂盒

高扩增效率：TaKaRa Ex Taq ®、TaKaRa Ex Taq ® HS 长链DNA扩增：TaKaRa LA Taq ®、TaKaRa LA Taq ® HS 高保真PCR扩增：PrimeSTAR ® HS DNA Polymerase
2．Real Time PCR 相关试剂。 SYBR Green I方法检测试剂：SYBR® Premix Ex TaqTM（Perfect Real Time）
SYBR® Premix Ex TaqTM II（Perfect Real Time） SYBR® Premix DimerEraserTM TaqMan探针方法检测试剂：Premix Ex TaqTM（Perfect Real Time）
●实验操作方法
① 在 Microtube 中配制下列混合液。
Oligo dT Primer（50 μM）[or Random 6 mers（50 μM）]
dNTP Mixture（10 mM each） Total RNA（or Poly(A)+ RNA） RNase free dH2O
l μl*1 1 μl X μg*2 up to 10 μl
*1 ① 2 kb 以上的长片段 cDNA 合成时，Random 6 mers 引物的使用量为 0.4 μ（l 20 pmol）。 ② Real Time PCR 反应时，Random 6 mers 引物使用 2 μl（100 pmol）可以得到较好的实验结果。 ③ 也可以使用 Gene Specific Primer，此时 Primer 终浓度为 0.1 μM。
-2-
*2 ① Total RNA的使用量小于 5 μg；Poly(A)+ RNA的使用量小于 1 μg。 ② Real Time RT-PCR 反应时，Total RNA 的最大使用量为 1 μg。

天根一步法逆转录PCR试剂盒说明书

通用型一步法RT-PCR试剂盒说明书前言本试剂盒适用于对各种动、植物、病毒RNA进行PCR 检测。

用户可根据被分析基因，配合一对引物，或同时采用Taqman 荧光探针，先将提取的RNA反转录(reverse transcription).成cDNA，再经过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)技术对特异性片段进行扩增，进行电泳或实时荧光分析。

一步法RT-PCR可使RT及PCR过程在单管中完成，比分开进行RT及PCR更方便。

由于不需要在RT完成后打开反应管，尽可能地避免了样品间的相互污染。

规格20人份适用仪器适用于各种普通PCR仪器和实时荧光PCR仪器。

试剂盒组成试剂准备根据下表配制反应液：振荡混匀后，按每管 40 μl(可根据需要调整)分装，备用。

PCR扩增将均一化后的RNA提取样本10 μl加入各反应管，混匀、离心后，置普通PCR仪器或实时荧光PCR仪器上进行扩增及实时检测。

结果判断扩增产物可直接进行电泳检测；实时荧光检测可根据相应仪器的配套软件进行结果分析。

保存及有效期-20℃保存，有效期为6个月。

注意事项1. 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。

2. 整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增（荧光检测）应分区进行以避免污染。

3. 操作人员应戴口罩，经常更换一次性手套，以避免RNA酶的污染；实验中所用器具均应经过除RNA酶处理。

4. 试剂盒组成中的试剂使用前应充分融化并混匀。

5. 进行实时荧光分析时，应使用透光性能较好的一次性薄壁离心管；.荧光探针应避光保存，加入缓冲液中后，应尽快进行扩增。

6. 注意适当处理检测中遗留的样品、扩增产物及可能被污染的试剂。

生产企业：上海蓝创生物科技发展有限公司。

逆转录试剂盒( transcriptor first strand cdna synthesis kit )操作步骤

Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit 逆转录步骤1，使用前解冻结冰的试剂2，将试剂短暂离心3，冰上操作：（操作RNA实验需要戴手套）将模板与引物在PCR管上混合试剂体积最终浓度细胞总RNA 或 1 ug 总RNA 或10ng多聚尾(A)+m RNA 多聚尾(A)+ mRNA任选其中一个引物:Anchored-oligo(dT)18 Primer, 1 ul 2.5 uM50 pmol/ul (vial 5)或Random Hexamer Primer, 2ul 60uM600 pmol/ul (vial 6)或 Sequence-Specific Primer 可变0.5-2.5 uM1%DEPC水, (vials 7 or 9) 可变使总体积为 13 ul总体积13ul注：以上为初次实验的推荐浓度。

总RNA的适用浓度为10ug到5ng，以及mRNA的适用浓度为1到100ng,当RNA模板浓度较低时添加10ug/ml 的MS2 RNA* 来稳定模板RNA。

4，（可选）65度水浴上述混合物10分钟，使模板引物混合物变性（确保失活RNA二级结构），水浴后立即冰浴至少一分钟5，往上述混合物继续加入以下试剂（冰上操作）试剂体积最终浓度.Transcriptor Reverse Transcriptase 4 ul 1×(8 mM MgCl2) Reaction Buffer, 5× conc. (vial 2)Protector RNase Inhibitor, 0.5 ul40 U/ul (vial 3)20 U Deoxynucleotide Mix, 2 ul 每个1 mM 10 mM each (vial 4)Transcriptor Reverse 0.5 ul 10U Transcriptase, 20 U/ul (vial 1)最终体积20 ul注：小心混合上述试剂，不要振荡，短暂离心使试剂沉在管底6，将PCR管放在PCR仪上孵育，孵育条件如下：使用的引物目标mRNA长度孵育温度与时间Anchored-oligo(dT)18 不大于4kb 55度30分钟大于4kb 50度60分钟primer, 50 pmol/ul 或Sequence–specific primerRandom hexamer primers, 不大于4kb 25度10分钟，然后55度30分钟600pmol/ul 大于4kB 25度10分钟，然后50度60分钟6,85℃水浴5分钟灭活逆转录酶8、－20℃保存，或立即进行PCR。

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