takara反转录试剂盒说明书

反转录试剂盒介绍及使用说明反转录（Reverse Transcription，RT）是指将RNA作为模板，逆向合成DNA的一种过程。

反转录酶（Reverse Transcriptase，RTase）是一种能够将RNA转录为相应的DNA序列的酶，它是自然界中一些逆转录病毒的主要组成部分。

反转录试剂盒是一种用于反转录反应的工具，通常包含有RTase、RNA模板、dNTPs、引物、缓冲液等试剂。

它可以在实验室中为实验者提供一个便利的条件，用于将RNA转录成DNA，以便进行后续的分析，比如PCR扩增、DNA测序等。

1.获取所需的RNA样品并确保其质量和浓度。

RNA可以从细胞、组织或体液中提取得到，常见的提取方法包括酚/氯仿提取法、硅胶柱法等。

2. 准备反转录反应混合液。

根据试剂盒的使用说明，将所需的试剂按照一定比例混合，包括RTase、RNA模板、dNTPs、引物和缓冲液等。

3.将反转录反应混合液加入至RNA样品中。

将反转录反应混合液和RNA样品按照一定比例混合，通常是将混合液加入至RNA样品中，然后通过轻轻的混匀操作进行反应。

4.进行反转录反应。

将反应混合物在适当的温度下进行反应，通常是在42-55摄氏度下反应30-60分钟。

5.停止反转录反应。

通过加入适当的反应终止缓冲液，可以停止反转录反应，以便进行后续的处理。

6.存储和使用反转录产物。

反转录产物可以直接用于下游分析，也可以暂时存储在低温下，比如-20摄氏度或-80摄氏度。

1. 反转录试剂盒中的试剂应避免受到污染和外界的RNase酶。

试剂的制备和操作过程中，应使用无RNase的操作台、无RNase的显微注射器、无RNase的离心管和其他试剂。

2.反转录试剂盒应在恒温条件下进行储存。

通常试剂盒的储存温度为-20摄氏度或-80摄氏度，应避免反复冻融。

3.操作过程中应注意试剂的保存，避免长时间暴露在室温下，以免影响试剂的质量和活性。

4.在进行反转录反应前，需要对RNA样品进行处理，如去除污染、进行退变性处理等。

takara反转录试剂盒说明书Takara反转录试剂盒是一种用于研究RNA分子的试剂盒。

该试剂盒可以用于DNA的反转录，将RNA转录成DNA，并进行后续的PCR扩增。

反转录试剂盒在生命科学领域中起着非常重要的作用，因此在使用过程中需仔细阅读说明书并按照说明书进行操作。

一、试剂盒组成Takara反转录试剂盒主要包含以下拉玛：1.反转录酶：外源的M-MLV反转录酶，具有高度的反转录活性和优异的扩增效率等优良特性。

2.反转录缓冲液：针对反转录酶的酶切优化反转录缓冲液。

3.引物：随机9mers引物，适用于多种RNA逆转录的应用。

4.对照RNA：In Vitro转录的任意序列的RNA，用于反转录和后续PCR扩增反应的质控。

二、试剂盒使用方法1. RNA提取：在使用Takara反转录试剂盒之前，需要从样品中提取RNA。

2. 反转录反应：将RNA测序专用随机引物、针对反转录酶的反转录缓冲液、反转录酶和RNA样品混合，进行逆转录反应。

3. PCR扩增：反转录完成后，可以利用PCR扩增技术对转录所得DNA进行扩增，完成DNA序列的检测和分析。

三、试剂盒注意事项1. 避免多次冻融。

为保证试剂的稳定性，反转录试剂盒必须储存于-20℃及以下的冰箱中，避免多次冻融。

2. 操作时需佩戴手套。

操作时需佩戴手套，尽量避免手汗或皮脂的污染，影响试剂盒的效率和准确性。

3. 注意反转录缓冲液的稀释量。

反转录缓冲液的稀释量会影响反转录效果，因此需要按照说明书进行操作，精准稀释。

4. 注意反转录酶的用量。

不同反转录酶的最优用量不同，需要根据实验需要按照说明书或文献进行调整。

5. 确认对照RNA引物的扩增效果。

在进行PCR扩增前，需要先进行对照RNA引物的扩增，以确认反转录反应的正确性，避免因为反应偏差而引起的实验结果的偏差。

4. 根据实验需要进行调整。

反转录试剂盒虽然具有大量的优良特性，但是实验环境和实验条件的不同，会对反转录试剂盒的效果产生较大的影响，因此需要根据实验需要进行调整。

takara反转录试剂盒说明书说明书一、产品简介takara反转录试剂盒是一种高效、可靠的反转录试剂盒，适用于转录RNA为cDNA的实验操作。

本试剂盒由takara公司制造，经过严格的质量控制，确保产品的稳定性和可靠性。

二、试剂盒组成本试剂盒包含以下组分：1. 反转录酶：高效反转录酶，能在广泛的实验条件下进行反转录反应。

2. 基质：提供反应所需的核酸和其他辅助物质。

3. 标记物：用于标记反转录产物的荧光染料或放射性同位素。

4. 缓冲液：维持试剂盒中酶的活性，调节反应条件的缓冲体系。

5. 控制样品：用于检验试剂盒的反应效果和稳定性。

三、实验操作1. 准备工作在进行实验前，请准备所需的实验仪器和试剂，确保实验环境的清洁和无菌，避免污染对实验结果的影响。

2. RNA提取使用适当的方法提取目标RNA样本，并在提取过程中避免RNA的降解。

3. 反转录反应将提取的RNA样本与反转录试剂盒中的反转录酶、基质和缓冲液按推荐比例混合，并在适当的温度下进行反应。

反应时间根据样本的RNA含量和实验要求确定。

4. 停止反应通过停止反应来终止反转录反应，一般使用热敏感性酶来达到这个目的。

5. 产物处理反转录产物可以直接用于下游实验，如实时定量PCR、聚合酶链式反应等，也可以进行储存和后续处理。

四、实验结果解读根据试剂盒的使用目的和实验设计，对反转录产物进行相应的分析和解读。

常见的分析方法有凝胶电泳、实时定量PCR和测序等。

根据实验结果，可以得到RNA的表达情况、差异表达基因等相关信息。

五、注意事项1. 试剂保存：请按照试剂盒上的说明保存试剂，避免暴露在高温、冻融循环和光照等不利条件下。

2. 操作规范：请按照本说明书中提供的实验操作步骤进行操作，避免实验误差对结果的影响。

3. 质量控制：在每次实验中，请使用合适的阳性和阴性对照样品，以确保实验结果的准确性和可靠性。

4. 废弃物处理：请将使用过的试剂和实验废弃物按照相关规定进行处理，避免对环境造成污染。

TaKaRa Code：DRR063ASYBR® PrimeScript™ RT-PCR Kit(Perfect Real Time)(200次量)目录内 容 页 码●制品说明 1●制品内容 1 ●适用的Real Time PCR扩增仪 2●保 存 2 ●试剂盒原理 2 ●特 长 3●RNA样品制备 3 ●操作注意 5 ●操作方法 5 1．反转录反应 5 2．Real Time PCR反应6◆应用Thermal Cycler Dice TM Real Time System扩增仪的操作方法 6 ◆应用ABI PRISM 7000/7700/7900 HT，77300/7500/7500 Fast Real-Time PCR的操作方法◆应用LightCycler Real Time PCR扩增仪的操作方法8◆应用Smart Cycler II System Real Time PCR扩增仪的操作方法9◆应用Mx3000P Real Time PCR扩增仪的操作方法 10●PCR反应条件说明 11 ●实验例 11 ●引物设计说明 13 ●特别提示：本公司提供用于基因表达定量分析的引物设计及合成服务 14 ●问 答14●制品说明本制品是采用SYBR® Green I嵌合荧光法进行Real Time RT-PCR的专用试剂。

Real Time RT-PCR方法以其卓越的快速性及定量性被广泛应用于科研领域，使用本制品可以准确简便地进行mRNA的表达分析。

本制品由「A. 反转录反应试剂」（TaKaRa Code：DRR037A）和「B. PCR反应试剂」（TaKaRa Code：DRR041A）两部分构成。

其「B. PCR反应试剂」部分是一种2×浓度的Premix Type试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单。

「B. PCR反应试剂」制品中的PCR用DNA聚合酶使用了改良后的Hot Start法用 DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq TM HS，并与TaKaRa精心研制的Real Time PCR用Buffer组合使用，可以有效抑制非特异性的PCR扩增，大大提高PCR的扩增效率，进行高灵敏度的Real Time PCR扩增反应。

TaKaRa Code：D3155’-Full RACE Kit(10次量)目录内容页码●制品说明 1 ●制品内容 1 ●保存 2 ●试剂盒原理 2 ●特异性引物的设计要求 3 ●试剂盒特点 3 ●RNA样品制备 3 ●试剂盒使用注意 4 ●使用Control HL60 Total RNA时的5′RACE实验例 4 ●实验样品的5′RACE操作方法 8 ●实验例 11 ●Q&A 11●制品说明本试剂盒是高灵敏度、高特异性扩增cDNA 5′末端全长的试剂盒。

使用RT-PCR方法扩增目的DNA时，一般很难得到全长的cDNA片段，在基因工程研究中，分析遗传基因的全长cDNA序列十分重要。

RACE （Rapid Amplification of cDNA Ends）法能有效解决这一问题。

TaKaRa 5′-Full RACE Kit能够通过已知的cDNA序列，高灵敏度、高特异性地扩增cDNA的5′末端的全长序列。

本试剂盒应用了“去帽法”原理，Tobacco Acid Pyrophosphatase（TAP）可以去掉mRNA的5′帽子结构，使用T4 RNA Ligase将5′RACE Adaptor连接到mRNA的5′端后，可以使用5′RACE Adaptor 上的引物与已知序列部分的引物进行RT-PCR反应，高特异性地扩增cDNA 5′末端的全长序列。

本试剂盒中含有完成5′RACE操作的主要试剂。

试剂盒中使用的Reverse Transcriptase M-MLV（RNase H-）经过了本公司的特殊改良，反转录性能良好，无RNase H活性，大大增加了反转录性能。

结合使用TaKaRa LA Taq®（TaKaRa Code：DRR02AM）进行PCR扩增时，其5′RACE的扩增性能大大优于其他同类产品。

本试剂盒应用了套式PCR原理，增加了PCR扩增的特异性与灵敏度，可以对少量样品或低丰度的基因进行5′RACE实验，并且对长片段的5′RACE扩增具有明显优势。

Cat. #9790A9791A Product ManualTaKaRa BioMasher Standard (Non-sterile)TaKaRa BioMasher Standard (Sterile)For Research UseTable of ContentsI. Description (3)II. Components (3)III. Storage (3)IV. Materials (3)V. Protocol (3)VI. Experimental Examples (4)VII. Related Products (4)I. DescriptionTaKaRa BioMasher Standard is a disposable microtube homogenizer designed to efficiently crush small amounts of biological samples for nucleic acid and/or protein extraction. This product is a set of a 1.5-ml microtubes and micro stir bars. The inner wall of the tube and the tip of the stir bar are textured allowing effective disruption of the sample. In addition, there is a lid to prevent splashing of the sample and reagents during sample processing. After the sample has been homogenized, the tube can be centrifuged to minimize sample loss.The TaKaRa BioMasher Standard is available either sterilized (Cat. #9791A) or nonsterilized (Cat.# 9790A).II. Components(1) TaKaRa BioMasher Standard (micro stir bar and microtube) 50(2) Stir bar grip (PESTLE GRIP) 1III. Storage Room temperatureKeep out of sun- and UV light.IV. MaterialsTaKaRa BioMasher StandardPolypropylene microtubes AutoclavablePolyacetal stir bar Not autoclavable*Silicon rubber stir bar grip Autoclavable* : The stir bar can not be autoclaved. If you require sterilization, please use Cat. #9791A. V. ProtocolNOTE: Wear a mask, gloves, lab coat, and safety goggles. If necessary, perform in a safety cabinet.1. Insert the micro stir bar into the end of the PESTLE GRIP.2. Add the sample to the microtube. Use less than 100 mg of sample. If necessary, add theextraction reagent (less than 250 μl).3. Insert the micro stir bar into the microtube. With the PESTLE GRIP, rotate and move themicro stir bar up and down, crushing the sample. If necessary, perform on ice.4. After crushing, disconnect the PESTLE GRIP and discard the micro stir bar. The PESTLEGRIP can be used repeatedly; store for future use.5. Close the lid of the microtube. The sample is ready for extraction.VII. Related ProductsRNAisoPlus （Cat. #9108/9109）*NucleoSpin® RNA II （Cat. #740955.10/.50/.250）NucleoSpin® RNA XS （Cat. #740902.10/.50/.250）NucleoSpin® Tissue （Cat. #740952.10/.50/.250）NucleoSpin® Tissue XS （Cat. #740901.10/.50/.250）Wide-Range DNA Ladder (100 - 2,000 bp) （Cat. #3427A/B）* : Not available in all geographic locations. Check for availability in your region.VI. Experimental ExampleTotal RNA extraction from mouse liver 100 mg of mouse liver was crushed using the TaKaRa BioMasher Standard (Sterile). As a comparison, 100 mg frozen mouse liver tissue was crushed with a mortar or with crusher beads. For all samples, total RNA was extracted using 1 ml RNAiso Plus (Cat. #9108/9109) according to the recommended protocol. Total RNA was quantified and analyzed on an 1% agarose gel.Results: Processing the samples using the TaKaRa BioMasher Standard had similar extraction efficiency as the mortar and bead crushing protocols.Crushing method total RNA (μg) A 260/A 2801．Mortar 360 1.702．Mortar 424 1.803．Crusher beads 530 1.924．Crusher beads 494 1.935．TaKaRa BioMasher Standard 411 1.896．TaKaRa BioMasher Standard4311.90M 125364(bp)2,000750Lane 1-6 Equal amounts of RNA M Wide-Range DNA Ladder (100 - 2,000 bp)NOTE : This product is for research use only. It is not intended for use in therapeutic or diagnostic procedures for humans or animals. Also, do not use this product as food, cosmetic, or household item, etc.Takara products may not be resold or transferred, modified for resale or transfer, or used to manufacture commercial products without written approval from TAKARA BIO INC.If you require licenses for other use, please contact us by phone at +81 77 543 7247 or from our website at .Your use of this product is also subject to compliance with any applicable licensing requirements described on the product web page. It is your responsibility to review, understand and adhere to any restrictions imposed by such statements.All trademarks are the property of their respective owners. Certain trademarks may not be registered in all jurisdictions.。

使用试剂盒时所有的试剂要放置在冰上转录反应步骤和孵育1.解冻冷冻的试剂把RNA聚合酶混合物放置在冰上，它在甘油中保存，没有被保存在-20。

vortex10×reaction buffer和2×NTP/CAP至完全溶解，一旦解冻，反应过程中把2×NTP/CAP 放在冰上，10×reaction buffer保存在室温，所有的试剂在打开之前都应该短暂的微微离心，以防丢失或污染到离心管边缘的物质。

2.室温下转录反应如果反应在冰上进行，10×reaction buffer中的亚精胺可以与模板中的DNA共沉淀，离心管中加入水和核苷酸后再加入10×reaction buffer。

以下是一个20ul的反应体系，可按需要放大或缩小。

当RNA长度为300base-5kb时采用以下反应体系(用0.1-0.2ug PCR产物模板或0-1ug线性质粒模板）对于更长或更短的转录，参考20页的“Optimizing yield of long transcripts’’和“Optimizing yield of short transcripts”部分。

当合成转录的长度大于5或6KB时，限制GTP生成率，会导致产量降低、过早终止转录。

为了避免这种情况，可能需要补充额外的GTP支持反应。

下面是添加特定体积的GTP对普通转录反应的影响。

（对于T7和T3试剂盒，提供的GTP为30mM。

对于SP6，为20mM.）应该添加多少额外的GTP?对于5-8KB的长度，我们建议最初测试加入1ul的GTP，对于更长的模板应该试试滴定额外的GTP确定所需的最小值。

添加GTP将减少转录合成加帽的比例，但将引起产量升高。

加帽转录的比例与反应中GTP中CAP的模拟物的比率成正比。

RNA产量与良好的加帽效率之间的平衡在网织红细胞溶解物中，我们测试了GTP不同比例的CAP模拟物对转录反应的RNA产量和产生RNA的翻译效率的影响。

TaKaRa Code：D3143’-Full RACE Core Set Ver.2.0(20 RT Reactions)目录内 容页 码●制品说明 1●制品内容 1●保存 2●试剂盒原理 2●特异性引物设计的注意事项 3●试剂盒特点 3●RNA样品制备 3●试剂盒使用注意事项 4●使用Control RNA时的实验操作 4●使用实验样品RNA时的实验操作 6●实验例 8●Q&A8●参考文献 9●制品说明本试剂盒是高灵敏度、高特异性扩增cDNA 3′末端全长的试剂盒。

对RNA结构进行分析时，一般先通过RT-PCR反应扩增目的区域，然后再对扩增出的目的DNA片段进行克隆、序列分析等。

一般的RT-PCR 反应很难得到全长的cDNA片段，然而在基因工程研究中，分析遗传基因的全长cDNA序列又是十分重要的。

RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）法能有效地解决这一问题。

TaKaRa 3′-Full RACE Core Set Ver.2.0能够通过已知的cDNA序列，高灵敏度、高特异性地扩增cDNA的3′末端的全长序列。

本试剂盒中含有完成3′-RACE操作的主要试剂。

试剂盒中使用的Reverse Transcriptase M-MLV （RNase H-）经过了本公司的特殊改良，反转录性能良好，无RNase H活性，大大增加了反转录性能。

结合使用TaKaRa LA Taq®（TaKaRa Code：DRR02AM）进行PCR扩增时，其3′RACE的扩增性能大大优于其他同类产品。

本试剂盒应用了套式PCR原理，增加了PCR扩增的特异性与灵敏度，可以对少量样品或低丰度的基因进行3′RACE实验，并且对长片段的3′RACE扩增具有明显优势，我们曾经使用本试剂盒成功扩增了8 kbp 的3′RACE DNA片段。

使用TaKaRa LA Taq®扩增得到的PCR产物3′端附有一个“A”碱基，其产物可直接克隆于T-Vector中。

行业文档TaKaRa Code：DRR014APrimeScript™ RT-PCR Kit(50次量)目录内容页码●制品说明 1●制品内容 1●保 存 2●原 理 2●试剂盒特点 3●RNA样品制备 3●使用注意 4●反转录引物的选择 5●实验操作 5●实验例 7 ●Q&A8●制品说明PCR（Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应）是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。

虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA 后，PCR法便可应用于RNA的解析了。

迄今为止，此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。

PrimeScript™ RT-PCR Kit是具有良好的延伸性能与高扩增效率的2 Step RT-PCR试剂盒。

反转录反应使用了TaKaRa独自开发的新型反转录酶PrimeScript™ RTase；PCR反应使用了扩增性能良好的Hot Start 型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq TM HS。

本试剂盒具有以下优点：1.进行高效的RT-PCR扩增。

2.在标准的RNA反转录反应温度（42℃）下，便可使具有复杂结构的RNA进行良好的延伸，可以避免RNA在高温条件下的降解。

3.能有效抑制非特异性的PCR扩增。

4.使用本试剂盒扩增得到的目的产物3′端附有一个A碱基，可以直接克隆于T-Vector中。

本试剂盒含有反转录反应及PCR扩增反应所需的全部试剂。

●制品内容（50次量*1）1.PrimeScript™ RTase（for 2 Step）2.5×PrimeScript™ Buffer3.RNase Inhibitor（40 U/μl）4.dNTP Mixture（10 mM each）5.Oligo dT Primer（2.5 μM）6.Random 6 mers（20 μM）7.TaKaRa Ex Taq TM HS（5 U/μl）8.10×PCR BufferⅡ9.Control F-1 Primer*2（20 μM）10.Control R-1 Primer*3（20 μM）11.Positive Control RNA（2×105 copies/μl）12. RNase Free dH2O25 μl 200 μl 25 μl 150 μl 50 μl 50 μl 25 μl 250 μl 10 μl 10 μl 20 μl 1 ml*1 反转录反应20 μl 、PCR反应50 μl体系时可使用50次。

takara反转录试剂盒说明书关键信息项：1、试剂盒名称：Takara 反转录试剂盒2、适用样本类型：＿___________________________3、反应体系：＿___________________________4、反应条件：＿___________________________5、储存条件：＿___________________________6、有效期：＿___________________________1、产品简介11 Takara 反转录试剂盒是一种用于将 RNA 反转录为 cDNA 的高效、可靠的工具。

111 本试剂盒经过精心设计和优化，能够提供高质量的反转录产物，适用于各种下游分子生物学实验。

2、试剂盒组成21 反转录酶211 具有高活性和热稳定性，确保反转录反应的高效进行。

22 反转录缓冲液221 包含各种必要的成分，为反转录反应提供适宜的环境。

23 RNA 酶抑制剂231 有效抑制 RNA 酶的活性，防止 RNA 降解。

24 随机引物或 oligo(dT)引物241 可根据实验需求选择合适的引物进行反转录。

25 dNTP 混合物251 提供四种脱氧核糖核苷酸，用于 cDNA 合成。

3、适用样本类型31 总 RNA311 包括从细胞、组织、血液等样本中提取的总 RNA。

32 mRNA321 经过纯化或富集的 mRNA 样本。

4、反应体系41 建议的反应体系如下：411 RNA 模板：X μL（根据 RNA 浓度和实验需求确定）412 随机引物或 oligo(dT)引物：Y μL413 dNTP 混合物：Z μL414 反转录缓冲液：A μL415 RNA 酶抑制剂：B μL416 反转录酶：C μL417 无 RNase 水：补充至总体积D μL5、反应条件51 反转录反应的温度和时间可根据引物类型和RNA 质量进行调整。

511 使用随机引物时，反应条件通常为：25°C 孵育 10 分钟，然后42°C 孵育 30 60 分钟。

反转录试剂盒TAKARA6210A操作步骤Code No. 6210A 研究⽤PrimeScript? II 1st StrandcDNA Synthesis Kit说明书⽬录内容页码●制品说明 1 ●制品内容 1 ●保存 1 ●1st-strand cDNA合成反应 2 ●RT-PCR反应 2 ●RNA样品的制备 3 ●相关产品 3●制品说明本制品是使⽤PrimeScript II RTase从Total RNA或Poly (A)＋ mRNA合成1st Strand cDNA的试剂盒。

含有1st Strand cDNA合成所需的全部试剂。

以结构复杂的RNA或长链RNA为模板进⾏cDNA合成时，cDNA合成受到抑制的主要原因是RNA⾼级结构与反转录酶的⾮特异性结合。

并且，由于反转录酶的错配引起的⾮特异性延伸，对RT-PCR或全长cDNA的合成极为不利。

PrimeScript II RTase是对PrimeScript RTase进⾏进⼀步改良的反转录酶，本反转录酶可以极⼤限度地抑制RNA⾼级结构与反转录酶的⾮特异性结合。

本制品使⽤了PrimeScript II RTase，利⽤Oligo dT从PolyA开始进⾏延伸反应，使⽤标准反转录温度42℃，不仅能维持PrimeScript RTase原有的卓越的cDNA合成效率和cDNA合成速度，同时可以合成本底低、纯度⾼、完整性好的cDNA。

另外，反转录反应液配制时所产⽣的⾮特异性延伸是抑制cDNA合成的主要原因，本制品能有效控制这⼀现象。

反应液配制后，冰上放置直⾄反转录反应开始，不会发⽣抑制cDNA合成的现象。

合成的1st Strand cDNA可⼴泛应⽤于2nd Strand cDNA合成、杂交、PCR法扩增等。

特别适⽤于全长cDNA⽂库制作、⾼纯度全长cDNA合成等。

●制品内容(50次量)PrimeScript II RTase (200 U/µl) 50 µl5×PrimeScript II Buffer 200 µl RNase Inhibitor (40 U/µl) 25 µl dNTP Mixture (10 mM each) 50 µl Oligo dT Primer (50 µM) 50µl Random 6 mers (50 µM) 100 µl RNase free dH2O 1 ml【各种引物序列】* 该序列与RNA PCR Kit (AMV) Ver. 3.0 (Code No. RR019A)中的Oligo dT Adaptor Primer不同，不含有与M13 Primer M4匹配的序列。

Code No. RR047A 研究用PrimeScript™RT reagent Kitwith gDNA Eraser(Perfect Real Time)说明书目录内容页码●制品说明1●制品内容 1 ●试剂盒外必备材料 1 ●保存 1 ●特长 2 ●使用注意 2 ●操作方法 2 ● Real Time PCR 4 ●实验例 6 ●附录7 ●关联产品8●制品说明为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。

为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。

但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。

在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。

而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。

PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。

Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。

同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。

使用本制品合成的cDNA适用于SYBR® Green分析法和TaqMan®探针分析法，可以根据实验目的，选择与SYBR Premix Ex Taq™ II（Tli RNaseH Plus）（Code No. RR820Q/A/B）、Probe qPCR Mix（Code No. RR391S/A/B）组合使用。