细胞角蛋白20在Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌淋巴结微转移患者中的表达及意义

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大肠癌nm23、E-cadherin表达与淋巴结微转移关系的研究

低表达可以导致其转移抑制作用丧失，肿瘤细胞易脱离原发灶发生转移［。本研究通过对６例大肠癌患者进行临床病理分析发３］２现，ｎ３．ａｈｒ的表达与肿瘤分化程度、肠壁浸润深度和ｍ２和Ｅｃｄｅｉｎ淋巴结转移均密切相关。通过检测大肠癌ｎ３．ａｈｒ的表ｍ２、Ｅｃｄｅｉｎ达能较准确地反映肿瘤分化程度和侵袭、转移潜能。
的患者中通过Ｃ。色，发现８（３％）淋巴结微转移，与Ｋ，染例２．５有
Ｃａｅ等的研究结果类似。ｌｋｒＧ１
进一步分析发现３例Ｎ的大肠癌ｎ３Ｅｃｄｅｉ表达均４Ｏｍ２和．ａｈｒｎ与淋巴结Ｃ。达呈负相关，表明淋巴结微转移与原发灶ｎ３Ｋ。表ｍ２和Ｅｃｄｅｉ低表达有著联系。所以我们认为大肠癌ｎ３．ａｈｒｎｍ２、Ｅｃｄｅｉ表达缺失在淋巴结转移的早期阶段即微转移阶段就已 —ａｈｒｎ发挥作用。并且通过相关分析发现二者具有协同性，其中ｎ３ｍ２和Ｅｃｄｅｉ同时阳性表达，淋巴结微转移阳性率为５３。ａｈｒｎ－％，同时阴性表达，淋巴结微转移阳性率高达７．１％。因此对于Ｎ的大肠４。癌患者（ｕｅＡ、Ｂ）发灶中ｎ３ —ａｈｒ联合检测有望Ｄｋｓ原ｍ２和Ｅｃｄｅｎｉ成为估微转移风险有用指标，并对临床制定治疗措施和判断预
ｃｎｅ［．ｉｒｎｌｃｌ０８１（）１５ａｃｒＪＣｌＴａｓＯｎｏ，０，０３：７．］ｎ２

博士生科研计划书模板

博士研究生科研计划书（）姓名：报考专业：计划书题目：细胞角蛋白CK20对胃癌微转移的预测价值及临床意义2013年2月一、立题依据重点介绍本项目的科学意义、国内外现状，并附主要参考文献胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，居消化道肿瘤发病率之首，多见于男性，男女发病率之比为2:1，死亡率居恶性肿瘤首位，平均死亡年龄为61. 6岁。

临床上诊断的多为进展期胃癌患者，即使经标准的根治性手术治疗，其5年生存率仍在40%左右，其中最重要的原因是胃癌患者术后了腹膜转移。

近年来在临床开展的术前辅助化疗，也即新辅助化疗(neoadjuvantchemotherapy, NACT)是指在恶性肿瘤局部治疗、手术或放疗前给予的全身或局部化疗，也称术前化疗(preoperative chemotherapy)。

新辅助化疗是对肿瘤外科医生及内科医生观念上的一个挑战，其理论依据是:手术切除原发肿瘤可能会刺激剩余肿瘤细胞的生长;肿瘤周围组织在术后血供改变影响化疗药物浓度及放疗效果;新辅助化疗、放疗的组织病理学反应与预后呈正相关:可以达到预期的目的以提高手术切除率，减少术中播散可能性，降低肿瘤细胞活性;消除潜在的微转移灶，降低术后转移复发的可能;术前通过可测量病灶及术后标本准确判定临床缓解率和病理学有效率;新辅助治疗可剔除不宜手术治疗的患者。

新辅助化疗使进展期胃癌治疗的效果得到显著改善，Wilke等[1]和Plukker [2]的II期临床试验发现，NACT能够使原剖腹探查无法切除的胃癌获得30%-50%的再切除率，这些再切除患者的中位生存期为24个月，远高于原无法切除患者小于6个月的生存期。

胃癌的腹膜转移和复发占所有胃癌术后复发的半数以上，而腹膜转移者的5年生存率低于20%。

临床所遇腹膜转移患者多数在已出现腹水、盆腔肿块或肠梗阻时才得以确诊，已失去治疗最好时机，故胃癌腹膜转移的早期诊断和治疗具有重要意义。

腹膜转移的关键因素是腹腔内脱落的癌细胞和腹膜微转移灶的存在。

胃肠道恶性肿瘤患者CK20 mRNA表达及其临床意义

因此，采用RT-PCR检测外周血中CFA、CK20基因的表达，可能是一种较理想的无创性胃癌诊断、转移检测方法，亦便于临床及时判断胃癌患者预后。
RT-PCR方法是灵活很高的检测手段，并且简便准确。CK20作为标志基因对胃肠道恶性肿瘤外周血微转移进行检测，对于早期发现微转移，及时采取综合治疗，挺高生存率正确判断预后，有着极其重要的意义。
3 CK20在胃癌患者表达及其意义
胃癌是临床发病率较高的恶性肿瘤，根治手术的治愈率低于30%，这可能与病人手术后的淋巴系统、血循环、骨髓、干、肺等组织器官中存在者微小的细胞灶有关。以此微转移的检测对于转移早期发现、及时采取有效的综合治疗，改善预后具有相当重要的意义。CK20是细胞角蛋白的一种组分，在正常骨髓、血液淋巴结中均无表达，在几乎所有的胃肠道肿瘤中均明显表达，且在肿瘤侵袭、转移、扩散到其他组织器官时，CK20 mRNA的表达始终保持稳定。Nlert[4]等报道40％的胃癌患者外周血中检测到CK20mRNA。有研究显示，正常对照及胃良性病变组均未检测到CK20mRNA表达，而胃恶性肿瘤组有48．1％的表达，证实了CK20表达的特异性。因此，外周血CK20mRNA阳性表达可作为癌细胞血行播散的标志。
1 CK20
细胞角蛋白20 (cytokertin20,CK20)是由MOLL等[3]于1990年发现的一种多肽，它含424个氨基酸，分子量为48533，等电点5.66，其编码DNA总长18Kb，含8个外显子，7个内含因子局限于上皮细胞，是上皮源性恶性肿瘤微转移检测的敏感标志。
CK20的合成首先出现于8周胚胎肠粘膜上皮中，以后扩散到几乎所有的杯状细胞及数目不定的绒毛细胞中。不同于其他CK,CK20具有严格的上皮特异性，正常组织中CK20见于胃粘膜及幽门腺体细胞，十二指肠粘膜，泌尿道伞状细胞，表皮Merkel细胞，舌味蕾细胞，而非上皮细胞或组织如乳腺、平滑肌、血细胞、淋巴细胞、造血细胞均为阴性。但在许多癌中，如胃肠道、乳腺癌等CK20表达增强。CK20在侵袭、转移、扩散到其他组织器官时始终保持稳定，被认为是检测循环癌细胞的敏感标记物。

胃肠道肿瘤微转移灶的检测及意义

胃肠道肿瘤微转移灶的检测及意义作者：王忠津马纪江来源：《中国实用医药》2009年第02期肿瘤的转移情况与肿瘤患者的疾病分期、治疗及预后密切相关。

现就胃肠道肿瘤微转移灶的检测及意义作一综述。

近20年来，胃癌根治术的方法不断改进，但总的来说最近20年来胃癌患者的预后并未改善。

结肠癌患者大约50%死于局部复发或转移疾病，这可能与这可能与肿瘤患者在手术时未能清扫淋巴结、骨髓及腹腔内的微小转移灶有关。

因此，肿瘤患者微转移灶的检测具有重要意义。

1 微转移灶的检测方法1．1 免疫组化抗体的特异性的选择与检测方法的敏感性同样重要。

目前所有的抗体主要有抗癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白（CK）、上皮细胞膜抗原（EMA）等抗体，而近来研究较多的是抗细胞角蛋白单抗。

细胞角蛋白是一组蛋白，共有20个组份。

细胞角蛋白多肽是正常上皮细胞和恶性上皮细胞骨架的基本成分。

有报道结肠癌、胃癌、卵巢癌、乳腺导管癌等均能被CK1~CK4单抗染色。

而Haboubi等报道一些抗上皮细胞的抗体与正常的淋巴结成分，如树突细胞和浆细胞反应。

还有报道细胞角蛋白组分8．18在一些非上皮细胞组织和细胞系的异常表达。

因此抗体的特异性有待提高。

1．2 聚合酶链反应（PCR）最近检测微转移灶的技术取得很大进步。

PCR方法具有敏感性高、特异性强、快速、样本量大等优点、目前PCR检测微转移灶的方法主要有两种：①检测突变或重组的改变了的DNA；②检测“组织特异”基因的mRNA。

所谓“组织特异”基因即所需测定的基因必须是在恶性细胞中转录活化，而不是在恶性肿瘤组织所在的正常细胞中活化。

Hayashi等通过检测突变的K-ras或p53基因来诊断淋巴结转移。

这种方法的缺点是原发肿瘤必须具有一个能进行PCR扩增的异常基因，而Hayashi等只在120例重的71例获得扩增基因。

另外，用PCR方法在淋巴结中测到的可能是降解的含有重要序列的肿瘤DNA片段，而非活的肿瘤细胞。

但如果能找到各种肿瘤的共同突变的致癌或抑癌基因，则这种方法将具有很广泛的应用价值。

CK20检测大肠癌淋巴结微小转移的免疫组织化学探究

于局部肿瘤复发或转移，而且其中２０％一３０％常规组织学检查无
淋巴结转移（ＤｕｋｅｓＡ＆Ｂ期）的患者由于远处转移或局部复发于５年内死亡。在大肠癌根治术复发或转移中，其中一个原因为淋巴结亚临床灶转移即淋巴结微小转移，所谓淋巴结微小转移是指常规病理检查难以发现的小于２ｍｍ的转移。几种方法已经被用于淋巴结微小转移的检测，免疫学方法和分子生物学技术已经体现出其优越性和临床价值。本实验采用免疫组织化学技术应用抗细胞角蛋白２０（ＣＫ２０）单克隆抗体检测大肠癌淋巴结微小转移情况。实验结果表明，免疫组织化学方法较常规组织学方法（ＨＥ染色）能检测出常规组织学检测遗漏的淋巴结微小转移（７．７％），提高了淋巴结转移的检出率。在４８例组织学未发现淋巴结转移（ＤｕｋｅｓＢ期）标本中，ＣＫ２０免疫组织化学Ｓ一Ｐ法检出其中８例存在淋巴结微小转移（１６．７％），改变了临床上对这８例大肠癌患者的病理分期（从ＤｕｋｅｓＢ期到真正的ＤｕｋｅｓＣ期），因而提高了大肠癌临床分期的准确性，对判断患者预后、指导术后辅助治疗均有重要的意义。国外有学者报告了类似结果，指出微小转移的检出结果与患者预后（５年生存率）显著相关，有淋巴结微小转移者５年生存率明显低于无微小转移者。本组资料中有３例ＤｕｋｅｓＣ期患者常规组织学检查发现有淋巴结转移，而采用抗ＣＫ２０抗体免疫组织化学检测比常规组织学检查多检出５枚淋巴结微小转移，预示这些患者预后可能更差，合并结外转移几率增加，故治疗和随访更应积极。
Ｏｌｎｍｏｌ／１ＰＢＳ（ＰＨ７．４）代替一抗作为阴性对照，以原发大肠癌的

RT-PCR检测CK19 mRNA青年结直肠癌患者淋巴结微转移

RT-PCR检测CK19 mRNA青年结直肠癌患者淋巴结微转移目的利用RT-PCR检测CK19 mRNA技术，从分子水平探讨在青年结直肠癌患者区域淋巴结微转移的价值及临床意义。

方法采用RT-PCR扩增，对角蛋白CK19检测。

对30例结直肠癌患者的癌组织标本和108个淋巴结进行检测，检测良性结直肠疾病（结直肠息肉、憩室等）手术的20例患者的正常肠周淋巴结20枚作为对照组，同时行常规病理检查。

结果30例结直肠癌患者均有CK19 mRNA表达，108个淋巴结中有47个存在CK19 mRNA阳性表达，阳性率为43.5%；常规病理检查有25枚有癌转移，阳性率为23.2 %；20例良性病变患者30枚淋巴结CK19 mRNA表达为阴性。

结论RT-PCR扩增CK19 mRNA检测结直肠癌区域淋巴结微转移，是一种敏感而特异性的检测方法，对青年结直肠癌患者指导治疗，有较大的临床意义。

标签：青年结直肠癌；微转移；淋巴结；聚合酶链反应结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，且有年轻化趋势。

外科手术治疗依旧是首选方法。

但根治术后易复发，影响了术后5年生存率。

因此对于结直肠癌诊治的研究也空前提高。

其中淋巴结转移是影响结直肠癌患者预后的最重要因素之一。

近几年来，不少学者通过研究结直肠癌淋巴结的微转移(micrometastasis，MM)来提高结直肠癌治疗效果以期改善预后，提高5年生存率。

细胞角蛋白（cytokeratin,CK）是细胞骨架系统中间丝组成成分之一。

广泛存在于上皮组织细胞中，而间叶组织中缺乏表达，故成为上皮肿瘤细胞较为敏感和特异的指标。

由于它在正常淋巴结中不表达，因而最常用来检测微转移的标记物［1］。

RT-PCR 被认为是检测隐匿性癌转移的高度敏感的方法。

本文探讨RT-PCR检测CK19 mRNA在诊断青年（40岁以下）结直肠癌患者区域淋巴结微转移的价值及其临床应用。

现报告如下。

1 资料与方法1.1 一般资料收集2007年9月-2011年9月在本科行结直肠根治性切除40岁以下结直肠癌患者30例行根治术，排除合并其它脏器肿瘤或术前行辅助化疗的病例。

结肠癌患者CK19的表达及意义

结肠癌患者CK19的表达及意义古丽【摘要】目的：研究红细胞角蛋白19（CK19）mRNA在结肠癌患者外周血中的表达，以及其与肿瘤病理特征的相关性，探讨CK19与结肠癌的关系。

方法分析2012年3月至2014年5月在该院接受手术治疗的结肠癌患者的临床资料，共纳入研究对象160例，其中结肠癌患者52例（结肠癌组），结肠息肉患者55例（结肠息肉组），健康者53例（对照组），比较3组外周血CK19 mR‐NA表达差异，分析CK19 mRNA表达情况与结肠癌的肿瘤病理特征间的关系，并比较CK19 mRNA与CEA和CA199对于结肠癌的诊断价值。

结果3组受试者外周血的CK19 mRNA阳性表达率差异有统计学意义（χ2＝54．53，P＜0．01），结肠癌患者CK19 mRNA阳性表达最高；不同Dukes分期（χ2＝16．14，P＜0．01）、分化程度（χ2＝8．155，P＝0．017）、肝转移情况（χ2＝13．68，P＜0．01）所对应的结肠癌患者的CK19 mRNA阳性并不相同，差异均有统计学意义；CK19 mRNA对于结肠癌的诊断价值ROC曲线分析结果提示曲线下面积为0．947，其敏感性和特异性均高于CEA和CA199。

结论 CK19 mRNA在结肠癌中的表达显著升高，且其表达水平与肿瘤的分期、分级及转移有着重要的相关性，其对于结肠癌的诊断价值优于CEA和CA199。

%Objective To study the expression of red blood cell keratin 19(CK19) mRNA in the peripheral blood of the pa‐tients with colorectal cancer and the relationship between the CK19 mRNA and the pathological characteristics ,to investigate the relationship between CK19 and colorectal cancer .Methods Clinical data of patients with colorectal cancer received treatment at our hospital from 2012 to 2014 was retrospectively analyzed .A total of 160 patients wereretrospective analyzed ,including 52 patients with colorectal cancer ,55 with colon polyps and 53 normal persons .The control group was the healthy subjects and the patients with colon polypsc who accept the physical examination at our hospital at the same period .The different expressions of CK19 mR‐NA of colorectal cancer ,colon polyps and the normal persons were compared .The relationship between the CK19 mRNA and the pathological characteristics of colorectal cancer was analyzed .The different diagnostic values of CK19 mRNA and CEA ,CA199 to colorectal cancer were compared .Results There were significant differences in the positive rate of CK19 mRNA between three groups(χ2=54 .53 ,P<0 .01) .The positive rate of CK19 mRNA in the patients with colorectal cancer was the highest .The positive CK19 mRNA in the patients with colorectal cancer of different Dukes typing(χ2=16 .14 ,P<0 .01) ,differentiation(χ2 =8 .155 ,P=0 .017) ,liver metastasis(χ2 =13 .68 ,P<0 .01) were different .And the differences were significant .The result of ROC area under the curve was 0 .947 which described the diagnostic value of CK19 mRNA to the patients with colorectal cancer .The sensitivity and specificity of CK19 mRNA were higher than both of CEA and CA199 .Conclusion The expression of CK19 mRNA in colorectal cancer is significantly increased .There is significant correlation between the expression level of CK19 mRNA and the staging ,grad‐ing and transferring of the tumor .The diagnostic value of CK19 mRNA to the patients with colorectal cancer is better than CEA and CA199 .【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2015(000)029【总页数】3页(P4120-4122)【关键词】角蛋白19;RNA ,信使;结肠肿瘤【作者】古丽【作者单位】重庆市九龙坡区第五人民医院检验科 409908【正文语种】中文【中图分类】R935.3+5结肠癌是消化道内常见的一种恶性肿瘤，在胃肠道肿瘤中的发病率占据第3位，对人类的健康构成了严重的威胁[1]。

HER-2在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

HER-2在结直肠癌组织中的表达及其临床意义何静;郭小青;陈元平;欧阳玉茗【摘要】目的研究人类表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2)在结直肠癌组织中的表达及特征.方法运用免疫组化的方法检测经外科手术切除的50例结直肠癌组织标本和30例正常结直肠组织标本中HER-2的表达状况,并研究HER-2表达与结直肠癌病理特征和临床表现的相关性.结果 HER-2在结直肠癌组织中表达阳性18例(36.0%),正常组织阳性3例(10.0%),2组差异有统计学意义(P<0.05).HER-2基因表达与结直肠癌患者的年龄、部位及性别等无关(P>0.05),但是与结直肠癌的分期、患者淋巴结转移等有着明显的相关性(P<0.05).HER-2阳性的结直肠癌患者5年生存率显著低于阴性患者(P<0.05).结论结直肠癌患者中存在HER-2蛋白过表达,HER-2或成为结直肠癌的一种早期检测和诊断标志物.%Objective To investigate the expression of HER-2 in patients with colorectal cancer and the relationship be-tween its expression and patients.Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of HER-2 in 50 cases of colorectal cancer tissue and 30 cases of normal colorectal tissue.Pathological characteristics and clinical data were compared be-tween those two groups.Results HER-2 was positively expressed in 18 cases(36.0%)of colorectal cancer tissue and 3 cases (10.0%)of normal tissue,and the difference was statistically significant(P<0.05).The over expression of HER-2 was not as-sociated with patients,age,gender,tumor size,location and distantmetastases(P>0.05),but associated with differentiation stage,Dukes' stage and lymphatic metastases(P<0.05).The colorectal cancer patients withpositive expression of HER-2 had a significantly lower five-year survival than those with negative expression(P<0.05).Conclusion The expression of HER-2 was associated with the occurrence of colorectal cancer,which could be used as a marker for early detection and prognosis.【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】2018(033)002【总页数】3页(P185-187)【关键词】结直肠癌;人类表皮生长因子受体-2【作者】何静;郭小青;陈元平;欧阳玉茗【作者单位】341000 江西省赣州市人民医院;341000 江西省赣州市人民医院;341000 江西省赣州市人民医院;341000 江西省赣州市人民医院【正文语种】中文【中图分类】R735.3+7结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是肠胃道中较为常见的恶性肿瘤之一，由于早期表现的症状不明显，患者很难发现，但是结直肠癌的发病率和死亡率在我国乃至全世界都呈现上升的趋势[1]，严重威胁着人类健康。

结直肠癌行前哨淋巴结微转移术中的临床检测

结直肠癌行前哨淋巴结微转移术中的临床检测【摘要】目的前哨淋巴结微转移术中的临床检测实例讨论。

方法结合文献，对临床实际病例进行研究。

结果连续切片的阳性率可提高前哨淋巴结微转移的检测。

结论进一步提高前哨淋巴结微转移的含有率，减少假阴性率，使评价能更好地服务于临床治疗及预后。

【关键词】前哨淋巴结微转移术；检测；临床doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2013.07.716文章编号：1004-7484（2013）-07-4094-02结直肠癌是对人体健康危害巨大的恶性肿瘤，其发病率逐年增加，在恶性肿瘤里面位于前列。

前哨淋巴结活检（slnb）在结直肠癌中能较准确地预测腋窝淋巴结或病理条件下的组织，前哨淋巴结（sln）阴性的腋窝淋巴结清扫（alnd），提高手术效果和患者的生活质量。

可以如何快速检测sln和微转移的患者，提高微转移的sln 诊断的准确性，减少两个操作率，许多学者对此进行了整理，研讨，下面汇总这方面的研究。

1前哨淋巴结活检及微转移1.1前哨淋巴结活检定位前哨淋巴结是在淋巴结引流淋巴结原发肿瘤，淋巴肿瘤导致淋巴结转移发生的第一批只有淋巴结。

前哨淋巴结的淋巴管扩散屏障阻止癌细胞，其临床意义一直受到人们的重视。

因此，找到前哨淋巴结将成为一个重要组成部分的运作。

大体来看，共有三种前哨淋巴结定位方法：一是生物染料针对淋巴结着色的使用的方法；二是使用放射性胶体注射，检测和γ计数器的使用；结合生物识别放射性胶体染料的结合使用。

其中，第三种方法的准确度和灵敏度最高的。

巴恩韦尔和42例阿尔贝蒂尼的肿瘤在99mtc标记的胶体硫和异硫蓝相同的注射，前哨淋巴结检测准确率的组合是90%。

通过大量的研究证明，共同使用生物染料和放射性胶体一般都可以确定前哨淋巴结的具体位置。

1.2前哨淋巴结活检特征不是所有的结直肠癌患者可以进行前哨淋巴结活检。

前哨淋巴结活检适用于腋窝淋巴结阴性或不愿腋窝淋巴结清扫在结直肠癌患者的临床检查，尤其是在患者的乳腺癌保乳手术的实施。

肿瘤标志物检测注意事项及临床意义

甲胎蛋白
ELISA法可用血清、含EDTA、柠檬酸或肝素的血浆标本，待测标本不可用NaN3防腐，检测前应充分离心标本。 ECLIA（电化学发光法）对于接受高剂量生物素（>5mg/d）治疗的患者，必须在末次生物素治疗8小时后才能采血；检测结果不受类风湿因子影响（RF＜1500IU/ml）。
甲胎蛋白
CA15-3
CA15-3血清增高亦可见于肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌等其它恶性肿瘤。某些良性乳腺疾病，卵巢疾病等非恶性肿瘤疾病亦可引起CA15-3水平的增高。
CA242
CA242(carbohydrate anigen 242)水平在正常人和良性肿瘤患者中很低，但在消化道等多种器官恶性肿瘤患者中CA242的水平很高，特别是胰腺癌、结直肠肿瘤中呈高表达，因此对胰腺和结直肠癌具有很高的特异性和灵敏度，是胰腺癌和结直肠癌的第三代肿瘤标志物。
甲胎蛋白
AFP-L3（甲胎蛋白异质体，alpha-fetoprotein variant），亲和交叉免疫电泳法亲和电泳免疫印迹法均要求待测血清或其他体液避免溶血、脂血或微生物污染，亲和吸附离心管法血清要求清亮。
甲胎蛋白
AFP-L3在HCC诊断中特异性高于AFP，但敏感性与总AFP无明显差异；与其他指标如AFP、
癌胚抗原
良性肿瘤、炎症和退行性疾病（例如胆汁淤积、结肠息肉、酒精性肝硬化患者、慢性肝炎、胰腺炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病、肺气肿）CEA含量会轻度或中度上升，但通常不超过10ng/ml。吸烟者中约有30%CEA大于5ng/ml。CEA可作为良性与恶性肿瘤的鉴别诊断依据。
癌胚抗原
CEA测定主要用于指导肿瘤治疗及随访。能对病情判断、预后及疗效观察提供重要的依据。CEA的检测对肿瘤术后复发的敏感度极高，可达80%以上，往往早于临床、病理检查及X线检查半年。CEA正常不能排除恶性肿瘤疾病存在的可能。与CEA发生反应的抗体与胎粪抗原（NCA2）也能反应。

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·论著·细胞角蛋白20在Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌淋巴结微转移患者中的表达及意义周仕海1 彭文君2 陈宏1 储兵3 雒洪志1 邓庆炎1 孟凤娇3【摘要】目的通过免疫组化方法检测Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者细胞角蛋白20（CK20）的表达对淋巴结微转移及预后的影响。

方法　选择2010年1月至2011年12月中山市人民医院收治的137例Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者，获取根治性手术切除的淋巴结组织学标本945枚，采用免疫组织化学SP法和单克隆抗体检测淋巴结标本中CK20表达情况，结合临床和随访资料进行生存分析。

结果　（1）10例（7.3%）结直肠癌的15枚（1.6%）淋巴结出现微转移，CK20表达阳性。

（2）淋巴结CK20的表达情况与Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者性别、年龄、肿瘤大小、部位、手术方式、原发灶CEA表达情况、组织学类型、有无脉管神经浸润无相关性。

（3）5年内复发转移的患者淋巴结CK20的阳性率为16.7%（4/24），远高于未发生复发转移患者的5.3%（6/113），但差异无统计学意义（χ2=2.282，P=0.131）。

生存分析发现，CK20表达阴性组5年生存率高于表达阳性组（84.3% vs 60.0%，P=0.025）。

（4）COX回归分析结果显示性别（P=0.359）、年龄（P=0.917）、肿瘤大小（P=0.547）、组织学类型（P=0.106）、原发灶CEA表达情况（P=0.069）、肿瘤位置（P=0.760）、分期（P=0.069）、手术方式（P=0.350）与Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者预后无明显的相关性；而CK20表达与患者预后密切相关（P=0.033），存在淋巴结微转移的患者死亡的风险是无转移的3.224倍（95% CI=1.100~9.451）。

结论 CK20检测结直肠癌淋巴结微转移可以改善结直肠癌患者的临床分期，影响治疗方案，且与患者预后相关。

【关键词】结直肠肿瘤；角蛋白20；淋巴结；微转移；复发Expression and significance of cytokeratin 20 in lymph node micrometastasis of colorectal cancer instage and Zhou Shihai1, Peng Wenjun2, Chen Hong1, Chu Bing3, Luo Hongzhi1, Deng Qingyan1,Meng Qingjiao3. 1Department of General Surgery, 2the First Department of Anesthesia, 3Department ofPathology, Zhongshan City People's Hospital, Zhongshan 528403, ChinaCorresponding author: Zhou Shihai, Email: 3827906383@【Abstract】Objective To assess the impact of cytokeratin 20 (CK20) in lymph node micrometastasison clinical staging and prognosis of colorectal cancer (stage and stage ) by immunohistochemistry. MethodsThe original histology of one hundred and thirty-seven patients with stage or stage colorectal cancerwho had undergone curative resection from January 2010 to December 2011 in Zhongshan City People'sHospital was reviewed. Immunohistochemical staining was performed using CK20 antibodies on all the 945lymph nodes. The clinical and follow-up data of those patients were used for survival analysis. Results(1) Micrometastases were observed in 15 lymph nodes (1.6%) of 10 patients (7.3%). (2) The presence ofmicrometastases was not related to gender, age, tumor size, location, operation methods, CEA expression ofthe primary lesion, histological type, vascular and nerve invasion. (3) The positive rate of CK20 was 16.7%(4/24) of micrometastasis patients in 5 years, higher than those without recurrence or metastasis 5.3% (6/113,χ2=2.282, P=0.131). (4) COX regression analysis showed that gender (P=0.359), age (P=0.917), tumor size(P=0.547), histological type (P=0.106), CEA expression of the primary lesion (P=0.069), tumor location(P=0.760), stage (P=0.069), and surgeries (P=0.350) were not related to prognosis; but the expression of CK20was closely related with the prognosis of the patients (P=0.033), the risk of death in patients with the presenceDOI：10.3877/cma.j.issn.1674-0793.2018.02.006基金项目：中山市卫生局基金项目（2014J054）作者单位：528403 广东省中山市人民医院普外三科1，手术麻醉一科2，病理科3通信作者：周仕海，Email：382796383@形态确定为微转移的癌细胞。

CK 阳性细胞成小灶性，三五成群散在分布，部分以单个细胞形式存在。

所有切片均由两位病理科医师核实。

四、随访采用电话、书信、门诊等方式对患者进行随访，随访截至2016年12月31日，随访时间12~83个月，中位随访时间为63.25个月，随访率为100.0%。

五、统计学处理采用SPSS 18.0软件进行数据分析。

淋巴结CK20表达阳性率等计数资料的两因素构成比差异性用χ2检验；当n ≤40，但有理论频数1≤T <5时，用Continuity Correction ；小样本（n <40）用Fisher 确切概率法计算概率。

P <0.05为差异有统计学意义。

结果一、CK20在淋巴结标本中的表达137例结直肠癌患者945枚淋巴结中共检出10例15枚呈阳性表达，包括Ⅰ期4例5枚（4/51），Ⅱ期6例10枚（6/86）。

病例总阳性率为7.3%（10/137），淋巴结总阳性率为1.6%（15/945）（图1、2）。

二、CK20蛋白表达与结直肠癌临床病理特征之间的关系Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者淋巴结中CK20的表达情况与不同性别、年龄、肿瘤大小、部位、手术方式、原发灶CEA 表达情况、组织学类型、有无脉管神经浸润无关，在开腹组和腹腔镜组中淋巴结CK20的表达差异无统计学意义（表1）。

三、CK20蛋白与结直肠癌患者预后137例Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌在5年内复发转移24of lymph node micrometastasis was 3.224 times higher than those without metastasis (95% CI =1.100-9.451). Conclusion CK20 detection of lymph node micrometastasis in colorectal cancer can improve the clinical stage of colorectal cancer, a ff ect the treatment plan and is related to the prognosis of the patients.【Key words 】 Colorectal neoplasms; Keratin-20; Lymph node; Micrometastasis; Recurrence结直肠癌发病率在我国位于恶性肿瘤的第四位，病死率位居恶性肿瘤第五位［1］，手术根治切除肿瘤是治疗的重要手段，然而术后肿瘤的复发、转移始终是临床面临的难题。

即使是Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者仍有较高的复发转移率，患者5年内死于局部复发或转移的最高比例接近25%~30%［2-4］。

许多研究表明，结直肠癌患者可能存在淋巴结微转移，并且在复发转移中起了重要作用［4-8］。

为进一步研究Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌中淋巴结微转移的情况，本研究采用免疫组织化学的方法，检测Ⅰ、Ⅱ期患者淋巴结中细胞角蛋白20（cytokeratin 20, CK20）的表达情况，结合临床资料分析其临床意义。

现报道如下。

材料与方法一、材料来源选取中山市人民医院病理科2010年1月至2011年12月间收治的Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者137例，其中Ⅰ期51例，Ⅱ期86例。

具体患者资料见表1。

所有入组患者术前均未接受放化疗，术后病理确诊结直肠癌，pTNM 分期为Ⅰ、Ⅱ期,排除因急性肠梗阻、穿孔和大出血行急诊手术的患者。

获取以上患者根治性手术切除的淋巴结标本945枚作为研究对象，单个淋巴结直径 2~10 mm 。

切除的淋巴结经10％中性甲醛固定，石蜡包埋。

二、主要试剂CK20兔单克隆抗体（丹麦DAKO 公司，工作浓度为 1100），正常山羊血清封闭液，SP 试剂盒（美国Zymed 公司）（工作浓度为1100）。

三、病理组织检查945枚淋巴结石蜡包埋块分别连续冰冻切片（厚 4 μm ），其中1张行苏木精-伊红（HE ）病理检查，经两位病理科医师复检，如有淋巴结转移，则排除在本研究之外。