第5节 色谱固定相及其选择
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色谱固定相的基本要求1.色谱固定相是作为分离色谱样品的一种物质,也是确保分离效果的关键所在。
而色谱填充柱在使用之前一定要进行烘烤和老化。
以保证它在色谱工作状态下,不会因热、水及湿气等外界环境变化导致的吸附、解吸等问题而影响色谱数据的准确性和重现性。
同时它还应该能够耐受在工作过程中样品流动时可能产生的压力冲击,对填充柱本身不造成损害,并且还具有良好的机械强度和抗热性。
2.4.1.光学性质上有明显的吸收光。
2.4.2.颗粒形状应符合下列要求:孔径不大于0。
5μm;直径不大于8μm; 2.4.3.颗粒的堆积密度大于30g/cm3。
对于包含不同颗粒组分的色谱柱,它们必须有良好的分离效果和耐用性,以及能经得起严格而持久的性能考验。
2.4.4.粉末颗粒应不具有引起堵塞管道的危险性。
通常色谱柱的柱体长度较短( 30~100mm),其中仅含有一个填充柱,因此需要有较快的填充速率。
在大型系统中,色谱柱尺寸常可达250mm以上,柱长可达500mm以上,甚至1000mm以上。
填充柱的填料多为天然或人工合成的无机材料。
在固定相方面,按使用方法划分为挥发性固定相与非挥发性固定相两类。
挥发性固定相包括有机溶剂、无机盐类、酸碱性物质、氧化剂等;非挥发性固定相包括硅胶、氧化铝等。
色谱柱有无支撑结构可以分为层状柱、填充柱、微粒柱和多孔柱。
3.1.1.柱温的选择:柱温对柱效的影响很大。
但是,在色谱过程中柱温往往难以控制。
另外柱温不仅取决于操作条件,还依赖于固定相类型。
通常的情况下,柱温控制在20 ℃~30 ℃。
3.1.2.载气与流速的选择:由于填料粒度很细,因此载气需采用微小的、高纯度的气体。
通常载气与流速控制在5~10ml/min。
3.1.3.流速的选择:流速是影响柱效的又一主要因素。
通常流速为5ml/min~1。
5ml/min。
3.1.4.载气与液体固定相比例的选择:一般选择5: 1。
3.2.1.保护柱:可防止被分离物质污染。