多次完整皮肤刺激试验

实验名称：皮肤刺激试验实验日期：2023年11月15日实验目的：本实验旨在通过皮肤刺激试验评估受试物质对皮肤的可能刺激性，以判断其安全性。

通过本实验，我们可以了解受试物质对皮肤的潜在损伤，为产品的安全性评价提供科学依据。

实验原理：皮肤刺激试验是一种评估物质对皮肤刺激性的体外实验方法。

本实验采用经适当方法制备的动物皮肤，通过涂抹受试物质于皮肤表面，观察涂抹部位是否出现红斑、水肿等刺激性反应，从而判断受试物质的刺激性。

实验材料：1. 受试物质：某化妆品原料2. 动物：大白鼠（雌性，体重200-250g）3. 实验器材：皮肤刺激试验仪、玻璃滴管、剪刀、镊子、生理盐水、纱布、酒精棉球、敷料等实验方法：1. 选取健康大白鼠，雌性，体重200-250g，随机分为两组，每组5只。

2. 将动物麻醉，取腹部皮肤，用剪刀剪去毛发，清洁皮肤。

3. 将受试物质和溶剂分别稀释至适当浓度。

4. 将受试物质涂抹于动物腹部皮肤上，溶剂作为对照组。

5. 涂抹4小时后，用水或无刺激的适当溶剂清洗，去除残留物。

6. 每天连续涂抹1次，连续14天。

7. 涂布后每24小时观察一次结果，记录红斑、水肿等刺激性反应。

实验结果：1. 对照组：涂抹溶剂的动物皮肤未出现明显刺激性反应。

2. 试验组：涂抹受试物质的动物皮肤在第2天开始出现红斑，第4天红斑面积逐渐扩大，第7天达到最大面积，第10天红斑开始消退，第14天基本恢复正常。

讨论：根据实验结果，受试物质在涂抹于动物皮肤后，可引起局部红斑反应，但无水肿等刺激性反应。

这表明受试物质具有一定的刺激性，但在一定浓度范围内，其刺激性可被皮肤耐受。

结论：本实验结果表明，受试物质对动物皮肤具有一定的刺激性，但在一定浓度范围内，其刺激性可被皮肤耐受。

在实际应用中，应控制受试物质的浓度，以确保其安全性。

建议：1. 对受试物质进行进一步的研究，以确定其最适宜的浓度。

2. 对受试物质进行长期毒性试验，以评估其对动物皮肤的影响。

０引言太极贴以当归、干姜、冰片、生草乌、生川乌、麻黄、三七、红花、樟脑为原料，经加工而成，具有使用简便、有效、价廉特点，把药物贴敷于机体的相应穴位，使药物刺激穴位、疏通经络而调节机体的功能状态[1]。

在临床上用于治疗骨质增生，颈椎病，关节炎，肌肉疼痛，急、慢性扭、挫伤。

本文主要对太极贴的家兔多次皮肤刺激试验进行观察[2]，为临床用药安全及相关刺激性研究提供依据。

１材料1.1受试样品由某公司提供的太极贴(一种膏贴)。

1.2受试物处理把原样品剪成2.5cm×2.5cm大小用于试验。

1.3实验动物和饲养环境普通级日本大耳兔3只，体重2300—2500g，皮肤完好健康，由南昌龙平兔业有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK（赣）2009-0001。

实验兔饲养在本疾控中心动物实验室，实验动物使用许可证号：SYXK(赣)2007-0001。

室温21.6—24.5℃，湿度40.0%～70.0%RH，单笼饲养。

２方法2.1实验方法实验前24h把动物背部脊柱两侧被毛剪去，每块面积约3cm×3cm，实验时将受试物2.5cm×2.5cm样品贴在一侧去毛区，另一侧为空白对照，在斑贴后4h，用水清洗，去除残留物。

每天斑贴一次,连续斑贴14天，每次斑贴后24h观察结果。

2.2评分与计算按《消毒技术规范》（2002年版）中皮肤刺激反太极贴对家兔多次皮肤刺激试验的结果和分析ＲｅｓｕｌｔｓａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＤｅｒｍａｌＩｒｒｉｔａｔｉｏｎＴｅｓｔｏｆＴａｉＣｈｉＳｔｉｃｋｅｒｓｏｎＲａｂｂｉｔ＇ｓｋｉｎ肖岗夏芝璐曾立爱谌乐礼蔡宏丁晟Xiao Gang Xia Zhilu Zeng Liai Shen Yueli Cai Hong Ding Sheng（江西省疾病预防控制中心，江西南昌330029）（Jiangxi Province Center for Disease Control and Prevertion，Jiangxi Nanchang330029）摘要：目的：对太极贴进行动物多次皮肤刺激试验，为其提供使用前安全性评价。

化妆品多次皮肤刺激性试验结果分析分析化妆品多次皮肤刺激性试验结果,了解化妆品对动物皮肤的刺激作用,并进行安全性的评价。

方法按《化妆品卫生规范》中的“皮肤刺激性/ 腐蚀性试验”方法进行检测。

结果2010年共对269份化妆品进行了多次皮肤刺激性试验,总合格率为98.14%。

除防晒类和芳香类，其他化妆品的合格率均为100 %。

国产化妆品合格率为100 % ,进口化妆品的合格率为97.38%。

所有受检样品中,无刺激性的占84.76% ,轻刺激性的占13.38%,中刺激性的占1.86%。

结论大部分化妆品对动物皮肤不具刺激性，表明有较高的安全性，但任有一部分化妆品具有不同程度的刺激性,即具有潜在危害性。

卫生毒理随着化妆品在生活中的广泛的使用，其使用的安全性显得越来越重要。

为了保证化妆品的质量，在起投入市场前必须对其进行安全性检测。

化妆品可用于人体表面任何部位（皮肤、毛发、指甲、口唇等），但在安全使用化妆品时首先表现在皮肤。

多次皮肤刺激性试验是反映受试物对皮肤的慢性积累刺激性作用，是评价化妆品卫生质量的一项重要的毒理学指标。

根据《化妆品卫生规范》（2007）对2010年送检的269份化妆品进行了多次皮肤刺激性试验，结果分析如下。

1 材料和方法1.1 样品来源及处理2010年由化妆品生产企业或经销企业委托本中心检验的化妆品，其中国产化妆品105份，进口化妆品297份。

液体受试物一般不需稀释，直接使用原液。

若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。

使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。

特殊产品如染发类、育发类等按其使用说明书中规定的比例和方法配制后用于试验。

1.2 试验动物由四川省实验动物专委会养殖场提供的日本大耳白兔，雌雄各半，体重2.0-2.5kg，动物合格证号：SCXK(川)2008-14，普通级。

动物采用单笼饲养，动物房使用许可证号SYXK[川]2008-043、开放系统，温度18～-28℃，相对湿度40%～-70%。

Pharmacy Information 药物资讯, 2019, 8(1), 16-28Published Online January 2019 in Hans. /journal/pihttps:///10.12677/pi.2019.81003Study of the Skin Irritation and SkinAllergenic Effect of Miconazole NitrateLinimentHui Tian, Fanzhong Sun, Wenxiang Yang, Bolin Fan, Jinming Zhang*Hubei Provincial Key Laboratory for Applied Toxicology, Hubei Provincial Center for Disease Control andPrevention, Wuhan HubeiReceived: Jan. 2nd, 2019; accepted: Jan. 11th, 2019; published: Jan. 18th, 2019AbstractObjective: To study the skin irritation and skin allergenic effect of miconazole nitrate liniment.Methods: Multiple dosing skin irritation test was carried out with rabbit model, and skin sensiti-zation experiment was observed with guinea pig. Results: Miconazole nitrate liniment had mild ir-ritation on the normal skin and the wounded skin, and no allergic response was induced in guinea pig. Conclusion: Miconazole nitrate liniment is relatively safe for external use in animals. These animal experimental results provide experimental basis for clinical medication.KeywordsMiconazole Nitrate Liniment, Irritation, Allergy硝酸咪康唑搽剂多次皮肤刺激性试验及皮肤过敏试验研究田辉，孙凡中，杨文祥，樊柏林，张金明*湖北省疾病预防控制中心，湖北省应用毒理重点实验室，湖北武汉收稿日期：2019年1月2日；录用日期：2019年1月11日；发布日期：2019年1月18日摘要目的：对硝酸咪康唑搽剂皮肤的刺激性和致敏性进行了动物实验观察。

多次完整皮肤刺激试验中国科学院广州化学研究所分析测试中心卿工---189--3394--6343手和皮肤消毒剂：除按第一类、第二类或第三类消毒剂的要求进行毒理学试验外，还必须进行完整皮肤刺激试验。

如果偶尔使用或间隔数日使用的消毒剂，采用一次完整皮肤刺激试验；如果每日使用或连续数日使用的消毒剂，采用多次完整皮肤刺激试验。

接触皮肤伤口的消毒剂，还必须增做一次破损皮肤刺激试验；接触创面的消毒剂，应增做眼刺激试验。

使用过程中，必需接触皮肤的其它消毒剂，也应增做完整皮肤刺激试验。

根据消毒剂的成分，估计可能有致敏作用者，还需增做皮肤变态反应试验。

一、检测项目多次完整皮肤刺激试验。

二、检测依据中华人民共和国卫生部. 《消毒技术规范》（2002年版），皮肤刺激试验，多次完整皮肤刺激试验。

三、检测结论在本试验条件下，*****公司送检的样品（对新西兰兔多次完整皮肤刺激强度为是否具有刺激性。

(本页以下无正文)四、检测方法多次完整皮肤刺激试验（1）试验前动物皮肤准备同2.3.3.3.1 （1）。

（2）次日将受试物[浓度同 2.3.3.3.1 (2)]0.5ml（g）涂在一侧皮肤上，另一侧涂溶剂作为对照，在涂抹后4h，用水或无刺激的适宜溶剂清洗，除去残留物。

每天涂抹一次，连续涂抹14d。

在每次涂抹后24h观察结果，按表2-11评分。

为了便于受试物的涂抹和结果观察，必要时应剪毛。

对照区的处理方法同试验区。

2.3.3.4 评价规定2.3.3.4.1一次皮肤刺激试验在各个观察时间点，按照表2-11对动物的皮肤红斑与水肿形成情况进行评分，并分别按时间点将3只动物的评分相加，除以动物数，获得不同时间点的皮肤刺激反应积分均值(刺激指数)。

取其中最高皮肤刺激指数，按表2-12 评定该受试物对动物皮肤刺激强度的级别。

2.3.3.4.2多次皮肤刺激试验按下列公式计算每天每只动物平均积分（刺激指数），并以表2-12判定皮肤刺激强度。

∑（每只动物14d的红斑和水肿总积分）每天每只动物平均积分=受试动物数×14表2-11 皮肤刺激反应的评分标准皮肤刺激反应皮肤刺激反应评分红斑形成：无0勉强可见 1明显 2严重 3紫红色红斑，并有焦痂 4水肿形成:无0勉强可见 1皮肤隆起，轮廓清楚 2水肿隆起约1mm 3 水肿隆起超过1mm 4表2-12 皮肤刺激强度分级皮肤刺激指数刺激强度级别0～＜0.5 无刺激性0.5～＜2.0 轻刺激性2.0～＜6.0 中等刺激性6.0～8.0 强刺激性涉及地区：广东省、浙江省、福建省、海南省、云南省、广西省、贵州省、新疆省、四川省、重庆市、西藏省、湖南省、江西省、湖北省、上海市、北京市、天津市、安徽省、江苏省、甘肃省、宁夏省、内蒙古省、黑龙江省、吉林省、辽宁省、山东省、陕西省、山西省、河南省、河北省。

多次完整皮肤刺激试验中国科学院广州化学研究所分析测试中心卿工---189--3394--6343手和皮肤消毒剂：除按第一类、第二类或第三类消毒剂的要求进行毒理学试验外，还必须进行完整皮肤刺激试验。

如果偶尔使用或间隔数日使用的消毒剂，采用一次完整皮肤刺激试验；如果每日使用或连续数日使用的消毒剂，采用多次完整皮肤刺激试验。

接触皮肤伤口的消毒剂，还必须增做一次破损皮肤刺激试验；接触创面的消毒剂，应增做眼刺激试验。

使用过程中，必需接触皮肤的其它消毒剂，也应增做完整皮肤刺激试验。

根据消毒剂的成分，估计可能有致敏作用者，还需增做皮肤变态反应试验。

一、检测项目多次完整皮肤刺激试验。

二、检测依据中华人民共和国卫生部. 《消毒技术规范》（2002年版），皮肤刺激试验，多次完整皮肤刺激试验。

三、检测结论在本试验条件下，*****公司送检的样品（对新西兰兔多次完整皮肤刺激强度为是否具有刺激性。

(本页以下无正文)四、检测方法多次完整皮肤刺激试验（1）试验前动物皮肤准备同2.3.3.3.1 （1）。

（2）次日将受试物[浓度同 2.3.3.3.1 (2)]0.5ml（g）涂在一侧皮肤上，另一侧涂溶剂作为对照，在涂抹后4h，用水或无刺激的适宜溶剂清洗，除去残留物。

每天涂抹一次，连续涂抹14d。

在每次涂抹后24h观察结果，按表2-11评分。

为了便于受试物的涂抹和结果观察，必要时应剪毛。

对照区的处理方法同试验区。

2.3.3.4 评价规定2.3.3.4.1一次皮肤刺激试验在各个观察时间点，按照表2-11对动物的皮肤红斑与水肿形成情况进行评分，并分别按时间点将3只动物的评分相加，除以动物数，获得不同时间点的皮肤刺激反应积分均值(刺激指数)。

取其中最高皮肤刺激指数，按表2-12 评定该受试物对动物皮肤刺激强度的级别。

2.3.3.4.2多次皮肤刺激试验按下列公式计算每天每只动物平均积分（刺激指数），并以表2-12判定皮肤刺激强度。

∑（每只动物14d的红斑和水肿总积分）每天每只动物平均积分=受试动物数×14表2-11 皮肤刺激反应的评分标准皮肤刺激反应皮肤刺激反应评分红斑形成：无0勉强可见 1明显 2严重 3紫红色红斑，并有焦痂 4水肿形成:无0勉强可见 1皮肤隆起，轮廓清楚 2水肿隆起约1mm 3水肿隆起超过1mm 4表2-12 皮肤刺激强度分级皮肤刺激指数刺激强度级别0～＜0.5 无刺激性0.5～＜2.0 轻刺激性2.0～＜6.0 中等刺激性6.0～8.0 强刺激性涉及地区：广东省、浙江省、福建省、海南省、云南省、广西省、贵州省、新疆省、四川省、重庆市、西藏省、湖南省、江西省、湖北省、上海市、北京市、天津市、安徽省、江苏省、甘肃省、宁夏省、内蒙古省、黑龙江省、吉林省、辽宁省、山东省、陕西省、山西省、河南省、河北省。

皮肤刺激试验是一种常用的安全性评价方法，主要用于评估物质对皮肤刺激性的影响。

本实验通过对某物质进行皮肤刺激试验，探讨其皮肤刺激性，为该物质的安全应用提供依据。

二、实验方法1. 实验材料（1）受试物质：某物质（2）溶剂：无刺激溶剂（3）实验动物：豚鼠（4）实验器材：皮肤刺激试验仪、显微镜、量筒、移液器、培养皿、消毒棉签等2. 实验方法（1）实验动物分组：将实验动物随机分为实验组和对照组，每组10只。

（2）皮肤准备：将豚鼠背部皮肤用消毒棉签进行清洁，待皮肤自然干燥。

（3）受试物质制备：将某物质用无刺激溶剂配制成一定浓度的溶液。

（4）涂抹受试物质：将受试物质均匀涂抹于豚鼠背部皮肤，对照组涂抹无刺激溶剂。

（5）观察与记录：涂抹后，用敷料覆盖固定，粘贴时间至少4小时。

实验期间，每天观察豚鼠皮肤反应，记录红斑、水肿等刺激性表现。

（6）数据处理：根据实验结果，采用统计分析方法对数据进行处理。

三、实验结果1. 实验组与对照组豚鼠皮肤刺激反应对比实验结果显示，实验组豚鼠皮肤出现明显红斑、水肿等刺激性表现，对照组豚鼠皮肤无明显变化。

2. 皮肤刺激性程度评价根据实验结果，实验组豚鼠皮肤刺激性程度为轻度，对照组豚鼠皮肤无刺激性。

1. 实验结果分析本实验结果显示，某物质对豚鼠皮肤具有一定的刺激性，表现为轻度红斑、水肿。

这可能与该物质的化学性质有关，如刺激性较强的化学物质可能导致皮肤刺激性增强。

2. 皮肤刺激性试验方法评价本实验采用皮肤刺激试验方法，该方法操作简便、结果可靠，是评估物质皮肤刺激性的常用方法。

然而，该方法也存在一定局限性，如实验动物个体差异、实验条件等因素可能影响实验结果。

3. 实验结果应用本实验结果可为某物质的安全应用提供参考。

在实际应用过程中，应根据该物质的皮肤刺激性特点，采取相应的防护措施，降低皮肤刺激性风险。

4. 实验改进与展望为提高皮肤刺激性试验的准确性和可靠性，可从以下几个方面进行改进：（1）优化实验动物选择：选择与人类皮肤刺激性反应相似的实验动物，提高实验结果的代表性。

多次皮肤刺激性试验报告
检验受理编号：第页/ 共页
样品中文名称检验开始日期
检验项目多次皮肤刺激性试验检验完成日期
一、材料和方法
1. 受试物：物态，配制方法（所用浓度）。

2. 实验动物和饲养环境:
实验动物：动物种属、品系、级别、数量、体重、来源，实验动物生产许可证号和质量合格证号。

饲养环境：温度，相对湿度，实验动物环境使用许可证号。

饲料：饲料来源及饲料合格证明。

3. 试验方法
二、试验结果
受试物对家兔多次皮肤刺激性试验结果
涂抹天数动物数（只）
皮肤刺激性反应积分
样品对照
红斑水肿总分红斑水肿总分
1 4
2 4
3 4
4 4
5 4
6 4
7 4
8 4
9 4
10 4
11 4
12 4
13 4
14 4
14天每只动物积分均值
每天每只动物积分均值
注：积分均值保留2位小数。

三、试验结论
受试物对家兔多次皮肤刺激性为：
（本页以下空白）2-1j：皮肤变态反应试验报告体例。