急性皮肤刺激试验

四、皮肤刺激性/腐蚀性试验Dermal Irritation/Corrosion Test1 范围本规范规定了动物皮肤刺激性或腐蚀性试验的基本原则、要求和方法。

本规范适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测。

2 规范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals (No.404, July 1992)USEPA OPPTS Harmonized Test Guidelines (Series 870. 2500, Aug. 1998 )3 试验目的确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度。

4 定义4.1 皮肤刺激性(Dermal irritation)：皮肤涂敷受试物后局部产生的可逆性炎性变化。

4.2 皮肤腐蚀性(Dermal corrosion)：皮肤涂敷受试物后局部引起的不可逆性组织损伤。

5试验的基本原则将受试物一次(或多次)涂敷于受试动物的皮肤上，在规定的时间间隔内，观察动物皮肤局部刺激作用的程度并进行评分。

采用自身对照，以评价受试物对皮肤的刺激作用。

急性皮肤刺激性试验观察期限应足以评价该作用的可逆性或不可逆性。

6 试验方法6.1 受试物液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液。

若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。

使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。

受试物为强酸或强碱（pH值≤2或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。

此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50小于200mg/kg体重或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为5000mg/kg体重仍未出现皮肤刺激性作用，也无需进行急性皮肤刺激性试验。

6.2 实验动物和饲养环境多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。

应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。

急性皮肤刺激试验1 目的确定化学品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用及程度，为制定化学品对皮肤的保护措施提供依据。

2 制定依据《化妆品卫生规范（2007版）》。

3试验方法3.1受试样品处理液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液。

若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。

使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。

需稀释后使用的产品，先进行产品原型的皮肤刺激性/腐蚀性试验，如果试验结果显示中度以上刺激性，可按使用浓度为受试物再进行皮肤刺激性/腐蚀性试验。

受试物为强酸或强碱（pH 值≤2 或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。

此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50 小于200 mg/kg 体重或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为2000 mg/kg 体重仍未出现皮肤刺激性作用，也无需进行急性皮肤刺激性试验。

3.2实验动物和饲养环境多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。

应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。

实验动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需增加实验动物数。

实验动物应单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d 时间。

实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。

选用常规饲料，饮水不限制。

3.3 急性皮肤刺激性试验步骤3.3.1 试验前约24h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3cm×3cm。

3.3.2 取受试物约0.5mL（g）直接涂在皮肤上，然后用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。

另一侧皮肤作为对照。

采用封闭试验，敷用时间为4h。

对化妆品产品而言，可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩短敷用时间。

对用后冲洗的化妆品产品，仅采用2h 敷用试验。

一、实验目的本次实验旨在通过急性皮肤刺激试验，评估受试物质对皮肤的直接刺激作用，了解其在接触皮肤后可能引起的急性损伤情况。

实验依据《消毒技术规范》（2002年版）和相关标准进行。

二、实验材料1. 受试物质：[受试物质名称]，[受试物质浓度]。

2. 实验动物：豚鼠，体重200-250g，雌雄各半。

3. 实验设备：皮肤刺激试验箱、皮肤刺激试验板、分析天平、计时器、显微镜等。

4. 实验试剂：生理盐水、蒸馏水、棉签、酒精棉球、纱布等。

三、实验方法1. 实验动物分组：将豚鼠随机分为三组，每组10只，分别为受试物质组、溶剂对照组和生理盐水对照组。

2. 皮肤准备：将豚鼠置于皮肤刺激试验箱中，去除体毛，使皮肤暴露。

用酒精棉球清洁皮肤，待酒精挥发后，用纱布轻轻擦拭。

3. 受试物质涂抹：将受试物质[受试物质名称]按[受试物质浓度]要求，均匀涂抹于豚鼠皮肤上，面积为2cm×2cm。

溶剂对照组涂抹相同浓度的溶剂，生理盐水对照组涂抹等量生理盐水。

4. 涂抹时间：将受试物质涂抹于豚鼠皮肤后，用敷料覆盖固定，粘贴时间为4小时。

5. 观察与记录：涂抹受试物质后，每隔24小时观察豚鼠皮肤情况，记录红斑、水肿等皮肤刺激反应。

观察期为14天。

6. 结果评价：根据观察结果，按照皮肤刺激试验评价标准对受试物质进行评价。

四、实验结果1. 受试物质组：在涂抹受试物质后，豚鼠皮肤出现明显红斑、水肿，程度随时间逐渐加重。

在第7天时，红斑面积最大，水肿程度最严重。

2. 溶剂对照组：在涂抹溶剂后，豚鼠皮肤无明显变化。

3. 生理盐水对照组：在涂抹生理盐水后，豚鼠皮肤无明显变化。

五、讨论本次实验结果显示，受试物质[受试物质名称]对豚鼠皮肤具有明显的急性刺激作用。

涂抹受试物质后，豚鼠皮肤出现红斑、水肿，程度随时间逐渐加重。

这与受试物质的化学性质有关，可能与其释放的活性物质或对皮肤的直接刺激作用有关。

根据实验结果，受试物质[受试物质名称]的急性皮肤刺激强度为[评价等级]，建议在使用过程中加强防护措施，避免直接接触皮肤。

一、实验背景化妆品、药物、化工产品等在使用过程中，可能会对皮肤和眼睛产生刺激作用。

为了评估这些物质的安全性，本实验对某化妆品进行了急性皮肤眼刺激试验，以观察其对皮肤和眼睛的刺激反应。

二、实验目的1. 评估某化妆品对皮肤和眼睛的急性刺激作用；2. 为该化妆品的安全性评价提供依据。

三、实验材料1. 实验动物：成年白色家兔，体重2.0-2.5kg，共8只；2. 受试化妆品：某品牌化妆品，生产批号：20231201；3. 赋形剂：无刺激性乳液；4. 实验仪器：皮肤刺激试验箱、电子天平、滴管、纱布、胶布、绷带等。

四、实验方法1. 急性皮肤刺激试验（1）实验动物分组：将8只家兔随机分为两组，每组4只，分别为实验组和对照组。

（2）皮肤准备：实验前24小时，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，去毛范围各约3cm×6cm，不可损伤表皮。

（3）涂抹受试物：实验组将0.1ml受试化妆品滴在2.5cm×2.5cm大小的四层纱布上，敷贴在一侧皮肤上；对照组将相同体积的赋形剂敷贴在另一侧皮肤上。

然后用一层油纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。

（4）观察与记录：试验结束后1、24和48小时，观察涂抹部位皮肤反应，按照表1和表2进行皮肤反应积分和刺激强度评价。

2. 急性眼刺激试验（1）实验动物分组：将8只家兔随机分为两组，每组4只，分别为实验组和对照组。

（2）眼刺激准备：实验前24小时，将实验动物眼部用生理盐水清洗，去除分泌物。

（3）滴加受试物：实验组将0.1ml受试化妆品滴入每只实验动物的一侧眼结膜囊内；对照组将相同体积的赋形剂滴入另一侧眼结膜囊内。

（4）观察与记录：试验结束后1、24和48小时，观察眼睛刺激反应，按照表1和表2进行刺激强度评价。

五、实验结果1. 急性皮肤刺激试验实验组：1只家兔在试验结束后1小时出现轻微红斑，24小时后红斑消退；2只家兔在试验结束后24小时出现轻微红斑和水肿，48小时后症状消失；1只家兔在试验结束后48小时出现轻微红斑和水肿，72小时后症状消失。