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附件2《皮肤刺激性/腐蚀性试验技术指导原则（征求意见稿）》起草说明为规范开展化妆品和新原料的安全评估工作，根据《化妆品监督管理条例》《化妆品注册备案管理办法》《化妆品注册备案资料管理规定》《化妆品新原料注册备案资料管理规定》及相关法律法规、强制性国家标准和技术规范的要求,国家药监局化妆品监管司组织中国食品药品检定研究院（以下简称中检院）组织起草了《皮肤刺激性/腐蚀性试验技术指导原则（征求意见稿）》（以下简称《技术指导原则（征求意见稿）》）。
现将起草的有关情况说明如下：一、起草的必要性2021年5月1日，《化妆品监督管理条例》和相关配套法规已正式施行。
我国《化妆品安全技术规范》（2015版）中“毒理学试验方法”规定：化妆品新原料需进行皮肤和急性眼刺激性/腐蚀性试验，同时化妆品产品在投放市场前，对于每天使用的化妆品需进行多次皮肤刺激性试验，进行多次皮肤刺激性试验者不再进行急性皮肤刺激性试验；对于间隔1日或数日使用或使用后冲洗的化妆品需进行急性皮肤刺激性试验。
《化妆品注册和备案检验工作规范》《化妆品注册备案资料管理规定》中规定，发用类和芳香类化妆品需要进行急性皮肤刺激性试验；护肤类和彩妆类化妆品需要进行多次皮肤刺激性试验。
此外，该试验可对新原料是否具有皮肤刺激性进行检测或安全评估。
因此，中检院组织制定《技术指导原则》（征求意见稿），以规范应用皮肤刺激性/腐蚀性试验评价化妆品和新原料的皮肤刺激性。
二、制定原则（一）依法依规原则。
《技术指导原则（征求意见稿）》遵循依法依规原则，贯彻落实《化妆品监督管理条例》及配套法规文件中关于化妆品和新原料的法规要求，研究皮肤刺激性/腐蚀性试验的具体要求，切实为化妆品和新原料的安全评估提供技术指导，也为技术审评以及监管提供依据。
（二）公开透明原则。
《技术指导原则（征求意见稿）》起草过程中，坚持“公开透明、广泛参与”原则，充分参考国内外相关法规和技术标准，积极征求监管部门、专家、行业协会意见，同时根据意见反馈情况科学合理地进行修改完善。
实验名称：皮肤刺激试验实验日期：2023年11月15日实验目的：本实验旨在通过皮肤刺激试验评估受试物质对皮肤的可能刺激性，以判断其安全性。
通过本实验，我们可以了解受试物质对皮肤的潜在损伤，为产品的安全性评价提供科学依据。
实验原理：皮肤刺激试验是一种评估物质对皮肤刺激性的体外实验方法。
本实验采用经适当方法制备的动物皮肤，通过涂抹受试物质于皮肤表面，观察涂抹部位是否出现红斑、水肿等刺激性反应，从而判断受试物质的刺激性。
实验材料：1. 受试物质：某化妆品原料2. 动物：大白鼠（雌性，体重200-250g）3. 实验器材：皮肤刺激试验仪、玻璃滴管、剪刀、镊子、生理盐水、纱布、酒精棉球、敷料等实验方法：1. 选取健康大白鼠，雌性，体重200-250g，随机分为两组，每组5只。
2. 将动物麻醉，取腹部皮肤，用剪刀剪去毛发，清洁皮肤。
3. 将受试物质和溶剂分别稀释至适当浓度。
4. 将受试物质涂抹于动物腹部皮肤上，溶剂作为对照组。
5. 涂抹4小时后，用水或无刺激的适当溶剂清洗，去除残留物。
6. 每天连续涂抹1次，连续14天。
7. 涂布后每24小时观察一次结果，记录红斑、水肿等刺激性反应。
实验结果：1. 对照组：涂抹溶剂的动物皮肤未出现明显刺激性反应。
2. 试验组：涂抹受试物质的动物皮肤在第2天开始出现红斑，第4天红斑面积逐渐扩大，第7天达到最大面积，第10天红斑开始消退，第14天基本恢复正常。
讨论：根据实验结果，受试物质在涂抹于动物皮肤后，可引起局部红斑反应，但无水肿等刺激性反应。
这表明受试物质具有一定的刺激性，但在一定浓度范围内，其刺激性可被皮肤耐受。
结论：本实验结果表明，受试物质对动物皮肤具有一定的刺激性，但在一定浓度范围内，其刺激性可被皮肤耐受。
在实际应用中，应控制受试物质的浓度，以确保其安全性。
建议：1. 对受试物质进行进一步的研究，以确定其最适宜的浓度。
2. 对受试物质进行长期毒性试验，以评估其对动物皮肤的影响。
急性皮肤刺激试验1 目的确定化学品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用及程度，为制定化学品对皮肤的保护措施提供依据。
2 制定依据《化妆品卫生规范（2007版）》。
3试验方法3.1受试样品处理液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液。
若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。
使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。
需稀释后使用的产品，先进行产品原型的皮肤刺激性/腐蚀性试验，如果试验结果显示中度以上刺激性，可按使用浓度为受试物再进行皮肤刺激性/腐蚀性试验。
受试物为强酸或强碱（pH 值≤2 或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。
此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50 小于200 mg/kg 体重或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为2000 mg/kg 体重仍未出现皮肤刺激性作用，也无需进行急性皮肤刺激性试验。
3.2实验动物和饲养环境多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。
应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。
实验动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需增加实验动物数。
实验动物应单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d 时间。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
选用常规饲料，饮水不限制。
3.3 急性皮肤刺激性试验步骤3.3.1 试验前约24h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3cm×3cm。
3.3.2 取受试物约0.5mL（g）直接涂在皮肤上，然后用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。
另一侧皮肤作为对照。
采用封闭试验，敷用时间为4h。
对化妆品产品而言，可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩短敷用时间。
对用后冲洗的化妆品产品，仅采用2h 敷用试验。
实验三一次给药皮肤刺激实验一、实验目的掌握皮肤染毒技术，了解受试物对皮肤是否有刺激或腐蚀作用。
二、实验器材1、实验动物：小鼠24只，每组4只2、材料共用：剃毛器1把、剪毛剪2把、记号笔1支、透明胶1卷、纯桉叶油素10 mL、50%桉叶油素10 mL、25%桉叶油素10mL、3%吐温80 10mL、清洁温水500 mL 每组：长镊子1支、医用手套2双、、注射器（1 mL）1支、烧杯（50 mL）1个、纱布（1.5 cm×1.5 cm）8张。
三、实验内容与步骤1、保定：一人用一手抓住小鼠颈部皮肤，另一手抓住小鼠尾部，轻轻按住固定在操作台面上。
2、剃毛：小鼠保定后，一人用电动剃毛剪将小鼠背部脊柱两侧的毛剃净，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约2 cm×2 cm。
注意需将皮肤绷紧，把剪刀贴紧皮肤剪，但不可用手提起被毛，以免剪破皮肤；依次剪毛，不要乱剪；剪下来的被毛集中在一个装水的烧杯内，勿遗留在和操作台周围。
3、破损皮肤的制备：给药前24 h，用75%酒精消毒小鼠裸露皮肤部位，用消毒针头在剃毛部位做“井”字状划划痕，划破皮肤，以有组织液和血液渗出为度。
3、染毒：吸取1 mL受试物滴于两层灭菌纱布（1.5 cm×1.5 cm）上，将浸有受试物的纱布覆盖在左侧裸露皮肤区域，用透明胶布固定，右侧皮肤以3%吐温80为对照。
4、观察：一次给药4 h后，以温水洗去残留受试物，观察1 h，24 h、48 h、72 h涂抹部位的红斑和水肿等反应。
按表1进行皮肤反应评分，以受试动物积分的平均值进行综合评价，将观察结果填入表3中。
5、结果判定：根据24、48和72 h各观察时点最高积分均值，按表2判定皮肤刺激强度。
6、实验分组：见表4四、注意事项在实验操作过程中，注意安全，以免被小鼠咬伤，防止小鼠丢失；实验使用的有毒化学药品妥善处理；做好实验观察记录。
五、思考题皮肤刺激实验与皮肤毒性实验有何区别？表 1 皮肤刺激反应评分表3 皮肤刺激强度分级表 3 桉叶油素对小鼠急性皮肤刺激性试验结果动物编号1 h 24 h 48 h 72h样品对照样品对照样品对照样品对照红斑水肿总分红斑水肿总分红斑水肿总分红斑水肿总分红斑水肿总分红斑水肿总分红斑水肿总分红斑水肿总分1234总积分均值刺激强度分级表4 实验分组情况组别ⅠⅡⅢⅣⅤⅥ完整皮肤100% 50% 25% 100% 50% 25% 完整皮肤100% 50% 25% 100% 50% 25% 破损皮肤100% 50% 25% 100% 50% 25% 破损皮肤100% 50% 25% 100% 50% 25%。
一、实验背景化妆品、药物、化工产品等在使用过程中，可能会对皮肤和眼睛产生刺激作用。
为了评估这些物质的安全性，本实验对某化妆品进行了急性皮肤眼刺激试验，以观察其对皮肤和眼睛的刺激反应。
二、实验目的1. 评估某化妆品对皮肤和眼睛的急性刺激作用；2. 为该化妆品的安全性评价提供依据。
三、实验材料1. 实验动物：成年白色家兔，体重2.0-2.5kg，共8只；2. 受试化妆品：某品牌化妆品，生产批号：20231201；3. 赋形剂：无刺激性乳液；4. 实验仪器：皮肤刺激试验箱、电子天平、滴管、纱布、胶布、绷带等。
四、实验方法1. 急性皮肤刺激试验（1）实验动物分组：将8只家兔随机分为两组，每组4只，分别为实验组和对照组。
（2）皮肤准备：实验前24小时，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，去毛范围各约3cm×6cm，不可损伤表皮。
（3）涂抹受试物：实验组将0.1ml受试化妆品滴在2.5cm×2.5cm大小的四层纱布上，敷贴在一侧皮肤上；对照组将相同体积的赋形剂敷贴在另一侧皮肤上。
然后用一层油纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。
（4）观察与记录：试验结束后1、24和48小时，观察涂抹部位皮肤反应，按照表1和表2进行皮肤反应积分和刺激强度评价。
2. 急性眼刺激试验（1）实验动物分组：将8只家兔随机分为两组，每组4只，分别为实验组和对照组。
（2）眼刺激准备：实验前24小时，将实验动物眼部用生理盐水清洗，去除分泌物。
（3）滴加受试物：实验组将0.1ml受试化妆品滴入每只实验动物的一侧眼结膜囊内；对照组将相同体积的赋形剂滴入另一侧眼结膜囊内。
（4）观察与记录：试验结束后1、24和48小时，观察眼睛刺激反应，按照表1和表2进行刺激强度评价。
五、实验结果1. 急性皮肤刺激试验实验组：1只家兔在试验结束后1小时出现轻微红斑，24小时后红斑消退；2只家兔在试验结束后24小时出现轻微红斑和水肿，48小时后症状消失；1只家兔在试验结束后48小时出现轻微红斑和水肿，72小时后症状消失。
化妆品检验时限
化妆品检验时限是从正式受理样品之日至出具检验报告之日的时限。
检验机构受理样品时应将出具报告日期及相关事宜通知检验申请单位。
特殊情况（例如检验期内含长假）下，由检验机构与检验申请单位协商确定检验时限，并事先通知检验申请单位。
检验机构应向检验申请单位公布检验时限。
一、单项指标检验时限
单项指标检验时限见表6。
表6? 单项指标检验时限
二、非特殊用途化妆品检验时限
非特殊用途化妆品检验时限见表7。
表7? 非特殊用途化妆品检验时限①
化妆品类别
检验时限（天）
发用类一般发用产品35 易触及眼睛的发用产品35
护肤类一般护肤产品60 易触及眼睛的护肤产品60
彩妆类一般彩妆品60 眼部彩妆品60 护唇及唇部彩妆品60
指（趾）甲类25 芳香类25
注：①因pH≤3.5而需要进行人体试用试验安全性评价的检验时限未计在内。
三、特殊用途化妆品检验时限
特殊用途化妆品检验时限见表8。
表8? 特殊用途化妆品检验时限①
注：①防晒效果人体试验防水性能测定和长波紫外线防护指数测定时限未计在内。
多次完整皮肤刺激试验中国科学院广州化学研究所分析测试中心卿工---189--3394--6343手和皮肤消毒剂：除按第一类、第二类或第三类消毒剂的要求进行毒理学试验外，还必须进行完整皮肤刺激试验。
如果偶尔使用或间隔数日使用的消毒剂，采用一次完整皮肤刺激试验；如果每日使用或连续数日使用的消毒剂，采用多次完整皮肤刺激试验。
接触皮肤伤口的消毒剂，还必须增做一次破损皮肤刺激试验；接触创面的消毒剂，应增做眼刺激试验。
使用过程中，必需接触皮肤的其它消毒剂，也应增做完整皮肤刺激试验。
根据消毒剂的成分，估计可能有致敏作用者，还需增做皮肤变态反应试验。
一、检测项目多次完整皮肤刺激试验。
二、检测依据中华人民共和国卫生部. 《消毒技术规范》（2002年版），皮肤刺激试验，多次完整皮肤刺激试验。
三、检测结论在本试验条件下，*****公司送检的样品（对新西兰兔多次完整皮肤刺激强度为是否具有刺激性。
(本页以下无正文)四、检测方法多次完整皮肤刺激试验（1）试验前动物皮肤准备同2.3.3.3.1 （1）。
（2）次日将受试物[浓度同 2.3.3.3.1 (2)]0.5ml（g）涂在一侧皮肤上，另一侧涂溶剂作为对照，在涂抹后4h，用水或无刺激的适宜溶剂清洗，除去残留物。
每天涂抹一次，连续涂抹14d。
在每次涂抹后24h观察结果，按表2-11评分。
为了便于受试物的涂抹和结果观察，必要时应剪毛。
对照区的处理方法同试验区。
2.3.3.4 评价规定2.3.3.4.1一次皮肤刺激试验在各个观察时间点，按照表2-11对动物的皮肤红斑与水肿形成情况进行评分，并分别按时间点将3只动物的评分相加，除以动物数，获得不同时间点的皮肤刺激反应积分均值(刺激指数)。
取其中最高皮肤刺激指数，按表2-12 评定该受试物对动物皮肤刺激强度的级别。
2.3.3.4.2多次皮肤刺激试验按下列公式计算每天每只动物平均积分（刺激指数），并以表2-12判定皮肤刺激强度。
∑（每只动物14d的红斑和水肿总积分）每天每只动物平均积分=受试动物数×14表2-11 皮肤刺激反应的评分标准皮肤刺激反应皮肤刺激反应评分红斑形成：无0勉强可见 1明显 2严重 3紫红色红斑，并有焦痂 4水肿形成:无0勉强可见 1皮肤隆起，轮廓清楚 2水肿隆起约1mm 3 水肿隆起超过1mm 4表2-12 皮肤刺激强度分级皮肤刺激指数刺激强度级别0～＜0.5 无刺激性0.5～＜2.0 轻刺激性2.0～＜6.0 中等刺激性6.0～8.0 强刺激性涉及地区：广东省、浙江省、福建省、海南省、云南省、广西省、贵州省、新疆省、四川省、重庆市、西藏省、湖南省、江西省、湖北省、上海市、北京市、天津市、安徽省、江苏省、甘肃省、宁夏省、内蒙古省、黑龙江省、吉林省、辽宁省、山东省、陕西省、山西省、河南省、河北省。
第1篇一、实验目的本次实验旨在了解人皮肤对特定物质的刺激反应，通过皮肤刺激试验评估受试物质对皮肤的潜在刺激性，为化妆品、药品等产品的安全性评价提供依据。
二、实验原理皮肤刺激试验是一种用于评估受试物质对皮肤刺激性的实验方法。
本实验采用同体左右自身比较法，通过比较受试物质涂抹区域与溶剂对照区域的皮肤反应，判断受试物质的刺激性。
三、实验材料1. 受试物质：某化妆品原料2. 溶剂：蒸馏水3. 动物：家兔4. 皮肤刺激试验仪：包括涂布器、敷料、计时器等5. 皮肤评分标准：按照中华人民共和国卫生部《消毒技术规范》(2002年版)中的皮肤刺激试验评分标准四、实验方法1. 选取健康家兔，分为实验组和对照组，每组5只。
2. 将实验组家兔的皮肤按2.3.3.3.1(1)同样的方法准备。
3. 第二天，将受试物质浓度为2.3.3.3.1(2)0.5ml(g)涂抹在实验组家兔的一个皮肤上，另一个皮肤上涂抹溶剂作为对照。
4. 涂抹4小时后，用水或无刺激的适当溶剂清洗，去除残留物。
5. 每天连续涂抹1次，连续14天。
6. 涂布后每24小时观察一次结果，按照皮肤评分标准进行评价。
7. 对照组的处理方法与实验组相同。
五、实验结果1. 实验组家兔涂抹受试物质区域的皮肤出现红斑、水肿等刺激反应，评分标准为轻度刺激。
2. 对照组家兔涂抹溶剂区域的皮肤无任何刺激反应。
六、讨论与分析1. 本次实验结果表明，受试物质对家兔皮肤具有一定的刺激性，但刺激程度较轻。
2. 皮肤刺激试验是一种简单、有效的评估受试物质刺激性的方法，为化妆品、药品等产品的安全性评价提供依据。
3. 在实验过程中，需要注意以下几点：（1）受试物质的浓度和涂抹时间应符合实验要求。
（2）皮肤刺激试验应在无感染、无过敏反应的动物上进行。
（3）观察结果时，应按照皮肤评分标准进行评价。
七、结论本次实验通过皮肤刺激试验，证实了受试物质对家兔皮肤具有一定的刺激性，但刺激程度较轻。
为化妆品、药品等产品的安全性评价提供了实验依据。
