实验三 一次给药皮肤刺激实验

中药A注射剂特殊毒性实验【实验目的】通过对中药A注射剂的刺激性、过敏性、溶血性实验，研究该注射剂的安全性。

【实验原理】略。

【实验材料】动物：SD大鼠20只，雌雄各半，200—250g；豚鼠60只，雌雄各半，200—250g；家兔1只，1.5～2.0 kg。

试剂：中药A注射剂，75%乙醇，蛋清，蒸馏水，0.9%氯化钠溶液，苦味酸试剂。

仪器：全光谱灯，离心机，恒温箱，含玻璃珠的三角烧瓶，剃须刀，砂纸，玻璃纸，胶布，绷带，试管，玻璃棒，载玻片。

【实验方法】（一）刺激性试验方法皮肤刺激性试验1 实验动物选SD大鼠，20只，雌、雄各半。

设赋形剂（75%乙醇）对照，采用同体左右侧自身对比法。

试验前24小时对背部给药区用剃须刀进行脱毛处理。

去毛范围左、右各3 cm×3 cm。

给药前检查去毛皮肤是否因去毛而受损伤，有损伤的皮肤不进行试验。

进行破损皮肤的刺激性研究时，在用药部位用砂纸磨或划“井”字并以渗血为度。

2 给药方法取受试物0.5 ml直接涂布于一侧已去毛的皮肤上，然后用二层纱布（2.5 cm×2.5 cm）和一层玻璃纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定；另一侧涂布赋形剂75%乙醇作对照。

贴敷时间4小时。

贴敷结束后，除去受试物并用温水清洁给药部位。

3 结果观察在自然光线或全光谱灯光下观察皮肤反应。

按表1给出的评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分。

①单次给药皮肤刺激性试验，在去除药物后30-60分钟，24、48和72小时肉眼观察并记录涂敷部位有无红斑和水肿等情况。

如存在持久性损伤，有必要延长观察期限以评价上述变化的恢复情况和时间。

但延长期一般不超过14天。

对出现中度及以上皮肤刺激性的动物应在观察期结束时对给药局部进行组织病理学检查。

4 结果评价计算每一观察时间点各组受试物及赋形剂皮肤反应积分的平均分值，按表2进行刺激强度评价。

表1.皮肤刺激反应评分标准判断指标：表2.皮肤刺激强度评价标准（二）过敏性试验方法全身主动过敏试验（ASA）对致敏成立的动物体内，静脉注射抗原，观察抗原与IgE抗体结合后导致肥大细胞、嗜碱性细胞脱颗粒、释放活性介质而致的全身性过敏反应。

化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则一、概述化学药物刺激性、过敏性和溶血性是指化学药物制剂经眼、耳、鼻、口腔、呼吸道、关节腔、皮肤、直肠、阴道、静脉、动脉、肌肉、皮下、静脉旁和鞘内等非口服途径给药，对用药局部产生的毒性（如刺激性和过敏性等）和/或对全身产生的毒性（如过敏性和溶血性等）。

它是临床前安全性评价的组成部分。

药物的活性成分及其代谢物、辅料、有关物质及理化性质（如pH值、渗透压等）均有可能引起刺激性和/或过敏性和/或溶血性的发生，因此药物在临床应用前应研究其制剂在给药部位使用后引起的局部和/或全身毒性，以提示临床应用时可能出现的毒性反应、毒性靶器官、安全范围、临床研究监测指标并为临床解毒或解救措施提供参考，保障临床用药的安全、有效。

本指导原则适用于化学药物，主要内容包括化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究和评价的总体原则、一般原则和常用试验方法。

二、总则根据《药品注册管理办法》（试行）的规定，化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究必须执行《药物非临床研究质量管理规范》（GLP）。

试验设计应遵循随机、对照、重复的原则。

化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究试验设计应结合毒性的发生机制、影响因素、临床意义和药物临床应用的适应症和给药方法等来考虑。

动物种属的选择应依据拟采用的试验模型和观察的指标。

动物的性别、年龄和生理状态应符合拟采用试验动物模型的要求。

受试物应与临床应用制剂一致。

给药方案应根据所采用的试验模型和拟定的临床应用情况来决定。

观察部位除给药部位外，同时应考虑周围组织或可能暴露于受试物的部位。

如果受试物与拟进行临床研究的制剂相同或具有可比性，其他非临床安全性（如长期毒性）研究结果可充分反映受试物的刺激性、过敏性和溶血性中的某一毒性时，则可不单独进行相应的毒性研究。

化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究时应采用与临床应用制剂一致，符合临床用质量标准规定的受试物，并注明其名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件及配制方法等，其中辅料和杂质等的名称和量应尽可能明确，并附有研制单位的自检报告。

一、实验目的本研究旨在评估某新型化学物质对皮肤和黏膜的刺激性，为该化学物质的安全评价提供科学依据。

二、实验材料1. 受试化学物质：某新型化学物质（以下简称化学物质A）2. 实验动物：家兔（雌性，体重2.5kg左右）3. 试剂与仪器：生理盐水、脱脂棉、敷料、显微镜、病理切片机、病理显微镜等4. 实验环境：温度20-25℃，相对湿度40-70%三、实验方法1. 皮肤刺激试验（1）将家兔随机分为两组，每组6只，分别命名为A组和B组。

（2）A组为受试组，将化学物质A配制成0.5%的溶液；B组为对照组，使用等量的生理盐水。

（3）将受试溶液和生理盐水分别涂抹在受试家兔的背部皮肤上，面积约为1cm²，厚度约0.1cm。

（4）涂抹后，用敷料覆盖固定，粘贴时间为4小时。

（5）4小时后，去除敷料，观察并记录皮肤反应。

2. 黏膜刺激试验（1）将家兔随机分为两组，每组6只，分别命名为C组和D组。

（2）C组为受试组，将化学物质A配制成0.5%的溶液；D组为对照组，使用等量的生理盐水。

（3）将受试溶液和生理盐水分别滴入受试家兔的鼻腔，剂量约为0.1ml。

（4）滴入后，观察并记录鼻腔黏膜反应。

（5）1小时后，重复滴入受试溶液和生理盐水，观察并记录鼻腔黏膜反应。

四、实验结果1. 皮肤刺激试验（1）A组：受试家兔背部皮肤出现红斑、水肿，部分家兔出现瘙痒。

（2）B组：受试家兔背部皮肤无异常反应。

2. 黏膜刺激试验（1）C组：受试家兔鼻腔黏膜出现充血、水肿，部分家兔出现打喷嚏、流涕。

（2）D组：受试家兔鼻腔黏膜无异常反应。

五、实验结论1. 化学物质A对家兔皮肤具有刺激性，表现为红斑、水肿、瘙痒等症状。

2. 化学物质A对家兔鼻腔黏膜具有刺激性，表现为充血、水肿、打喷嚏、流涕等症状。

六、实验讨论1. 本实验结果表明，化学物质A对家兔皮肤和黏膜具有刺激性，提示该化学物质在实际应用中可能对人体造成潜在危害。

2. 皮肤刺激试验和黏膜刺激试验结果表明，化学物质A的刺激性与其浓度和接触时间有关。

一、实验目的本实验旨在评估某种化学物质对哺乳动物皮肤的急性刺激性，通过进行急性皮肤刺激试验，为该化学物质的安全使用提供科学依据。

二、实验材料1. 实验动物：成年雌性昆明种小鼠，体重20-25g。

2. 受试化学物质：某化学物质，纯度≥98%。

3. 对照溶剂：蒸馏水。

4. 实验器材：皮肤刺激试验仪、皮肤刺激试验板、无菌棉球、生理盐水、剪刀、剪刀、酒精灯、显微镜等。

三、实验方法1. 实验动物分组：将实验动物随机分为两组，每组10只，分别为实验组和对照组。

2. 皮肤刺激试验：在实验组小鼠的背部皮肤上涂抹0.5ml的受试化学物质，对照组小鼠涂抹等量的对照溶剂。

涂抹后用无菌棉球轻轻擦拭，使受试化学物质均匀分布在皮肤上。

3. 观察与记录：在涂抹受试化学物质后，分别在1小时、4小时、24小时、48小时、72小时观察皮肤反应，记录皮肤红斑、水肿、脱皮等反应程度。

4. 数据分析：采用SPSS软件对实验数据进行统计分析，比较实验组和对照组皮肤反应的差异。

四、实验结果1. 实验组小鼠在涂抹受试化学物质后，皮肤出现明显的红斑、水肿，部分小鼠出现脱皮现象；对照组小鼠皮肤无明显反应。

2. 对实验数据进行统计分析，结果显示实验组小鼠的皮肤红斑、水肿程度与对照组小鼠相比，具有显著性差异（P<0.05）。

五、实验结论根据实验结果，某化学物质对哺乳动物皮肤具有明显的急性刺激性，涂抹后可引起皮肤红斑、水肿、脱皮等反应。

建议在使用该化学物质时，采取适当的安全防护措施，以降低其对皮肤的潜在危害。

六、讨论1. 实验过程中，受试化学物质的浓度和涂抹面积对实验结果有一定影响。

本实验中，受试化学物质的浓度为0.5ml，涂抹面积为小鼠背部皮肤，实验结果具有一定的参考价值。

2. 实验结果表明，某化学物质对哺乳动物皮肤具有明显的急性刺激性，可能与该化学物质的化学性质有关。

建议进一步研究该化学物质的化学结构、分子量等因素，以期为该化学物质的安全使用提供更全面的科学依据。