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土壤中蛔虫卵检测一、背景卫生部于2006 年在全国设立了22个土源性线虫病监测点开展监测工作 ,监测方案中要求对每个监测点进行人群土源性线虫病监测的同时, 还需监测土壤中人蛔虫卵的污染情况。
2006～2010年的监测数据显示，土源性线虫病监测点土壤中人蛔虫卵检出率分别为37.1%，29.5%，25.9%，31.3%和24.4%，统计分析表明，土壤人蛔虫卵检出率与人群蛔虫感染率呈正相关，因此土壤中蛔虫卵的污染情况是评价环境卫生状况的一项重要指标。
二、原理先用碱性溶液与土壤样品充分混合以分离蛔虫卵与土壤颗粒，再加入比重较大的液体使得比重较轻的蛔虫卵漂浮在溶液表面，收集后镜检计数。
三、采样要求1分别从表面及2～3厘米深处采取土样，因为虫卵存活时间与土层深度有关；2在用人粪施肥的农场和菜地可分别在陇上和犁沟中取土样，同时还应取20厘米深处的土样，以确定虫卵附着在根块植物上的可能；3为了测定不同局部气候条件下虫卵存活率，要从有日光照射和荫蔽区采取土样；4厕所、庭院、厨房取表层土；5每份土样约100g。
四、步骤1土样处理：剔除菜叶、树皮等大杂物，压碎土样中的大颗粒；然后用孔径3mm的铜筛和孔径为2mm的铜筛过筛，收集过筛后的土样。
2分离：取50ml大离心管，放入过筛后的土样10g，加5%氢氧化钠溶液至40或45ml刻度线。
用橡皮塞紧塞管口，在振荡器上振荡15分钟，可反复3～4次，待充分混合后，以2000rpm,离心4min。
3漂浮：弃去上部的氢氧化钠，加入饱和硝酸钠溶液充分搅拌混匀，2000rpm离心4min，再加饱和硝酸钠溶液满至管口，覆上18mm ×18mm盖玻片。
4 计数：静臵15min后，将盖玻片迅速翻转取下，臵于载玻片上镜检，同时再覆上第二张盖玻片，如此反复，共计数3～4张盖玻片。
五、影响土壤蛔虫检出率的因素1 漂浮液的比重：漂浮液的比重是影响蛔虫卵检出率的重要因素，用比重大的溶液作为漂浮液效果较为理想，与饱和硫酸锌、硫酸镁、氯化钠等盐溶液相比，饱和硝酸钠的比重最高，用作漂浮液蛔虫卵的检出率最高。
污水及污泥中蛔虫卵的检测方法——集卵法批准人：批准日期：2002年6月6日生效日期：2002年7月6日有效版本：第 1 版第 0 次修订页次：第 1 页共 10 页受控状态：发放编号：1 方法原理本法总的原则是利用碱性溶液与样品充分混合，分离蛔虫卵，然后利用比重的不同，将分散在样品中的蛔虫卵集中起来，再进行检查并计数。
所采用的方法一般有二种类型（因蛔虫卵的比重在1.10~1.16之间）。
其一是飘浮法：用比重大的饱和氯化钠溶液（比重1.18）将蛔虫卵飘浮在溶液表面，收集检验；其二是溶液沉淀法：利用比重小的水溶液，将蛔虫卵沉入溶液底，收集检验。
2 主要仪器2.1 生物显微镜；2.2 离心机；2.3 电动振荡器；2.4 滤膜(Ф35mm. 0.65—0.80um)；2.5 抽滤器；2.6 大型载玻(4x7.5cm)，等。
3 主要试剂3.1 饱和氯化钠溶液；3.2 50%甘油；3.3 5%氢氧化钠等。
4 方法步骤4.1 飘浮法：4.1.1 分离：称取5-10ｇ（或ml）经过处理的样品于容量50ml清洁铜离心管或塑料离心管中，注入5%氢氧化钠溶液25-30ml，另加玻璃珠10粒，用适当大小的橡皮塞子紧塞管口，置电动振荡机上，振荡10-15min，每分钟200-300次，静置15-30min后，再行振荡，如此重复3-4次，使样品为碱性溶液所浸透，加上玻璃珠的撞击和摩擦，则混合液中的蛔虫卵，不再被粘着在一起。
4.1.2 飘浮：从振荡机上取下离心管，揭去橡皮塞子，用滴管吸取清水，将附着在皮塞上和管口内壁的泥状物，冲入管中，以免一小部分卵的漏检，而后再在离心机上离心3-5min，每分钟2000-2500转，倒去多余的氢氧化钠溶液，水洗一次，即加清水将沉淀物搅浑后，离心，倒去上面的脏水。
随后加入少量饱和氯化钠溶液，用玻璃棒搅成糊状，添加饱和氯化钠溶液，随加随搅，直加到离管口约1cm为止，此时将附在玻棒上的混合液也用一两滴饱和氯化钠溶液，冲入管中，离心3-5min，每分钟2000-2500转，由于蛔虫卵的比重小于饱和氯化钠溶液的比重，因此经离心后，管中的蛔虫卵，就会飘浮在氯化钠溶液的表面。
肥料中蛔虫卵死亡率的测定GB/T 19524.2—20041 范围本标准规定了肥料中蛔虫卵死亡率的测定方法。
2 测定方法原理将碱性溶液与肥料样品充分混合，分离蛔虫卵，然后用密度较蛔虫卵密度大的溶液为漂浮液，使蛔虫卵漂浮在溶液的表面，从而收集检验。
3试验方法3.1仪器设备（略）3.2试剂（略）3.3检验程序3.3.1蛔虫卵分离称取5.0～10.0g样品（颗粒较大的样品应先进行研磨），放于容量为50mL 离心管中，注入NaOH溶液25～30mL,另加玻璃珠约10粒，用橡皮塞塞紧管口，放置在振荡器上，静置30min后，以200～300r/min频率振荡10～15min。
振荡完毕，取下离心管上的橡皮塞，用玻璃棒将离心管中的样品充分搅匀，再次用橡皮塞塞紧管口，静置15～30min 后，振荡10～15min。
3.3.2离心沉淀从振荡器上取下离心管，拔掉橡皮塞，用滴管吸取蒸馏水，将附着于橡皮塞上和管口内壁的样品冲入管中，以2000～2500r/min速度离心3～5min后，弃去上清液。
然后加适量蒸馏水，并用玻璃棒将沉淀物搅起，按上述方法重复洗涤三次。
3.3.3离心漂浮往离心管中加入少量饱和NaNO3溶液，用玻璃棒将沉淀物搅成糊状后，再徐徐添加饱和NaNO3溶液，随加随搅，直加到离管口约1cm为止，用饱和NaNO3溶液冲洗玻璃棒，洗液并入离心管中，以2000～2500r/min速度离心3～5min。
用金属丝圈不断将离心管表层液膜移于盛有半杯蒸馏水的烧杯中，约30次后，适当增加一些饱和NaNO3溶液于离心管中，再次搅拌、离心及移置液膜，如此反复操作３～４次，直到液膜涂片观察不到蛔虫卵为止。
3.3.4抽滤镜检将烧杯中混合悬液，通过覆以微孔火棉胶滤膜的高尔特曼氏漏斗抽滤。
若混合悬液的浑浊度大，可更换滤膜。
抽滤完毕，用弯头镊子将滤膜从漏斗的滤台上小心取下，置于载玻片上，滴加二、三滴甘油溶液，于低倍显微镜下对整张滤膜进行观察和蛔虫卵计数。
第1篇一、实验目的1. 了解蛔虫卵的基本形态结构；2. 观察未受精蛔虫卵的特征；3. 掌握显微镜操作技能。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：未受精蛔虫卵样本、生理盐水、显微镜、载玻片、盖玻片、吸管等；2. 仪器：光学显微镜、酒精灯、镊子、剪刀、烧杯等。
三、实验步骤1. 准备工作（1）将未受精蛔虫卵样本放入生理盐水中浸泡；（2）用镊子轻轻挑取适量卵样，置于载玻片上；（3）用盖玻片覆盖，确保卵样均匀分布。
2. 观察未受精蛔虫卵（1）将载玻片放置在显微镜载物台上；（2）调整显微镜的焦距，使视野清晰；（3）观察未受精蛔虫卵的形态结构，记录观察结果。
3. 分析与讨论（1）观察未受精蛔虫卵的形状、大小、卵壳、卵细胞等特征；（2）分析未受精蛔虫卵与受精蛔虫卵的区别；（3）结合蛔虫的生命周期，讨论未受精蛔虫卵在蛔虫生命周期中的作用。
四、实验结果与分析1. 实验结果通过显微镜观察，未受精蛔虫卵呈长椭圆形，大小约为88-94μm×39-44μm。
卵壳较薄，外附一层凹凸不平的蛋白质膜。
卵内充满大小不等的屈光颗粒。
2. 分析与讨论（1）未受精蛔虫卵与受精蛔虫卵相比，卵壳较薄，卵内充满屈光颗粒，说明未受精蛔虫卵尚未发育成熟；（2）未受精蛔虫卵在蛔虫生命周期中起着重要作用，是蛔虫传播和感染宿主的途径之一。
当未受精蛔虫卵随粪便排出体外后，在适宜的条件下，卵内屈光颗粒会发育成幼虫，从而感染宿主。
五、实验结论本次实验成功观察到了未受精蛔虫卵的形态特征，并与受精蛔虫卵进行了比较。
实验结果表明，未受精蛔虫卵在蛔虫生命周期中具有重要作用，是蛔虫传播和感染宿主的途径之一。
六、实验体会1. 通过本次实验，我们了解了蛔虫卵的基本形态结构，掌握了显微镜操作技能；2. 实验过程中，我们要注重观察、分析、讨论，提高自己的实验能力和综合素质；3. 在日常生活中，我们要养成良好的卫生习惯，预防蛔虫病的发生。
七、注意事项1. 实验过程中，注意安全操作，避免发生意外；2. 观察时，保持耐心，仔细观察卵的形态特征；3. 实验结束后，清理实验器材，保持实验室整洁。
肥料中蛔虫卵死亡率的测定GB/T19524.2—20041范围本标准规定了肥料中蛔虫卵死亡率的测定方法。
2测定方法原理将碱性溶液与肥料样品充分混合，分离蛔虫卵，然后用密度较蛔虫卵密度大的溶液为漂浮液，使蛔虫卵漂浮在溶液的表面，从而收集检验。
3试验方法3.1仪器设备（略）3.2试剂（略）3.3检验程序3.3.1蛔虫卵分离称取5.0～10.0 g样品（颗粒较大的样品应先进行研磨），放于容量为50 mL离心管中，注入NaOH溶液25～30 mL,另加玻璃珠约10粒，用橡皮塞塞紧管口，放置在振荡器上，静置30 min后，以200～300 r/ min频率振荡10～15 min。
振荡完毕，取下离心管上的橡皮塞，用玻璃棒将离心管中的样品充分搅匀，再次用橡皮塞塞紧管口，静置15～30 min后，振荡10～15 min。
3.3.2离心沉淀从振荡器上取下离心管，拔掉橡皮塞，用滴管吸取蒸馏水，将附着于橡皮塞上和管口内壁的样品冲入管中，以2000～2500 r/ min速度离心3～5 min后，弃去上清液。
然后加适量蒸馏水，并用玻璃棒将沉淀物搅起，按上述方法重复洗涤三次。
3.3.3离心漂浮往离心管中加入少量饱和NaNO3溶液，用玻璃棒将沉淀物搅成糊状后，再徐徐添加饱和NaNO3溶液，随加随搅，直加到离管口约1 cm为止，用饱和NaNO3溶液冲洗玻璃棒，洗液并入离心管中，以2000～2500 r/ min速度离心3～5 min。
用金属丝圈不断将离心管表层液膜移于盛有半杯蒸馏水的烧杯中，约30次后，适当增加一些饱和NaNO3溶液于离心管中，再次搅拌、离心及移置液膜，如此反复操作３～４次，直到液膜涂片观察不到蛔虫卵为止。
3.3.4抽滤镜检将烧杯中混合悬液，通过覆以微孔火棉胶滤膜的高尔特曼氏漏斗抽滤。
若混合悬液的浑浊度大，可更换滤膜。
抽滤完毕，用弯头镊子将滤膜从漏斗的滤台上小心取下，置于载玻片上，滴加二、三滴甘油溶液，于低倍显微镜下对整张滤膜进行观察和蛔虫卵计数。
实验5 蛔虫及其他原腔动物一、实验目的1．通过对蛔虫外形观察及内部解剖，认识原腔动物的基本结构和特征。
2．认识人体常见的寄生线虫。
二、实验材料1．猪蛔虫浸制标本及横切面装片。
2．人体常见寄生线虫浸制标本和虫卵装片。
3．其他原腔动物常见种类标本。
三、实验器具与药品显微镜、放大镜、蜡盘、尖头镊、解剖剪、解剖针、载玻片、盖玻片、单面刀片、大头针等。
四、实验内容与操作（一）蛔虫（Ascaris）外形观察及内部解剖将猪蛔虫浸制标本置于盛水的蜡盘中，观察其外形。
1．外形观察形态结构蛔虫体长圆形，体表光滑，外包厚角质膜，左右背腹具四条纵走的体线，口端有三个唇片，一片背唇，两片腹唇。
泄殖孔位距腹唇2 mm左右，肛门在体后端腹面。
雌雄个体区别蛔虫雌、雄异体，雌性较粗大，雄性较细小；雌性体后端尖直，雄性体后端向腹面弯成钩形；雌性生殖孔在体腹前1/3处，雄性生殖孔与肛门合并，开口称泄殖孔，自孔中伸出两根交合刺，是雄虫交配时用以固着的器官。
2．内部结构解剖及观察首先判断虫体的背腹面，雌虫腹面有阴门和肛门，雄虫末端弯曲面为腹面。
将蛔虫背面朝上置蜡盘上，用解剖针从背面中线处轻轻划破其体壁，从前端至后端，把它向两侧展开，再用大头针以45 斜插固定在蜡盘上（注意划针时不能太深，以免划破内部器官）。
解剖完毕，可加一些水在蜡盘里，使虫体浸润在水中，然后按下列顺序观察。
图5-1 蛔虫内部解剖A．雌虫；B．雄虫；C．虫卵。
（自江静波等）（1）体线蛔虫背面和腹面的正中各有一条背线和腹线，在身体的两侧分别可见到侧线，是体壁表皮层加厚的部分，将体壁的肌肉层分隔成4列。
（2）原体腔打开蛔虫体壁，在体壁与肠壁之间为宽广的原体腔（图5-1）。
原体腔不与外界相通，其内充满着体液和白色迂回细管状的生殖系统，可输送养料。
（3）消化系统紧接着口的是肌肉质的咽头，然后是一条薄扁略呈绿色的肠和直肠，最后通肛门。
注意线虫动物已具有完全的消化管。
（4）生殖系统雌虫在体中部靠后端有左右成对的细线状卵巢，各连着较粗的输卵管，再通最粗大的子宫，一对子宫会合成短的管状阴道，开口在距身体前端腹面约1/3处。
污水及污泥中蛔虫卵的检测方法
——集卵法
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批准日期：2002年6月6日
生效日期：2002年7月6日
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1 方法原理
本法总的原则是利用碱性溶液与样品充分混合，分离蛔虫卵，然后利用比重的不同，将分散在样品中的蛔虫卵集中起来，再进行检查并计数。
所采用的方法一般有二种类型（因蛔虫卵的比重在1.10~1.16之间）。
其一是飘浮法：用比重大的饱和氯化钠溶液（比重1.18）将蛔虫卵飘浮在溶液表面，收集
检验；其二是溶液沉淀法：利用比重小的水溶液，将蛔虫卵沉入溶液底，收集检验。
2 主要仪器
2.1 生物显微镜；
2.2 离心机；
2.3 电动振荡器；
2.4 滤膜(Ф35mm. 0.65—0.80um)；
2.5 抽滤器；
2.6 大型载玻(4x7.5cm)，等。
3 主要试剂
3.1 饱和氯化钠溶液；
3.2 50%甘油；
3.3 5%氢氧化钠等。
4 方法步骤
4.1 飘浮法：
4.1.1 分离：称取5-10ｇ（或ml）经过处理的样品于容量
50ml清洁铜离心管或塑料离心管中，注入5%氢氧化
钠溶液25-30ml，另加玻璃珠10粒，用适当大小的橡
皮塞子紧塞管口，置电动振荡机上，振荡10-15min，
每分钟200-300次，静置15-30min后，再行振荡，
如此重复3-4次，使样品为碱性溶液所浸透，加上玻
璃珠的撞击和摩擦，则混合液中的蛔虫卵，不再被粘着
在一起。
4.1.2 飘浮：从振荡机上取下离心管，揭去橡皮塞子，用滴管
吸取清水，将附着在皮塞上和管口内壁的泥状物，冲入
管中，以免一小部分卵的漏检，而后再在离心机上离心
3-5min，每分钟2000-2500转，倒去多余的氢氧化
钠溶液，水洗一次，即加清水将沉淀物搅浑后，离心，
倒去上面的脏水。
随后加入少量饱和氯化钠溶液，用玻
璃棒搅成糊状，添加饱和氯化钠溶液，随加随搅，直加
到离管口约1cm为止，此时将附在玻棒上的混合液也
用一两滴饱和氯化钠溶液，冲入管中，离心3-5min，
每分钟2000-2500转，由于蛔虫卵的比重小于饱和氯
化钠溶液的比重，因此经离心后，管中的蛔虫卵，就会
飘浮在氯化钠溶液的表面。
4.1.3 移置液膜，用直径小于1cm的金属丝圈，不断将表层液
膜移于盛用半杯清水的小烧杯中，约30次后，再次搅
拌和离心，适当增加一些饱和氯化钠溶液，如此反复操
作3-4次，直到液膜涂片未查见虫卵为止。
4.1.4 抽滤：将烧杯中含卵混悬液，通过漏斗，抽滤于直径
35mm，无裂纹和孔眼的微孔滤膜（2.4）上,混合悬液
中的蛔虫卵,全部阻留在微孔滤膜上，有时由于样品中
蛔虫卵数量过多，浑浊度大，不易为一张滤膜过滤时，
则可另添一或二张滤膜，再抽滤。
4.1.5 镜检：抽滤完毕，立即用弯头小镊子，将滤膜从漏斗的
滤台上小心取下，平铺于大型载物玻璃片上(2.6)，趁
湿在低倍显微镜下直接检查，最好滴加两滴50%甘油
溶液，这样，蛔虫卵在比较透明而无气泡的视野中，便
于观察和计数。
4.2 沉淀法：
4.2.1 水洗：称取100g(或100ml)样品，放在500ml三角瓶
中，加入5%氢氧化钠溶液100-150ml和三四十粒玻
璃珠，塞以橡皮塞，浸泡半小时后，振摇3-4min，将
上面的液体，倒入大烧杯中，再加等量清水于三角烧杯
中，浸洗三、四次，直到洗出液透明为止。
4.2.2 过滤并用水洗沉淀：将前后收集的洗液，用1-2层纱布
过滤于1000ml锥形量杯中，静置半小时至一小时后，
倒去上层液体，如此，约半小时换水一次，直至上层水
澄清为止。
4.2.3 测定体积：用虹吸管慢慢吸去沉淀上面的液体，将沉淀
物倒入刻度量筒中，测量沉淀物的容积。
4.2.4 镜检：将沉淀物搅匀，迅速用1ml玻璃吸管吸取0.05和
0.1ml于载玻片，盖以盖玻片,在低倍镜下检查并计算
出总数。
5 计算结果
5.1 用饱和氯化钠溶液离心飘浮法时，5—20g（或ml）样品
中的蛔虫卵，高度集中在滤膜上，在显微镜下计数时容易混乱，因此最好能在显微镜的目镜筒内，装上一枚目镜计数网，利用移动尺有规律的移动，逐渐数完整个滤膜上的全部蛔虫卵数。
5.2 在用水洗沉淀法时，需要准确测定沉淀物的容积，在用玻
璃吸管吸取沉淀以供镜检时，必须搅拌均匀而后取样，而且需要观察若干次，而后取其平均数，从而计算1ml沉
淀物的虫卵数，最后乘以沉淀总容积数，即是100g（或
ml）原始样品的虫卵数。
6 蛔虫卵生活力测定法
6.1 直接镜检法：是根据蛔虫卵在发育过程中所出现的各种形
态，以鉴别其死活。
首先是鉴别受精卵和未受精卵，其次
是鉴别有生活力和失去生活力（变性卵）的受精卵和含有幼虫卵的形态。
有关形态鉴别要点如下：
6.1.1 未受精蛔虫卵的形态：
多为椭圆形，有时呈三菱形或不规则形，大小平均为80-98×40-60um，一般为黄褐色，有时蛋白质发育不全，有时完全失去蛋白质壳，卵内经常充满大大小小油滴状的卵黄细胞。
6.1.2 受精虫卵的形态：
活的受精蛔虫卵的形态，蛋白质壳为黄褐色，脱去蛋白质壳的为无色透明，平均大小为50-70×40-50PM，外层的蛋白质壳也很厚，呈乳状或花纹状突起，卵内有一个球形的卵细胞，卵壳两端和卵细胞之间有半月形的空隙，卵内的卵黄颗粒清晰而致密，死受精蛔虫卵（变性卵）的形态，卵细胞移向一端，致使卵两端呈现有大小不等的半月形空隙。
卵内脂肪变性，形成空泡，很像未受精卵，卵细胞颗粒减少或消失。
卵细胞质浑浊，呈黑色或棕黑色。
卵细胞向不定部位呈球状收缩。
卵壳的一侧或两侧，一端右两端向内凹陷或破裂。
只有蛋白质壳，而缺内容物。
6.1.3 含有活幼虫卵的形态：
虫体的前后部没有颗粒，中部颗粒清晰而有金属光泽，有立体感，镜检时，注视或轻压，可有轻微蠕动，强压后，有时可挤出幼虫。
6.1.4 含有死幼虫卵的形态：
幼虫体内几乎充满颗粒，且模糊不清，无金属光泽，缺乏立体感，镜检时注视之，久久不见蠕动，稍稍加热或轻压，不会蠕动，强压时，虽能挤出幼虫，但也不改变其原来的卷曲状态。
以上所列是死活蛔虫卵的一般形态，在镜检中有时会遇到外形发生变化的畸形活卵和各种形态的未受精卵，其它寄生虫卵，以及容易误认为寄生虫卵的异物。
6.2 滤膜培养法：
把上述通过饱和氯化钠溶液离心飘浮后（4.1）收集在滤膜上的蛔虫卵，经过计数后，直接用来培养测定蛔虫卵生活力，称为培养法。
6.2.1 在φ10-12cm的平皿底部平铺一层约1cm的脱脂棉，脱脂棉上铺一张直径与平皿等大的滤纸。
加入2-3%甲醛溶液或甲醛生理盐水，以湿透滤纸和脱脂棉。
把含卵滤膜平铺在皿中滤纸上，加盖，放在25±1℃的恒温箱中培养一个月，经常加清水或2-3%的甲醛溶液，使滤膜保持潮湿状态。
6.2.2 培养一个月后取出滤膜置于载片上，滴加50%甘油溶液，使其透明后，在低倍镜下查找蛔虫卵，然后在高倍镜下，根据形态，鉴定卵的死活，并加以计数，在载玻片上滴1-2小滴30%安替福尼液，蛔虫卵外面的蛋白质壳很快被溶解掉，内
部构造便于观察。
凡含有幼虫的，都认为是活卵，其它阶段的或单细胞的，都判为是死卵。
7 备注
(1)采样后如不能及时检测,需滴加35%福尔马林(或3%盐酸溶液)进行防腐,加盖后放置冰霜中。
参考文献
〔1〕堆肥蛔虫卵集卵法（GB7959-87 附录B）
〔2〕《实用医学检验学》上海科学技术出版社 2000.4。
