实训八 病毒的鸡胚接种技术

病毒的鸡胚培养一、目的掌握病毒鸡胚接种、收获、HA试验方法和原理二、实验内容1、种蛋选择、消毒与孵化：种蛋为健康未免疫ND疫苗、受精率为90﹪以上的新鲜种蛋。

15g高锰酸钾、30mL甲醛/m3熏蒸消毒30分钟，气室向上38.5-39℃孵化，相对湿度60-70%。

每2小时翻番一次。

2、画蛋与打孔：孵化9-11日龄鸡胚，暗室内画出气室边缘和胚头位置。

于胚头一侧气室边缘上方0.5cm处打孔。

3、接种与封孔：NDV Lasota种毒以灭菌生理盐水作一定倍数稀释（20倍）,尿囊腔内接种0.1ml/胚，以融化的石蜡封孔，继续孵化，不翻蛋。

每日照蛋一次，弃去72h内死亡鸡胚。

至120h全部取出于4℃冰箱过夜。

4、收毒：无菌操作打开气室部位蛋壳，撕开壳膜、尿囊膜和羊膜,吸出尿囊液，观察鸡胚肉眼变化。

5、HA效价测定：原理。

1%鸡RBC制备：采取3只青年公鸡血液，抗凝，以生理盐水离心洗涤3次，制成1%RBC悬液。

血凝试验按下表操作。

病毒鸡胚培养病毒培养可用动物接种、鸡胚培养和组织培养法。

鸡胚接种培养是病毒学的重要方法之一，来自禽类的病毒，均可在鸡胚中繁殖，哺乳动物的病毒如蓝舌病病毒、流感病毒等也可在鸡胚中增殖。

目前鸡胚尤其是SPF、鸡胚被广泛利用于分离病毒、制造疫苗和抗原等，其来源丰富，操作简便。

除病毒外，衣原体、立克次氏体也可用鸡胚来培养，衣原体可在鸡胚卵黄囊繁殖，致死鸡胚；部分立克次氏体也可在卵黄囊中繁殖。

[目的要求](1)掌握鸡胚的孵化过程和不同日龄鸡胚的接种途径和接种方法。

(2)掌握新城疫病毒在鸡胚尿囊腔增殖过程，掌握接毒和收毒的方法。

[实验材料]白壳鸡胚、孵化箱、1mL注射器、蛋架、新城疫工系和Ⅱ系弱毒苗等。

[实验准备]1．鸡胚的选择和孵化应选健康无病鸡群或SPF鸡群的新鲜受精蛋。

为便于照蛋观察，以来航鸡蛋或其他白壳蛋为好。

用孵卵箱孵化，要特别注意温度、湿度和翻蛋。

孵化条件一般选择相对湿度为60％，最低温度36℃，一般37．5℃。

鸡胚接种实验步骤
鸡胚接种实验是一种常用于研究病毒感染和疫苗研发的方法。

以下是一般的鸡胚接种实验步骤：
1. 准备工作：
- 确保实验室卫生条件良好，并进行必要的消毒处理。

- 准备所需材料，包括鸡蛋（受精后的鸡蛋）、病毒样品或疫苗、适当的培养基等。

2. 取出鸡蛋：
- 使用无菌器具将鸡蛋从孵化器中取出。

- 用消毒剂擦拭鸡蛋表面，确保表面无菌。

3. 制备操作区域：
- 在实验室台面上准备一个无菌操作区域。

- 使用无菌器具将所需工具（如注射器、刀片）摆放在操作区域上。

4. 接种操作：
- 在无菌操作区域上，使用无菌器具在鸡蛋的空气室区域确定一个合适的接种点。

- 使用无菌注射器将病毒样品或疫苗注入鸡蛋内。

- 注意避免对鸡蛋内的胚胎造成机械损伤。

5. 封蛋：
- 使用无菌聚乙烯封膜或其它适当的封蛋材料将接种点封住，以防止污染和脱水。

6. 孵化：
- 将接种后的鸡蛋放回孵化器中，并根据所研究的病毒或疫苗的特性设定合适的温度和湿度。

- 根据实验需求，确定孵化时间，通常为数天至数周。

7. 结果观察：
- 在孵化结束后，取出鸡蛋，观察胚胎的发育情况。

- 根据研究的目的，可以进行进一步的分析、检测和测量。

需要注意的是，鸡胚接种实验需要在合适的实验室条件下进行，严格遵守实验室安全操作规范，并获得相关机构的许可和伦理审批。

此外，具体的实验步骤可能会因研究目的和病原体的不同而有所变化，所以在进行实验前最好参考相关的专业文献或咨询专业人士。

一、实验目的1. 掌握鸡胚接种病毒的方法和步骤。

2. 了解病毒在鸡胚中的生长和繁殖情况。

3. 学习病毒分离和培养的基本原理。

二、实验原理鸡胚接种是一种常用的病毒分离和培养方法。

病毒接种于鸡胚后，能够在鸡胚中繁殖，从而便于观察和分析病毒的生物学特性。

本实验主要采用尿囊腔接种法，将病毒接种于鸡胚尿囊腔内，观察病毒在鸡胚中的生长和繁殖情况。

三、实验材料1. 实验动物：9-11日龄的鸡胚。

2. 实验试剂：新城疫病毒悬液、生理盐水、碘酒、酒精、消毒棉球等。

3. 实验仪器：照蛋器、无菌手术刀、镊子、注射器、剪刀、平皿等。

四、实验方法1. 鸡胚准备：取9-11日龄的鸡胚，用碘酒和酒精消毒鸡胚蛋壳，用手术刀在鸡胚气室处划一小孔，用注射器吸取适量新城疫病毒悬液。

2. 尿囊腔接种：将鸡胚置于卵盘上，气室端向上，用注射器将病毒悬液注入鸡胚尿囊腔内，注入量约为0.1-0.2ml。

3. 孵育：将接种后的鸡胚放入37℃孵卵箱中孵育48-72小时。

4. 观察：定期观察鸡胚的生长发育情况，记录死亡、畸形等现象。

5. 病毒分离：取出死亡鸡胚，无菌操作下取出尿囊液，进行病毒分离和培养。

五、实验结果1. 接种后，部分鸡胚出现死亡现象，死亡时间集中在接种后24-48小时。

2. 死亡鸡胚的尿囊液中检测到新城疫病毒。

3. 成活鸡胚生长发育正常，未出现明显异常。

六、实验讨论1. 鸡胚接种是一种简单、有效的病毒分离和培养方法，适用于多种病毒的研究。

2. 尿囊腔接种法是一种常用的鸡胚接种方法，适用于新城疫病毒、流感病毒等多种病毒。

3. 本实验结果表明，新城疫病毒能够在鸡胚中繁殖，为新城疫病毒的研究提供了有力支持。

七、实验结论1. 鸡胚接种是一种简单、有效的病毒分离和培养方法。

2. 尿囊腔接种法适用于新城疫病毒等多种病毒的分离和培养。

3. 本实验成功分离和培养了新城疫病毒，为新城疫病毒的研究提供了有力支持。

八、实验心得1. 实验过程中，无菌操作至关重要，需严格按照无菌操作规程进行。

病毒鸡胚接种技术心得体会
作为一种常见的病毒检测方法,病毒鸡胚接种技术可能有以下心得体会：
1. 病毒鸡胚接种技术需要实验室条件比较高,需要专门的实验室和专业的人员进行操作,操作过程需要严格遵守操作规程和安全规范。

2. 接种病毒前需要对鸡胚进行充分的检测,确保鸡胚的质量符合要求,否则会影响实验结果。

3. 操作过程中需要注意实验器材的消毒,避免污染和交叉感染的发生。

4. 实验中需要对病毒的种类进行合理的分类和识别,以便进行正确的对照实验,确保实验结果的正确性。

5. 在实验评价中,需要严格按照规范进行评价,对实验结果进行定量化处理和对比分析,以便有效地评估实验数据。

总之,病毒鸡胚接种技术需要严格遵守相关规范和操作规程,进行细致的实验操作和数据分析,以确保实验结果的可靠性和科学性。

鸡胚接种实验报告引言鸡胚接种实验是一种常见的生物学实验，通过将病毒或细菌接种于鸡胚中，我们可以观察到它们对胚胎发育的影响。

这种实验能够帮助我们了解病原体的传播途径、感染机制以及鸡胚对外界刺激的响应能力。

本文将就鸡胚接种实验的过程和观察结果展开论述，以期更好地了解和探索生命的奥秘。

实验材料和方法材料：新鲜鸡胚、病毒/细菌培养液方法：1. 准备培养基：将培养基配制好，并加热灭菌。

2. 取出鸡胚：在无菌条件下，取出新鲜的鸡胚，约为8-10天，保证胚胎仍处于发育阶段。

3. 接种病原体：在鸡胚卵黄囊的顶部，用无菌针缓慢注入病原体培养液。

4. 封胚：用胶带或蜡封好孔洞，保持接种处的无菌状态。

5. 孵化：将接种后的鸡胚放入孵化器中，保持适当的温度和湿度。

6. 观察：根据实验设计，每隔一段时间观察鸡胚的发育情况。

实验结果通过观察病原体接种后的鸡胚，我们可以得出一些有趣的结果。

1. 反应变化：不同病原体对鸡胚的反应变化具有差异。

一些病原体可能导致胚胎发育减缓或停滞，而另一些病原体可能导致胚胎畸形或死亡。

这些结果提供了关于病原体对于胚胎发育的影响的线索。

2. 免疫响应：鸡胚对病原体的接种可能会触发免疫响应。

我们可以观察到鸡胚的免疫系统是否能够有效地对抗病原体的入侵。

免疫细胞的增多、炎症反应的出现都可能是这一免疫响应的体现。

3. 病变形态：观察鸡胚的病变形态对于了解病原体的感染机制和病变过程非常重要。

我们可以观察到病原体在鸡胚中的定位、侵入细胞的方式以及细胞破坏的情况。

这些观察结果有助于研究病原体的致病机制，并为预防和治疗提供依据。

4. 实验变量：在鸡胚接种实验中，还可以引入一些实验变量，比如改变接种浓度、不同时间点的接种等，以观察这些变量对实验结果的影响。

通过对变量的控制和对比，可以更加准确地判断病原体对鸡胚的影响。

结论鸡胚接种实验是一种有效的方法，可以研究病原体与胚胎发育之间的关系。

通过观察鸡胚的发育情况和病变形态，我们可以了解病原体的感染机制以及胚胎对外界刺激的响应能力。

鸡胚的接种技术-养鸡技术张师杨（哈尔滨市阿城区畜牧兽医局150000）鸡胚接种技术用途广泛，除了可以分离培养病毒、支原体及衣原体等病原以确诊传染病外，还可用于病毒的鉴定，效价测定，致病力测定及制造疫苗、抗原等。

因此掌握鸡胚接种技术对进行传染病的研究和防制工作非常重要。

1选胚根据需要选用合适日龄的鸡胚，大多数病毒适于9～12日龄的鸡胚。

鸡胚应以白色蛋壳者为好，便于照蛋观察。

鸡胚应发育正常，健康活泼，不要过大、过小或畸形蛋孵化的胚。

鸡胚应来自健康无病的鸡群，而且不能含有可抑制所接种病毒的母源抗体，最好选用SPF鸡胚或非免疫鸡胚。

2. 照蛋定位接种前应在照蛋器下检查鸡胚，挑出死胚和弱胚。

对所有健康胚应先用红铅笔画出气室位置，再于胚胎侧画出接种位点（进针点），接种点应避开大血管，靠近气室边缘处，离胚头约1cm左右[养殖:/]。

3 接种照蛋定位完毕后，即可开始接种。

先用碘酊将接种位点和气室消毒，再用70%酒精脱碘，然后根据需要用三棱针或20号针头在蛋壳上打孔。

尿囊腔接种：最常用的接种方法，鸡新城疫、减蛋综合症病毒、传染性支气管炎病毒、法氏囊病毒等均可采用这种方法。

蛋壳消毒后，先在气室上打一小孔，再于胚胎一侧近气室处所画位点打一小孔，用带5～7号针头的注射器插入孔内约1. 5cm，接种接种材料0. 1～0.2mL。

进针时针头与蛋壳应保持30℃角，不应垂直进针，注射完毕，立即用溶化的热石蜡将注射口和气室上小孔密封，然后放回37℃孵化箱孵化72～120h。

绒毛尿囊膜接种：主要用于痘病毒、喉气管炎病毒和马立克氏病毒等的分离培养。

将卵壳消毒后，先在气室上打一小孔，再于胚胎侧靠近气室处避开大血管用电烙铁或钢锯条将蛋壳打开1个4mm见方的小口，用刀尖小心撬开蛋壳，不能损伤卵壳膜，形成卵窗。

用针尖轻轻挑破卵窗中心的卵壳膜，但不能损伤卵壳膜下的绒毛尿囊膜。

在针尖挑破处滴1滴灭菌生理盐水或甘油，然后用吸头在气室小孔上吸气，使胚内造成负压，这时卵窗处绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室，此时可见生理盐水或甘油迅速渗入。

一、实验目的1. 掌握鸡胚尿囊腔接种的基本操作技术。

2. 熟悉鸡胚尿囊腔接种在病毒分离与培养中的应用。

3. 了解鸡胚尿囊腔接种对病毒分离与培养的重要性。

二、实验原理鸡胚尿囊腔接种是一种常用的病毒分离与培养方法。

该法利用鸡胚尿囊腔作为病毒培养的场所，使病毒在尿囊腔内繁殖，从而获得病毒培养物。

鸡胚尿囊腔接种适用于多种病毒，如新城疫病毒、流感病毒等。

三、实验材料1. 9-11日龄健康鸡胚。

2. 病毒悬液（如新城疫病毒、流感病毒等）。

3. 无菌操作工具：无菌镊子、无菌剪刀、无菌注射器、无菌吸管、无菌培养皿、无菌滤纸等。

4. 无菌消毒剂：碘酊、酒精棉球等。

5. 温箱、孵化箱等。

四、实验步骤1. 鸡胚准备- 将鸡胚置于温箱中孵化，保持温度37.5-38.0℃，湿度60-70%。

- 在孵化过程中，每日翻动鸡胚2-3次，以防止粘连。

- 在孵化第5-6天，用照蛋器检查鸡胚发育情况，挑选发育良好的鸡胚。

2. 病毒悬液准备- 将病毒悬液置于无菌操作台中，用无菌吸管吸取适量病毒悬液。

3. 鸡胚尿囊腔接种- 将鸡胚取出，用无菌滤纸吸去表面水分。

- 在鸡胚气室部位，用碘酊和酒精棉球进行消毒。

- 用无菌剪刀在鸡胚气室部位剪一小孔，露出尿囊。

- 用无菌注射器吸取病毒悬液，注入尿囊腔内。

- 用无菌滤纸吸去多余病毒悬液。

4. 鸡胚孵育- 将接种后的鸡胚放回孵化箱中，继续孵化。

- 每日观察鸡胚的生长发育情况，记录死亡、病变等。

5. 收获病毒- 在接种后48-72小时，取出死亡鸡胚。

- 用无菌剪刀剪开鸡胚气室部位，撕去卵壳膜。

- 用无菌吸管吸取尿囊液，进行病毒分离与培养。

五、实验结果与分析1. 鸡胚尿囊腔接种成功后，大部分鸡胚在接种后48-72小时内死亡。

2. 死亡鸡胚尿囊腔内可见病毒繁殖的典型病变，如尿囊液增多、尿囊膜增厚等。

3. 收获的尿囊液经病毒分离与培养，可得到纯化的病毒。

六、实验总结1. 鸡胚尿囊腔接种是一种简单、实用的病毒分离与培养方法，适用于多种病毒。