医学课件新城疫病毒的鸡胚培养和病毒滴度检测
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实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测篇一:实验五十动物病毒的鸡胚培养实验五十一动物病毒的鸡胚培养三、器材1(病毒痘苗病毒(Vaccinia virus),鸡新城疫病毒(Necastle distase virus)。
2.仪器或其他用具孵卵器,检卵灯,齿钻,磨壳器,钢针,蛋座木架,注射器,2.5,碘酒,70,乙醇,镊子,剪刀,封蜡(固体石蜡加1,4凡士林,溶化),灭菌培养板,灭菌盖玻片等。
3.白壳受精卵 (自产出后不超过10d,以5d以内的卵为最好)。
四、操作步骤1(准备蛋胚孵育前的鸡卵先用清水以布洗净,再用干布擦干,放入孵卵器内进行孵育(37?,相对湿度是45%~60%),孵育3d后,鸡卵每日翻动1~2次。
孵至第4d,用检卵灯观察鸡胚发育情况,未受精卵,只见模糊的卵黄黑影,不见鸡胚的形迹,这种鸡卵应淘汰。
活胚可看到清晰的血管和鸡胚的暗影,比较大一些的可以看见胚动,随后每日观察一次,将胚动呆滞的或没有运动的、血管昏暗模糊者,即可能是已死或将死的鸡胚,要随时加以淘汰。
生长良好的蛋胚一直孵育到接种前,具体胚龄视所拟培养的病毒种类和接种途径而定。
鸡卵孵化期间,箱内应保持新鲜空气流通,特别是孵化5~6d后,鸡胚发育加快,氧气需要量加大,空气供应不足,会导致鸡胚大量死亡。
2.接种(1)绒毛尿囊膜接种?将孵育10~12d的蛋胚放到检卵灯上,用铅笔勾出其实与胚胎略近气室端的绒毛尿囊膜发育的好的地方。
?用碘酒消毒气室顶端与绒毛尿囊膜记号处,并用磨壳器或齿钻在记号处的卵壳上磨开一三角形或正方形(每边约5~6mm)的小窗,不可弄破下面的壳膜。
在气室顶端钻一小孔。
?用小镊子轻轻揭去所开小窗处的卵壳,露出壳下的壳膜,在壳膜上滴一滴生理盐水,用针尖小心地划破壳膜,但注意切勿伤及紧贴在下面的绒毛尿囊膜,以利两膜分离。
?用针刺破其实小孔处的壳膜,再用橡皮乳头吸出气室内的空气,是绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室(图?—4)。