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血管内皮抑制素研究进展江苏南京大学医学院临床学院王轩综述刘福坤黎介寿审校年美国哈佛大学医学院［］教授在实验中发现一有趣现象：将黑色素瘤细胞注射进被抽干血液的甲状腺，结果黑色素瘤一直只有笔尖大，但一旦肿瘤与血管相通，肿瘤体积在周内快速增大至余倍。
根据这一现象，首先提出恶性肿瘤生长和转移依赖于肿瘤新生血管的新观点，由此开创了肿瘤血管形成和抗血管治疗的研究［］。
在随后人们对转移肿瘤进行研究时也发现，当直径很小的微转移灶内瘤组织处于无血管生成的血管前期时，微小转移灶内瘤细胞增殖与凋亡速度处于平衡，微小转移灶可长期处于休眠期，而一旦肿瘤血管系统在转移灶内形成，则瘤细胞增殖与凋亡平衡被打破，肿瘤体积在短时间内快速增大。
现已证实，在肿瘤生长过程中，存在持续而失控的血管生成。
新生血管不仅为肿瘤生长提供营养和排泄代谢产物，还为其转移提供通道。
在肿瘤直径大于或时，如仍无充分血管供给营养，肿瘤细胞将停止生长或死亡。
因此，抑制肿瘤新生血管形成，促使肿瘤细胞进入休眠状态或诱发凋亡是治疗肿瘤的有效途径之一。
众所周知，在肿瘤新生血管形成过程中有多种因素参与调节，既有神经内分泌因素影响，又有肿瘤细胞和肿瘤基质细胞分泌因子的调控。
其中由肿瘤细胞分泌的碱性成纤维生长因子（）和血管内皮生长因子（）是主要促血管生长刺激因子，而抑制血管生长的因子主要有：干扰素（!／"）、白介素（）、血小板因子（）、内皮抑制素（）及血管抑制素（）等［］。
在众多的血管抑制因子中，近年发现的内皮抑制素无疑是最引人注目的，实验表明其抑制血管生成活性最强，毒副作用最轻，是目前较有希望成为新一代抗肿瘤药物的代表。
!内皮抑制素的发现及结构特点年，和在研究肺癌时，从移植肺癌小鼠血清和尿液中分离，纯化出一种分子量为的蛋白，具有亲肝素和赖氨酸特性，能强烈抑制血管内皮细胞增殖和迁移，故被命名为血管抑制素。
年他们采用相同的技术路线，在鼠血管内皮细胞瘤（）培养物中提取出一种分子量为的新的血管生成抑制因子，其抑制血管内皮细胞增殖能力是已发现血管抑制素的数倍。
重组人血管内皮抑素联合化疗治疗乳腺癌的实验研究张玮，潘月龙*(浙江省杭州市第一人民医院肿瘤化疗科，杭州 310006)摘要：目的研究重组人血管内皮抑素联合化疗方案对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的治疗效应，并进一步探讨其抑制肿瘤血管生成的作用机制。
方法将乳腺癌荷瘤裸鼠40只随机分为4组，分别为化疗组、内皮抑素组、联合用药组及对照组。
化疗组给予长春瑞滨和顺铂；内皮抑素组给予重组人血管内皮抑素；联合用药组给予长春瑞滨，顺铂，和重组人血管内皮抑素；对照组给予等量的生理盐水。
给药期间测量肿瘤大小，实验结束取肿瘤称重，计算肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线并比较各组的抑瘤率。
免疫组化方法检测各组肿瘤组织微血管密度(MVD)，VEGF，HIF-1α及P53的表达。
结果联合用药组抑瘤率为64.63％，化疗组抑瘤率为35.47％。
联合用药组与其他3组MVD计数比较明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)。
与对照组及化疗组相比，联合用药组的VEGF、HIF-1α和P53的表达均明显减少，其差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论重组人血管内皮抑素联合化疗能够有效控制裸鼠乳腺肿瘤生长，降低肿瘤MVD，其机制可能为下调VEGF及HIF-1α的表达。
内皮抑素对P53的作用机制有待于更进一步的研究。
关键词：乳腺癌；重组人内皮抑素；化疗；血管内皮生长因子；HIF-1α；P53中图分类号：R969.4 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2011)12-1085-06Recombinant Human Endostatin Combined with Vinorelbine-cisplatin Chemotherapy in Treatment of Human Breast Cancer Xenograft in Nude MiceZHANG Wei, PAN Yuelong*(Deparment of Oncology, Hangzhou First People’s Hospital, Hangzhou 310006, China) ABSTRACT:OBJECTIVE To investigate the anti-angiogenesis and tumor inhibitory effects of recombinant human endostatin(rhES) combined with vinorelbine-cisplatin chemotherapy(NP regimen) on xenograft tumors in nude mice of human breast carcinoma cell MDA-MB-435S. METHODS Forty xenograft nude mice were randomized into 4 groups: NP group (vinorelbine and cisplatin), rhES group (rhES), rhES+NP group(combined treatment as above-mentioned), and control group (normal saline). Inhibitory rate of xenograft and tumor growth curve was calculated and plotted. MVD, VEGF, HIF-1α and P53 were measured by immunohistochemistry. RESULTS Tumor inhibition rate of the rhES+NP group was 64.63%, but that of the NP group was 35.47%. Compared with the other 3 groups, MVD of the rhES+NP group significantly reduced, the difference was statistically significant (P<0.05). HIF-1α, VEGF and P53 of the rhES+NP group was significantly lower than of the control group and the NP group, the difference was statistically significant(P<0.05). CONCLUSION Experiments show that rhES combined with NP regimen can effectively control the tumor growth and decrease tumor MVD in nude mice, which may down-regulated the expression of VEGF and HIF-1α. The mechanism of rhES on P53 needs further study.KEY WORDS: breast cancer; recombinant human endostatin; chemotherapy; VEGF; HIF-1α; P5320世纪70年代，Folkman教授提出了关于肿瘤生长依赖血管发生的假设，早期肿瘤生长不依赖血管供应，但当瘤块直径>1~2 mm时，即可分泌肿瘤血管发生因子，引起血管内皮细胞增殖、迁移，在瘤块内形成新生血管，使肿瘤继续生长和转移。
重组人血管内皮抑制素联合贝伐珠单抗体内抑瘤作用的效果及分析牛牛;李宝兰;刘朝阳;胡瑛;李雪冰;李杰;史鹤龄;张海清【摘要】Background and objective The aim of this study is to investigate difference of antiangiogenesis ablility and interaction about bevacizumab and endostatin in vivo in lung cancer animal model. Methods First, we construct a Balb/c mice model with A549 lung adenocarcinoma cell. Then, we divide the mice into four groups randomly. Every group has six mice. Control group: mice injected with normal saline every day aroud the tumor. Endostatin group: mice injected with endostatin (Recombinant endostatin) injection (3 mg/kg) every day Peritumoral. Bevacizumab group: mice injected with bevacizumab twice a week (biw/5 mg/kg) Peritumoral. Combing group: mice were injected with endostatin and bevacizumab (dose just like single drug group). After 16 days, we executed mice and got the tumor tissue for next analysis. Results Based on this experiment, we found bevacizumab and endostatin expressed the ability for inhibiting tumor growth in vivo. Bevacizumab was more powerful (52.36% vs 38.68%). Combining bevacizumab with endostatin could get better results (64.15%) than single drug did. Bevacizumab played the role by inhibiting VEGF-A expression (60.8%). Endostatin took effect by inhibiting VEGF-A/C (14.6%, 30.3%). Combining group present better antitumor efficacy than any single drug group did. (79.7%, 44.2%). Conclusion Both bevacizumab and endostatin present the antiangiogenesis ability in vivo of lung canceranimal model. In our test, bevacizumab show better ability in inhibiting tumor growth than endostatin does. Additional, combing bevacizumab with endostatin reveal better potential to inhibit tumor growth than single drug does.%背景与目的研究重组人血管内皮抑制素和贝伐珠单抗在体内对肺腺癌抑制作用的差别及联合用药的效果.方法首先建立A549肺腺癌细胞系的荷瘤Balb/c小鼠动物模型,然后将小鼠随机分为4组,对照组使用普通生理盐水每日瘤周注射.重组人血管内皮抑制素治疗组使用重组人血管内皮抑素(3 mg/kg)每日瘤周注射连续16天贝伐珠单抗治疗组使用贝伐珠单抗(5 mg/kg)每周两次瘤周注射给药.贝伐珠单抗、重组人血管内皮抑制素联合用药组使用贝伐珠单抗(5 mg/kg)每周两次瘤周注射给药+重组人血管内皮抑素(3mg/kg)每日瘤周注射给药.治疗16天后处死所有实验鼠切取肿瘤标本比较实体瘤大小,采用Western blot的方法检测血管内皮生长因子A和C(vascular endothelial growth factor/VEGF-A,C)在各组表达情况的差异.结果重组人血管内皮抑制素和贝伐珠单抗在体内实验中均表现出了抑制肿瘤生长的作用,贝伐珠单抗作用更加明显(52.36％vs 38.68％).联合使用可获得更好的效果(64.15％).贝伐珠单抗只对VEGF-A有抑制作用(60.8％),重组人血管内皮抑制素对VEGF-A/C都有抑制作用(14.6％,30.3％).联合用药组对VEGF-A/C 的抑制作用最强(79.4％,44.2％).结论重组人血管内皮抑制素和贝伐珠单抗都在裸鼠动物模型试验中表现出了明显的抑瘤效果,联合使用抑制肿瘤效果更加明显.恩度对肿瘤组织内VEGF-A/C都表现出了抑制作用贝伐珠单抗对VEGF-A表现出了较明显的抑制作用联合用药组对VEGF-A/C抑制作用更加明显.【期刊名称】《中国肺癌杂志》【年(卷),期】2013(016)002【总页数】6页(P61-66)【关键词】肺肿瘤;抗血管治疗;重组人血管内皮抑制素;贝伐珠单抗【作者】牛牛;李宝兰;刘朝阳;胡瑛;李雪冰;李杰;史鹤龄;张海清【作者单位】101149北京,北京市结核病胸部肿瘤研究所,首都医科大学附属北京胸科医院综合科;101149北京,北京市结核病胸部肿瘤研究所,首都医科大学附属北京胸科医院综合科;100021北京,中国医学科学院肿瘤研究所生物检测中心;101149北京,北京市结核病胸部肿瘤研究所,首都医科大学附属北京胸科医院综合科;101149北京,北京市结核病胸部肿瘤研究所,首都医科大学附属北京胸科医院综合科;101149北京,北京市结核病胸部肿瘤研究所,首都医科大学附属北京胸科医院综合科;101149北京,北京市结核病胸部肿瘤研究所,首都医科大学附属北京胸科医院综合科;101149北京,首都医科大学附属北京胸科医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R734.2自20世纪70年代Folkman教授[1]提出肿瘤生长和转移依赖于肿瘤内部新生血管的观点后，很多研究一直致力于通过阻断肿瘤新生血管形成来达到治疗肿瘤的目的。
IL--24联合顺铂对人宫颈癌裸鼠移植瘤抑制及化疗增敏作用的探究的开题报告一、研究背景宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，其发生率和死亡率较高。
虽然化疗在宫颈癌治疗中已经得到了广泛应用，但是单独使用化疗药物往往存在一定的限制性。
因此，寻找新的治疗方法以及提高化疗药物的疗效逐渐成为研究热点。
IL-24是一种由基因转录发挥抗癌作用的蛋白质。
研究表明，IL-24可通过诱导凋亡、抑制细胞增殖及转化等作用抑制多种肿瘤细胞的生长。
在实验室中，联合使用化疗药物往往能够提高IL-24的逆转化作用，从而达到更好的治疗效果。
二、研究目的本研究旨在探究IL-24联合顺铂对人宫颈癌裸鼠移植瘤抑制及化疗增敏作用。
三、研究内容1.建立宫颈癌裸鼠移植瘤模型。
选取一定数量的会阴部显微手术建立人宫颈癌裸鼠移植瘤模型。
2.对照组和实验组。
将宫颈癌裸鼠移植瘤的裸鼠随机分为对照组和实验组。
两组均给予顺铂治疗，并在顺铂治疗后24小时内实验组注射IL-24，对照组注射生理盐水。
3.观察瘤体生长。
观察两组裸鼠移植瘤在化疗过程中的生长情况，记录瘤体大小变化及生长曲线。
4.瘤体细胞凋亡率检测。
采用免疫荧光染色法检测两组裸鼠瘤体细胞凋亡率，揭示两者可能存在的差异。
5.免疫组化检测。
用免疫组化法检测裸鼠瘤体中IL-24、PCNA、Bcl-2、Bax等相关蛋白的表达。
四、研究意义本研究将探究IL-24联合顺铂对宫颈癌治疗的作用机制，为宫颈癌治疗提供新的思路和方法。
同时，该研究还有助于深刻理解IL-24与化疗药物联用的治疗机制。
D O I:10.3781/j.i s s n.1000-7431.2010.11.005B a s i c R e s e a r c h·基础研究放疗联合周剂量重组人血管内皮抑素对A549肺腺癌裸鼠移植瘤生长抑制作用的研究蒋晓东1,2,戴 鹏2,吴 瑾2,宋大安2,于金明3(1.天津医科大学研究生院,天津 300021;2.连云港市第一人民医院肿瘤科,连云港 222002;3.山东省肿瘤医院放射治疗科,济南 250117)[摘要] 目的:研究放疗联合周剂量重组人血管内皮抑素(r e c o m b i n a n t h u m a n e n d o s t a t i n,r h-E n d o s t a t i n)对肺腺癌A549裸鼠移植瘤生长的抑制作用。
方法:40只裸鼠A549细胞移植瘤模型随机分成4组:空白对照组、r h-E n d o s t a t i n治疗组、放射治疗组和放疗联合r h-E n d o s t a t i n治疗组,观察并绘制肿瘤生长曲线图,计算肿瘤体积抑制率;肿瘤组织行常规H E病理学检查,免疫组织化学法检测肿瘤组织中微血管内皮C D31的表达及肿瘤微血管密度(m i c r o v e s s e l d e n s i t y,M V D)的变化;采用免疫组织化学及W e s t e r n印迹法检测血管内皮生长因子(v a s c u l a r e n d o t h e l i a l g r o w t hf a c t o r,V E G F)的表达;T U N E L法检测肿瘤细胞的凋亡。
结果:治疗第8天起,放疗联合r h-E n d o s t a t i n治疗组的肿瘤体积与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。
15d后,r h-E n d o s t a t i n治疗组、放射治疗组和放疗联合r h-E n d o s t a t i n治疗组小鼠的肿瘤体积的抑制率依次为68.35%、90.78%和106.56%;r h-E n d o s t a t i n治疗组小鼠的M V D较放射治疗组下降明显(P<0.05);但r h-E n d o s t a t i n治疗组与对照组、放疗联合r h-E n d o s t a t i治疗组及放射治疗组相比,V E G F的改变差异均无统计学意义;放疗联合r h-E n d o s t a t i n治疗组细胞凋亡明显。
结论:放疗联合周剂量r h-E n d o s t a t i n能抑制肿瘤的生长,较早诱导肿瘤退缩,可能与减少放射治疗后肿瘤血管再生及增加肿瘤细胞和内皮细胞的凋亡相关;各治疗组小鼠均未出现急性不良反应,因此该方法具有短疗程的优势,可用于临床推广。
[关键词] 癌,非小细胞肺;血管抑制蛋白质类;动物实验;小鼠,裸;A549细胞[中图分类号] R734.2 [文献标志码] A [文章编号] 1000-7431(2010)11-0917-07I n h i b i t o r y e f f e c t s o f r a d i o t h e r a p y c o m b i n e dw i t hw e e k l y a p p l i c a t i o no f r e c o m b i n a n t h u m a ne n d o s t a t i no nt h e h u-m a np u l m o n a r y a d e n o c a r c i n o ma A549x e n o g r a f t s i nn u d e mi c eJ I A N GX i a o-d o n g1,2,D A I P e n g2,W UJ i n2,S O N GD a-a n2,Y UJ i n-m i n g3 (1.G r a d u a t e S c h o o l,T i a n j i n M e d i c a l U n i v e r s i-t y,T i a n j i n300021,C h i n a;2.D e p a r t m e n t o f O n c o l o g y,L i a n y u n g a n g F i r s t P e o p l e's H o s p i t a l,L i a n y u n g a n g222002,C h i n a;3.D e p a r t m e n t o f R a d i a t i o n O n c o l o g y,S h a n d o n g C a n c e r H o s p i t a l,J i n a n250117,C h i n a)[A B S T R A C T] O b j e c t i v e:T o i n v e s t i g a t e t h e i n h i b i t o r y e f f e c t s o f r a d i o t h e r a p y c o m b i n e dw i t hw e e k l y a p p l i c a t i o no f r e c o m b i n a n t h u-m a ne n d o s t a t i n(r h-E n d o s t a t i n)o nt h e g r o w t h o f h u m a n p u l m o n a r y a d e n o c a r c i n o m a A549x e n o g r a f t s i n n u d e m i c e.Me t h o d s:T h e x e n o-g r a f t e d m o d e l o f A549c e l l s w a s e s t a b l i s h e d i nn u d e m i c e.T h e40n u d e m i c e w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o4g r o u p s:c o n t r o l g r o u p,s i n g l e r h-E n d o s t a t i ng r o u p,s i n g l e r a d i o t h e r a p y g r o u p,a n d r a d i o t h e r a p y p l u s r h-E n d o s t a t i n.T h e s e n u d e m i c e w e r e o b s e r v e d f o r15d.T u m o r g r o w t h c u r v e w a sd r a w n,t u m o r v o l u m ei n h i b i t i o nr a t ew a s c a l c u l a t e d,a n dH Ep a t h o l o g i c a l e x a m i n a t i o nw a s p e r f o r m e d.T h eC D31 e x p r e s s i o na n d m i c r o v e s s e l d e n s i t y(M V D)o f t u m o r t i s s u e s w e r e d e t e r m i n e d u s i n g i m m u n o h i s t o c h e m i c a l m e t h o d.T h e e x p r e s s i o n o f v a s-c u l a r e n d o t h e l i a l g r o w t hf a c t o r(V E G F)w a s m e a s u r e du s i n gi m m u n o h i s t o c h e m i c a l m e t h o da n dWe s t e r nb l o t t i n g.T u m o r a p o p t o s i s w a s t e s t e du s i n gT U N E La s s a y.R e s u l t s:T h e t u m o r v o l u m e w a s s m a l l e r i nr a d i o t h e r a p y p l u s r h-E n d o s t a t i ng r o u p t h a nt h a t i nc o n t r o l g r o u p f r o md8a f t e r t r e a t m e n t(P<0.05).O n t h e15t h d a y a f t e r t r e a t m e n t,t h e i n h i b i t o r yr a t e s o f t u m o r v o l u m e w e r e68.35%,90.78%, a n d106.56%i n r h-E n d o s t a t i n g r o u p,r a d i o t h e r a p y g r o u p a n d r a d i o t h e r a p y p l u s r h-E n d o s t a t i nt r e a t m e n t g r o u p,r e s p e c t i v e l y.T h e M V D n u m b e r w a s m a r k e d l y d e c r e a s e di nr h-E n d o s t a t i nt r e a t m e n t g r o u pc o m p a r e d w i t hr a d i o t h e r a p y g r o u p(P<0.05).T h e r e w a s n o s t a t i s t i c a l s i g n i f i c a n c e i n V E G F e x p r e s s i o n b e t w e e n r h-E n d o s t a t i n t r e a t m e n t g r o u p a n d c o n t r o l g r o u p a s w e l l a s b e t w e e n r a d i o t h e-r a p y g r o u p a n d r a-d i o t h e r a p y p l u s r h-E n d o s t a t i n g r o u p(P>0.05).T h e a p o p t o t i c r a t e w a s m a r k e d l y h i g h e r i n r a d i o t h e r a p y p l u s r h-E n d o s t a t i n g r o u p.C o n-c l u s i o n:R a d i o t h e r a p y c o m b i n e dw i t hw e e k l y a p p l i c a t i o no f r h-E n d o s t a t i nc o u l ds i g n i f i c a n t l y i n h i b i t t u m o r g r o w t ha n di n d u c e t u m o r r e-g r e s s i o n a t e a r l y s t a g e,w h i c h m a y b e r e l a t e dt o t h e s u p p r e s s i o n o f a n g i o g e n e s i s a f t e r r a d i o t h e r a p y a n di n d u c i n g a p o p t o s i s o f t u m o r c e l l s a n d e n d o t h e l i a l c e l l s.N o a c u t e a d v e r s e r e a c t i o n w a s o b s e r v e d i n t h e f o u r g r o u p s.I t h a d s h o r t-t e r mb e n e f i t s a n d c o u l d b e a p p l i e d i n c l i n i-c a l p r a c t i c e.[K E YWO R D S] C a r c i n o m a,n o n-s m a l l c e l l l u n g;A n g i o s t a t i c p r o t e i n s;A n i m a l e x p e r i m e n t a t i o n;M i c e,n u d e;A549c e l l s[T u m o r,2010,30(11):917-923][基金项目] 1.江苏省自然科学基金面上项目(编号:b k2009167)2.连云港市科技局资助课题项目(编号:S H0705)C o r r e s p o n d e n c e t o:于金明(Y UJ i n-m i n g) E-m a i l:y u j m w i n@y a h o o.c n 肺癌是发病率和病死率最高的肿瘤之一,每年全世界新诊断病例高达120万例,占全球新诊断癌症的12%,严重危害人类的健康。
