甲苯胺蓝染色

甲苯胺蓝染色渗透试验
1.目的
根据ASTM F1929-2012标准方法采用染色渗透法检测无菌包装封口泄漏性能2.设备及工具、材料
天平（万分之一）10mL注射器，甲苯胺蓝、曲拉通X-100（氚X-1004）、纯化水、烧杯、试管
3.配制方法
3.1.用天平称量0.5g Triton X-100，与20ml纯化水混合，搅拌或摇动容器，混合二者。

待Triton X-100分散后。

再加入纯化水定容至100ml。

3.2.用天平称量0.05g甲苯胺蓝，加入混合了Triton X-100的溶液中,搅拌或摇动容器混合均匀，即成0.05%甲苯胺蓝染色液。

4.试验方法
4.1.把已灭菌产品包装在试验开始之前，放置于大气温度23±2℃（73.4±3.6oF）和相对湿度50±2%环境中进行存贮24小时。

4.2.依据ASTM F1929-2012标准，将足够的染料渗透液注入包装中，覆盖最长的封边，深度约5mm（0.25英寸）（注入方法：可以使用带有软管的注射器通过切口送入染料渗透剂）使染料渗透液与封边保持接触最少5s最多20s的时间，旋转包装使每道封边都能接触渗透液，如有需要可以补充染色液，确保每道封边都能接触足够量的染色液。

通过包装的透明面目力检测密封区，看有无泄漏或者通道出现，也可使用放大镜进行细致的观察。

5.检验标准
在包装透明的一边，用肉眼检测封口区域。

即可看见封口区的通道。

检查染色液有无透过密封区到达另一侧或染色液有无通过确定的通道进入密封区内部的迹象。

6.注意事项
染色渗透液与包装材料封边的作用时间不应超过20秒。

甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)简介：甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。

甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。

另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。

Leagene 甲苯胺蓝染色液(Toluidine Blue,1%,硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液呈强碱性，更利于组织细胞的着色。

组成：操作步骤(仅供参考)：(一)肥大细胞染色1、脱蜡至蒸馏水。

2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液。

3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。

4、冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。

5、快速和无水乙醇脱水。

6、 二甲苯透明，封固。

染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

(二)软骨染色1、 石蜡切片入二甲苯。

2、 系列乙醇各。

3、 自来水洗。

4、 入Toluidine Blue O Stain ，浸染。

5、 自来水洗，滤纸吸干水分。

6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。

7、 逐级乙醇脱水。

编号 名称 DA0059 Storage Toluidine Blue O stain (0.5%,硼酸盐法) 100ml RT 避光 使用说明书 1份8、二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

(三)细胞涂片染色1、用乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释即可。

2、细胞涂片后，立即放入乙醇中固定，取出放在纸巾上。

3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。

4、将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。

5、无需干燥，直接镜检。

PH1040|甲苯胺蓝染色液（软骨专用）
Cartilage Staining Solution with Toluidine Blue
Catalog No：PH1040Size：☐50mL|☐100mL Store at RT
试剂简介
甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料,属于醌亚胺染料类,这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。

甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。

另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。

软骨染色液(甲苯胺蓝法)呈强碱性，更利于软骨组织的着色。

该试剂仅用于科研使用，不得应用于其他领域使用。

试剂存储
常温保存，12个月有效；
使用参考
1、常规脱钙，包埋、固定。

2、石蜡切片入二甲苯2次，每次15min。

3、系列乙醇各1min，自来水洗2min。

4、入软骨染色液，浸染15～20min。

根据不同组织，染色时间不完全相同。

5、自来水洗2min，滤纸吸干水分。

6、丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。

7、逐级乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

注意事项
1、针对于较难着色组织的染色，浸染的时间应相应延长。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

细胞核染色方法及原理
细胞核染色是生物学领域中常用的实验技术之一，用于研究细胞核的结构和功能。

目前常用的细胞核染色方法包括苏木精-
伊红染色法、甲苯胺蓝染色法和荧光染色法等。

苏木精-伊红染色法是最常见的细胞核染色方法之一。

其原理
是将标本固定后，用苏木精染料染亮细胞核，然后用伊红染料染暗胞质细胞器。

染色后的样本可以通过显微镜进行观察。

苏木精主要染色DNA，使细胞核呈现为紫红色，而伊红主要染
色胞质蛋白质，使胞质呈现为粉红色。

甲苯胺蓝染色法主要用于观察细胞核的细胞形态和染色体结构。

其原理是将标本固定后，用甲苯胺蓝染料染色，然后对其进行脱水、透明化等处理，最后用显微镜观察。

甲苯胺蓝染料可以与DNA结合，使细胞核呈现出深蓝色。

荧光染色法是一种利用荧光染料标记细胞核的方法。

其中，常用的荧光染料有荧光素、荧光素同工异构体和DAPI等。

这些
染料可以与DNA结合，在荧光显微镜下观察细胞核。

荧光染
色法可以提供更高的分辨率和更准确的定位信息，常用于细胞核的三维结构研究和基因表达等研究领域。

细胞核染色方法的选择要根据实验的目的和需要来决定，不同的染色方法有不同的优缺点。

细胞核染色的目的是为了更好地观察和研究细胞核的结构、功能和变化，从而揭示细胞核在生物体内扮演的关键角色。

石蜡切片的甲苯胺蓝染色法
方法一
配方：甲苯胺蓝1g 溶于95%酒精100ml ，置60℃温箱中2h后降至室温。

染液于室温下可保存3个月，若放于4℃冰箱则可保存半年左右，但该液的染色效果在早期为最佳，若染液存放时间较长，则染色偏淡，应适应延长染色时间。

1、脱蜡至蒸馏水。

2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液20～30min。

3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗3～5min。

4、(可选)0.5%冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。

5、快速95%和无水乙醇脱水。

6、二甲苯透明。

7、封固。

方法二
配方：甲苯胺蓝0.5g蒸馏水定容至100ml。

冰醋酸液：冰醋酸0.5ml蒸馏水定容至100ml
1.组织切片常规脱蜡至水
2.入甲苯胺蓝液30min
3.稍水洗
4.入冰醋酸液分化，直到胞核和颗粒清晰。

5.稍水洗，用冷风吹干
6.二甲苯透明，中性树胶封固。

甲苯胺蓝（TB）染色一、甲苯胺蓝（TB）染色简介甲苯胺蓝（Toluidine blue，TB）是常用的人工合成染料的一种，属于醌亚胺染料类，这类染料一般含有两个发色团，一个是胺基，一个是醌型苯环，来构成色原显色。

染料除有发色团外，还要有能使色原对组织及其他被染物产生亲和力的原子团即助色。

助色团能促使染料产生电离成盐类，帮助发色团对组织产生染色力，使切片上的组织细胞着色。

甲苯胺蓝不仅含有两个发色团，还含有两个助色团，为碱性染料，甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用，组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

二、染色步骤（软骨组织为例）1、常规脱钙，包埋、固定。

2、石蜡切片入二甲苯2次。

3、系列乙醇各1min自来水洗。

4、入软骨染色液浸染。

根据不同组织，染色时间不完全相同。

5、自来水洗2min，滤纸吸干水分。

6、丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。

7、逐级乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

8、结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色三、样本说明1、石蜡切片取材：1、组织离体后需及时固定；2、组织标本不宜过大、过厚。

固定：1、固定液：10%福尔马林（4%多聚甲醛）或10%中性甲醛；2、用量：一般固定液的量与组织体积比为10:1～20:1；3、固定：适宜的固定时间，主要根据材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。

保存：切片经60℃烤片3-5小时后，可于常温或4℃干燥保存。

2、冰冻切片取材：取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。

固定：样本冰冻切片后，应立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。

保存：固定好的切片自然风干，密封后置于-80℃、-20℃保存，尽快用于后续实验。

3、细胞块石蜡切片细胞量较多的样品，可离心分离所需细胞，用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块，然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。

4、细胞爬片在孔板里做的细胞爬片，爬片取出后，用PBS洗涤2次（根据研究目的，PBS洗涤可选择不做），用4%多聚甲醛4℃固定15分钟，将表面液体吹干，置于-20℃保存。