甲苯胺蓝.SDS

由于电泳法具有灵敏度高、重现性好、检测范围广、操作简便并兼备分离、鉴定、分析等优点，故已成为生物技术及生化药物分析的重要手段之一。

现就该方法基本原理，分类和应用概要介绍如下。

（一）电泳法的基本原理和分类在电解质溶液中，带电粒子或离子在电场作用下，以不同的速度向其所带电荷相反方向迁移的现象叫电泳。

电泳分离是基于溶质在电场中的迁移速度不同而进行的。

一个离子在电场中的移动速度为（公式）（式中解释）根据电泳的分离特点及工作方式，电泳可分为三大类：（l）自由界面电泳：在二根U形管里的溶液中，同种分子的构型及荷电情况基本一致，在电场影响下，它们逐渐密集而与其他电泳迁移率不同的物质之间形成明显的界面。

（2）区带电泳：在电泳过程中，应用各种不同的惰性支持介质，在电场作用下，使具有不同泳动速度的组分形成各自区带的电泳。

根据所用的支持物不同可分为：纸电泳法、醋酸纤维素薄膜电泳法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法和十二烷基硫酸纳（SDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳法。

（3）高效毛细管电泳：是在一根内径约50μm的毛细管中，在高压电场下进行样品分离分析的一种新型电泳技术。

（二）常用电泳法的类型及其应用1．纸电泳法纸电泳法是用滤纸作为支持介质的一种电泳法，其操作要点如下：（1）缓冲液的选择：应根据供试品的理化特性，需要的电泳速度和分辨力，选择适宜的缓冲液、pH值和离子强度。

（2）滤纸的裁剪：滤纸可按需要裁成与电泳槽相当的长方形或长条形，样点的间距为2～3cm，滤纸长度视电源输出最高电压及所需的电场强度而定，电压恒定时，所需场强越大，滤纸裁得越短。

（3）点样方法：分干点法与湿点法。

干点法是将供试品溶液点于滤纸上，吹干，再点，反复数次直至点完规定量的供试品溶液，然后用喷雾器将滤纸喷湿，点样处最后喷湿。

干点法能浓缩供试品，适用于稀的供试品溶液。

湿点法是将滤纸全部浸入缓冲液中，湿润后，取出，用滤纸吸干多余的缓冲液，滤纸点样部分需用架子架起，点的次数不宜过多，稀的供试品溶液应预先浓缩。

SDSPAGE之迟辟智美创作30%聚丙烯酰胺溶液30%（w/v）Acrylamide【组分浓度】【配制方法】将29克丙烯酰胺和1克N,N’亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充沛搅拌溶解，补加水至终体积为100ml.0.45µm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保管.严格核实PH不得超越7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的.使用期不得超越两个月，隔几个月须重新配制.如有沉淀，可以过滤.【保管条件】4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保管【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性.称量丙烯酰胺和N,N’亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具.可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎把持，因为它还可能含有少量未聚合资料.1MTrisHCL（pH6.8）(浓缩胶buffer)【组分浓度】1MTrisHCL【配制方法】称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充沛搅拌溶解，加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH值（7.4年夜约0.7mL，7.6年夜约0.6mL，8.0年夜约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保管.应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变动不同很年夜，温度每升高1℃，溶液的pH值年夜约降低0.03个单元.【保管条件】室温保管.【注意事项】对人体有安慰性，请注意适当防护.1.5MTrisHCL（pH8.8）(分离胶buffer)【配制方法】1L称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充沛搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保管.（1.5mmol/LTrisHCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积.过滤后40C保管.）【保管条件】室温保管【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变动不同很年夜，温度每升高1℃，溶液的pH值年夜约降低0.03个单元.10%十二烷基硫酸钠SDS溶液10%(w/v)SDS【组分浓度】10%(w/v)SDS【配制方法】称取2g高纯度的SDS置于100~200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水，68℃加热溶解，滴加浓盐酸调节PH至7.2，定容至20ml后，室温保管【保管条件】室温保管【注意事项】保管条件： 4℃保管. 注意事项：易燃，有腐蚀性，请注意防护.易挥发，使用后请盖紧瓶盖. 为了您的平安和健康，请穿实验服并戴一次性手套把持.保管条件： 4℃保管. 注意事项：易燃，有腐蚀性，请注意防护.易挥发，使用后请盖紧瓶盖. 为了您的平安和健康，请穿实验服并戴一次性手套对人体有害，请注意防护.10%过硫酸铵溶液10%(w/v)AP【组分浓度】10%(w/v) 过硫酸铵【配制方法】称取0.1g过硫酸铵置于1.5ml离心管，加1mL去离子水奏乐溶解，4℃保管【保管条件】4℃保管【注意事项】10%过硫酸铵溶液在4℃保管时，可使用2周左右，超越期限会失去催化作用5×Tris甘氨酸电泳缓冲液 5×TrisGlycine buffer （SDSPAGE 电泳缓冲液）【组分浓度】【配制方法】称取15.1gTris，94.0g甘氨酸（glycine），5.0gSDS，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充沛搅拌溶解，定容至1000ml，室温保管.得0.125mol/L Tris1.25mol/L甘氨酸电极缓冲液.临用前稀释5倍.【保管条件】室温保管，两年有效.【注意事项】配制好的电泳液使用时间不宜超越两周.电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用12次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液.5×SDSPAGE加样缓冲液 5×SDSPAGE Loading Buffer【组分浓度】0.25MTrisHCL(pH6.8)；10%(W/V)SDS；0.5%(W/V) BPB(溴酚蓝)；50%(V/V) 甘油；5%(W/V)β巯基乙醇(2ME)【配制方法】量取 1.25mL 1MTrisHCL（pH6.8），0.5g SDS，25mg BPB，2.5mL甘油，置于10mL塑料离心管中，加去离子水溶解后，定容至5mL，小份（0.5mL/份）分装，于室温保管.使用前将25μL的2ME加入到每小份中.加入2ME的Loading Buffer可在室温下保管一个月左右.【保管条件】20℃保管，至少一年有效.【注意事项】SDSPAGE卵白上样缓冲液(5X)中含少量DTT和巯基乙醇，有轻微安慰性气味，必需完全溶解后再使用.摘自Takara 商品目录实验室惯例试剂配制方法TEMED原液直接使用考马斯亮蓝R250染色液【组分浓度】0.1%(w/v)考马斯亮蓝R250，25%(v/v)异丙醇，10%(v/v)冰醋酸考马斯亮蓝染色脱色液【组分浓度】10%(v/v)醋酸，5%(v/v)乙醇。

甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)简介：甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。

甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。

另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。

Leagene 甲苯胺蓝染色液(Toluidine Blue,1%,硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液呈强碱性，更利于组织细胞的着色。

组成：操作步骤(仅供参考)：(一)肥大细胞染色1、脱蜡至蒸馏水。

2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液。

3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。

4、冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。

5、快速和无水乙醇脱水。

6、 二甲苯透明，封固。

染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

(二)软骨染色1、 石蜡切片入二甲苯。

2、 系列乙醇各。

3、 自来水洗。

4、 入Toluidine Blue O Stain ，浸染。

5、 自来水洗，滤纸吸干水分。

6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。

7、 逐级乙醇脱水。

编号 名称 DA0059 Storage Toluidine Blue O stain (0.5%,硼酸盐法) 100ml RT 避光 使用说明书 1份8、二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

(三)细胞涂片染色1、用乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释即可。

2、细胞涂片后，立即放入乙醇中固定，取出放在纸巾上。

3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。

4、将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。

5、无需干燥，直接镜检。

Masson 三色染色试剂盒（甲苯胺蓝）说明书修订日期：2018.07.31Cat number：KGMST-8004Store at 2-8℃ for 12 monthsFor Research Use Only（科研专用）【适用范围】Masson 三色染色试剂盒主要用于结缔组织染色。

用于判定各种组织、器官的病变程度与修复情况，以不同色调显示与区分某些非结缔组织及物质成分；如显示与区分肌肉及其肿瘤组织的正常或异常成分。

尤适用于软组织肿瘤的鉴别诊断。

【主要成分】【染色步骤】1、切片脱蜡处理至水。

2、滴加 1 滴（50-100µl）苏木素染色液（试剂 A）染色 5-10 分钟。

蒸馏水冲掉染液。

3、蒸馏水或自来水冲洗 2-5 分钟。

4、滴加 1 滴（50-100µl）复合染色液（试剂 B）染色 5 分钟。

5、蒸馏水或自来水冲洗一下（2-3 秒，冲掉染液即可）。

6、滴加 1 滴（50-100µl）磷钼酸（试剂 C）染色 1 分钟。

7、甩干或自然晾干。

8、滴加 1 滴（50-100µl）甲苯胺蓝染色液（试剂 D）染色 5min 左右。

9、蒸馏水或自来水冲洗一下（2-3 秒，冲掉染液即可）。

10、放入烘箱（50－60 摄氏度）烘干。

中性树胶封片。

【结果】胶元纤维、黏液、软骨、神经纤维呈蓝色；肌肉、弹力纤维呈红色；神经轴索呈粉红色；纤维素呈紫红色；红血球呈橘红色。

细胞核呈蓝紫色。

【注意事项】1、不同的固定液或固定时间以及不一样的组织，染色效果可有差异，要根据显微镜下观察来掌握染色或分化时间。

2、染色液必须充分淹盖组织。

3、每次染色宜用阳性切片作对照。

【有效期】12 个月仅供研究、不用于临床诊断。

电泳技术全面总结电泳技术简介电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。

电泳技术的基本原理和分类在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。

F＝QE质点的前移同样要受到阻力（F）的影响，对于一个球形质点，服从Stoke定律，即：F′＝6πrην式中r 为质点半径，η为介质粘度，ν为质点移动速度，当质点在电场中作稳定运动时：F＝F′即QE＝6πrην可见，球形质点的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。

除了自身状态的因素外，电泳体系中其它因素也影响质点的电泳迁移率。

电泳法可分为自由电泳（无支持体）及区带电泳（有支持体）两大类。

前者包括Tise-leas式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。

区带电泳则包括滤纸电泳（常压及高压）、薄层电泳（薄膜及薄板）、凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）等。

自由电泳法的发展并不迅速，因为其电泳仪构造复杂、体积庞大，操作要求严格，价格昂贵等。

而区带电泳可用各种类型的物质作支持体，其应用比较广泛。

本节仅对常用的几种区带电泳分别加以叙述。

影响电泳迁移率的因素⒈电场强度电场强度是指单位长度（cm）的电位降，也称电势梯度。

如以滤纸作支持物，其两端浸入到电极液中，电极液与滤纸交界面的纸长为20cm，测得的电位降为200V，那么电场强度为200V/20cm＝1 0V/cm。

当电压在500V以下，电场强度在2-10v/cm时为常压电泳。

电压在500V以上，电场强度在20-200V/cm时为高压电泳。

电场强度大，带电质点的迁移率加速，因此省时，但因产生大量热量，应配备冷却装置以维持恒温。

Aniline Blue *************(24小时)化学品安全技术说明书GHS product identifier 应急咨询电话（带值班时间）::供应商/ 制造商:供应商/ 制造商: Agilent Technologies, Inc.（美国安捷伦科技有限公司）住所：5301 Stevens Creek Boulevard, Santa Clara, CA, 95051, United States 联系电话：+1 800 227 9770 供应商/ 制造商: Agilent Technologies Singapore (International) Pte Ltd.（安捷伦科技新加坡（国际）私人有限公司）住所：No. 1 Yishun Avenue 7, Singapore, 768923 联系电话：(65) 6276 2622供应商/ 制造商: Agilent Technologies Denmark ApS (安捷伦科技丹麦私人有限公司)住所：Produktionsvej 42， DK-2600 Glostrup, Denmark 联系电话： +45 44859500 苯胺蓝化学品的推荐用途和限制用途AR173部件号:安全技术说明书根据 GB/ T 16483-2008 和 GB/ T 17519-2013本安全技术说明书责任人的e-mail地址:***************GHS化学品标识:苯胺蓝推荐用途AR173 // Aniline Blue // Artisan Masson's Trichrome Stain Kit // 65 mL & 115 mL参考号码: SDS013:有关环境保护措施，请参阅第 12 节。

物质或混合物的分类根据 GB13690-2009 和 GB30000-2013紧急情况概述液体。

蓝色。

象醋 [轻微]如发生皮肤刺激： 求医要么就诊。

细胞活性是判断体外培养细胞在某些条件下是否能正常生长的重要指标,如药物处理、放射性或紫外线照射、培养条件变化等。

目前常用的方法有很多,如有台盼蓝染色法、克隆(集落)形成法、H放射性同位素掺入法、MTT法等。

本文总结了一些常用的细胞活性检测方法的原理、特点，并对比了各自的优缺点。

一、染色计数法1. 化学染色法染色计数法是细胞培养中检查细胞死活最常用的方法，直接利用死细胞和活细胞对染料的不同亲和力，检查细胞活性，能在光学显微镜下观察到染色结果。

可分为两类：死细胞着色法和活细胞着色法。

使死细胞着色的常用染料有台盼蓝、苯胺黑、伊红Y。

能使活细胞着色的常用染料有结晶紫、亚甲基蓝、甲苯胺蓝等。

其中最常用的是台盼蓝染色法。

细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA结合，使其着色，而活细胞能阻止染料进入细胞内，故可以鉴别死细胞与活细胞。

通过细胞计数可得出细胞的存活率。

本染色法方便实用，价格低廉，操作简单。

但是台盼蓝染色时，时间不宜过长，否则部分活细胞也会着色，会干扰计数。

而且，细胞没有经过固定，形态不清晰。

2. 荧光染色法一些荧光染料对死细胞和活细胞也有不同的作用效果，利用荧光显微镜检测细胞活性。

如碘化丙啶（PI），被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡细胞的细胞膜，因此活细胞不被染料上色，只有死细胞或凋亡细胞才能被染上红色。

吖啶橙（AO）能透过质膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的绿色荧光。

溴乙锭（EB）仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。

也可应用AO-EB双染法鉴定细胞死活。

这种检测方法相比传统的染料，具有灵敏度高，操作简便，结果容易分辨等特点，而且利用双染法还可以分辨活细胞、凋亡早期细胞、凋亡晚期细胞、死亡细胞。

在细胞凋亡的检测上有很广泛的应用。

缺点在于，要求特殊的仪器进行检测，如荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜或流式细胞仪。

而且通过荧光染料具有毒性，操作时需要带手套。

医学检验主管技师考试备考预习试题2017年医学检验主管技师考试备考预习试题医学检测考试注重于平时多思考多做题，在题目中感受到知识的运用，今天店铺为大家带来医学检验主管技师考试备考预习试题，一起来看看吧!选择题1.关于蝰蛇毒下列哪项是正确的正确答案是：( )A.是一种强烈的因子Ⅶ激活剂B.是一种强烈的`因子X激活剂-----正确答案C.是一种强烈的因子Ⅻ激活剂D.与Ca2+无关2.患者凝血酶原时间(PT)延长,提示下列哪一组凝血因子缺陷正确答案是：( )A.因子Ⅷ,Ⅸ,ⅪB.因子XⅢ,Ⅻ,ⅪC.因子Ⅱ,V,Ⅶ,I-----正确答案D.因子V,Ⅶ,Ⅷ3.活化部分凝血活酶时间测定是下列哪一种性质的试验正确答案是：( )A.共同途径凝血因子筛选试验B.DIC确诊试验C.内源性凝血因子筛选试验-----正确答案D.外源性凝血因子筛选试验4.下列哪种叙述是正确的正确答案是：( )A.凝血时间较复钙时间测定敏感准确B.复钙时间较凝血时间测定敏感准确-----正确答案C.两者均敏感正确D.两者均不敏感准确5.凝血酶原时间延长可见于下列几种情况,但除了正确答案是：( )A.严重肝病,阻塞性黄疸B.维生素K缺乏,纤维蛋白原减少或缺乏症C.弥散性血管内凝血(DIC),血液中有抗凝物质D.血友病-----正确答案6.某患者诊断重症肝炎,皮肤瘀斑及鼻阻,消化道出血,实验室检查有关出血性疾病试验结果是PT及APTT均延长,此结果提示下列哪组凝血因子有缺陷正确答案是：( )A.因子Ⅷ,Ⅸ,Ⅺ,ⅫB.因子Ⅱ,Ⅶ,Ⅸ,X-----正确答案C.因子Ⅶ,X,V,ⅡD.因子Ⅲ,V,Ⅶ7.临床上以肌肉和关节腔出血为主要表现的患者,应选用下列哪组试验作筛选性检查正确答案是：( )A.束臂试验,出血时间,血小板计数B.活化部分凝血活酶时间,凝血酶原时间,凝血时间-----正确答案C.血小板计数,凝血酶原时间,纤维蛋白测定D.血小板计数,血块收缩试验,出血时间8.疑为血友病患者,首选常用的筛选试验是下列哪一个正确答案是：( )A.复钙时间B.凝血时间C.活化部分凝血活酶时间-----正确答案D.活化凝血时间9.毛细血管脆性试验阳性可见于下述疾病,但除外正确答案是：( )A.过敏性紫癜B.血友病-----正确答案C.血小板减少性紫癜D.遗传性出血性毛细血管扩张症10.下列哪项组合是错误的正确答案是：( )A.血管壁异常,束臂试验阳性B.DIC早期,3P试验阳性C.甲型血友病,APTT延长D.血小板减少性紫癜,血块收缩良好-----正确答案11.下列哪项组合是错的正确答案是：( )A.血友病时,活化部分凝血活酶时间延长B.严重肝病时,凝血酶原时间延长C.继发性DIC早期,3P阳性D.原发性血小板减少紫癜时凝血酶消耗试验正常-----正确答案12.有一肝病患者,临床表现皮肤瘀斑,龈血,鼻衄,消化道出血,你选择下列哪组筛选试验正确答案是：( )A.血小板计数,凝血酶原时间,APTT,TT-----正确答案B.阿司匹林耐量试验,束臂试验,出血时间测定C.血小板计数,凝血酶时间,纤维蛋白原D.凝血时间(CT),复钙时间测定13.受检血浆凝血酶时间及蕲蛇酶时间皆延长则表明正确答案是：( )A.有肝素或类肝素物质存在B.有FDP或异常纤维蛋白原存在-----正确答案C.因子Ⅱ,V缺乏D.因子X,Ⅶ,Ⅱ缺乏14.测定受检血浆中有否肝素或类肝素物质存在,常用的试验是正确答案是：( )A.蕲蛇酶时间测定B.蝰蛇毒试验C.甲苯胺蓝纠正试验-----正确答案D.凝血酶原纠正试验15.受检血浆的凝血酶时间(TT)延长,可被甲苯胺蓝纠正则表明正确答案是：( )A.因子Ⅷ,Ⅸ,Ⅺ缺乏B.因子Ⅱ,V,Ⅶ缺乏C.有肝素或类肝素物质存在-----正确答案D.有FDP或异常纤维蛋白原存在16.血管性假血友病实验室诊断敏感性高,特异性强的是下列哪一项正确答案是：( )A.BT延长B.VWF：Ag减低C.SDS-凝胶电泳检出VWF多聚体结构异常-----正确答案D.RIPA及ⅧR：Rcof测定减低17.蕲蛇酶时间或爬虫酶时间测定时,以下哪项是正确的正确答案是：( )A.两者都不受肝素和类肝素物质的影响-----正确答案B.两者都受肝素和类肝素物质的影响C.蕲蛇酶时间受肝素影响而不受类肝素物质的影响D.爬虫酶不受肝素影响而受类肝素物质的影响18.凝血时间明显延长见于下列哪组疾病正确答案是：( )A.甲、乙型血友病-----正确答案B.过敏性紫癜,原发性血小板减少性紫癜C.胆结石和阻塞性黄疸D.白血病,再生障碍性贫血19.某出血性疾病患者,实验室检查结果是:PT正常,APTT延长,APTT延长不被新鲜血清纠正,而被硫酸钡吸附血浆纠正,此结果提示患者是正确答案是：( )A.血友病甲-----正确答案B.血友病乙C.因子Ⅺ缺乏症D.维生素K缺乏症20.某女性患者,二周来牙龈出血及月经过多,伴有低热及间歇性头痛,实验室检查结果是:Hb 80g/L,网织红细胞10%,血小板计数20×10↑/L,白细胞11×10↑/L,出凝血时间正常,凝血酶原13S(对照12S),APTT45S(对照30S),尿液和肾功能异常,试问该病例可能是正确答案是：( )A.原发性血小板减少性紫癜B.弥慢性血管内凝血C.血栓性血小板减少性紫癜-----正确答案D.过敏性紫癜21.一男性患者,发热5天,有上呼吸道卡他症状,并见两下肢小腿胫骨紫癜,高出皮面,实验室检查结果:Hb125g/L,白细胞5.5×10↑/L,血小板计数120×10↑/L,束臂试验阳性,凝血酶原时间12S(对照12S),血块收缩良好,纤维蛋白原2g/L,该例诊'断是正确答案是：( )A.血栓性血小板减少性紫癜B.过敏性紫癜-----正确答案C.弥散性血管内凝血D.继发性血小板减少性紫癜22.鲜血清中主要含下列哪一组凝血因子正确答案是：( )A.因子Ⅶ和因子X-----正确答案B.因子V和因子ⅧC.因子Ⅱ,V,Ⅶ,XD.因子I,Ⅲ,V,Ⅶ23.硫酸钡吸附血浆中主要含下列哪一组凝血因子正确答案是：( )A.因子Ⅶ和因子XB.因子V和因子Ⅷ-----正确答案C.因子Ⅱ,V,Ⅶ,XD.因子I,Ⅲ,V,Ⅶ24.下列哪一项凝血因子,产生场所一部分在肝,一部分在肝外组织正确答案是：( )A.因子I,Ⅱ,VB.因子Ⅷ-----正确答案C.因子Ⅶ,Ⅸ,XD.因子Ⅻ,Ⅺ,XⅢ25.外源系统最常用的筛选试验是正确答案是：( )A.活化部分凝血活酶(APTT)测定B.凝血酶原时间(PT)测定-----正确答案C.凝血酶时间测定D.纤维蛋白原测定26.应用发色底物法测定α2与纤溶酶抑制物不需加正确答案是：( )A.纤溶酶B.PNAC.纤维蛋白原-----正确答案D.受检血浆27.纤维蛋白降解产物不包括正确答案是：( )A.碎片DB.碎片C-----正确答案C.碎片ED.碎片Y28.原发性纤溶时可见正确答案是：( )A.三P试验阴性-----正确答案B.纤溶酶原含量增多C.优球蛋白溶解时间延长D.血片上破碎红细胞增多29.纤溶酶含量减少可见于正确答案是：( )A.原发性纤溶B.继发性纤溶C.应用溶栓药D.血栓性疾病-----正确答案30.弥散性血管内凝血的病因,下列哪一项是最多见的正确答案是：( )A.白血病B.感染性疾病-----正确答案C.病理产科D.免疫性疾病下载全文。

人骨关节炎软骨细胞的体外分离与培养魏钰;魏民【摘要】背景:大量针对骨关节炎细胞水平的研究仍集中在动物模型关节软骨细胞的体外培养.动物模型引发的退变效应与人骨关节炎的发生并不完全一致.如何利用人骨关节炎软骨组织构建体外细胞模型并研究其特征性蛋白变化趋势,是模拟体内骨关节炎软骨退变过程的关键.目的:探讨人骨关节炎软骨细胞的体外分离、培养方法,观察原代至第3代人骨关节软骨细胞的形态学特性和相关蛋白表达变化.方法:取6例因重度骨关节炎行关节置换术患者的废弃软骨组织(获得中国人民解放军总医院医学伦理委员会批准,伦理批号为S2017-23-7),男2例,女4例;年龄62-72岁,平均(68.3±3.39)岁,采用一步酶消化法(Ⅱ型胶原酶)分离培养人骨关节炎软骨细胞,并进行传代培养,从而构建体外人骨关节炎软骨细胞培养体系.倒置相差显微镜观察各代细胞形态;苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫荧光染色方法进行细胞鉴定.采用Western blot法检测各代软骨细胞于70％融合率时Col2a、Aggrecan与MMP-13的表达.结果与结论:经过Ⅱ型胶原酶消化后,培养1周左右可见组织块周围爬出散在的细胞,3周左右可传代进行下一步研究;形态学、苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色与Ⅱ型胶原免疫荧光染色证明培养出的细胞为人软骨细胞.第3代软骨细胞Col2a、Aggrecan的相对表达量与原代比较有明显降低(P<0.01),且随着培养代数增加表达逐渐降低;MMP-13随着培养代数的增加表达逐渐增强(P<0.01).结果表明,Ⅱ型胶原酶一步消化法可成功从标本中分离出骨关节炎软骨细胞并传代培养.体外培养的骨关节炎软骨细胞去分化特性随着传代次数增加而逐渐增强,功能性蛋白表达整体下降.3代以内的软骨细胞符合人骨关节炎时软骨退变的表现,可能是用于实验研究的最佳选择.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2019(023)025【总页数】6页(P4056-4061)【关键词】骨关节炎;关节置换;人软骨细胞;一步酶消化法;Ⅱ型胶原酶;Ⅱ型胶原;聚集蛋白聚糖;国家自然科学基金【作者】魏钰;魏民【作者单位】中国人民解放军总医院,北京市 100000;中国人民解放军总医院,北京市 100000【正文语种】中文【中图分类】R459.9;R394.20 引言 Introduction骨关节炎是最常见的老年退行性关节疾病，以软骨磨损和骨质增生为主要特征[1]。

SD大鼠甲苯胺蓝染色步骤1、甲苯胺蓝染色法鉴定软骨细胞表型将第二代软骨细胞以2x105/ml的密度接种到24孔细胞培养板上，并在与原代培养相同的条件下制备细胞爬片。

常规培养48小时后，进行甲苯胺蓝染色。

具体操作步骤如下：(1)倾去培养液，pbs充分漂洗3次，加入10％的中性甲醛常温下固定30min。

(2)倾去10％的中性甲醛，pbs充分漂洗3次，加入70％的乙醇固定30min除去四价铵离子，以免影响染色。

（3）倒出70%乙醇溶液，用PBS冲洗3次，在空气中干燥，加入甲苯胺蓝乙醇溶液（0.2g甲苯胺蓝溶于100m1的30%乙醇中）染色20分钟(4)pbs充分漂洗3次，迅速用无水乙醇再漂洗1次。

（5）取出爬升件，干燥中性树脂密封件，在电子显微镜下观察并取出。

2.I型胶原免疫细胞化学染色鉴定软骨细胞表型ⅱ代软骨细胞以2×105／ml的密度接种到铺有多聚赖氨酸盖玻片的24孔细胞培养板中，与原代培养条件相同，制作细胞爬片，常规培养48h后行免疫细胞化学法染色。

实验过程严格遵照免疫细胞化学染色试剂盒说明书进行操作，pbs缓冲液代替一抗作为阴性对照组。

具体操作步骤如下：（1）倒出培养基，用冷PBS冲洗3x3分钟，加入1毫升4%多聚甲醛，室温固定15分钟。

（2）使用PBS清洗样品3x3分钟。

每个样品加入1滴新鲜制备的3%H2O2，并在室温下培养10分钟。

（3）使用PBS清洗样品3x3分钟。

每个样品加入0.5 m（0.1%Timton+o.1 mg甘氨酸）的膜穿透溶液，并在冰上培养30分钟。

(4)pbs清洗标本3x3min，每张标本滴加5mg／ml的动物非免疫封闭血清(bsa)0.5ml，室温下封闭1h。

（5）向密封膜中加入50ul以1:150稀释的兔抗鼠II型胶原多克隆抗体，使标本与一抗充分接触，并将其置于4℃的湿盒中过夜。

阴性对照组用PBS缓冲液代替一抗。

（6）用PBS清洗样品3x3min，加入二抗工作液，37℃孵育20min。

产品编号：024025 修订日期：2019-06-10化学品安全技术说明书第一部分化学品及企业标识产品中文名称：甲苯胺蓝-DNA琼脂产品英文名称：Toluidine Blue-DNA Agar产品编号：024025企业名称：广东环凯微生物科技有限公司地址：广东省广州市黄埔区广州开发区科学城神舟路788号邮编：510663公司网址电子邮件地址：*********************传真号码：************销售热线：************-8602技术热线：************-8877/8876推荐用途和限制用途：生化研究/分析第二部分危险性概述GSH危害性类别皮肤刺激(类别3), H316眼睛刺激(类别2B), H320GSH标签要素象形图无信号词警告危险申明H316 造成轻微皮肤刺激。

H320 造成眼刺激。

警告申明预防措施P264 作业后彻底清洗皮肤。

事故响应P305 + P351 + P338 如进入眼睛：用水小心冲洗几分钟。

如戴隐形眼镜并可方便地取出，取出隐形眼镜。

继续冲洗。

P332 + P313 如发生皮肤刺激：求医/就诊。

P337 + P313 如仍觉眼刺激：求医/就诊。

当心- 此制剂含有还未完全测试过的物质。

物理和化学危险目前掌握信息，没有物理或化学的危险性。

产品编号：024025 修订日期：2019-06-10健康危害H316 造成轻微皮肤刺激。

H320 造成眼刺激。

其它危害（健康危害、环境危害）未见报道第四部分 急救措施一般信息： 无特殊的措施要求 皮肤接触： 立即用清水彻底清洗眼睛接触： 立即提起眼睑，用大量流动清水冲洗，如不适就医。

吸 入： 如不适就医 食 入： 如不适就医就医信息： 出示产品使用说明或者此SDS第五部分 消防措施危险特性： 可能助燃。

有害燃烧产物：碳氧化物, 氮氧化物, 硫氧化物, 氯化氢气体 碳氧化物, 硫氧化物, 氯化氢气体, 氧化钠灭火方法及灭火剂： 用水雾，耐醇泡沫，干粉或二氧化碳灭火。

药　物　生　物　技　术Pharmaceutical Biotechnology　2007,14(5):364～367薄芝糖肽结构组成分析3陆　莹1,金宇灏1,张慧慧2,倪扬林3,高向东13(1.中国药科大学生命科学与技术学院,江苏南京210009;2.南京普瑞医药生物技术有限公司,江苏南京210036;3.扬州制药有限公司,江苏扬州225009)摘　要　采取薄层层析法分析单糖组成,高效液相色谱法测定分子量及其分布,高碘酸氧化、Smith降解等方法确证糖苷键类型,紫外、Tricine2SDS2PA GE和β2消除等方法确证结合态蛋白的存在,利用柱前衍生化高效液相法测定氨基酸的组成,对薄芝糖肽(Ganoderma Ca pense glycopeptide,GCGP)结构组成进行研究。

结果: GCGP的多糖部分由葡萄糖组成,连接方式为1→6和1→2两种,含有结合态蛋白,氨基酸组成分析显示GCGP 富含谷氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、缬氨酸、亮氨酸、半胱氨酸,碱水解结果表明GCGP含微量色氨酸。

糖肽连接方式初步定为O2连接。

关键词　薄芝;糖肽;结构;组成;糖肽键中图分类号:S567.3+1 文献标识码:A 文章编号:100528915(2007)0520364204 薄芝为灵芝亚属真菌薄树芝的菌丝体,薄盖灵芝又称薄树芝Ganoderm a Ca pense(Lloyd)Teng,是多孔菌科灵芝属真菌。

主要活性成分是薄芝中的糖肽类成分,薄芝糖肽是由薄树芝菌丝体中分离纯化的含多肽组成的蛋白多糖体[1,2]。

利用薄盖灵芝深层培养的菌丝体为原料制成的注射液,即薄芝糖肽注射液,对恶性肿瘤[3]、乙型肝炎[4]、硬皮病[5]、[6]、斑秃[7]、特应性皮炎[8]、肌营养不良[9]、顽固性失眠[10]等疑难病症都有一定的疗效。

作者对薄芝糖肽的结构和组成进行了研究。

1　材　料1.1　仪器722光栅分光光度计(上海第三分析仪器厂); R2201旋转蒸发器(上海申胜生物技术有限公司); TSP高效液相色谱仪:Thermo Separation Products; RID210A示差折光检测器;多糖专用GPC软件;紫外可见分光光度仪(北京瑞利分析仪器公司)。

第十章 蛋白质和氨基酸的测定第一节 概述蛋白质是生命的物质基础，是构成生物体细胞组织的重要成分，是生物体发育及修补组织的原料。

一切有生命的活体都含有不同类型的蛋白质。

人体内的酸、碱及水分平衡，遗传信息的传递，物质代谢及转运都与蛋白质有关。

人及动物只能从食物中得到蛋白质及其分解产物，来构成自身的蛋白质，故蛋白质是人体重要的营养物质，也是食品中重要的营养成分。

蛋白质在食品中含量的变化范围很宽。

动物来源和豆类食品是优良的蛋白质资源。

部分种类食品的蛋白质含量见表10-1表10-1 部分食品的蛋白质含量蛋白质是复杂的含氮有机化合物，摩尔质量大，大部分高达数万～数百万，分子的长轴则长达1nm ～100nm ，它们由20种氨基酸通过酰胺键以一定的方式结合起来，并具有一定的空间结构，所含的主要化学元素为C 、H 、O 、N ，在某些蛋白质中还含有微量的P 、Cu 、Fe 、I 等元素，但含氮则是蛋白质区别于其它有机化合物的主要标志。

不同的蛋白质其氨基酸构成比例及方式不同，故各种不同的蛋白质其含氮量也不同。

一般蛋白质含氮量为16%，即1份氮相当于6.25份蛋白质，此数值（6.25）称为蛋白质系食 品 种 类 蛋白质的质量分数（以湿基计）/% 食 品 种 类 蛋白质的质量分数（以湿基计）/%谷类和面食大米（糙米、长粒、生） 7.9大米（白米、长粒、生、强化） 7.1小麦粉（整粒） 13.7玉米粉（整粒、黄色） 6.9意大利面条（干、强化） 12.8玉米淀粉 0.3乳制品牛乳（全脂、液体） 3.3牛乳（脱脂、干） 36.2切达干酪 24.9酸奶（普通的、低脂） 5.3水果和蔬菜苹果（生、带皮） 0.2芦笋（生） 2.3草莓（生） 0.6莴苣（冰、生） 1.0土豆（整粒、肉和皮） 2.1 豆类 大豆（成熟的种子、生） 36.5 豆（腰子状、所有品种、 23.6 成熟的种子、生） 豆腐（生、坚硬） 15.6 豆腐（生、普通） 8.1 肉、家禽、鱼 牛肉（颈肉、烤前腿） 18.5 牛肉（腌制、干牛肉） 29.1 鸡（可供煎炸的鸡胸肉、 23.1 生） 火腿（切片、普通的） 17.6 鸡蛋（生、全蛋） 12.5 鱼（太平洋鳕鱼、生） 17.9 鱼（金枪鱼、白色、罐 26.5 装、油浸、滴干的固体）数。

电泳技术原理、分类及分析方法点击次数：2798 发布日期：2008-5-17 来源：本站仅供参考，谢绝转载，否则责任自负电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。

电泳技术的基本原理和分类在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。

F＝QE质点的前移同样要受到阻力（F）的影响，对于一个球形质点，服从 Stoke定律，即：F′＝6πrην式中r为质点半径，η为介质粘度，ν为质点移动速度，当质点在电场中作稳定运动时：F＝F′即 QE＝6πrην可见，球形质点的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。

除了自身状态的因素外，电泳体系中其它因素也影响质点的电泳迁移率。

电泳法可分为自由电泳（无支持体）及区带电泳（有支持体）两大类。

前者包括 Tise-leas式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。

区带电泳则包括滤纸电泳（常压及高压）、薄层电泳（薄膜及薄板）、凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）等。

自由电泳法的发展并不迅速，因为其电泳仪构造复杂、体积庞大，操作要求严格，价格昂贵等。

而区带电泳可用各种类型的物质作支持体，其应用比较广泛。

本节仅对常用的几种区带电泳分别加以叙述。

影响电泳迁移率的因素⒈电场强度电场强度是指单位长度（cm）的电位降，也称电势梯度。

如以滤纸作支持物，其两端浸入到电极液中，电极液与滤纸交界面的纸长为 20cm，测得的电位降为 200V，那么电场强度为200V/20cm＝10V/cm。

当电压在500V以下，电场强度在 2-10v/cm 时为常压电泳。

电压在 500V 以上，电场强度在20-200V/cm 时为高压电泳。

切片染色：甲苯胺蓝染色法展开全文染色步骤：1.切片脱腊至水。

2.蒸馏水浸洗3次。

3.0.1%甲苯胺蓝液浸染10min。

4.水洗，洗去多余染液。

5.各级酒精脱水。

6.二甲苯透明，中性树胶封固。

结果：在胃粘膜腺上皮表面，腺腔内均可见到幽门螺杆菌（HP），有的呈弯曲杆状或逗点状，HP可散在出现，也可成团聚集出现，这要根据不同病例而异。

试剂的配制：称取0.1g甲苯胺蓝，溶于100ml 0.1M醋酸盐缓冲液中，置室温5天后，即可使用染液于室温下可保存3个月，若放于4℃冰箱则可保存半年左右，但该液的染色效果在早期为最佳，若染液存放时间较长，则染色偏淡，应适应延长染色时间。

醋酸缓冲液（PH3.6）醋酸钠 1.64g醋酸 2.5ml蒸馏水凑足200ml1%硝酸银液硝酸银 1g醋酸盐缓冲液（PH3.6）凑足100ml对苯二酚液对苯二酚（hydroquinone） 300mg醋酸盐缓冲液（PH3.6）凑足 10ml明胶液明胶 5g醋酸盐缓冲液（PH3.6）凑足 100ml明胶加入缓冲液后，用热水液促其溶解，或者放入37℃培养箱中过夜，禁用明火直接加热，因其容易热糊。

2%硝酸银液硝酸银 2g醋酸盐缓冲液（PH3.6）凑足 100ml显影液对苯二酚液 6ml5%明胶液 30ml2%硝酸银液 6ml注意事项：1.所有用于本法中的浸染液，都须预热60℃。

2.该法最早应用于螺旋体的染色，1983年，我们应用此法于胃幽门弯曲菌的染色，获得成功，现在该法是染幽门弯曲菌的最好方法，虽然操作较为复杂，但效果最好，经与其它几种方法的对照证明，应用本法能获得最好结果。

3.如果显影时间过长，切片颜色过深，切片深黑一片，可用1%亚铁氰化钾处理切片。

临床应用（1）用于胃幽门螺杆的显示;（2）用于莱姆病（lyme fisease）的诊断，莱姆病是由Borreliaburgdor feri螺旋体所致的一种多系统性疾病，镜下见血管周围以淋巴细胞为主的炎细胞浸润，也可有浆细胞和嗜酸性粒细胞，用Warthin-Starry银染法可显示。

甲苯胺蓝试验液配制方法
甲苯胺蓝染色渗透试验
1.目的
根据ASTM F1929-2012标准方法采用染色渗透法检测无菌包装封口泄漏性能
2.设备及工具、材料
天平（万分之一）10mL注射器，甲苯胺蓝、曲拉通X-100（氚X-1004）、纯化水、烧杯、试管
3.配制方法
3.1.用天平称量0.5g Triton X-100，与20ml纯化水混合，搅
拌或摇动容器，混合二者。

待Triton X-100分散后。

再加入纯化水定容至100ml。

3.2.用天平称量0.05g甲苯胺蓝，加入混合了Triton X-100的溶
液中,搅拌或摇动容器混合均匀，即成0.05%甲苯胺蓝染色液4.试验方法
4.1.把已灭菌产品包装在试验开始之前，放置于大气温度23±
2℃（73.4±3.6oF）和相对湿度50±2%环境中进行存贮24小时】
4.2.依据ASTM F1929-2012标准，将足够的染料渗透液注入包装中，
覆盖最长的封边，深度约5mm（0.25英寸）（注入方法：可以使用带有软管的注射器通过切口送入染料渗透剂）使染料渗透液与封边保持接触最少5s最多20s的时间，旋转包装使每道封边都能接触渗透液，如有需要可以补充染色液，确保每道封边都能接触足够量的染色液。

通过包装的透明面目力检测密封区，看有无泄漏或者通道出现，也可使用放大镜进行细致的观察
5.检验标准
在包装透明的一边，用肉眼检测封口区域。

即可看见封口区的通道。

检查染色液有无透过密封区到达另一侧或染色液有无通过确定的通道进入密封区内部的迹象
6.注意事项
染色渗透液与包装材料封边的作用时间不应超过20秒编写：日期：。