甲苯胺蓝染色液

甲苯胺蓝染色渗透试验
1.目的
根据ASTM F1929-2012标准方法采用染色渗透法检测无菌包装封口泄漏性能2.设备及工具、材料
天平（万分之一）10mL注射器，甲苯胺蓝、曲拉通X-100（氚X-1004）、纯化水、烧杯、试管
3.配制方法
3.1.用天平称量0.5g Triton X-100，与20ml纯化水混合，搅拌或摇动容器，混合二者。

待Triton X-100分散后。

再加入纯化水定容至100ml。

3.2.用天平称量0.05g甲苯胺蓝，加入混合了Triton X-100的溶液中,搅拌或摇动容器混合均匀，即成0.05%甲苯胺蓝染色液。

4.试验方法
4.1.把已灭菌产品包装在试验开始之前，放置于大气温度23±2℃（73.4±3.6oF）和相对湿度50±2%环境中进行存贮24小时。

4.2.依据ASTM F1929-2012标准，将足够的染料渗透液注入包装中，覆盖最长的封边，深度约5mm（0.25英寸）（注入方法：可以使用带有软管的注射器通过切口送入染料渗透剂）使染料渗透液与封边保持接触最少5s最多20s的时间，旋转包装使每道封边都能接触渗透液，如有需要可以补充染色液，确保每道封边都能接触足够量的染色液。

通过包装的透明面目力检测密封区，看有无泄漏或者通道出现，也可使用放大镜进行细致的观察。

5.检验标准
在包装透明的一边，用肉眼检测封口区域。

即可看见封口区的通道。

检查染色液有无透过密封区到达另一侧或染色液有无通过确定的通道进入密封区内部的迹象。

6.注意事项
染色渗透液与包装材料封边的作用时间不应超过20秒。

甲苯胺蓝染色原理甲苯胺蓝（Methylthioninium chloride）是一种用于组织切片染色的有机染料，也被称为甲苯蓝或亚甲基蓝。

甲苯胺蓝在组织学染色中广泛应用，特别在神经组织中的染色效果显著，常用于突触研究和神经元计数。

甲苯胺蓝的染色原理涉及到其本身的分子结构和组织切片中的某些成分之间的相互作用。

首先，甲苯胺蓝是一种亲电性染料，其分子结构含有亚甲基蓝的三个苯环。

这些苯环中的一个或多个苯基与细胞组分中的负电荷基团（如DNA核苷酸、蛋白质等）发生吸附和离子相互作用。

这种吸附和离子相互作用使得甲苯胺蓝能够与细胞内的核酸物质结合，并产生特定的染色效果。

其次，甲苯胺蓝在染色过程中通过可逆地与细胞组分中的电荷基团发生氧化还原反应来增强或改变染色效果。

在染色溶液中，甲苯胺蓝会接受电子，从而减少其氧化态，形成无色的还原型甲苯胺蓝。

当染色溶液接触到切片表面时，甲苯胺蓝被氧化，恢复到其有色的氧化态，从而显现出染色效果。

这种还原氧化循环的发生使得甲苯胺蓝能够在组织切片上形成持久的染色效果。

此外，甲苯胺蓝还可以与细胞中的多种有机物质发生特异性反应。

例如，甲苯胺蓝可以与DNA中的磷酸核苷酸结合，形成深蓝色的染色复合物。

这种DNA与甲苯胺蓝的结合形成了一种可靠的染色方法，常用于观察细胞核的形态和位置。

此外，甲苯胺蓝还可以与某些神经细胞蛋白质中的酚基团发生偶联反应，从而形成深蓝色的染色效果。

这种特异性反应可以帮助研究人员定位神经元的位置，并观察神经元之间的连接情况。

总结来说，甲苯胺蓝染色的原理是通过染料分子与细胞中的带负电荷的核酸和蛋白质等电荷基团的吸附和离子相互作用，以及发生氧化还原反应来产生染色效果。

甲苯胺蓝与细胞内不同成分的特异性反应可用于观察细胞核的形态和位置，以及神经元的连接情况。

因此，甲苯胺蓝成为一种常用的神经组织切片染色方法，为神经科学研究提供了重要的工具和技术支持。

甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)简介：甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。

甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。

另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。

Leagene 甲苯胺蓝染色液(Toluidine Blue,1%,硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液呈强碱性，更利于组织细胞的着色。

组成：操作步骤(仅供参考)：(一)肥大细胞染色1、脱蜡至蒸馏水。

2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液。

3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。

4、冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。

5、快速和无水乙醇脱水。

6、 二甲苯透明，封固。

染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

(二)软骨染色1、 石蜡切片入二甲苯。

2、 系列乙醇各。

3、 自来水洗。

4、 入Toluidine Blue O Stain ，浸染。

5、 自来水洗，滤纸吸干水分。

6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。

7、 逐级乙醇脱水。

编号 名称 DA0059 Storage Toluidine Blue O stain (0.5%,硼酸盐法) 100ml RT 避光 使用说明书 1份8、二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

(三)细胞涂片染色1、用乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释即可。

2、细胞涂片后，立即放入乙醇中固定，取出放在纸巾上。

3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。

4、将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。

5、无需干燥，直接镜检。

Masson 三色染色试剂盒（甲苯胺蓝）说明书修订日期：2018.07.31Cat number：KGMST-8004Store at 2-8℃ for 12 monthsFor Research Use Only（科研专用）【适用范围】Masson 三色染色试剂盒主要用于结缔组织染色。

用于判定各种组织、器官的病变程度与修复情况，以不同色调显示与区分某些非结缔组织及物质成分；如显示与区分肌肉及其肿瘤组织的正常或异常成分。

尤适用于软组织肿瘤的鉴别诊断。

【主要成分】【染色步骤】1、切片脱蜡处理至水。

2、滴加 1 滴（50-100µl）苏木素染色液（试剂 A）染色 5-10 分钟。

蒸馏水冲掉染液。

3、蒸馏水或自来水冲洗 2-5 分钟。

4、滴加 1 滴（50-100µl）复合染色液（试剂 B）染色 5 分钟。

5、蒸馏水或自来水冲洗一下（2-3 秒，冲掉染液即可）。

6、滴加 1 滴（50-100µl）磷钼酸（试剂 C）染色 1 分钟。

7、甩干或自然晾干。

8、滴加 1 滴（50-100µl）甲苯胺蓝染色液（试剂 D）染色 5min 左右。

9、蒸馏水或自来水冲洗一下（2-3 秒，冲掉染液即可）。

10、放入烘箱（50－60 摄氏度）烘干。

中性树胶封片。

【结果】胶元纤维、黏液、软骨、神经纤维呈蓝色；肌肉、弹力纤维呈红色；神经轴索呈粉红色；纤维素呈紫红色；红血球呈橘红色。

细胞核呈蓝紫色。

【注意事项】1、不同的固定液或固定时间以及不一样的组织，染色效果可有差异，要根据显微镜下观察来掌握染色或分化时间。

2、染色液必须充分淹盖组织。

3、每次染色宜用阳性切片作对照。

【有效期】12 个月仅供研究、不用于临床诊断。

甲苯胺蓝染色原理
甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。

甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类；帮助发色团对产生染色力，使切片上的细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。

肥大细胞胞质内含有肝素和胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。

1。

肥大细胞-甲苯胺蓝目的：此细胞广泛分布于结缔组织中。

胞质含有异染性颗粒，由肝磷脂和组胺构成。

原理：肥大细胞被染成红-紫色(异染质着染)和蓝色的背景(正染质着染)。

异染性组织染色原理是一种染液染出不同的颜色。

是因为碱性染料的PH值、染料浓度和温度。

蓝色和紫色染料可显出红色，红色染料可显出黄色异染色组织原理。

对照：皮肤固定：10%甲醛技术：4μ石蜡切片设备：染色，蒸馏水稍洗。

试剂：甲苯胺蓝原液：甲苯胺蓝Toluidine Blue O 1.0 gm70%酒精alcohol 100.0 ml混合溶解，保存期6个月。

警告：避免接触和吸入。

工作液：甲苯胺蓝Toluidine blue, Stock 5.0 ml1%氯化钠Sodium chloride 45.0 ml新鲜配制，用后丢弃。

警告：避免接触和吸入。

1%氯化钠：氯化钠Sodium chloride 0.5 gm蒸馏水Distilled water 50.0 ml新鲜配制。

安全：穿戴手套、护目镜和白大衣。

在通风场所进行。

避免接触和吸入。

甲苯胺蓝O：有引起人的胃肠道和血液紊乱报导。

程序：1. 脱蜡至蒸馏水。

2. 甲苯胺蓝工作液1-2 minutes。

3.蒸馏水稍洗×3。

4. 快速95%和无水乙醇脱水。

5. 二甲苯透明和封固。

结果：肥大细胞紫红色背景蓝色参考文献：Sheehan D, Hrapchak B, Theory and practice of Histotechnology, 2nd Ed, 1980, pp282,Battelle Press, OhioLuna L, Manual Of Histologic Staining Methods from the AFIP, 3rd Ed, 1968,pp 162-163, McGraw-Hill, NYCrookham,J, Dapson,R, Hazardous Chemicals in the HistopathologyLaboratory, 2nd ED, 1991, Anatech肥大细胞-甲苯胺蓝对照：皮肤技术：4μ石蜡切片程序：1. 脱蜡至蒸馏水。

甲苯胺蓝（TB）染色一、甲苯胺蓝（TB）染色简介甲苯胺蓝（Toluidine blue，TB）是常用的人工合成染料的一种，属于醌亚胺染料类，这类染料一般含有两个发色团，一个是胺基，一个是醌型苯环，来构成色原显色。

染料除有发色团外，还要有能使色原对组织及其他被染物产生亲和力的原子团即助色。

助色团能促使染料产生电离成盐类，帮助发色团对组织产生染色力，使切片上的组织细胞着色。

甲苯胺蓝不仅含有两个发色团，还含有两个助色团，为碱性染料，甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用，组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

二、染色步骤（软骨组织为例）1、常规脱钙，包埋、固定。

2、石蜡切片入二甲苯2次。

3、系列乙醇各1min自来水洗。

4、入软骨染色液浸染。

根据不同组织，染色时间不完全相同。

5、自来水洗2min，滤纸吸干水分。

6、丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。

7、逐级乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

8、结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色三、样本说明1、石蜡切片取材：1、组织离体后需及时固定；2、组织标本不宜过大、过厚。

固定：1、固定液：10%福尔马林（4%多聚甲醛）或10%中性甲醛；2、用量：一般固定液的量与组织体积比为10:1～20:1；3、固定：适宜的固定时间，主要根据材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。

保存：切片经60℃烤片3-5小时后，可于常温或4℃干燥保存。

2、冰冻切片取材：取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。

固定：样本冰冻切片后，应立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。

保存：固定好的切片自然风干，密封后置于-80℃、-20℃保存，尽快用于后续实验。

3、细胞块石蜡切片细胞量较多的样品，可离心分离所需细胞，用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块，然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。

4、细胞爬片在孔板里做的细胞爬片，爬片取出后，用PBS洗涤2次（根据研究目的，PBS洗涤可选择不做），用4%多聚甲醛4℃固定15分钟，将表面液体吹干，置于-20℃保存。

SD大鼠甲苯胺蓝染色步骤1、甲苯胺蓝染色法鉴定软骨细胞表型ⅱ代软骨细胞以2x105／ml的密度接种到铺有多聚赖氨酸盖玻片的24孔细胞培养板中，与原代培养条件相同，制作细胞爬片，常规培养48h后行甲苯胺蓝染色。

具体操作步骤如下：(1)倾去培养液，pbs充份冲洗3次，重新加入10％的中性甲醛常温下紧固30min。

(2)倾去10％的中性甲醛，pbs充份冲洗3次，重新加入70％的乙醇紧固30min除去四价铵离子，以免影响染色。

(3)倾去70％的乙醇溶液，pbs充分漂洗3次，晾干，加入甲苯胺蓝乙醇液(甲苯胺蓝0.2g溶于30％乙醇100m1)染色_20min。

(4)pbs充份冲洗3次，快速用无水乙醇再冲洗1次。

(5)取出爬片，干燥后中性树脂封片，电子显微镜下观察、摄片。

2、型胶原免疫细胞化染色法鉴定软骨细胞表型ⅱ代软骨细胞以2×105／ml的密度注射至砌存有多聚赖氨酸盖玻片的24孔细胞培养板中，与原代培育条件相同，制作细胞爬片，常规培育48h后行免疫细胞化学法染色。

实验过程严苛遵从免疫细胞化学染色试剂盒说明书展开操作方式，pbs缓冲液替代一抗炎做为阴性对照组。

具体内容操作步骤如下：(1)倾去培养液，冰冷的pbs漂洗3x3min，加入4%多聚甲醛1ml室温固定15min。

(2)pbs清洗标本3x3min，每张标本滴加1滴新鲜配制的3％h202，室温下孵育10min。

(3)pbs清洗标本3x3min，每张标本滴加穿膜液0.5m](0.1％timton+o.1mglycine)冰上孵育30min。

(4)pbs冲洗标本3x3min，每张标本碱液5mg／ml的动物非免疫系统半封闭血清(bsa)0.5ml，室温下半封闭1h。

(5)滴加1：150稀释的兔抗大鼠ii型胶原多克隆抗体50ul于封口膜上，使标本与一抗充分接触，置于湿盒中4℃过夜。

pbs缓冲液代替一抗作为阴性对照组。

(6)pbs清洗标本3x3min，加入二抗工作液，37℃孵育20min。