地牯牛对烫伤大鼠的治疗作用
郭淑云;张薇;张文娟;戚志华
【摘要】目的：探讨地牯牛外用对烫伤大鼠模型创面修复的影响。方法：大鼠背部皮肤用100℃水蒸气持续10 s造成烫伤模型；观察地牯牛外敷对烫伤大鼠创伤部位修复情况及相应时间内血清TNF、VEGF、IL的表达。结果：模型建立成功，结果显示地牯牛组组织形态学变化显著，创面愈合明显优于其他组。大鼠血清中血管内皮生长因子（VEGF）表达地牯牛组高于其他组（P＜0．05），血清肿瘤坏死因子（TNF）、白介素（IL）的表达地牯牛组低于其他组（P＜0．05）。结论：地牯牛外用对大鼠烫伤模型有显著的治疗效果。%Objective:To investigate the effects of antlion on rats scald model .Methods:By keeping the dorsum skin of rats in 100℃ water vapor for 10 seconds to establish the rats scald model .Observing the effects of antlion on scald area and pathological changes of TNF、VEGF and IL .Results:The scald model of rats was succe ss‐fully established and the repair effects on wound skin of each antlion group was obviously better than that in other group .Compared with other group ,the VEGF of antlion group increased(P<0 .05) ,but TNF and IL decreased sig‐nificantly(P<0 .05) .Conclu sion:The antlion in external application has positive effects on curing the local skin of rats scald model .【期刊名称】《陕西医学杂志》
【年(卷),期】2016(000)002
【总页数】3页(P131-132,135)
【关键词】烧伤;血管内皮生长因子;肿瘤坏死因子;白细胞介素-1;大鼠;地牯牛【作者】郭淑云;张薇;张文娟;戚志华
【作者单位】第四军医大学唐都医院西安710038;第四军医大学唐都医院西安710038;第四军医大学唐都医院西安710038;第四军医大学唐都医院西安710038
【正文语种】中文
【中图分类】R644
主题词烧伤血管内皮生长因子肿瘤坏死因子白细胞介素-1 大鼠 @地牯牛
地牯牛为脉翅目蚁蛉的幼虫，历来有入药记载，具有清热解毒、消肿散结等功效。临床用来治疗高热惊厥、跌打损伤、疟疾和外用于痈疮肿毒、中耳炎等症；有文献报道地牯牛醇提物有明显的镇痛、消肿及抗血栓作用；还有临床研究发现以地牯牛为主要成分的外敷散剂对褥疮的治疗有令人满意的效果，促进肉芽组织生长，溃疡愈合的效果明显优于其他对照组[1]。但现代药理学机制尚不清楚。不利于其在临床治疗中的推广应用。本实验通过建立大鼠烫伤模型，以麻油为阴性对照、表皮生长因子为阳性对照药，观察大鼠血中血管内皮生长因子(VEGF)、血清肿瘤坏死因子(TNF)、白介素(IL)的表达，烫伤创面变化、组织形态学改变，探讨地牯牛促进大鼠创面皮肤修复的作用机制，为其临床应用提供实验依据。
1 材料地牯牛(经我院中医科郭瑞林教授鉴定)，表皮生长因子(20131206)，麻油(上海太太乐食品有限公司)，TNF、VEGF、IL、ELISA试剂盒(欣博盛生物科技有限公司)MK3型酶标仪(芬兰 Thermo公司)。
2 模型制备与分组SD大鼠由第四军医大学动物实验中心提供[许可证号：
SCXK-(军)2012-0007]共60只，雌雄不限，体质量200±10 g，适应环境饲养1周，背部用电动脱毛器脱毛，取约2 cm厚度泡沫板一块，上挖面积2 cm×2 cm
洞两个，置于装有沸水的烧杯上方，烧杯下方置电加热套持续加热。抓住大鼠头尾部，背部紧贴泡沫板挖洞处10 s，造成大鼠背部1处III度烫伤创面，伤后即刻腹腔注射生理盐水抗休克。(面积2 c m×2 cm经组织病理学切片证实)。
3 方法①分组及造模：观察创面大体情况。将上述烫伤大鼠随机分5组：地牯牛治疗组，阳性药物治疗组，基质对照组，烫伤组，空白组每组12只，分别涂抹治疗药物。于造模后2
4 h、48 h、1 周、2周、3周分别取血，并取皮肤组织标本，用4%甲醛固定，石蜡包埋做病理学切片。②给药：造模后，各治疗组大鼠立即连续涂敷相应药物，治疗组(烫伤大鼠用地牯牛药粉加麻油调糊状，1次/d)，阳性药物对照组(烫伤大鼠用表皮生长因子， 1次/d)，基质对照组(烫伤大鼠麻油涂抹， 1次/d)，烫伤组(烫伤大鼠不给药物治疗)，空白组(正常无烫伤大鼠)。
4 检测指标及方法①创面大体观察：伤后24 h、48 h、1 周、2周、3周观察创面大体变化，记录创面愈合时间。观察不同组间大鼠造模后创面愈合时间、感染及创面结痂情况。②造模后不同时间点取动物血清检测VEGF、TNF、IL免疫组织化学观察结果。③创面组织形态学观察：造模后于不同时间点取创伤面皮肤标本置于10%甲醛中固定24 h，蒸馏水漂洗，梯度乙醇脱水后常规石蜡包埋切片行HE
染色后进行组织形态学观察。
4 统计学方法数据以±s表示，采用SPSS 13.0 统计软件进行单因素方差分析，P<0.0
5 为差异有统计学意义。
1 创面大体观察见图1～3。烫伤后，各组大鼠创面红肿突出，与周围正常皮
肤区别明显，无渗出。伤后1周，烫伤部位开始结痂。地牯牛组与阳性对照药组
在烫伤后3 d左右开始结痂，21 d左右伤口基本愈合，创面处留轻微愈合伤。
2 形态学及病理学观察伤后21 d，地牯牛组病例切片显示皮肤组织轻度慢性炎
(图4)，阳性对照药组病例切片显示皮肤组织慢性炎伴炎性渗出，肉芽组织增生及
多核巨细胞反应(图5)；麻油对照组病例切片显示皮肤组织慢性炎伴炎性渗出，坏
死及肉芽组织增生(图6)。
3 不同时间点动物血清TNF-α、VEGF、IL-1α免疫组织化学结果伤后随着时
间推移，地牯牛组大鼠创面愈合明显。烫伤后24 h，48 h VEGF水平明显高于阳
性对照组(P<0.05)见表1。IL-1α、TNF-α水平地牯牛组与阳性药对照组差异显著(P<0.05)见表2。同时期病理组织切片显示与其他检测结果相符。
本研究参考文献建立动物烫伤模型[2]，并对建模方法进行改进。蒸汽烫伤模型制
作简单，可一人独立完成，烫伤深度和面积均匀易控制，排除其他因素影响，稳定性高，重复性强。模型建立后烫伤局部出现皮肤发红、水肿，与临床烫伤症状一致，同时期病理组织切片也可验证烫伤结果。
实验研究表明地牯牛对创面愈合作用明显高于麻油组，HE染色结果也提示地牯牛能加速创面愈合。烫伤后，机体出现肌肤红肿热痛和渗出肿胀，大量炎性细胞浸润创面，创面愈合的过程中产生多种生长因子，在不同的阶段这些生长因子的表达随着创面愈合的变化而改变[3]。在本次实验中对VEGF、TNF、IL的表达进行了观察。VEGF是烫伤愈合过程中的关键。是一种特异性作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子，可促进新生血管生成，增加血管通透性和促进单核细胞游走等功能。本次实验中VEGF的表达在地牯牛组与阳性药物对照组各时间点差异显著，地牯牛组VEGF血清水平均高于阳性对照药物组。两组间随时间变化趋势走向大体相同，随着愈合时间的增加VEGF的表达呈下降趋势，变化规律明显与大鼠创伤愈合的进
程呈高度一致关系。
TNF与IL-1是参与炎症反应的重要因子之一[4]，本次研究结果显示，烫伤后组织释放大量炎症因子，动物血清中TNF和IL-1增加，随着时间改变逐渐减少。在这
个过程中，地牯牛组大鼠血清中TNF和IL-1的表达均低于阳性对照药物组，表明地牯牛能有效减少创面组织中TNF和IL-1等炎症因子的产生和释放，控制炎症反应强度，减轻过度炎症反应对创面的损伤。
地牯牛可加快烫伤创面愈合，增加动物血清中VEGF水平，同时降低血清炎性因子TNF-α与IL-1α的水平。本次实验为地牯牛治疗烫伤提供了实验依据，为进一步加深对地牯牛的临床研究提供理论支持。
参考文献
[1] 张胜，郭治友.黔南地区野生药用昆虫地牯牛资源初探[J].科技创新导报，2010，16：234.
[2] 贾美美，李玉桑，裴兰洁，等.三黄生肤油对兔III度烫伤创面的作用[J].中华烧伤杂志，2013，29(1)：50-54.
[3] 李文彬，闫小宁，田庆，等.半枝莲方对寻常银屑病血热证患者血清TNF-a 及VEGF的影响[J].陕西中医，2014 35(9)：1211-1213.
[4] 邓守恒，杨敬宁，曹凤君，等.芦荟多糖软膏对浅II度烫伤小鼠创面组织的促修复作用[J].时珍国医国药， 2010，21(8)：1981-1982.
(收稿：2015-07-27)
Effects of antlion on rats scald model
Tangdu Hospital， Fourth Military Medical University of PLA (Xi’an 71003 8)
Guo Shuyun Zhang Wei Zhang Wenjuan et al
ABSTRACT Objective：
To investigate the effects of antlion on rats scald model. Methods：
By keeping the dorsum skin of rats in 100℃ water vapor for 10 seconds to establish the rats scald model.Observing the effects of antlion on scald are
a and pathological changes of TNF、VEGF and IL.Results：
The scald model of rats was successfully established and the repair effects on wound skin of each antlion group was obviously better than that in oth er group. Compared with other group，
the VEGF of antlion group increased(P<0.05)，
but TNF and IL decreased significantly(P<0.05). Conclusion：
The antlion in external application has positive effects on curing the local s kin of rats scald model.
KEY WORDS Burns Vascular endothelial growth factors
Tumor necrosis factors Interleukin-1 Rats @Antlion
【中图分类号】R644
【文献标识码】 A
doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.02.001
·论著·基础研究·
*国家自然科学基金资助项目(81102836)
实验研究表明地牯牛对创面愈合作用明显高于麻油组，HE染色结果也提示地牯牛能加速创面愈合。烫伤后，机体出现肌肤红肿热痛和渗出肿胀，大量炎性细胞浸润创面，创面愈合的过程中产生多种生长因子，在不同的阶段这些生长因子的表达随着创面愈合的变化而改变[3]。在本次实验中对VEGF、TNF、IL的表达进行了观察。VEGF是烫伤愈合过程中的关键。是一种特异性作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子，可促进新生血管生成，增加血管通透性和促进单核细胞游走等功能。本次实验中VEGF的表达在地牯牛组与阳性药物对照组各时间点差异显著，地牯牛组VEGF血清水平均高于阳性对照药物组。两组间随时间变化趋势走向大体相同，随
着愈合时间的增加VEGF的表达呈下降趋势，变化规律明显与大鼠创伤愈合的进程呈高度一致关系。
TNF与IL-1是参与炎症反应的重要因子之一[4]，本次研究结果显示，烫伤后组织释放大量炎症因子，动物血清中TNF和IL-1增加，随着时间改变逐渐减少。在这个过程中，地牯牛组大鼠血清中TNF和IL-1的表达均低于阳性对照药物组，表明地牯牛能有效减少创面组织中TNF和IL-1等炎症因子的产生和释放，控制炎症反应强度，减轻过度炎症反应对创面的损伤。
地牯牛可加快烫伤创面愈合，增加动物血清中VEGF水平，同时降低血清炎性因子TNF-α与IL-1α的水平。本次实验为地牯牛治疗烫伤提供了实验依据，为进一步加深对地牯牛的临床研究提供理论支持。
[1] 张胜，郭治友.黔南地区野生药用昆虫地牯牛资源初探[J].科技创新导报，2010，16：234.
[2] 贾美美，李玉桑，裴兰洁，等.三黄生肤油对兔III度烫伤创面的作用[J].中华烧伤杂志，2013，29(1)：50-54.
[3] 李文彬，闫小宁，田庆，等.半枝莲方对寻常银屑病血热证患者血清TNF-a 及VEGF的影响[J].陕西中医，2014 35(9)：1211-1213.
[4] 邓守恒，杨敬宁，曹凤君，等.芦荟多糖软膏对浅II度烫伤小鼠创面组织的促修复作用[J].时珍国医国药， 2010，21(8)：1981-1982.
地牯牛对烫伤大鼠的治疗作用 郭淑云;张薇;张文娟;戚志华 【摘要】目的：探讨地牯牛外用对烫伤大鼠模型创面修复的影响。方法：大鼠背部皮肤用100℃水蒸气持续10 s造成烫伤模型；观察地牯牛外敷对烫伤大鼠创伤部位修复情况及相应时间内血清TNF、VEGF、IL的表达。结果：模型建立成功，结果显示地牯牛组组织形态学变化显著，创面愈合明显优于其他组。大鼠血清中血管内皮生长因子（VEGF）表达地牯牛组高于其他组（P＜0．05），血清肿瘤坏死因子（TNF）、白介素（IL）的表达地牯牛组低于其他组（P＜0．05）。结论：地牯牛外用对大鼠烫伤模型有显著的治疗效果。%Objective:To investigate the effects of antlion on rats scald model .Methods:By keeping the dorsum skin of rats in 100℃ water vapor for 10 seconds to establish the rats scald model .Observing the effects of antlion on scald area and pathological changes of TNF、VEGF and IL .Results:The scald model of rats was succe ss‐fully established and the repair effects on wound skin of each antlion group was obviously better than that in other group .Compared with other group ,the VEGF of antlion group increased(P<0 .05) ,but TNF and IL decreased sig‐nificantly(P<0 .05) .Conclu sion:The antlion in external application has positive effects on curing the local skin of rats scald model .【期刊名称】《陕西医学杂志》 【年(卷),期】2016(000)002 【总页数】3页(P131-132,135)