醇沉4组分芦荟多糖通过不同给药途径对SD大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合过程中纤维连接蛋白含量的影响
何洁;唐建红;刘川玉;冯熙;黄瑶
【摘要】目的研究醇沉4组分芦荟多糖对SD大鼠深Ⅱ度烫伤创面修复过程中皮
肤愈合率及皮肤组织中纤维连接蛋白(FN)含量的影响,探讨芦荟多糖促进烫伤创面
愈合的可能作用机制.方法大鼠背部用水浴烙铁法致伤,采用随机数字表法对大鼠分组.试验组用醇沉4组分(60％、70％、80％、90％比例)芦荟多糖水溶液采取外敷、灌胃及混合给药3种方式,对照组用生理盐水采取相同给药方式,2次/d.记录伤后3、7、14d创面愈合率,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定创面皮肤组织中FN含量.
结果与对照组比较,试验组愈合率明显升高,80％、90％芦荟多糖组于烫伤后14d
创面愈合率明显高于对照组(P＜0.01).FN含量在第7天达峰值,之后逐渐下降.伤后3、7、14d试验组创面FN含量均高于对照组,80％、90％芦荟多糖组FN含量于
第7、14天显著高于对照组(P＜0.01),80％芦荟多糖组FN含量最高.给药方式上
外敷优于灌胃,混合给药优于外敷给药.结论 80％芦荟多糖混合给药(外敷及灌胃)烫伤大鼠,促进伤口愈合的疗效最佳.芦荟多糖使烫伤创面皮肤组织中FN含量增加,促进创面皮肤愈合,为芦荟多糖制剂在烧烫伤方面的临床应用提供了实验依
据.%Objective To study the effects of aloe polysaccharide in four components of alcohol precipitation on the healing rate of skin and the contents of fibronectin (FN) during healing process in SD rats with scalded wound surface of deep Ⅱ degree,and to investigate the possible mechanism of aloe polysaccharide in promoting the healing of scalded wound surface.Methods The back of rats was injured by iron in boiling water,and the rats were grouped by random digits table.Experimental
group was applied with aloe polysaccharide aqueous solution in four components of alcohol precipitation (60％,70％,80％ and 90％),with 3 administration routes of external application,gastrogavage and mixing administer;control group was applied with physiological saline by the same administration routes,twice a day.The healing rate of wound surface was recorded after scalding for 3,7,14 d,and the content of FN in wound surface was determined by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).Results Compared with control group,the healing rate in experimental group was increased significantly,and the healing rates in 80％,90％ aloe polysaccharide groups after scalding for 14 d were significantly higher than that of control group (P ＜ 0.01).The contents of FN reached peak in seventh day,then they were gradually decreased.The contents of FN in wound surface after scalding for 3,7,14 d in the experimental group were all higher than those of control group,the contents of FN in 80％,90％ aloe polysaccharide groups after scalding for 7,14 d were significantly higher than that of control group (P ＜0.01),the content of FN in 80％ aloe polysaccharide grou p was the highest.In way of administration,external application was better than gastrogavage,and mixing administer was better than external application.Conclusion The efficacy of 80％ aloe polysaccharide by mixing administer (external application,gastrogavage) in scalded rats in promotingthe healing of wound is the best.Aloe polysaccharide makes the increase of FN in scalded wound surface,promote the healing of wound surface,and provide
experimental basis for the clinical application of aloe polysaccharide preparations in burn and scald.
【期刊名称】《中国医药导报》
【年(卷),期】2017(014)011
【总页数】4页(P22-25)
【关键词】芦荟多糖;醇沉;给药途径;烫伤创面;愈合;纤维连接蛋白;含量
【作者】何洁;唐建红;刘川玉;冯熙;黄瑶
【作者单位】桂林医学院附属医院药学部,广西桂林 541001;桂林医学院第二附属
医院药学部,广西桂林 541199;桂林医学院附属医院药学部,广西桂林 541001;桂林医学院附属医院药学部,广西桂林 541001;桂林医学院附属医院药学部,广西桂林541001
【正文语种】中文
【中图分类】R644
开发既能消炎止痛、抗感染、促进创面愈合且愈后瘢痕少，又经济便宜、操作方便的外用药物，成为目前临床上烧烫伤创面治疗的重点。芦荟是多年生百合科肉质草本植物，具有良好的抗炎[1]、抗氧自由基[2]、调节免疫[3]、促进创伤愈合[4]、
抗细菌[5]、抗真菌[6]、抗病毒[7]及抗辐射[8]、抗癌[9]等作用，广泛用于治疗烧
烫伤、创伤。芦荟多糖为主要生物活性成分，可刺激免疫，激活巨嗜细胞产生[10]，分泌多种细胞因子如表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、核因子等[11]；促进内皮细胞迁移、增殖并影响受损内皮细胞修复[12]，促进伤口愈合。研究发现芦荟凝胶对Ⅱ度烫伤大鼠具有促进创面愈合和减少瘢痕形成的作用[13]。本研究通过
建立大鼠深Ⅱ度烫伤模型，按鲜榨汁法制备库拉索芦荟凝胶中醇沉4组分芦荟多
糖水溶液采取外敷、灌胃及混合给药3种方式，观察大鼠烫伤创面愈合率及皮肤
组织中纤维连接蛋白（FN）含量，探讨芦荟多糖促进烫伤创面愈合的作用机制，
为芦荟多糖制剂在烧烫伤方面临床应用提供实验依据。
1.1 实验动物
SPF级SD大鼠450只，成年（12月龄），雌雄各半，体重（200±20）g，由桂林医学院科学实验中心动物室提供（桂动字第P0020500A号）。严格遵循科技部《关于善待实验动物的指导性意见》，经桂林医学院实验动物伦理委员会批准实施。
1.2 药品与试剂
芦荟多糖，采用百合科芦荟属植物库拉索芦荟去皮取肉质部分按鲜榨汁法提取，醇沉法制备。库拉索芦荟品种来源于桂林医学院药用植物园，经桂林医学院生药教研室唐爱莲教授鉴定为正品。大鼠FN酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒（SBJ，
96T，PD-7002）购自南京安培化工科技有限公司。
1.3 仪器
电子天平（HK-7532，瑞士Mettler公司）；振荡器（B0025，上海医科大学仪
器厂）；组织粉碎机（JB90-D，上海标本模型厂）；旋转蒸发仪（C0034，上海
医科大学仪器厂）；快速恒温数显水浴箱（JK-56，常州国华仪器厂）；-80℃超
低温冰箱（M-6200，日本Sanyo公司）；自动高速低温离心机（J6-HC，美国Beckman公司）；酶标仪（K-6010，美国Bio-Tek公司）。
1.4 方法
1.4.1 芦荟多糖水溶液制备
鲜榨汁法[14]制备芦荟凝胶。取新鲜库拉索芦荟叶，洗净沥干剪成长条状并去皮，取叶肉用组织粉碎机打成胶状，称定质量，将芦荟凝胶置于烧杯中加3倍量蒸馏水，0.5%活性炭脱色，超声30 min后60℃水浴30 min，6层纱布过滤后减压抽
滤。滤液置旋转蒸发仪中浓缩至原体积1/5，加0.2%～0.5%抗氧化剂Na2SO3防止氧化。
运用醇沉法[15]按60%、70%、80%、90%比例提取芦荟凝胶中的芦荟多糖。将制备好的新鲜芦荟凝胶各4份，3倍量蒸馏水于60℃水浴30 min充分溶解，减压抽滤，滤液分别用无水乙醇配成料液比为1∶1.50、1∶2.33、1∶4.00、
1∶9.00的芦荟凝胶-乙醇混合溶液，静置过夜，得白色絮状沉淀。倾去上清液，取下层混合液于60℃水浴蒸干，将所得物质再次加水复溶，重复操作，研磨得到白色均匀细腻的粉末，即醇沉4组分的芦荟多糖，蒸馏水溶解配制成浓度为10 mg/mL芦荟多糖水溶液，冷藏备用。
1.4.2 大鼠烫伤模型建立
大鼠腹腔麻醉，背部脱毛消毒，将开水浴中煮沸铁棒（横断面1.5 cm×1.0 cm）一端紧贴大鼠背部皮肤持续7 s，造成约10%面积烫伤，创面病理证实为深Ⅱ度，腹腔注射乳酸林格液5 mL抗休克。因背部烫伤部位大鼠未能舔食触及和搔抓，故将烫伤创面开放以随时观察创面愈合或感染情况。于室温22～25℃、湿度50%单笼饲养，自由摄食、饮水。
1.4.3 实验分组及给药方法
采用随机数字表法将450只SD大鼠随机分成对照组（90只）和试验组（360只）。试验组即芦荟多糖组，随机分为60%、70%、80%、90%芦荟多糖组，每组90只，按外敷、灌胃（每次10 mL）及混合（外敷及灌胃）3种给药方式（2次/d），分为三小组，每小组30只。试验组均按“1.4.1”法配制10 mg/mL芦荟多糖水溶液给药，对照组用与试验组等体积的生理盐水采取相同给药方式，如有感染用抗生素外涂。
1.4.4 标本处理
五组大鼠分别于烫伤后3、7、14 d每小组处死10只。取创面全层皮肤组织100
mg，去除痂皮并吸去血迹，按1 mL生理盐水/100 mg皮肤组织比例碾磨匀浆。将标本于4℃以下10 000 r/min（r=13.5 cm）离心15 min，取上清液于-20℃
以下保存。
1.5 检测指标
1.5.1 创面愈合率
烫伤后3、7、14 d记录创面愈合程度，将创面描记在半透明纸上，以此为模板，将质地均匀的硬纸片剪成同样大小，以硬纸片大小间接表示创面面积大小。创面愈合率（%）=（开始烫伤面积-未愈合创面面积）/开始烫伤面积×100%。
1.5.2 FN含量
取烫伤后3、7、14 d烫伤部位皮肤称重、定容、匀浆，测定组织液中FN含量，采用ELISA双抗夹心法检测。1.5.2.1建立标准曲线设标准孔10孔，1、2孔分别加标准品100 μL及稀释液50 μL，依次混匀、对倍稀释至9、10孔，稀释后各孔加样量均为50 μL，于450 nm波长处测吸光度。取每2孔平均值，以浓度C为
横坐标，吸光度A（OD值）为纵坐标，绘制标准曲线。得回归方程
A=0.0236C+0.252，R2=0.9947。见表1、图1。
1.5.
2.2 结果测定设空白对照孔（不加样品及酶标试剂）、待测样品孔，按加样、
温育、配液、洗涤、加酶、温育、洗涤、显色、终止步骤操作。以空白对照孔调零，于450 nm波长处依序测定每孔吸光度（OD值），将样本OD值代入标准曲线
方程，求出浓度，样品浓度×稀释倍数=样品的实际浓度。
1.6 统计学方法
采用SPSS 19.0软件分析，计量资料数据以均数±标准差（±s）表示，组间比较
采用单因素方差分析（One-way ANOVA）及方差齐性检验，方差齐采用LSD检验，方差不齐采用Tamhane's T2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。
2.1 各组烫伤创面愈合率比较
烫伤后第3天各组间差异无统计学意义（P＞0.05），第7天80%、90%芦荟多
糖组愈合率明显高于对照组（P＜0.05），第14天60%、70%芦荟多糖组愈合率高于对照组（P＜0.05），80%、90%芦荟多糖组愈合率显著高于对照组（P＜
0.01）。试验各组组间差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。
2.2 各组烫伤创面皮肤组织纤维连接蛋白含量变化比较
烫伤后各组FN含量随着时间的延长而逐渐增加，烫伤后第7天达高峰，试验组FN含量均高于对照组，80%芦荟多糖组FN含量最高。给药方式上外敷优于灌胃，混合给药优于外敷给药。烫伤后第3天，80%、90%芦荟多糖组FN含量明显高
于对照组（P＜0.05）；烫伤后第7、14天，60%、70%芦荟多糖组FN含量高于对照组（P＜0.05），80%、90%芦荟多糖组FN含量显著高于对照组（P＜
0.01）。试验各组组间差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。
烫伤创面修复愈合受多种因素影响，早期与局部炎性反应，后期与上皮细胞增殖、结缔组织形成、伤口收缩改建有关[16-17]。FN促进细胞与纤维基质间连接生长，与创伤修复过程密切相关，为伤口愈合关键物质[18-19]。芦荟多糖促进FN合成，加速胶原蛋白生物合成降解，使伤口愈合加速[20]。
与对照组相比，试验组烫伤创面愈合时间明显缩短，烫伤后第7、14天愈合率明
显提高（P＜0.05）。试验组FN含量明显高于对照组，表明芦荟多糖给药促进烫
伤创面皮肤组织内FN合成，达到愈合创面皮肤作用。80%芦荟多糖组混合给药
FN含量最高，研究表明[21]，芦荟凝胶中多糖含量与醇沉比例呈正相关，但并非
比例越大越好，以80%醇沉组多糖含量最高，故促进创面愈合疗效最佳。FN含量于烫伤后第7天达到峰值，之后逐渐下降。由于烫伤早期损伤修复由肉芽组织即
新生毛细血管和纤维母细胞修复，烫伤晚期肉芽组织中毛细血管成熟并减少，纤维母细胞转变为纤维细胞并产生胶原纤维[22]，因此芦荟多糖在烫伤早期促进组织修复，烫伤晚期由于组织修复较快，加速肉芽组织形成和老化而减少瘢痕形成，FN
含量下降。
总之，芦荟多糖促使烫伤创面皮肤组织中FN含量增加，加速创面皮肤愈合，以80%芦荟多糖混合给药（外敷及灌胃）方式促进愈合疗效最佳，为芦荟多糖制剂在烧烫伤方面的临床应用提供实验依据。
【相关文献】
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中华急诊医学杂志，2012，15（5）：406-409.
地牯牛对烫伤大鼠的治疗作用 郭淑云;张薇;张文娟;戚志华 【摘要】目的：探讨地牯牛外用对烫伤大鼠模型创面修复的影响。方法：大鼠背部皮肤用100℃水蒸气持续10 s造成烫伤模型；观察地牯牛外敷对烫伤大鼠创伤部位修复情况及相应时间内血清TNF、VEGF、IL的表达。结果：模型建立成功，结果显示地牯牛组组织形态学变化显著，创面愈合明显优于其他组。大鼠血清中血管内皮生长因子（VEGF）表达地牯牛组高于其他组（P＜0．05），血清肿瘤坏死因子（TNF）、白介素（IL）的表达地牯牛组低于其他组（P＜0．05）。结论：地牯牛外用对大鼠烫伤模型有显著的治疗效果。%Objective:To investigate the effects of antlion on rats scald model .Methods:By keeping the dorsum skin of rats in 100℃ water vapor for 10 seconds to establish the rats scald model .Observing the effects of antlion on scald area and pathological changes of TNF、VEGF and IL .Results:The scald model of rats was succe ss‐fully established and the repair effects on wound skin of each antlion group was obviously better than that in other group .Compared with other group ,the VEGF of antlion group increased(P<0 .05) ,but TNF and IL decreased sig‐nificantly(P<0 .05) .Conclu sion:The antlion in external application has positive effects on curing the local skin of rats scald model .【期刊名称】《陕西医学杂志》 【年(卷),期】2016(000)002 【总页数】3页(P131-132,135)
芦荟药理作用研究进展 李聚仓;王德才 【摘要】@@ 芦荟(Aloe)隶属于百合科,其味苦性寒,归肝、胃、大肠经.具清肝热、通便等功效.药用芦荟中常用的有库拉索芦荟、好望角芦荟、中华芦荟、皂草芦荟 和木立芦荟等品种. 【期刊名称】《泰山医学院学报》 【年(卷),期】2011(032)002 【总页数】3页(P158-160) 【关键词】芦荟;药理作用;进展 【作者】李聚仓;王德才 【作者单位】泰山医学院药学院,山东,泰安,271016;泰山医学院药学院,山东,泰 安,271016 【正文语种】中文 【中图分类】R285 芦荟(Aloe)隶属于百合科, 其味苦性寒，归肝、胃、大肠经。具清肝热、通便等功效。药用芦荟中常用的有库拉索芦荟、好望角芦荟、中华芦荟、皂草芦荟和木立芦荟等品种。现代研究发现，芦荟具有抗菌、抗炎、调节免疫、抗肿瘤、调节血糖等多种药理作用。现将芦荟近年来药理作用的研究阐述如下。 1 抗菌作用
研究表明，芦荟具有抗菌杀菌作用。薛春兰等[1]通过从芦荟中提取有效成分，按一定的比例进行配伍,制备复方芦荟抑菌药膜，检测药膜对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、乙型溶血性链球菌、普通变形杆菌和铜绿假单胞菌这6种临床感染的常见菌、耐药菌的抑菌效果。结果显示对前三者均有不同程度的抑菌效果,但对后三者抑菌效果不明显。Shilpakala SR[2]也在体外测定大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对芦荟凝胶的敏感性，发现金黄色葡萄球菌比大肠杆菌更敏感，这种差异归因于这两种细菌的结构不同。对芦荟汁的抑菌作用及热稳定性进行了研究发现芦荟外皮汁比芦荟凝胶汁有较强的抑菌作用，并且芦荟汁的热稳定性较好。ASP-1是从中华芦荟中分离到一种多糖，体外试验表明该物质表现出显著的清除自由基和防止氢过氧化物所引起的PC12细胞的损伤的作用。同时对一些与心血管疾病及帕金森症相关的自由基有显著的治疗和防治作用 [3]。 2 抗肿瘤作用 芦荟具有抗癌抗肿瘤的作用。苗艳艳[4]通过培养原代培养肝癌细胞, 于分离培养第2天,加芦荟多糖AP11、芦荟多糖AP11干预和未干预的外周血单个核细胞(PBMC)于癌细胞中,倒置显微镜观察其对癌细胞形态的影响,MTT法观察其对癌细胞生长的影响。结果显示芦荟多糖组癌细胞在形态上无明显差别，癌细胞的生长也无明显影响。芦荟多糖AP11干预和未干预PBMC组癌细胞形态均有较大变化 ,也显著抑制癌细胞的生长。提示芦荟多糖AP11无直接体外抗肿瘤活性,其抗肿瘤机制可能是通过与PBMC的相互作用,通过调节机体的免疫系统而达到的。并通过进一步实验证明AP体外抗肿瘤作用与提高免疫和促进肿瘤坏死因子释放有关[5]。芦荟大黄素具有明显的抗肿瘤的作用，Lee等[6]研究表明,芦荟大黄素通过在肺癌细胞中产生抗性氧化物诱导DNA的损伤,从而导致癌细胞(H460 cell)的衰亡。芦荟大黄素还能抑制黑色素瘤细胞的增殖和入侵能力, 同时改变细胞分化的途径[7]。 3 免疫调节
芦荟多糖的研究进展 何洁;房振京 【摘要】芦荟是多年生百合科肉质草本植物,芦荟多糖为其主要生物活性成分,具有多种药理作用.本研究分别从化学研究、药理活性和提取分离工艺等方面对研究芦荟多糖的文献资料进行综述,为开展芦荟多糖的临床研究做好前期准备工作. 【期刊名称】《华夏医学》 【年(卷),期】2017(030)002 【总页数】4页(P188-191) 【关键词】芦荟多糖;化学研究;药理活性;提取分离 【作者】何洁;房振京 【作者单位】桂林医学院附属医院药学部,广西桂林541001;桂林医学院附属医院药学部,广西桂林541001 【正文语种】中文 【中图分类】R282.71 芦荟[Aloe vera var.chinesis(haw.)Berg.]为百合科植物芦荟或同属植物的叶汁干燥品，含有蒽醌类化合物、糖类、氨基酸和各种有机酸、活性酶等多种化学成分。糖类是芦荟凝胶部分去除水分干燥后所得固形物中的主要成分，其中大部分是具有重要生物活性作用的多糖。 芦荟多糖(Polysaccharide of Aloe，AP)占芦荟凝胶总固体的60%以上，基本结构是由线性的β-(1，4)-D甘露糖基本单元组成的一种长链聚合物[1]。具有良好的
治疗烧烫伤、抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、抗氧自由基[2]、抗菌消炎[3]、降血糖与 免疫调节等诸多药理作用。随着研究不断深入，又相继发现具有保肝、降糖及抗突变、艾滋病防治等新的药理作用。近年来国内外对芦荟多糖各方面有较多研究和报道，本研究主要就其化学研究、药理活性和提取分离工艺等方面的研究进展作一综述。 芦荟多糖是一大类具有不同生理功能的大分子化合物，其活性与分子量、溶解度和糖链结构有关，尤其与糖链结构的分支程度、位置有关[4]。主要由甘露糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖组成，其中以甘露糖(60.73%)、半乳糖(16.42%)、葡萄糖(9.16%)含量居多。芦荟叶肉中的黏性物质以甘露聚糖为主，但不同品种芦荟中组成多糖的单糖种类及其摩尔比不同。 有学者对日本木立芦荟和中华芦荟中碳水化合物的组成进行比较分析，结果表明木立芦荟是一个以半乳糖为主的，还有甘露糖、葡萄糖和阿拉伯糖组成的中性杂多糖，而中华芦荟多糖则是以甘露糖为主，半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖及葡萄糖醛酸为辅组成的酸性杂多糖。据报道采用离子交换柱层析从中华芦荟原始多糖中分离并提纯得到一种中性糖，经分析测定证明为一种纯度较高的、部分乙酞化的β-1,4-D-聚 吡喃甘露糖。 2.1 免疫调节作用 芦荟多糖对机体免疫系统功能有全面的调节作用，可增强T、B淋巴细胞的分化和增殖，增强T淋巴细胞的细胞毒性[5]。并能显著提高巨噬细胞内乳酸脱氢酶、酸 性磷酸酶、精氨酸酶等3种酶的活性，促进肿瘤坏死因子a和白细胞介素1(IL-1) 的释放[6]。李建华[7]研究表明其可促进小鼠免疫器官脾脏、胸腺的增长，并显著 提高腹腔巨噬细胞的吞噬百分数和指数。陈丹等[8]以环磷酞胺建立小鼠免疫抑制 模型，观察到木立芦荟多糖能增加免疫抑制小鼠血清肿瘤坏死因子a和IL2水平，使血清IgG水平明显增加。孙培[9]以羊红细胞为抗原给小鼠注射后，用芦荟多糖