苯巴比妥含量的测定

文件名称苯巴比妥质量标准共 3 页第 1 页文件编号TS-02-006 编制部门质量部状态正式版本号00 备份起草人起草日期年月日号审核人审核日期年月日生效日期批准人批准日期年月日年月日分发部门质量部、生产技术部、质保处、质检处、生产车间、物流部目的建立苯巴比妥质量标准，作为采购、QC分析、车间使用的标准依据，确保生产中使用合格的茶碱。

范围本标准适用于茶碱的质量管理。

责任本标准由质量部起草；物流部负责按照本标准采购，QC处负责按本标准检验，QA负责监督；生产车间负责按照本标准使用。

内容1品名：1.1 中文名：苯巴比妥1.2 英文名：Phenobarbital1.3汉语拼音名：Benbabituo2 分子式、结构式、化学名、分子量2.1 分子式：C12H12N2032.2 结构式：2.3 化学名：5-乙基-5-苯基-2，4，6（1H,3H,5H）-吡啶三酮；2.4 分子量：232.24。

3 理化性质3.1 本品为白色有光泽的结晶性粉末，无臭，味微苦，饱和水溶液显酸性反应。

3.2本品在乙醇或乙醚中溶解，在三氯甲烷中略溶，在水中极微溶解，在氢氧化钠或碳酸钠溶液中溶解。

3.3 熔点：本品的熔点（附录Ⅵ C）为174.5-178℃。

4 产品规格和包装形式25kg/桶，双层聚乙烯薄膜袋包装（其中直接接触茶碱的为药用聚乙烯薄膜袋），放于纸板桶中。

5 内部使用代码：1006。

6 经批准的供应商：辽宁省医药物资有限公司。

7 标准依据：中国药典2010年版(ChP2010)。

8 取样、检验方法或相关操作规程编号见《苯巴比妥检验标准操作规程》SOP-08-306和《原辅料取样规程》SOP-08-048。

9 定性和定量的限度要求9.1 鉴别：9.1.1 取本品约10mg，加硫酸2滴与亚硝酸钠约5mg，混合，即显橙黄色，随即转橙红色。

9.1.2 取本品约50mg，置试管中，加甲醛试液1ml,加热煮沸，冷却，沿管壁缓缓加硫酸0.5ml，使成两液层，置水浴中加热，接界面显玫瑰红色。

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H NaO N O
CH2 N
O CH3 CH3
2Na2S2O3
• 取本品约0.1g，精密称定，置250ml碘瓶中，加水 10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.1mol/L） 25ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1min，在暗 处静置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液 10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液 （0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继 续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。 每1ml溴滴定液（0.1mo1/L）相当于13.01mg的 C12H17N2NaO3。
提取分离的主要目的是消除干扰物质对测定的影响。根据巴 比妥类药物具有弱酸性，在氯仿等有机溶剂中易溶，而其钠盐 在水中易溶的特点。测定时取供试液适量，加酸酸化后，用氯 仿提取巴比妥类药物。氯仿提取液加pH7.2～7.5缓冲溶液， 振摇，分离弃去水相缓冲液层。再用0.45mol/L氢氧化钠溶 液提取氯仿层中的巴比妥类药物，将碱提取液调节至适宜pH， 然后选择相应的吸收波长进行测定。
c(g/100ml)

A E11c%ml
c(g/ml )

A E11c%ml 100
B、标准曲线法
C、对照法
A供 A对

E11c%m c供l E11c%m c对l
A对 ＝C对 A供 C供
C供＝
A供 A对
C对
注射用硫喷妥钠含量测定
取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量 (约相当于硫喷妥钠0.25g)，置500ml量瓶中，摇匀， 量取此溶液用0.4% NaOH溶液定量稀释制成每1ml中约 含5µg的溶液；
H
NaO N O
N
CH2
+ Br2

摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液 （0.1mol/L）滴定，至近终点时， 加淀粉指示液，继续滴定至蓝色 消失，并将滴定结果用空白试验 校正。每1ml溴滴定液（0.1mo1/L） 相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。
原料药：剩余滴定法（回滴定法）
作空白实验的百分含量计算： Vo：空白试验消耗滴定液的体积， V：样品测定消耗滴定液的体积， F：滴定液浓度矫正因子
百分含量 T（V0 V）F 100 % ms
CM T （滴定度） n C：摩尔浓度，M：摩尔质 0.1 mol L 260.27 g mol 量（分子量），n：滴定液 2 的摩尔数。 13.01 mg ml
3. 注意事项 （1）操作中要防止溴和碘的逸失
（2）平行条件进行空白试验可减少溴
T——滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的mg数 V——滴定时，供试品消耗滴定液的体积（ml） V0——滴定时，空白消耗滴定液的体积（ml）
c实测 F——浓度校正因子 F c标准
ms——供试品的质量
2. 非水溶液滴定法 巴比妥类药物在非水溶液中 的酸性增强，用碱滴定，终 点明显。
溶
剂：二甲基甲酰胺
检查方法： 碱性条件下乙醚提取，蒸 干乙醚，称重。不能超过0.3%。
（二） 司可巴比妥钠的特殊杂质 检查 1 溶液的澄清度 极易溶于水， 水溶液应澄清，用新煮沸过的冷 水，以防与二氧化碳反应，析出 司可巴比妥（司可巴比妥比碳酸 的酸性更弱）。
取本品1.0g，加新沸过 的冷水10ml，溶液应澄清。
每1 ml 硝酸银滴定液（0.1 mo1/L） 相当于22.63 mg的异戊巴比妥 C11H18N2O3。
3. 注意事项
（1）无水碳酸钠应新鲜配制

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祝各位身体健康、工作顺利、家 庭幸福。
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胶束具有增溶作用，水溶液中胶束的存在能使不溶 或微溶于水的有机化合物的溶解度增加，并显著改变 弱酸、弱碱性物质的解离，使其酸碱性增强。
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正胶束
H2O
反胶束
溴化十六烷基三甲基苄铵
Cetyltrimethylbenzylammonium bromide，
CTMA 氯化四癸基二甲基苄铵
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单组分定量的方法：
A、吸收系数法（绝对法）
A E11c%mcl
A c(g/100)ml
E11c%ml
A c(g/m)l E11c%ml100
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B、标准曲线法
C、对照法
A供 A对
E11c%mc供l E11c%mc对l
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A对 ＝ C 对 A供 C 供
C供＝
A供 A对
采用本法测定巴比妥和苯巴比妥的结果的
相对标准差（RSD）均小于0.3%，并优于在
水-乙醇混合溶液中的滴定方法。
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原料药 直接滴定法（有空白校正）
D%T(VV0)f10% 0 W
T－滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的mg数 V－滴定时，供试品消耗滴定液的体积（ml） VO－滴定时，空白消耗滴定液的体积（ml） f－浓度校正因子
H
NaON O
N
C2H +
2 Br
H
NaON N
OBrBr C2H
O C3HC3H（定量过量）
O C3HC3H
Br2 + 2KI 2KBr + I2 （剩余） I2 + 2Na2S2O3 → 2NaI + Na2S4O6

RP-HPLC测定拉莫三嗪和苯巴比妥的血药浓度目的:建立RP-HPLC法同时测定人血清中抗癫痫药拉莫三嗪和苯巴比妥浓度的方法。

方法:采用Agilent Zorbax XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱;流动相:0.1%乙酸-乙腈,梯度洗脱;检测波长:240 nm;流速:1.0 ml/min。

结果:拉莫三嗪和苯巴比妥的血药浓度分别在0.02～1.00 μg、0.02～3.00 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率分别为97.62%和97.96%,拉莫三嗪2.0、20.0、40.0 μg/ml 日内精密度(RSD,n=5)分别为 4.3%、3.9%和 2.9%,日间精密度(RSD,n=5)分别为5.1%、5.4%%和3.9%;苯巴比妥5.0、20.0和50.0 μg/ml日内精密度(RSD,n=5)分别为3.5%、4.2%和3.6%,日间精密度(RSD,n=5)分别为5.0%、4.7%和4.2%。

结论:本方法简便、准确、重现性好,可用于临床上常规监测拉莫三嗪和苯巴比妥的血药浓度。

[Abstract] Objective: To establish a method for the content determination of lamotrigine and phenobarbital in human plasma by RP-HPLC. Methods: The Agilent Zorbax XDB-C18 (4.6 mm×150 mm, 5 μm) column was used. The mobile phases consisted of 0.1% acetic acid and acetonitrile, gradient elution. The flow rate was 1.0 ml/min and the detection wavelength was at 240 nm. Results: The linear ranges of Diphenhydramine Hydrochloride were at 0.02-1.00 μg and 0.02-3.00 μg, respectively. Lamotrigine presented a good linear relationship in the range of 1.00-50.0 μg/ml (r=0.999 1); phenobarbital in the range of 1.00-150.0 μg/ml (r=0.999 0). The intra-day RSD (n=5) of 2.0, 20.0 and 40.0 μg/ml of lamotrigine were 4.3%, 3.9% and 2.9%; the inter-day RSD (n=5) were 5.1%, 5.4% and 3.9%. The intra-day RSD of 5.0, 20.0 and 50.0 μg/ml of phenobarbital were 3.5%, 4.2% and 3.6% (n=5); the inter-day RSD were 5.0%, 4.7% and 4.2% (n=5),respectively. The recovery rates (n=5) of lamotrigine and phenobarbital were 97.62% and 97.96%, respectively.Conclusion: The method is fast, reliable, accurate and can be used in monitoring plasma levels of lamotrigine and phenobarbital in clinic.[Key words] Lamotrigine; Phenobarbital; Serum level of drug; Gradient elution; Content determination; RP-HPLC拉莫三嗪(1amotrigine,LTG)为一种新型的广谱抗癫痫药,对部分性发作、GTCS、Lennox-Gastaut综合征、失神发作和肌阵挛发作有效,临床上用于难治性癫痫的辅助治疗[1-3]。

CH2 N
O CH3 CH3
2Na2S2O3
• 取本品约0.1g，精密称定，置250ml碘瓶中，加水 10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.1mol/L） 25ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1min，在暗 处静置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液 10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液 （0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继 续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。 每1ml溴滴定液（0.1mo1/L）相当于13.01mg的 C12H17N2NaO3。
原料药 剩余滴定法
D% V空 V样 f T 100%
W
T cM n
0.1mol L 260.27 g mol 2
13.01mg ml
溴滴定液（0.1 mol/L）的配制
取溴酸钾3.0 g与溴化钾15 g，加水适量使溶解成 1000 ml，摇匀。
KBrO3＋5KBr＋6HCl→3Br2＋6KCl＋3H2O
（四）紫外分光光度法
巴比妥类药物在酸性介质中几乎不电离，无明显 的紫外吸收。但在碱性介质中电离为具有紫外吸收 特征的结构，因而可采用紫外分光光度法测定其含 量。本法灵敏度高，专属性强，广泛应用于巴比妥 类药物的原料及其制剂的含量测定，以及固体制剂 的溶出度和含量均匀度检查，也常用于体内巴比妥 类药物的检测。
2.测定方法与计算
例如:异戊巴比妥及其钠盐的测定： 取本品约0.2g 加甲醇40ml使溶解 新鲜配制的3%无
水 碳 酸 钠 溶 液 15ml ， 照 电 位 法 ， 用 硝 酸 银 滴 定 液 （ 0.1mol/L ） 滴 定 ， 即 得 。 每 1ml 硝 酸 银 滴 定 液 （ 0.1mol/L ） 相 当 于 22.63mg 的 C11H18N2O3 （ 或 24.83mg的C11H17N2NaO3）。 原料药：直接滴定法（容量分析法）

O C2H5 C NH C C C NH O
NaNO2
O
C2H 5 R
ON
1
CO NH C CO NH
NO
C O
Na2C
H2SO4
R2
橙黄色→橙红色
（2）甲醛-硫酸反应（区别苯巴比妥）：
O C2H5 C NH C C C NH O
HCHO
O
玫瑰红色
（接界面）
H2SO4
3.丙二酰脲类的鉴别反应与金属离子反应
• 样品前处理：液-液或固-液萃取
• 测定方法：高效液相色谱法、高效毛细管
电泳法、色谱质谱联用法和荧光偏振免疫 分析法等。
(2)与铜盐的反应
吡 啶
水
有色配位化合物 部分离子化 ＋
注意事项：
a.巴比妥类药物显紫色溶液或沉淀 ——一般鉴别试验（ChP） b.含S巴比妥 显绿色(硫喷妥—特征反应)
与铜盐的反应
取供试品约 50mg ，加吡啶溶液（ 1→10 ） 5m1 ，溶解后，加铜吡啶试液（硫酸铜 4g ，水 90ml 溶解后，加吡啶 30m1 ，即得） 1m1 ，即显紫色或生 成紫色沉淀。
• 4.IR
• 羧基、磺酰胺基、对位取代的苯环的特征
吸收峰。
（二）苯巴比妥应检查：
1.酸度 控制副产物苯基丙二酰脲。指示剂为甲基 +水10ml 橙。
苯巴比 +水10ml 妥0.20g 煮沸搅拌 放冷 滤过 1min 滤液 滤渣 不得显红色 5ml +甲基橙1d
2.乙醇溶液的澄清度
供试品1.0g 乙醇5ml 加热回流 澄清 3min
妥类药物的含量。
滴定开始时生成可溶性的一银盐，当所有的巴
比妥类药物都形成一银盐，出现二银盐的沉淀时就

5.方茴说：“那时候我们不说爱，爱是多么遥远、多么沉重的字眼啊。

我们只说喜欢，就算喜欢也是偷偷摸摸的。

”6.方茴说：“我觉得之所以说相见不如怀念，是因为相见只能让人在现实面前无奈地哀悼伤痛，而怀念却可以把已经注定的谎言变成童话。

”7.在村头有一截巨大的雷击木，直径十几米，此时主干上唯一的柳条已经在朝霞中掩去了莹光，变得普普通通了。

8.这些孩子都很活泼与好动，即便吃饭时也都不太老实，不少人抱着陶碗从自家出来，凑到了一起。

9.石村周围草木丰茂，猛兽众多，可守着大山，村人的食物相对来说却算不上丰盛，只是一些粗麦饼、野果以及孩子们碗中少量的肉食。

第五章巴比妥类药物的分析五、含量测定题（根据下列药物结构，按规定方法测定其含量，并写出测定方法的原理、主要条件及药物名称）1．用银量法测定苯巴比妥钠的含量。

原理：分子结构中含有丙二酰脲基团，在碳酸钠介质中可与硝酸银定量反应。

根据消耗硝酸银的量可计算出苯巴比妥钠的含量。

主要条件：①甲醇作溶剂。

②加新配制的无水碳酸钠溶液后滴定。

③用电位法指示终点。

④滴定剂为0.1 mol/L硝酸银滴定液。

2．用紫外分光光度法测定硫喷妥钠的含量。

原理：硫喷妥钠在0.4%NaOH溶液中，于304 nm波长处有最大吸收，因此可采用紫外分光光度法中的对照品对照法测定其含量。

主要条件：①需要硫喷妥钠或硫喷妥对照品。

②在0.4%NaOH溶液中测定吸收度。

六、问答题1．丙二酰脲类药物鉴别试验包括哪些反应，主要用于哪一类药物的鉴别？丙二酰脲类鉴别试验包括银盐反应和铜盐反应，是巴比妥类药物环状丙二酰脲母核特殊的反应；是巴比妥类药物共有的鉴别试验。

因此主要用于巴比妥类药物的鉴别。

2．苯巴比妥及其钠盐的化学鉴别方法有哪几种？药品标准中常收载的苯巴比妥及其钠盐的鉴别方法有硝化反应，硫酸-亚硝酸钠反应和甲醛-硫酸反应。

3．简述硫喷妥钠硫元素鉴别试验的基本原理。

利用硫喷妥钠在氢氧化钠试液中与铅离子反应生成白色硫喷妥铅盐沉淀，加热后转变成黑色的硫化铅沉淀4．巴比妥类药物银量法药品标准中为什么要求采用电位法指示终点？利用巴比妥类药物与银离子生成二银盐白色沉淀指示终点时，由于终点的沉淀浑浊不易观察，而且沉淀的溶解度受温度的影响，使终点的观察产生误差较大。

药物中的苯巴比妥和苯妥英药物〔二〕分光光度法A试剂A.a水饱和的15%正戊醇的CHCl3溶液将500ml15%正戊醇的CHCl3溶液用25ml水饱和后，静置30min。

为确定试剂的适用性，将80ml溶液通过制备好的柱子，然后再通过25ml水饱和的CHCl3，在蒸汽浴上及空气流中蒸发至干。

用乙醇溶解并稀释至25.0ml，用1cm吸收池于自动记录分光光度计上读出320－250nm范围的吸光度A；如果(A258-A263)≤0.190，则应进行空白校正。

较高的△A表示，必须使用更高一级的试剂。

A.b乙酸-氯仿溶液1%HOAc水饱和的CHCl3溶液。

B标准的配制B.a苯巴比妥标准溶液准确称量并转移20mg苯巴比妥，USP，至50ml容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至体积。

用移液管移取10ml此溶液至125ml带玻塞的锥形瓶中，在蒸汽浴上及空气流中蒸发至干〔用1cm吸收池，在最大吸收波长纸253nm处，4mg/100ml0.1NNaOH溶液的吸光度A约为1.30〕。

B.b苯妥因〔5，5-二苯基乙内酰脲〕标准溶液准确称量并转移90mg二苯基乙内酰脲至50ml容量瓶中，用乙醇溶解，并稀释至体积。

用移液管移取10ml此溶液至125ml带玻塞的锥形瓶中，在蒸汽浴上及空气流中蒸发至干〔用1cm吸收池，在最大吸收波长约258nm处，18mg/25ml乙醇的吸光度A约为1.90〕。

C样品的制备将500ml15%正戊醇的CHCl3溶液用25ml水饱和后，静置30min。

为确定试剂的适用性，将80ml溶液通过制备好的柱子，然后再通过25ml水饱和的CHCl3，在蒸汽浴上及空气流中蒸发至干。

用乙醇溶解并稀释至25.0ml，用1cm吸收池于自动记录分光光度计上读出320－250nm范围的吸光度A；如果(A258-A263)≤0.190，则应进行空白校正。

较高的△A表示，必须使用更高一级的试剂。

D柱的制备取直径25mm，长15－30cm的玻璃管，柱颈用玻璃毛塞住，带有重约32g有20-22mm夯头的玻璃捣榛。

药物分析苯巴比妥的分
析
Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】
2017药物分析：苯巴比妥的分析
苯巴比妥的分析
(一)鉴别
1.亚硝酸钠-硫酸反应：显橙黄色，随即转为橙红色。

苯环特征反应，可鉴别苯巴比妥与其他不含苯环的巴比妥类
2.甲醛-硫酸反应：界面显玫瑰红色。

区别苯巴比妥与其他不含苯环的巴比妥类
3.红外光谱
4.丙二酰脲类反应
(1)与银盐反应：一银盐溶解，二银盐不溶
(2)与铜盐反应：显紫色
(二)特殊杂质的检查
1.酸度在苯巴比妥的合成中乙基化反应不完全，生成苯丙二酰脲，酸性强于苯巴比妥，可使甲基橙指示剂显红色。

规定在一定量供试液中加甲基橙指示剂不得显红色。

2.乙醇溶液澄清度苯巴比妥酸在乙醇中溶解度小，而主成分溶解度大。

检查乙醇溶液澄清度来检查巴比妥酸杂质。

3.中性或碱性物质主要是副产物或分解产物，为中性或碱性物质，不溶于氢氧化钠而溶于醚。

用乙醚提取分离后称重检查限量。

(三)含量测定
银量法：利用丙二酰脲类的银盐反应。

若用二银盐浑浊来指示终点，在实际操作中反应较慢，难于判断浑浊的出现。

采用电位法指示终点可消除该缺陷。