血液样本采集和血涂片制备

临床医学检验技术(士)：血液样本采集和血涂片制备考点1、单选正常人血液pH为（）A.7.05～7.15B.7.15～7.25C.7.25～7.35D.7.35～7.45E.7.45～7.55答案（江南博哥）：D参考解析：正常人血液pH值为7.35～7.45。

2、单选瑞氏染液中起固定作用的是（）A.伊红B.亚甲蓝C.甲醇D.沙黄E.甘油正确答案：C参考解析：瑞氏染料由酸性染料伊红（E-）和碱性染料亚甲蓝（M+）组成，将适量伊红、亚甲蓝（又名美蓝）溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。

甲醇的作用：一是溶解伊红和美蓝；二是固定细胞形态。

3、单选枸橼酸钠抗凝剂的原理是（）A.阻止凝血酶的形成B.阻止血小板的聚集C.除去球蛋白D.与血液中的钙离子形成螯合物E.除去纤维蛋白原正确答案：D参考解析：枸橼酸钠抗凝剂的原理是枸橼酸钠与血液中的钙离子形成螯合物阻止血液凝固。

4、单选网织红细胞计数灵敏的染色方法是（）A.煌焦油蓝染液B.碱性亚甲蓝染液C.墨汁负染色D.抗酸染色E.瑞氏染液正确答案：A参考解析：1.瑞氏染料由酸性染料伊红（E-）和碱性染料亚甲蓝（M+）组成，将适量伊红、亚甲蓝（又名美蓝）溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。

2.网织红细胞计数原理：经体外活体染色，网织红细胞内RNA的磷酸基带有负电荷，能与新亚甲蓝、灿烂甲酚兰（煌焦油蓝）、中性红等碱性染料带正电荷的有色反应基团结合，使RNA胶体间电荷减少，分子间斥力下降失去分散力，形成核酸与碱性染料复合物的多聚体，呈深染的颗粒状或网状结构。

凡含两个以上的深染颗粒或具有网状结构的无核红细胞，即为网织红细胞。

5、单选不适用于凝血象检查和血小板功能试验的抗凝剂是（）A.EDTA盐B.枸橼酸钠C.草酸盐D.双草酸盐E.肝素正确答案：A参考解析：肝素可以保持红细胞的自然形态，是红细胞渗透脆性试验的理想抗凝剂；枸橼酸钠对凝血因子V有较好的保护作用，使其活性缓慢减低，故常用于凝血象的检查，也用于红细胞沉降率的测定，因毒性小，是输血保养液的成分之一；EDTA-K2对血细胞的影响最小，是全血细胞分析的理想抗凝剂，不适于凝血检查、血小板功能试验；草酸铵对红细胞破坏力较强，保持血小板形态完整适用于血小板计数；乙二胺四乙酸（EDTA）盐影响血小板聚集，不适合于做凝血象检查和血小板功能试验。

实验报告血涂片的制备实验报告：血涂片的制备引言：血涂片是一种常见的实验技术，用于观察和分析血液细胞的形态和数量。

通过制备血涂片，我们可以了解疾病的诊断和治疗过程中的重要信息。

本实验报告将介绍血涂片的制备过程和相关技术。

一、材料与设备：1. 血液样本：采集自健康人士或实验动物。

2. 血涂片玻片：具有一定的光学透明度和平整度。

3. 血涂片刮板：用于制备血涂片的工具。

4. 血涂片染色剂：如吉姆萨染色剂。

二、实验步骤：1. 准备工作：清洁实验台面，并确保材料和设备的无菌状态。

2. 血液采集：使用无菌针头采集血液样本，将血液缓慢抽入无菌注射器中。

3. 制备血涂片：a. 取一片无菌血涂片玻片，用无菌棉球蘸取适量的酒精擦拭玻片表面，使其干燥。

b. 用无菌血涂片刮板，将血液样本滴于血涂片玻片的一端。

c. 快速而均匀地将刮板从滴液处向另一端刮过，使血液在玻片上均匀分布。

d. 在刮板刮过的血液上方，迅速将另一片无菌玻片平放在上方，使血液与玻片接触。

e. 缓慢而均匀地将上方的玻片向下滑动，使血液在两片玻片之间形成薄膜。

f. 将制备好的血涂片放置在通风干燥的地方，待其完全干燥。

三、血涂片染色：1. 准备工作：将吉姆萨染色剂按照说明书的要求稀释至适当浓度。

2. 染色过程：a. 将制备好的血涂片放入染色盒中，使其与染色剂接触。

b. 根据需要，将血涂片浸泡在染色剂中的时间可调整为几分钟至几十分钟。

c. 取出血涂片，用清水轻轻冲洗，直至水清。

d. 将血涂片放置在通风处晾干。

四、结果与讨论：通过制备和染色的血涂片，我们可以观察到不同类型的血细胞，如红细胞、白细胞和血小板。

通过观察它们的数量、形状和结构，我们可以判断出是否存在异常情况，如贫血、感染或血液疾病等。

血涂片的制备和染色技术在临床诊断和科学研究中具有广泛的应用。

结论：通过本实验报告，我们了解了血涂片的制备过程和相关技术。

制备血涂片的步骤包括血液采集、血涂片制备和血涂片染色。

实验目的1. 了解血液的基本组成和功能。

2. 观察血液中红细胞的形态和数量。

3. 掌握血涂片的制作和观察方法。

实验材料1. 人或动物血液样本2. 血涂片载玻片3. 尖头吸管4. 显微镜5. 血细胞计数板6. 生理盐水实验步骤1. 血液采集：采集适量人或动物血液样本，注意避免污染。

2. 血涂片制作：- 将载玻片倾斜45度角，用尖头吸管吸取少量血液。

- 将血液均匀滴在载玻片上，迅速用另一载玻片的一端轻轻刮过血液，使其形成薄膜。

- 将制成的血涂片放置在空气中自然干燥。

- 将干燥后的血涂片用火焰固定，防止细胞脱落。

3. 染色：- 将固定后的血涂片浸入瑞氏染液中染色3-5分钟。

- 用蒸馏水冲洗染液，去除多余染料。

4. 显微镜观察：- 将染色后的血涂片放置在显微镜下观察。

- 观察红细胞、白细胞和血小板的形态和数量。

5. 血细胞计数：- 使用血细胞计数板，在显微镜下直接计数红细胞、白细胞和血小板的数量。

实验结果1. 红细胞：呈双凹圆盘状，无细胞核，富含血红蛋白，主要负责氧气的运输。

2. 白细胞：包括粒细胞、淋巴细胞和单核细胞，主要负责免疫和防御功能。

3. 血小板：无细胞核，形状不规则，主要负责血液凝固。

实验讨论1. 通过本次实验，我们了解了血液的基本组成和功能，以及红细胞的形态和数量。

2. 血涂片制作和显微镜观察是研究血液的重要方法，可以帮助我们更好地了解血液的生理和病理变化。

3. 血细胞计数是临床医学中常用的检查项目，可以用于诊断贫血、感染等疾病。

实验结论本次实验成功完成了血液的采集、血涂片制作、染色和显微镜观察，观察到了红细胞、白细胞和血小板的形态和数量，达到了实验目的。

注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作，避免污染血液样本。

2. 血涂片制作要均匀，避免出现细胞重叠或缺失。

3. 显微镜观察时要调整光圈和焦距，确保细胞清晰可见。

4. 血细胞计数时要认真计数，避免出现误差。

血液样本采集和血涂片制备一、血液生理概要要点1：离体后的血液自然凝固，分离出来的淡黄色透明液体称为血清。

血液加抗凝剂后分离出来的淡黄色液体称为血浆。

血清与血浆差别是：血清缺少某些凝血因子，如凝血因子Ⅰ（纤维蛋白原）、Ⅱ（凝血酶原）、Ⅴ、Ⅷ等。

要点2：全血适用于临床血液学检查，如血细胞计数、分类和形态学检查等。

血浆适用于血浆生理性和病理性化学成分的测定，特别是内分泌激素测定；血浆除钙离子外，含有其他全部凝血因子，也适用于血栓与止血的检查。

血清适用于临床化学和临床免疫学检查。

要点3：正常人血量约为（70±10）ml／kg体重，成人约4～5L，约占体重的6%～8%，其中血浆占55%，血细胞占45%。

小儿血量与体重之比略高于成人，男性比女性血量稍多，但女性妊娠期间血量可增加23%～25%。

要点4：血液的红色来自红细胞内血红蛋白。

动脉血氧合血红蛋白含量较高，呈鲜红色；静脉血还原血红蛋白含量高，呈暗红色。

严重贫血者血液红色变浅。

严重一氧化碳中毒或氰化物中毒者血液呈樱红色。

要点5：酸碱度：正常人血液pH值7.35～7.45，动脉血pH值7.40，静脉血pH值7.35。

血浆渗透量：正常人约为290～310mOsm／（kg·H20）。

要点6：正常人血液中红细胞呈均匀混悬状态。

与红细胞膜表面的唾液酸根、正常血浆成分、血浆黏度及血流动力学等因素有关。

正常人全血黏度约为生理盐水黏度的4～5倍，血浆黏度约为生理盐水黏度的1.6倍。

血液黏度与血细胞比容和血浆黏度有关，其中，血浆黏度受血浆中纤维蛋白原、球蛋白等大分子蛋白质的影响，它们的浓度越高，血浆黏度越高。

要点7：血液生理功能具有运输功能、协调功能、维护机体内环境稳定和防御功能。

二、采血方法要点8：静脉采血多采用位于体表的浅静脉，通常采用肘部静脉、手背静脉、内踝静脉或股静脉。

小儿可采颈外静脉血液。

要点9：皮肤采血法曾称为毛细血管采血法，是采集微动脉、微静脉和毛细血管的混合血，同时含细胞间质和细胞内液。

血液样本采集和血涂片制备一、血液生理概要1.血液组成2.血液理化性质①血量：正常人血量约为（70±10）ml/kg体重，成人约4～5L，约占体重的6%～8%。

小儿血量与体重之比略高于成人，男性比女性血量稍多，但女性妊娠期间血量可增加23%～25%。

颜色：血液的红色来自红细胞内血红蛋白。

动脉血氧合血红蛋白含量较高，呈鲜红色；静脉血还原血红蛋白含量高，呈暗红色。

严重贫血者血液红色变浅。

严重一氧化碳中毒或氰化物中毒者血液呈樱红色。

②酸碱度：pH 7.35～7.45。

比密和渗透量①血液比密：正常男性约为1.055～1.063，女性约为1.051～1.060，相对黏度为4～5；血浆比密约为1.025～1.030；血细胞比密约为1.090。

血液比密与红细胞含量、红细胞内血红蛋白含量有关：血浆比密和血浆内蛋白浓度有关。

②血浆渗透量：正常人约为290～310mOsm/（kg·H20）。

3.血液特性：悬浮稳定性、黏滞性（纤维蛋白原、球蛋白）、凝固性。

4.血液生理功能：具有运输功能、协调功能、维护机体内环境稳定和防御功能。

血液标本类型①全血适用于临床血液学检查。

②血浆全血+抗凝剂+离心适用于内分泌激素、血栓与止血检查。

③血清全血+离心（静置）适用于临床化学和免疫学检测。

不加抗凝剂，血清缺少某些凝血因子，如凝血因子Ⅰ（纤维蛋白原）、Ⅱ（凝血酶原）、Ⅴ、Ⅷ等。

血浆与血清的区别血浆抗凝出凝血血清清白缺因子二、采血方法（一）静脉采血法1.概述通常采用肘部静脉、手背静脉、内踝静脉或股静脉。

小儿可采颈外静脉血液。

为避免血小板激活，要使用塑料注射器和硅化处理后的试管或塑料试管。

2.操作方法和注意事项准备→检查→选择→消毒→扎压脉带→穿刺→抽血→放血与混匀（二）皮肤采血法（毛细血管采血法）皮肤采血法曾称为毛细血管采血法，是采集微动脉、微静脉和毛细血管的混合血，同时含细胞间质和细胞内液。

1.概述部位→手指（WHO推荐左手无名指指端内侧）和耳垂。

血涂片的实验原理
血涂片实验的原理主要涉及到以下几个方面：
1. 血液样品制备：首先需要从被测者的血液中获取一定量的血样。

通常采用的方法是通过静脉穿刺或者采用鲜血指尖刺破的方式获得血液。

获得血液样品后，需要进行一定的处理和稀释，以便观察细胞和细胞成分的形态和数量。

2. 血涂片制备：将处理后的血液样品以一定的技巧涂布在载玻片或者显微镜盖玻片上。

涂片时需要控制好涂片的厚度和均匀性，以保证后续观察时的清晰度和准确性。

3. 血涂片染色：为了增强细胞和成分的对比度和可见度，在制备完成的血涂片上需要进行染色处理。

常用的染色方法有使用Wright染色液或者 Giemsa染色液。

这些染色方法能够显著提
高细胞和细胞成分的可见度，便于观察和分析。

4. 显微镜观察：经过染色后的血涂片会呈现出不同种类细胞和细胞成分的不同形态和特征。

通过使用显微镜观察和放大这些细胞和细胞成分，可以对血液样品中的各种细胞类型、数量和形态进行分析和检测。

5. 数据分析：通过对观察到的细胞和细胞成分，特别是白细胞和红细胞的形态、数量和比例等进行分析，可以判断出个体的血液状况，如是否存在炎症、贫血、感染或其他疾病。

同时还可以观察其他血液成分如血小板的数量和形态，以及其他相关细胞的异常情况。

总之，血涂片实验通过制备、染色和观察血液样品，以及对所见细胞和细胞成分进行分析和检测，来获得与个体健康状况相关的信息。

实验报告血涂片的制备实验报告：血涂片的制备引言：血涂片是一种常见的实验技术，用于观察和分析血液中的各种细胞和细胞形态。

本实验旨在探究血涂片的制备方法和技巧，以及观察和分析血涂片的步骤和注意事项。

材料与方法：1. 血液样本：采集新鲜的静脉血，使用无抗凝剂的试管收集。

2. 血涂片材料：玻璃片、洗净的玻璃滴管、无纺布、无纺布夹子、显微镜玻璃片、显微镜盖玻璃片。

3. 实验仪器：显微镜、离心机。

步骤：1. 准备工作：将玻璃片和显微镜玻璃片用去离子水和无纺布擦拭干净，保证表面无杂质。

2. 血液制备：使用无纺布夹子固定玻璃片，用洗净的玻璃滴管将血液滴在玻璃片上。

滴管与玻璃片的接触角度应适中，以保证血液均匀地分布在玻璃片上。

3. 血涂片制备：用另一块玻璃片将血液滴在玻璃片上的血液涂抹均匀，使血细胞分散均匀并形成单层。

4. 干燥处理：将血涂片放置在通风处晾干，或使用离心机低速离心，去除多余的液体。

5. 固定处理：将干燥的血涂片固定在95%乙醇中，浸泡2-3分钟，以保持细胞形态。

6. 染色处理：将固定的血涂片浸泡在Wright染料溶液中，浸泡时间根据染料浓度和需要的染色效果而定。

7. 清洗处理：用去离子水将染色过的血涂片洗净，去除多余的染料。

8. 干燥处理：将血涂片放置在通风处晾干，确保完全干燥。

9. 封片处理：将干燥的血涂片放在显微镜盖玻璃片上，用透明胶带固定。

结果与讨论：制备完毕的血涂片可用于显微镜观察。

通过血涂片，我们可以观察到血液中的各种细胞，如红细胞、白细胞和血小板，并且可以分析它们的数量、形态和结构。

在制备血涂片的过程中，有几个关键的步骤需要特别注意。

首先，血液的滴取和涂抹要均匀、细致，以避免细胞聚集和不均匀分布。

其次，血涂片在制备过程中要保持湿润，避免细胞干燥和变形。

此外，染色过程中的浸泡时间和染料浓度要控制好，以保证染色效果的准确性和清晰度。

血涂片的制备是一项基础实验技术，广泛应用于医学、生物学和病理学等领域。

血液样本采集和血涂片制备1、抽血时针栓只能外抽，不能内推，以免静脉内注入空气形成气栓，造成严重后果。

2、属于酸性染料的是：伊红属于酸性染料，通常为钠盐，有色部分为阴离子。

3、疟原虫检查常用的染色方法是：吉姆萨染液对细胞核、寄生虫（如疟原虫等）找色较好，结构更清晰，但对细胞质的着色能力略差。

4、手工推片法，推片与载玻片的夹角为25°～30°。

5、血液黏度与血细胞比容和血浆黏度有关，其中，血浆黏度受血浆中纤维蛋白原、球蛋白等大分子蛋白质的影响，它们的浓度越高，血浆黏度越高。

6、涂片瑞氏染色时，缓冲液常用的pH为6.4～6.8。

7、瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝（又名美蓝）组成。

染色原理既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。

血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染伊红结合，染粉红色；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料亚甲蓝或天青结合，染紫蓝色或蓝色；中性颗粒呈等电状态与伊红和亚甲蓝均可结合，染淡紫红色；原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。

瑞氏染色法是最经典、最常用染色法。

8、瑞氏染料亚甲蓝容易氧化为一二三甲基硫堇等次级染料（即天青）。

将适量伊红、亚甲蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料，由酸性染料伊红（E－）和碱性染料亚甲蓝（M＋）组成。

Ⅱ液磷酸盐缓冲液pH为6.4～6.8。

在偏碱性环境中负电荷增多，易与亚甲蓝结合，所有细胞呈灰蓝色，颗粒呈深暗，嗜酸颗粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性颗粒偏粗，呈紫黑色。

9、细胞各种成分均属蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸环境中正电荷增多易与伊红结合染色偏红；在偏碱环境中负电荷增多易与亚甲蓝或天青结合偏蓝。

因此，细胞染色对氢离子浓度十分敏感，所以在瑞氏染色中缓冲液起到恒定pH作用。

第一章血液样本采集和血涂片制备一、血液生理概要1、血液组成：由血细胞(红细胞、白细胞、血小板)和血浆组成血浆：血液加抗凝剂后分离出来的淡黄色液体血清：离体后的血液自然凝固析出的淡黄色透明液体两者区别:血清缺少某些凝血因子，如凝血因子Ⅰ(纤维蛋白原)、Ⅱ(凝血酶原)、Ⅴ、Ⅷ等；血浆除钙离子外，含有其他全部凝血因子。

全血适用于临床血液学检查，如血细胞计数、分类和形态学检查等。

血浆适用于血浆生理性和病理性化学成分的测定，特别是内分泌激素测定，也适用于血栓与止血的检查。

血清适用于临床化学和临床免疫学检查。

2、血液理化性质：血量：正常成人4-5L，约为70±10ml／kg体重，占体重的6%-8%，其中血浆占55%，血细胞占45%。

颜色：动脉血氧和血红蛋白含量较高，呈鲜红色；静脉血还原血红蛋白含量较高，呈暗红色。

严重贫血者颜色变浅，严重一氧化碳或氰化物中毒者，呈樱桃红色。

pH：正常人7.35-7.45。

动脉血为7.40，静脉血为7.35 血液比密：男性为1.055-1.063，女性为1.051-1.060。

血浆为1.025-1.030，血细胞为1.090。

血液比密与红细胞含量、血红蛋白含量有关，血浆比密和血浆内蛋白浓度有关。

血浆渗透压：290-310mOsm／(kg·H2O)。

3、血液特性：红细胞的悬浮稳定性、黏滞性、凝固性4、生理功能：运输功能、协调功能、维护机体内环境稳定和防御功能二、采血方法1、静脉采血法2、皮肤采血法(曾称毛细血管采血法)3、真空采血法(又称负压采血法)：采血装置分：套筒式、头皮静脉式三、抗凝剂选择抗凝：用物理或化学的方法除去或抑制血液中的某些凝血因子，以阻止血液凝固。

抗凝剂或抗凝物质：能够阻止血液凝固的物质。

常用抗凝剂和使用方法如下：1、乙二胺四乙酸(EDTA)盐：常用有钠盐)(EDTA-Na2·H2O)或钾盐(EDTA-K2·H2O)，能与血液中钙离子结合成鳌合物，使Ca2+失去凝血作用，阻止血液凝固。