实验四 血涂片的制备与染色

实验报告血涂片的制备实验报告：血涂片的制备引言：血涂片是一种常见的实验技术，用于观察和分析血液细胞的形态和数量。

通过制备血涂片，我们可以了解疾病的诊断和治疗过程中的重要信息。

本实验报告将介绍血涂片的制备过程和相关技术。

一、材料与设备：1. 血液样本：采集自健康人士或实验动物。

2. 血涂片玻片：具有一定的光学透明度和平整度。

3. 血涂片刮板：用于制备血涂片的工具。

4. 血涂片染色剂：如吉姆萨染色剂。

二、实验步骤：1. 准备工作：清洁实验台面，并确保材料和设备的无菌状态。

2. 血液采集：使用无菌针头采集血液样本，将血液缓慢抽入无菌注射器中。

3. 制备血涂片：a. 取一片无菌血涂片玻片，用无菌棉球蘸取适量的酒精擦拭玻片表面，使其干燥。

b. 用无菌血涂片刮板，将血液样本滴于血涂片玻片的一端。

c. 快速而均匀地将刮板从滴液处向另一端刮过，使血液在玻片上均匀分布。

d. 在刮板刮过的血液上方，迅速将另一片无菌玻片平放在上方，使血液与玻片接触。

e. 缓慢而均匀地将上方的玻片向下滑动，使血液在两片玻片之间形成薄膜。

f. 将制备好的血涂片放置在通风干燥的地方，待其完全干燥。

三、血涂片染色：1. 准备工作：将吉姆萨染色剂按照说明书的要求稀释至适当浓度。

2. 染色过程：a. 将制备好的血涂片放入染色盒中，使其与染色剂接触。

b. 根据需要，将血涂片浸泡在染色剂中的时间可调整为几分钟至几十分钟。

c. 取出血涂片，用清水轻轻冲洗，直至水清。

d. 将血涂片放置在通风处晾干。

四、结果与讨论：通过制备和染色的血涂片，我们可以观察到不同类型的血细胞，如红细胞、白细胞和血小板。

通过观察它们的数量、形状和结构，我们可以判断出是否存在异常情况，如贫血、感染或血液疾病等。

血涂片的制备和染色技术在临床诊断和科学研究中具有广泛的应用。

结论：通过本实验报告，我们了解了血涂片的制备过程和相关技术。

制备血涂片的步骤包括血液采集、血涂片制备和血涂片染色。

血涂片的制备与染色实验报告血涂片的制备与染色实验报告简介本报告旨在介绍血涂片的制备与染色实验方法及步骤，以及相关注意事项和结果分析。

实验步骤1.准备所需材料：–血液样本–血涂片载玻片–血液涂片器–双氧水–细胞染色剂–拖尾液–显微镜片2.制备血涂片：–取一滴血液样本，滴于载玻片中。

–使用血涂片器，将血液涂片器顶端垂直贴附在载玻片上。

–慢慢向后移动血涂片器，使血液样本均匀地涂布于载玻片上。

3.干燥血涂片：–将制备好的血涂片放置于通风处，自然晾干。

4.染色处理：–将已干燥的血涂片浸入双氧水中，浸泡5分钟，用来溶解红细胞。

–用显微镊子夹取血涂片，轻轻晃动10次，使红细胞充分分散。

–轻轻将血涂片冲洗干净，以去除残留的双氧水。

–将血涂片浸入细胞染色剂中，染色1分钟。

–将血涂片冲洗干净，确保没有染色剂残留。

5.拖尾处理：–取适量拖尾液滴在盖玻片上。

–将染色好的血涂片倒置放在盖玻片上，使其与拖尾液接触。

–轻轻拖动血涂片，使细胞核进入拖尾液。

6.结果观察与分析：–将染色好的血涂片放置在显微镜下进行观察。

–分析细胞形态、染色程度等指标，记录结果。

注意事项•实验过程中需戴好实验手套，避免直接接触血液。

•制备血涂片时，务必将血液涂布均匀，以免影响结果。

•双氧水具有漂白作用，使用时需小心避免溅到衣物或皮肤上。

•染色剂使用过程中，应注意避免吸入或误食。

•结果分析时，应根据实验要求和标准参考范围进行判断。

结论通过本实验，我们成功制备了血涂片并进行了染色处理。

观察结果可为后续血液相关研究提供重要数据和参考。

在实验过程中，我们严格遵守实验室操作规程，并注意了安全事项。

希望本报告对今后的血涂片制备与染色实验有所帮助。

参考文献：无。

血涂片制备与染色血涂片是通过特定的方法将血液按一定方向均匀涂开的过程，微观上使细胞是由球形变为平面形或近平面形平铺在载玻片上。

血涂片的显微镜检查是血液细胞形态学检查的基本步骤，特别是对于各种血液病的诊断和鉴别诊断，具有重要价值。

血涂片制备是否合格、染色的好坏直接关系到检验结果的质量。

（一）血涂片制备1.载玻片的准备新载玻片常带有游离碱质，须用浓度为lmol/L的HCl浸泡24h，再用清水彻底冲洗，干燥后备用。

旧载玻片要用含洗涤剂的清水中煮沸20min，洗掉血膜，再用清水反复冲洗，最后用0.95L/L乙醇浸泡1h，干燥备用。

使用载玻片时，不要用手触及玻片表面，保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。

2.血涂片制作方法取血液标本一滴置载玻片的一端，以边缘平滑的推片一端，从血滴前沿方向接触血液，使血液沿推片散开，推片与载玻片保持30～45○夹角，平稳地向前推动，血液即在载玻片上形成薄层血膜。

涂片的厚薄与血滴大小、推片与载玻片之间的角度、推片时的速度及血细胞比容有关。

血滴大、角度大、速度快则血膜越厚；反之则血膜越薄。

一张良好的血涂片，要求厚薄适宜，头体尾明显，细胞分布均匀，血膜边缘整齐并留有的空隙。

（二）血涂片染色染色的目的是使细胞的主要结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等染上不同的颜色，以便于镜下观察识别。

血涂片染色包括两个过程：固定和染色。

固定是将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联凝固，以保持细胞原有形态结构不发生变化。

常用的染色方法有瑞特染色法（Wright）、姬姆萨染色法（Giemsa）等。

1.瑞特（Wright）染色法为发观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须嘲行染色。

血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变来的。

目前常用瑞特染色法。

（1）瑞特染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料。

亚甲蓝为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。

通常为氯盐，即氯化美蓝。

美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料。

血涂片制备与染色临床应用血涂片制备是临床实验室中常见的实验操作，用于观察和诊断患者的血液情况。

正确的血涂片制备与染色技术将有助于提高血涂片的质量，为临床医生提供准确的诊断信息。

本文将介绍血涂片制备的步骤以及常用的染色方法，并探讨其在临床应用中的意义。

一、血涂片制备步骤1. 准备工作：首先需要准备好检测所需的材料，包括玻璃片、无菌注射器、消毒酒精、无纺布等。

确保工作台面整洁，无尘无菌。

2. 采集血液样本：选择合适的采血部位，用无菌注射器采集血样，并将血样滴在玻璃片上。

3. 制备血涂片：将另一块玻璃片平行放在血样上，以45度角倾斜，缓慢向前移动，使血涂片的宽度均匀。

4. 干燥固定：将制备好的血涂片晾干，或者用火焰烘干，使细胞固定在玻璃片上。

5. 染色处理：根据需要选择合适的染色方法进行处理，使细胞核、胞质等结构清晰可见。

二、血涂片染色1. Giemsa染色：是血涂片最常用的染色方法之一，可用于观察红细胞形态、白细胞分类及寄生虫等。

染色时间和比例需控制好，避免染色过度或不足。

2. Wright染色：适用于白细胞分类和形态分析，特别是嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的染色效果较好。

3. 厌氧染色：用于观察寄生虫、真菌等微生物，需要较长的染色时间和特殊的操作条件。

三、血涂片在临床应用中的意义1. 诊断疾病：通过观察血涂片中各种细胞的数量、形态、分布等特征，可以帮助医生诊断贫血、感染、白血病等疾病。

2. 指导治疗：血涂片可以反映患者的血液情况，指导医生制定合理的治疗方案，监测治疗效果。

3. 预后评估：血涂片中某些指标的变化可以反映患者病情的进展和预后情况，有助于医生及时调整治疗策略。

综上所述，正确的血涂片制备与染色技术对于临床医学具有重要意义。

通过规范操作和严格控制，可以提高血涂片的质量，为临床诊断提供可靠的依据。

希望本文对于血涂片制备与染色临床应用有所帮助，谢谢！。

血涂片的制备及染色血涂片的制备及染色摘要血涂片是世界上使用最广泛的实验室检测方法之一，应用于疾病的筛查，发现，诊断以及监控。

本文提供了在临床检验中制备及染色出优质血涂片的一种参考。

虽然在如何人工制备血涂片上仍存在某些“工艺”，但是已尽可能采用了客观标准使得临床实验室能准备和染色出优质血片。

本参考中包含固定和染色手工工艺中的问题解决方法。

关键词：血涂片制备，染色前言血涂片是世界上使用最广泛和最频繁的检测方法之一，但似乎没有关于血涂片制备要求，程序及潜在问题等的综合性文献。

虽然血涂片的制备是个简单的过程，但作为一种检测方法，有很多因素可导致检测失败或比其预期低效。

本文应国际血液学标准化委员会的请求所写，并作为实验室血细胞计数板的指导方针。

本文旨在提供临床检验中用于形态评价的血涂片制备及其染色的指导和标准化。

显微镜分析过程和解释不在本文的范围内。

列举的方法中包括最先进的技术以及发展中国家实验室的适用方法。

发展中国家不具备最高水平的指标，但应在所有条件下可达到其规定的指标，以确保诊断测试的质量，以免降低病人护理。

这点尤其重要，因为无论对于病例发现，诊断或疾病监测，血涂片显微镜分析所得数据通常在临床情况中起最终和决定性的作用。

为了方便参考使用，本文采用一种特殊的格式来描述涉及血涂片制备和染色的各个步骤。

血涂片制备载玻片载玻片应由最高纯度的耐腐蚀玻璃制成；通常不可接受其他材料如塑料。

典型玻片为75×25mm，约有1mm 厚度，必须平整，无扭曲和波痕，而且必须澄清无色（“水白，无色透明”）。

荧光显微镜检测必须使用无自发荧光的玻片。

最好使用预洗过的载玻片，但至少实验室必须确保载玻片无划痕，干净无尘、绒线，油脂（指纹），而且必须干燥。

这就意味着在潮湿环境中，载玻片必须能抗水。

在所处密闭容器开启后，载玻片必须保存于干燥器或装有无水（甲基）乙醇或乙醇与丙酮混合液（3:1）的容器内直至被使用。

载玻片需一直保存于密闭容器中，只能在立即使用前开启。

血涂片制作与染色1.血涂片的制备血涂片的制备需要用到标本采集工具如无菌化的注射器、针头、试管、硅化玻璃片以及一些实验室试剂如无菌生理盐水、巴氏溶液和电解溶液等。

具体步骤如下：（1）将患者指尖的表面清洁卫生。

（2）选择一个适合的静脉穿刺点，通常是患者的中指或无名指。

（3）用酒精棉球清洁穿刺点，使其干燥。

（4）将无菌化的注射器连接到无菌生理盐水的瓶口上，并抽取一定量的生理盐水。

（5）将针头插入穿刺点后，将生理盐水匀速注射入患者的静脉内。

（6）在生理盐水滴入试管的同时，用眼微观检查，如果有血液进入注射器和管道内，即可采集。

宜用自来水洗净试管外表面，先不带盖座放倾空液。

（7）用试管夹夹住注射针，将针头推入试管内，然后轻轻射入试管底部液面下，同时向上抽手，保持抽液缓慢，可避免气泡产生。

（8）将采集到的血液缓缓带走，同时注入试管内，让其与100ml巴氏溶液进行搅拌。

（9）将混合液倾入瓷漏斗中，从中取出干燥了的血细胞。

2.血涂片的染色血涂片染色可使用湿涂片法或干涂片法，其中湿涂片法应用更广泛。

下文将以湿涂片法为例进行介绍。

（1）取一根硅化玻璃片，用纸巾或棉球擦拭干净。

（2）用血涂片染色钳将准备好的血涂片床放在玻璃片上。

（3）将一滴适量的Wright液倒在血涂片的中段。

Wright液包含了染色剂和辅助剂，其中主要成分是吡啶基甲重氮盐和三氧二氮菲盐。

（4）用另一根玻璃片的尾部将液滴均匀地扩开，并迅速在血涂片上来回涂抹，在染液与血涂片上充分接触并混合。

（5）保持血涂片在室温下静置5-10分钟，以促进染色反应的进行。

（6）用蒸馏水冲洗玻璃片上的染料，并将其晾干。

3.血涂片的观察与分析观察血涂片需用光学显微镜，常规放大倍数为1000倍。

观察血涂片时，应注意血细胞的形态、大小、核形态、细胞质染色情况及相关细胞间的比例等。

根据各种细胞的数量和比例，可以初步评估出是否存在异常细胞，及其可能的病理性质，如感染、贫血等。

总结：血涂片制作与染色是血液检查中重要的步骤之一，它能够帮助医生判断病情，制定治疗方案。

实验四血涂片的制备与染色【目的】掌握血涂片的制备和染色方法（preparation and staining of thin blood films）。

【原理】将一小滴血液均匀涂在玻片上，呈单层紧密分布，制成薄血片。

用含天青B和伊红的Romannowsky类染料进行染色。

细胞中的碱性物质如RBC中的血红蛋白及嗜酸性粒细胞胞质中的嗜酸性颗粒等与酸性染料伊红结合染成红色；细胞中的酸性物质如淋巴细胞胞质及嗜碱性粒细胞质中的嗜碱性颗粒等与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色；中性粒细胞的中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染成淡紫红色。

【器材】1．载玻片使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。

2．推片选择边缘光滑的载玻片，在两角分别作斜线标记，然后用玻璃切割刀裁去两角，制成约15mm 宽度的推片。

3．吸耳球。

4．显微镜。

5．酒精灯或Bunsen灯。

6．采血针。

7．注射器和针头。

【试剂】1．瑞氏（Wright）染液（1）Ⅰ液：包含瑞氏染料1.0g、纯甲醇（AR级以上)600ml、甘油15ml。

将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少量甲醇慢慢地研磨（至少30min），以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒入洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。

再加15ml甘油密闭保存。

（2）Ⅱ液：磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8），包含磷酸二氢钾（KH2PO4）0.3g、磷酸氢二钠（Na2HPO4）0.2g、蒸馏水加至1000ml。

配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口贮存。

如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。

2．吉姆萨染液包含吉姆萨染料0.75g、甘油35ml、甲醇65ml。

将吉姆萨染料、甘油和甲醇放入含玻璃珠的容器内，每天混匀3次，连续4天，最后过滤备用。

3．瑞-吉复合染液（1）I液：包含瑞氏染料1g、吉姆萨染料0.3g、甲醇500ml、中性甘油10ml。