DNA的粗提取与鉴定

dna的粗提取与鉴定DNA的粗提取与鉴定一、粗提取粗提取的方法是通过物理和化学方法从一个或多个生物样品中提取DNA样品，通常是为了进行DNA分子生物学分析、基因组学以及其他科学研究。

1. 用拆解液拆解细胞使用拆解液拆解细胞是最常用的粗提取DNA技术。

主要使用的拆解液有Tris-EDTA（TE buffer）、Cetyltrimethyl ammonium bromide （CTAB）、Sarkosyl（SDS）和NaOH溶液等。

各种拆解液的比例和温度可以根据每个实验的要求进行调整。

2. 用磁珠或磁性分选器抽提也可以使用磁珠或磁性分选器来抽提DNA样品。

这种方法可以从多种生物样品中提取DNA，如血清、血浆、细胞粗提物以及血液细胞等。

磁珠抽提的原理是利用磁性珠子来吸附DNA样品，而磁性分选器则是利用磁场将DNA分离出来。

磁珠抽提的优点是简单快捷，缺点是提取的DNA质量不够高。

3. 改良的拆解方式一些改良的拆解方式可以用来考察某一特定细胞类型。

这些方法包括冷冻破碎、湿热破裂、极限温度破裂和化学破裂等。

这些技术可以有效地提高蛋白质和DNA的提取效率，但缺点是需要较高的技术要求，而且操作步骤较多，比较耗时。

二、DNA的鉴定DNA的鉴定是指用特定的方法和技术，明确某个DNA样品的鉴定。

常见的DNA鉴定技术有定性分析、定量分析和活性检测等。

1. 定性分析定性分析是指对DNA样品进行定性鉴定，识别出它们是哪种DNA，以确定其基本性质。

常用的定性分析方法有紫外光检测和酶切检测等。

紫外光检测是将DNA浓度调整至1μg/ml，然后放置在紫外光228纳米的紫外灯管（UV lamp）下，通过分析紫外光吸收光谱来鉴定DNA 样品。

酶切检测是将DNA样品与特定的酶进行反应，用来分析DNA的特征。

常用的酶有限制性内切酶（restriction enzymes），例如EcoRI、BamHI、PstI和HindIII等。

2. 定量分析定量分析是指对某一DNA样品的浓度和数量进行测量，以了解其容量。

DNA的粗提取与鉴定
方法步骤：
1.溶解鸡血细胞核内的DNA
取一个125mL烧杯，注入15mL蒸馏水，注入1mL制备好的鸡血细胞液，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向快速搅拌5min，血细胞吸入大量水分而被胀破（搅拌加速破开裂），释放出DNA。

向烧杯中注入20mL 2mol/L的NaCl溶液，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向搅拌1min，混合均匀，DNA溶解。

2.析出含DNA的粘稠物
取150mL蒸馏水，沿烧杯壁缓慢加入，同时，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向缓慢不停地搅拌，大量含DNA的粘稠物逐渐析出，并吸附在玻璃棒周围，此时，溶液中NaCl浓度为0.14mol/L.
3.洗涤粘稠物——提取含杂质较少的DNA
取一个100mL的烧杯，注入25mL 95%酒精（常温），持玻璃棒连同吸附的粘稠物转移到注入酒精的烧杯中，沿顺（或逆）时针方向搅拌1—2min，血色及大部分杂质被洗去，缠绕在玻璃棒上的丝状物，其主要成分是DNA（含杂质较少）。

4.DNA的鉴定
取两只试管，分别加入2mL 0.015mol/L NaCl溶液，1号试管中加入丝状物，用玻璃棒搅拌，混合均匀，两只试管中分别加入2mL二苯胺试剂，振荡，水浴3min，1号试管变深蓝色（说明DNA 的量多），冷却后蓝色略深，2号试管无颜色变化。

注意：操作步骤2中搅拌不能快，以免析出的粘稠物被搅碎，搅拌后难以进行后面的操作。

DNA的粗提取与鉴定（一）实验原理鸟类血液中红细胞有细胞核，细胞核内DNA与蛋白质结合成染色质。

利用DNA在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，而蛋白质此时的溶解度高的特点，可以使DNA与蛋白质分离，形成沉淀析出，通过过滤，得到粗提取的滤出物DNA。

再利用DNA不溶于酒精，但细胞中的其他物质可溶于酒精的特点，进一步提取出含杂质较少的DNA。

利用DNA遇二苯胺（沸水浴）成蓝色的特性，可以鉴定提取的DNA。

（二）实验材料（以鸡血为例）鸡血细胞液：先配备10%的柠檬酸钠溶液，按180mL新鲜鸡血混合100mL10%柠檬酸钠溶液的比例，立即将血液与柠檬酸钠充分混合，同时用玻璃棒搅拌以免凝血。

然后，用离心机以2000转/min的速度离心4min后，用吸管除去离心管上清液，就可获得所需的鸡血细胞悬液。

每组大约需要5—10mL鸡血细胞悬液。

如果无离心机，可将与柠檬酸钠充分混合的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀后，也可获得所需的鸡血细胞悬液。

（三）试剂与仪器1、2mol/L的NaCl溶液称取117g的NaCl，加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解，即可获得2mol/L 的NaCl，须按此配方配备大量的2mol/L 的NaCl。

2、二苯胺试剂A液——1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸，用棕色瓶保存。

B液——体积分数为0.2%的乙醛溶液。

实验前，将0.1mL的B液加入到10mL的A液中，现配现用。

3、0.015mol/L的NaCl溶液称取0.88g氯化钠加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解。

4、塑料杯和试管DNA易吸附在玻璃器皿上，用塑料杯和试管可减少提取过程中DNA的损失。

（四）实验方法与步骤1、提取细胞核物质取5—10mL鸡血细胞悬液入烧杯中，加蒸馏水20mL，同时，用玻璃棒沿一个方向快速充分搅拌，使血细胞过度吸水破裂，细胞核内物质释放出来，然后用纱布过滤取其滤液。

2、溶解核内的DNA在滤液中加入2mol/L的NaCl40mL，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，核中DNA游离并充分溶解，染色质中的DNA和蛋白质分离。

dna粗提取与鉴定DNA粗提取与鉴定DNA是生命的基础，它携带了生物体的遗传信息。

在现代分子生物学中，DNA的提取和鉴定是非常重要的技术。

本文将介绍DNA粗提取和鉴定的方法。

一、DNA粗提取1.1 细胞破碎法细胞破碎法是一种常见的DNA粗提取方法。

它通过机械或化学手段破坏细胞膜和核膜，释放出细胞内的DNA。

机械方法包括高压均质和超声波破碎等，化学方法包括SDS、NaOH等。

这些方法都可以有效地破坏细胞结构，但同时也会对DNA造成一定程度的损伤。

1.2 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA粗提取方法，它利用酚对蛋白质和核酸有不同的溶解度来分离DNA。

首先用盐水或缓冲液洗涤样品，然后加入酚/氯仿混合液，在离心后上层为水相（含RNA）、中间为界面层（含蛋白质）和下层为有机相（含DNA）。

通过抽取下层的有机相，可以得到粗提的DNA。

1.3 硅胶柱法硅胶柱法是一种高效的DNA粗提取方法，它基于DNA和硅胶之间的亲和力。

首先将样品加入硅胶柱中，然后用盐水或缓冲液洗涤硅胶柱，最后用低盐缓冲液洗脱DNA。

这种方法可以得到较纯的DNA，并且适用于大量样品处理。

二、DNA鉴定2.1 凝胶电泳凝胶电泳是一种常见的DNA鉴定方法，它利用电场将带电的DNA分子移动到凝胶上。

根据不同长度的DNA片段在凝胶中行进速度不同来分离不同大小的DNA片段。

通过比较样品中不同长度的DNA条带，可以确定样品中是否存在目标序列。

2.2 PCR扩增PCR扩增是一种高效、敏感、特异性强的鉴定方法。

它通过引物特异性识别目标序列，在体外进行大量扩增。

PCR扩增可以检测极少量的目标序列，并且能够对复杂混合物进行分析。

2.3 DNA测序DNA测序是一种直接读取DNA序列的方法。

它通过将PCR扩增的目标片段或提取的DNA样品，进行测序仪读取，得到目标序列的具体信息。

这种方法可以检测出极少量的变异或突变，并且可以对整个基因组进行分析。

三、总结DNA粗提取和鉴定是现代分子生物学中非常重要的技术。

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2023高中生物人教版DNA的粗提取与鉴定实验教案一、实验目的通过本实验，学生将了解到DNA的结构和提取方法，并学会进行DNA的粗提取与鉴定实验。

二、实验原理DNA是一种复杂的分子，存在于细胞核中。

DNA的提取是将细胞溶解，分离出DNA分子的过程。

本实验采用CTAB法进行DNA的提取。

CTAB（正十六烷基三甲基溴化铵）可与DNA中的脂质结合，使其在酒精中沉淀出来，然后进行纯化。

三、实验材料1. 鸽子肌肉组织2. CTAB提取液（含CTAB、EDTA等）3. 去离子水4. 洗涤溶液（含乙醇、酒精等）5. 漂白粉溶液6. 碘酒溶液7. NB试剂液（含甲酚、硫酸等）8. DNA鉴定试剂盒9. 细胞破碎管10. 离心管11. 显微镜四、实验步骤1. 取适量鸽子肌肉组织，用漂白粉溶液清洗约5分钟，然后用去离子水洗净。

2. 将清洗后的组织切成小块，加入细胞破碎管中。

3. 加入适量的CTAB提取液，轻轻颠倒破碎管，使其均匀混合。

4. 将混合液放入水浴中加热，温度控制在60℃，保持30分钟。

5. 在水浴中加热过程中，制备NB试剂液。

取一定体积的NB试剂液加入离心管中。

6. 完成加热后，将破碎管置于冷水中快速降温。

7. 按顺序加入等体积的NB试剂液和酒精，轻轻摇晃离心管。

8. 静置一段时间后，观察管内是否有白色物质沉淀，即DNA。

9. 使用显微镜观察提取的DNA样品，并拍照记录。

五、实验结果与分析通过上述实验步骤，我们成功从鸽子肌肉组织中提取到了DNA。

观察显微镜下的DNA样品，可以观察到DNA的纤维状结构，证明DNA成功提取。

通过DNA鉴定试剂盒，可以进一步鉴定DNA的质量和纯度。

六、实验扩展1. 不同来源的细胞组织是否存在DNA含量差异？2. 不同提取方法对DNA的效果有何不同？3. 通过PCR技术对提取的DNA进行进一步分析。

七、实验注意事项1. 实验过程中需注意个人安全，避免接触有害物质。

2. 实验器材需干净无污染，避免杂质对实验结果的影响。

专题05DNA 的粗提取与鉴定一、实验原理1．提取DNA的原理利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。

如：(1)DNA在酒精溶液中的溶解性：DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。

(2)DNA在NaCl溶液中的溶解性：DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于2 mol/L 的NaCl溶液。

2．鉴定DNA的原理在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。

二、方法步骤1．称取约30 g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨。

2．去除滤液中的杂质方案一在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液方案二直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1 500 r/min的转速下离心5 min，再取上清液3．DNA方案一在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2～3 min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA；用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分方案二将溶液倒入塑料离心管中，在10 000 r/min的转速下离心5 min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干4.DNA取两支20 mL的试管，各加入2 mol/L的NaCl溶液5 mL。

将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中，再向两支试管中各加入4 mL的二苯胺试剂。

混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。

三、操作提示1．以血液为实验材料时，每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠，防止血液凝固。

2．加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。

四、关键点拨1．利用动物细胞提取DNA时，破碎细胞的方法：动物细胞无细胞壁，可直接使其吸水涨破。

2．不能选用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料，原因是哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。

DNA的粗提取与鉴定实验一、实验原理①DNA主要存在于细胞核②DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。

当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol／L时,DNA的溶解度最低。

利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA 析出。

③DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液。

利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。

⑷DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

二、实验材料和用具鸡血细胞液（5~10ml）；体积分数为95%的冷酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却24h）；蒸馏水；质量浓度为0．１g/ml的柠檬酸纳溶液；质量的浓度分别为2mol/L和0．015mol/L的氯化纳溶液（新教材不要求0、015的浓度了，都是用的2mol/L）；二苯胺试剂；铁架台；镊子；水浴锅；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒（100ml，一个）；烧杯；（1000ml，一个，50ml、100 ml 、500ml各二个）；试管（20ml，二个）；漏斗；试管夹；纱布。

三、课前准备鸡血细胞液取质量浓度为0．1g/ml的柠檬酸纳溶液（抗凝剂）100ml，置于500ml烧杯中。

注入新鲜的鸡血（约180ml），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳溶液充分混合，以免凝血。

将烧杯中的血液置于冰箱内，精置一天，使血细胞自行沉淀。

（也可以将血液倒入离心管内，用1000r/min（转每分）的离心机离心2min，血细胞沉淀于离心管底部。

实验时。

用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。

四、方法步骤①提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL，注入到50 mL烧杯中。

向烧杯中加入蒸馏水20 mL，同时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速破裂。

然后，用放有1-2层纱布的漏斗将血细胞液过滤至1000mL。

取其滤液。

②溶解细胞核内的DNA将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L的溶液40mL加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。