高中生物实验—DNA的粗提取和鉴定

【实验九】DNA的粗提取与鉴定陈小珺（江西省赣州市第三中学341000）1 教学建议在本实验的教学中，教师应注意以下几点。

1.1 实验材料必须准备充足。

本实验所用的实验材料是鸡血细胞液,由活鸡的鲜血经沉淀后获得。

每组(2个学生)需用5 mL 鸡血细胞液,则每班(50人)至少需要130 mL,而鸡血细胞液与鸡血的体积比为1:3,这样每班至少需要390 mL 鸡血细胞液。

宰杀1只中等大小的活鸡,一般可得120 mL 左右的鲜血,因此,1个班实验需要买4只活鸡。

也可以到市场售活鸡处去索取鸡血,但所带烧杯中必须提前放入抗凝剂。

（每100ml鸡血加入3g柠檬酸钠）1.2 盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。

因为鸡血细胞破碎后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少。

1.3 获取较纯净的DNA的关键步骤。

1.3.1 充分搅拌鸡血细胞液：将鸡血细胞液与蒸馏水混合以后,必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞加速破裂,并释放出DNA。

1.3.2沉淀DNA时必须用冷酒精：体积分数为95%的酒精在冰箱中至少存放24 h。

1.3.3正确搅拌含有悬浮物的溶液实验步骤3、5、7,都需要用玻璃棒搅拌。

教师应提醒学生注意,在进行步骤3、5时,玻璃棒不要直插烧杯底部,而且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA 分子。

进行步骤7时,要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间,用手缓慢转动5 min。

2 实验原理的补充介绍2.1 DNA的释放本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。

一是因为鸡血细胞核的DNA 含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破。

DNA位于鸡血细胞的细胞核中,正常情况下不会释放出来。

为了使DNA从细胞核中释放出来,实验中采用了向鸡血细胞液中加入蒸馏水并且搅拌的方法。

蒸馏水对于鸡血细胞来说,是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞破裂。

高中生物实验:DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定实验原理
粗提取原理：在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而降低;在0.14mol/L时，DNA的溶解度最小;当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA溶解度又增大。

扩展资料
纯化原理：DNA不溶于酒精，但细胞中的.某些蛋白质溶于酒精。

鉴定DNA原理：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。

实验材料的选择及处理
(1)不选择猪血等哺乳动物的血液，因为哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。

(2)需要在鸡血中加入抗凝剂——柠檬酸钠溶液，防止血液凝固。

(3)需除去鸡血中的血浆，因为血浆中无DNA。

特别提醒：不同生物的组织中DNA含量不同在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。

高中生物实验DNA的粗提取和鉴定实验中应注意的问题⑴充分搅拌鸡血细胞液。

DNA存在于鸡血细胞的细胞核中。

将鸡血细胞液与蒸馏水混合后，必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使鸡血细胞加速破裂，并释放出DNA。

⑵沉淀DNA时必须用冷酒精。

实验前必须准备好大量的体积分数为95%的酒精，并在冰箱中至少存放24h。

⑶正确搅拌含有悬浮物的溶液。

实验步骤3、5、7都需要用玻璃棒搅拌。

在进行步骤3、5时，玻璃棒不要直接接触烧杯底部，而且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子。

进行步骤7时，要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间，用手缓慢转动5min〜10min。

本实验中鉴定DNA的方法为二苯胺法。

如果在没有二苯胺的情况下也可以用以下几种方法。

典例解析下列关于“DNA的粗提取与鉴定”的实验原理中，说法错误的是A.DNA在氯化钠溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变 B.利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNAC.DNA是大分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂D.DNA溶液中加入二苯胺试剂经沸水浴后会出现蓝色反应答案：C下列关于实验操作的说法中，有误的是()A.该实验中有两次加入蒸馏水，均是为了析出DNAB.该实验学生操作中多次用到搅拌，除最后一步未强调方向外，其余均要求单向搅拌C.该实验中有3次过滤，过滤时使用纱布层数与需用滤液或黏稠物有关D.实验三次加入NaCl溶液，无论浓度是2mol/L，还是0.015mol/L，均是为了溶解DNA解析：对照比较表可知，除A说法有误外，其余各项均正确。

两次加蒸馏水，第一次是为了使细胞吸水破裂释放出核物质（DNA），第二次是为了降低NaCl溶液的浓度从而析出DNA。

⑷DNA粘稠物的再溶解：；⑸提取杂质较少的DNA白色乳状丝状物：；⑹鉴定DNA是否存在可用试剂:。

解析：⑹鉴定DNA是否存在常用：二苯胺试剂沸水浴为蓝色反应;也可选用甲基绿试剂，其颜色反应为蓝绿色。

DNA的粗提取和鉴定分析DNA(脱氧核糖核酸)是构成生物体遗传信息的重要分子。

DNA的提取和鉴定分析是分子生物学和遗传学等领域中的一项基础技术和研究方法。

DNA的提取过程旨在从生物样品中纯化和提取出DNA分子，而DNA的鉴定分析则旨在确认提取的DNA是否符合特定的特征。

DNA的提取过程通常包括以下几个主要步骤：样品处理、细胞破碎、DNA纯化和DNA溶解。

首先，对于涉及到固体样品的提取，如动物组织样品或植物组织样品，必须先将样品粉碎，通常使用刀片或研钵研磨的方法。

然后，样品细胞被破碎，通常通过各种化学方法或机械方法。

常用的细胞破碎方法包括裂解酶、超声波、热冲击等。

细胞破碎后，通过使用盐水溶解细胞内其他组分，将纯化的DNA从其他细胞组分中分离出来。

这通常涉及到一系列的溶剂溶解步骤以及DNA的沉淀和洗涤。

DNA的纯化过程中，一些常用的技术包括酚/氯仿法、硅胶柱法和离心管法等。

其中，酚/氯仿法是最常用和最早的纯化方法之一、该方法通过将DNA溶解于酚-氯仿混合物中，形成有机相和水相的界面，然后通过离心分离DNA和其他组分。

硅胶柱法则利用硅胶效应，在高盐浓度条件下，DNA吸附在硅胶柱上，然后通过洗脱形成纯净的DNA样品。

离心管法是通过盐溶解和酶处理等步骤，使DNA从细胞中提取并纯化。

DNA提取完成后，可以进行进一步的鉴定分析。

常用的DNA鉴定方法包括聚合酶链式反应(PCR)、限制性酶切和电泳等。

PCR是一种常用的扩增DNA的方法，利用特定的引物和聚合酶在体外模拟自然界中的DNA扩增过程，从而产生大量的特定DNA序列。

限制性酶切是通过使用限制性内切酶切割DNA，然后通过电泳检测DNA片段的大小和形状来鉴定DNA。

电泳是一种将DNA样品通过电场在凝胶中进行分离的方法，通过测量DNA片段的迁移距离和大小来分析和鉴定DNA。

DNA的提取和鉴定分析在许多领域中都具有重要意义。

在法医学中，可以通过DNA分析来确定犯罪嫌疑人和受害者之间的关联；在遗传学中，可以通过DNA分析来确定遗传疾病的相关基因等。

2023高中生物人教版DNA的粗提取与鉴定实验教案一、实验目的通过本实验，学生将了解到DNA的结构和提取方法，并学会进行DNA的粗提取与鉴定实验。

二、实验原理DNA是一种复杂的分子，存在于细胞核中。

DNA的提取是将细胞溶解，分离出DNA分子的过程。

本实验采用CTAB法进行DNA的提取。

CTAB（正十六烷基三甲基溴化铵）可与DNA中的脂质结合，使其在酒精中沉淀出来，然后进行纯化。

三、实验材料1. 鸽子肌肉组织2. CTAB提取液（含CTAB、EDTA等）3. 去离子水4. 洗涤溶液（含乙醇、酒精等）5. 漂白粉溶液6. 碘酒溶液7. NB试剂液（含甲酚、硫酸等）8. DNA鉴定试剂盒9. 细胞破碎管10. 离心管11. 显微镜四、实验步骤1. 取适量鸽子肌肉组织，用漂白粉溶液清洗约5分钟，然后用去离子水洗净。

2. 将清洗后的组织切成小块，加入细胞破碎管中。

3. 加入适量的CTAB提取液，轻轻颠倒破碎管，使其均匀混合。

4. 将混合液放入水浴中加热，温度控制在60℃，保持30分钟。

5. 在水浴中加热过程中，制备NB试剂液。

取一定体积的NB试剂液加入离心管中。

6. 完成加热后，将破碎管置于冷水中快速降温。

7. 按顺序加入等体积的NB试剂液和酒精，轻轻摇晃离心管。

8. 静置一段时间后，观察管内是否有白色物质沉淀，即DNA。

9. 使用显微镜观察提取的DNA样品，并拍照记录。

五、实验结果与分析通过上述实验步骤，我们成功从鸽子肌肉组织中提取到了DNA。

观察显微镜下的DNA样品，可以观察到DNA的纤维状结构，证明DNA成功提取。

通过DNA鉴定试剂盒，可以进一步鉴定DNA的质量和纯度。

六、实验扩展1. 不同来源的细胞组织是否存在DNA含量差异？2. 不同提取方法对DNA的效果有何不同？3. 通过PCR技术对提取的DNA进行进一步分析。

七、实验注意事项1. 实验过程中需注意个人安全，避免接触有害物质。

2. 实验器材需干净无污染，避免杂质对实验结果的影响。