线粒体的活体染色

实验二液泡系和线粒体的活体染色法实验二液泡系和线粒体的活体染色法一、液泡系的活体染色液泡系（vacouome）是细胞内一种重要的细胞器，它普遍存在于动植物细胞。

动物细胞液泡系是法国学者M．Parat继Dangeard发现植物细胞液泡系之后于1924年第一次发现的。

在一切动物细胞内皆有。

通常为圆形泡状，数目多少不定。

除少数例外，腺细胞和幼年的细胞，通常有极性，皆集中在核的顶部上方，位于细胞的中央部分。

液泡系和线粒体（mitochondria）组成一个特殊的区域名高尔基区。

液泡是细胞内浓缩产品的重要场所，有十分重要的生理功能。

动物细胞内的液泡因为很小，如果不经过活体染色，就很难显示出来。

在有些细胞（如胰脏细胞）可用相差显微镜观察到液泡系。

根据中性红活体染色的结果，可知液泡系分为大、中、小三种类型的液泡。

小液泡被中性红染成均匀一致的深红色，即为“含浆液泡”（Vacuoles Plasmoccrines）。

经中性红染色后呈橙红色，有的边缘呈深红色新月形或环形，这是中等的“含分泌粒液泡”（Vacuoles rhagiocrines）。

含成熟分泌颗粒的大液泡因已全部蛋白质化，所以不再被中性红染色，只有液泡的残余部分（新月形或环形）被染成红色。

中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核绝对不被染色。

如果细胞死亡，细胞质及核才被中性红染成弥散的红色。

此时，液泡染色消失，液泡开始毁坏。

为了保证观察材料处于生活状态，要求一定的细胞环境条件——适宜的温度、渗透压、PH值、营养成分等。

因此观察时室温不要过高或过低，显微镜灯要有必要的滤热装置。

细胞材料要浸泡在生理盐水中。

长期观察还要注意防止因生理盐水蒸发而改变渗透压，并供给所需的养分等。

（一）仪器设备和材料1．复式显微镜（ X10、 X40及油镜头），擦镜纸2．解剖器，载玻片，盖玻片，吸管，吸水纸。

3．实验材料（1）黄豆幼苗根尖（绿豆或水稻也可），把黄豆培育在培养皿中潮湿的滤纸上，使其发芽，直到胚根伸长到一厘米以上。

细胞化学法在线粒体活体染色中的应用细胞化学法在线粒体活体染色是研究细胞内结构和功能的重要手段之一。

其利用各种荧光探针，通过特定的染色技术，在不破坏活体细胞的前提下，对细胞中的结构和分子进行直接标记和显微观察，从而实现对细胞内各种生物过程的研究。

下面，我们将从准备、处理、染色、观察等方面详细介绍细胞化学法在线粒体活体染色的应用。

一、准备实验材料及试剂首先，需要准备实验用的细胞培养物。

在细胞培养过程中，需要注意细胞的生长状态，保证细胞摆脱静止状态，并保证细胞状态的均匀性和健康状态。

同时，还需要准备各种荧光染料、生理盐水、PBS、缓冲液、透明质酸、含有氧气的培养液等。

这些试剂可以在实验室的商店或生化试剂商店购买得到。

二、处理细胞接着，需要对细胞进行处理。

在细胞化学法在线粒体活体染色中，需要将细胞固定在未硬化的胶中。

一种较为常见的方法是采用透明质酸凝胶。

在处理细胞前，需要先将透明质酸浸泡在PBS中，使其达到理想的浓度。

细胞在贴壁培养皿中生长至60％ - 80％并提前准备PBS和缓冲液，抽取透明质酸，加1/10体积的PBS调成一定的浓度。

将透明质酸糖液滴加到细胞培养物上，并等待其自然流动，直至完全凝固。

这样可以使细胞在固定的胶中扩散，并将其限制在一个区域内。

在细胞凝固后，可以使用小量脱液纸吸去液体，以避免过多的液体干扰观察。

三、进行荧光染色在处理好细胞后，需要进行荧光染色。

通常使用的荧光探针是MitoTrack Green，可以捕捉到在线粒体内的活动和功能变化，可以被在线粒体内的蛋白质吸附。

在进行染色前，需要先洗涤细胞，去除细胞表面的杂质。

然后，使用荧光探针进行染色。

在进行染色的过程中，应严格按照试剂的使用说明进行，避免对细胞的损伤。

四、观察细胞最后，通过显微镜观察细胞并记录图像。

通过观察细胞的形态和内部结构，可以了解在线粒体的分布和形态，以及在线粒体的数量和形态变化等信息。

需要注意的是，在进行观察时，应避免过度的光照和过度的荧光染色，以避免对细胞的损伤和影响。

线粒体(Mitochondrion)的活体染色及电镜照片观察【实验目的】掌握一种活体染色方法,了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。

【实验用品】一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。

二、器材和仪器显微镜、手术器材一套、解剖盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、10ml 注射器、吸管。

三、试剂 l／300詹纳斯绿B染液、Ringer氏液(哺乳类用)。

【实验内容】一、兔肝细胞线粒体的活体染色（一）原理线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。

细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。

活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。

詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂。

线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

（二）方法用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。

当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。

染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。

将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。

(三)结果显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。

二、线粒体的光镜切片观察用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。

三．线粒体的电镜照片观察不同细胞中线粒体的形态和数目不同。

线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。

线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。

实验一线粒体的活体染色与观察一、实验目的1．观察动物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。

2．学习一些细胞器的活体染色技术。

二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。

体内活染是将胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。

一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。

线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。

詹纳斯绿B（Janus green B）是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

三、实验仪器、材料和试剂1．仪器：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、。

姓名系年级2011级临八组别同组者科目细胞生物学实验题目小鼠肝细胞线粒体染色学号【实验目的】1、掌握细胞器活体荧光标记技术。

2、观察和了解活细胞内线粒体等的形态与分布特点。

【实验原理】对细胞的结构及功能的研究历来是细胞生物学的主要内容。

活体染色是指使生活有机体的细胞或组织着色但对其又无毒害作用的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的的生命活动。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染和体外活染两类。

体内活染是将胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，使这些特殊结构易于识别。

体外活染又称超活染色，它是将活的动植物的分离出部分细胞或组织小块，用染料溶液浸染。

染料被选择性的固定在活细胞的某种结构上面显色。

随着细胞生物学的实验研究技术发展，对细胞的研究正经历着从简单到复杂，静态到动态，从单维度到多维度的发展。

其中，细胞器的活体荧光标记技术是现代细胞生物学研究常用的重要试验技术。

这种技术可以从分子水平上动态的研究活细胞中的各种生理活动，极大地增强了人们对细胞的认识能力。

这种技术能够用来分析细胞的信号转导、物质运输、能量代谢和膜电位的变化等。

现在。

已经有许多细胞器的特异的商业化荧光染料。

本节课所需的线粒体特异活体染色剂是詹纳斯绿B（Janus green B）。

由于线粒体内细胞色素氧化酶系的作用，是该染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色。

【实验材料】人口腔黏膜上皮细胞、小鼠干细胞、Ringer液、0.02%詹纳斯绿B水溶液【实验步骤】1、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的活体染色与观察（1）取干净的的载玻片，滴加两滴0.02%詹纳斯绿B染液。

（2）用干净的牙签在自己的口腔粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放放入载玻片上的染液中，染色10~15敏，盖上盖玻片，用吸水纸吸去周围溢出的染液，在于光学显微镜下观察。

2、小白鼠肝细胞线粒体的活体染色与观察（1）用脊椎脱臼法处死小鼠，至于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝边缘较薄的肝组织块（0.5cm2 ），放入小烧杯中。

姓名系年级13级生科3班组别同组者科目细胞生物学实验题目线粒体的超活染色与观察学号【实验目的】掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。

【实验原理】活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。

体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。

一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。

詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。

詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

【实验用品】1、材料：小白鼠肝脏、睾丸2、试剂：Ringer溶液：NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl2 0.03g + 蒸馏水100ml；1%、1/5000詹纳斯绿B溶液：称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，30-40℃加热，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。