液泡系和线粒体的活体染色

细胞生物学实验四液泡系和线粒体的活体染色一、实验目的通过荧光活体染色观察液泡系和线粒体的形态结构及特点。

二、实验原理荧光活体染色法可以为我们提供高质量，高效率的细胞形态结构信息，其液泡系和线粒体都是细胞内非常重要的细胞器。

液泡系：是一种由膜包裹的小颗粒，由高度表达蛋白的外部囊泡和腺体细胞构成。

液泡系有多种类型，包括突触小泡、内分泌小体和溶酶体等，它们在细胞内部扮演着很重要的角色。

液泡系具有在荧光显微镜下能够显现的一些特定特征，如大小、形状、亮度和分布等。

活体染色可以提供很好的分辨率和细节，从而帮助我们更好地了解液泡系统的形态和功能。

线粒体：是一个直径约为1微米的双层膜结构，是细胞中的能量“发电厂”，在细胞内分解代谢物质，并生成ATP分子，以提供细胞各项生物学过程所需的能量。

可见线粒体可以帮助我们了解线粒体的数量、大小、形状和位置等特征，这有助于我们了解其功能和代谢状态。

三、实验材料激光共焦显微镜，激光荧光探针，放置在组织玻片上的细胞，PBS磷缓冲液，人工合成影响线粒体功能小分子等药物。

四、实验步骤1. 将细胞悬液滴在组织玻片上。

2. 添加荧光探针，荧光探针可以帮助我们区分液泡系和线粒体。

3. 给细胞注射小分子化合物，如人工合成影响线粒体功能小分子等，以研究药物对细胞器的影响。

4. 用激光共焦显微镜观察荧光探针和小分子化合物的荧光信号。

5. 分析显示出的细胞器信息，记录液泡和线粒体的数量、大小、形状和位置等特征。

五、实验注意事项1. 需要小心操作激光共焦显微镜，以避免损坏昂贵的设备或可能对人体存在危害的激光。

2. 荧光探针和小分子化合物需要在适当的浓度下添加，以避免对细胞的生长和存活产生不必要的影响。

3. 细胞的准确选择和应用荧光信号分析需要经验和技能支持，因此可能需要学习其他课程或培训活动，以便更好地完成任务。

六、实验结果正确的观察、检测和记录结果是实验的关键要求。

液泡系和线粒体的活体染色结果应包括液泡和线粒体的数量、亮度、位置和其它相关特征。

实验二液泡系和线粒体的活体染色法实验二液泡系和线粒体的活体染色法一、液泡系的活体染色液泡系（vacouome）是细胞内一种重要的细胞器，它普遍存在于动植物细胞。

动物细胞液泡系是法国学者M．Parat继Dangeard发现植物细胞液泡系之后于1924年第一次发现的。

在一切动物细胞内皆有。

通常为圆形泡状，数目多少不定。

除少数例外，腺细胞和幼年的细胞，通常有极性，皆集中在核的顶部上方，位于细胞的中央部分。

液泡系和线粒体（mitochondria）组成一个特殊的区域名高尔基区。

液泡是细胞内浓缩产品的重要场所，有十分重要的生理功能。

动物细胞内的液泡因为很小，如果不经过活体染色，就很难显示出来。

在有些细胞（如胰脏细胞）可用相差显微镜观察到液泡系。

根据中性红活体染色的结果，可知液泡系分为大、中、小三种类型的液泡。

小液泡被中性红染成均匀一致的深红色，即为“含浆液泡”（Vacuoles Plasmoccrines）。

经中性红染色后呈橙红色，有的边缘呈深红色新月形或环形，这是中等的“含分泌粒液泡”（Vacuoles rhagiocrines）。

含成熟分泌颗粒的大液泡因已全部蛋白质化，所以不再被中性红染色，只有液泡的残余部分（新月形或环形）被染成红色。

中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核绝对不被染色。

如果细胞死亡，细胞质及核才被中性红染成弥散的红色。

此时，液泡染色消失，液泡开始毁坏。

为了保证观察材料处于生活状态，要求一定的细胞环境条件——适宜的温度、渗透压、PH值、营养成分等。

因此观察时室温不要过高或过低，显微镜灯要有必要的滤热装置。

细胞材料要浸泡在生理盐水中。

长期观察还要注意防止因生理盐水蒸发而改变渗透压，并供给所需的养分等。

（一）仪器设备和材料1．复式显微镜（ X10、 X40及油镜头），擦镜纸2．解剖器，载玻片，盖玻片，吸管，吸水纸。

3．实验材料（1）黄豆幼苗根尖（绿豆或水稻也可），把黄豆培育在培养皿中潮湿的滤纸上，使其发芽，直到胚根伸长到一厘米以上。

线粒体和液泡系的超活染色与观察实验报告实验目的：
1. 了解超活染色的原理；
2. 掌握超活染色的方法；
3. 观察线粒体和液泡系的结构特点；
4. 学习常用的显微镜操作技巧。

实验步骤：
1. 取一份新鲜叶片，用透明胶带轻轻压住叶片，将透明胶带带上的叶片剥离下来。

2. 将剥离下的叶片放在载玻片上，加一滴超活染色溶液，并用盖玻片盖住。

3. 用粗目显微镜观察叶片上染色体的变化情况，观察细胞器的数量和形态特征，用细目显微镜进行进一步观察和记录。

实验结果：
经过超活染色处理后，我们可以清晰地观察到叶片细胞的结构特点。

其中，线粒体是细胞内重要的细胞器之一，其形态大小各异，常常呈圆柱状，且有许多线粒体。

而液泡是细胞内的囊状体，它可以储存水分、营养物质、色素等，体积大小不一，可见度较低，需要用高倍显微镜进行观察。

实验分析：
超活染色是一种能够使细胞有机物分解的过程中的酶不会破坏细胞结构和细胞器的染色方法。

该方法对细胞膜和细胞器的染色效果非常好，有助于观察和研究细胞的生理和功能，尤其是在细胞形态变化研究和药物筛选方面有着广泛的应用。

实验总结：
本次实验，通过超活染色，我们成功地观察到了植物叶片细胞内线粒体和液泡系的形态特点。

同时，我们也掌握了常用的显微镜操作技巧，对现代生命科学领域中细胞结构和功能的研究提供了帮助。

线粒体和液泡系的超活染色与观察XXX,YYY,ZZZ一、实验目的：1、观察动物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。

2、观察植物细胞内液泡系的形态、数量与分布。

3、学习一些细胞器的超活染色技术。

二、实验原理：线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态、数量随不同物种、不同组织器官和不同生理状态而发生变化。

詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内地细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

中性红为弱碱性染料，对液泡系（即高尔基体、内质网、溶酶体以及细胞内的运输小泡）的染色具有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中的某些酸性蛋白质有关。

三、实验用品：1、材料：人口腔上皮细胞、黄豆幼根根尖。

2、试剂：（1）Ringer溶液：氯化钠0.85g（变温动物用0.65g）氯化钾0.25g氯化钙0.03g蒸馏水100mL（2）1%，1/3000中性红溶液：称取0.5g中性红溶于50mLRinger液，稍加热（30~40℃）使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。

临用时取已配制的1%中性红原液1mL，加入29mLRinger溶液混匀，即为1/3000工作液，装入棕色瓶备用。

（3）1%，1/5000詹纳斯绿B溶液：称取50mg詹纳斯绿B溶于5mLRinger溶液中，稍加热（30~40℃），使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。

取1%原液1mL加入49mLRinger溶液，即成1/5000工作液，装入瓶中备用。

最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。

3、器材：普通光学显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。

四、实验方法：1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体地的超活染色与观察：（1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。

实验2线粒体和液泡系的超活染⾊与观察中国海洋⼤学实验报告姓名:常天易系年级:海洋⽣命学院2012级专业:⽣物科学科⽬:分⼦细胞⽣物学实验学号:12050011006线粒体与液泡系得超活染⾊与观察⼀、实验⽬得1、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系得形态、数量与分布;2、学习⼀些细胞器得超活染⾊技术。

3、观察⾖芽根部细胞得液泡分布⼆、实验原理１、詹纳斯绿B染液被线粒体中得细胞⾊素氧化酶氧化⽽呈现蓝绿⾊,在细胞得其她部位因保持还原状态⽽呈现⽆⾊。

２、中性红染液为⼀种碱性染液,易随外周染液进⼊液泡,因液泡内环境偏酸性,所以使液泡被染上红⾊。

三、实验材料黄⾖幼根根尖、⼈⼝腔上⽪细胞,Ringer试剂,詹纳斯绿B染⾊液,中性红染液四、实验⽅法黄⾖幼根根尖得超活染⾊(1)、使⽤中性红染液将黄⾖幼根根尖⼩⼼地纵切⼀薄⽚将纵切⽚浸⼊到载玻⽚上得中性红染液中染⾊１０分钟⽤吸⽔纸轻轻地把染液吸掉,再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻⽚,⽤镊⼦轻压玻⽚后,在显微镜下观察(２)、使⽤詹纳斯绿B 染液将黄⾖幼根根尖⼩⼼地纵切⼀薄⽚将纵切⽚浸⼊到载玻⽚上得詹纳斯绿B染液中染⾊10分钟盖上盖玻⽚,⽤镊⼦轻压玻⽚后,在显微镜下观察(３)、使⽤詹纳斯绿B 与中性红染液混合染⾊①先加詹纳斯绿B,后加中性红染液将黄⾖幼根根尖⼩⼼地纵切⼀薄⽚将纵切⽚浸⼊到载玻⽚上得詹纳斯绿B染液中染⾊10分钟向载玻⽚上得标本滴加中性红染液再染⾊１０分钟⽤吸⽔纸轻轻地把染液吸掉,再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻⽚,⽤镊⼦轻压玻⽚后,在显微镜下观察②、使⽤詹纳斯绿B与中性红染液同时染⾊将黄⾖幼根根尖⼩⼼地纵切⼀薄⽚将纵切⽚浸⼊到载玻⽚上得詹纳斯绿B染液与中性红染液得混合物中染⾊10分钟⽤吸⽔纸轻轻地把染液吸掉,再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻⽚,⽤镊⼦轻压玻⽚后,在显微镜下观察⼈⼝腔上⽪细胞得超活染⾊(1)、使⽤詹纳斯绿B染⾊⽤消毒⽛签得钝端在⼝腔上⽪轻轻地挂取部分上⽪细胞在载玻⽚上滴加詹纳斯绿Ｂ染液,将⽛签上得内容物在染液中混匀染⾊10分钟后,在显微镜下观察(２)、使⽤中性红染⾊⽤消毒⽛签得钝端在⼝腔上⽪轻轻地挂取部分上⽪细胞在载玻⽚上滴加中性红染液,将⽛签上得内容物在染液中混匀,染⾊10分钟⽤吸⽔纸轻轻地把染液吸掉,再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻⽚,在显微镜下观察五、实验结果1、观察根尖得染⾊情况图1、根部伸长区得切⽚及其在中性红染⾊下显⽰得液泡。

实验三 液泡系和线粒体的活体染色
1实验目的与原理
1.1实验目的：观察植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布； 掌握一些细胞活体染色的原理和技术。

1.2实验原理：活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。

中性红为弱碱性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。

2 实验材料与方法
2.1实验材料：洋葱鳞茎内表皮
2.2洋葱鳞茎细胞液泡的活体染色：
撕取洋葱鳞茎内表皮→1/3000中性红溶液染色5~10min →吸去染液，滴加Ringer 液→盖上载玻片，显微镜观察。

2.3洋葱鳞茎细胞线粒体的活体染色：
撕取洋葱鳞茎内表皮→1/5000詹纳斯绿B 溶液染色10min →吸去染液，滴加Ringer 液→盖上载玻片，显微镜观察。

3 实验结果
图1中性红染色洋葱内表皮细胞 图2詹纳斯绿染色洋葱内表皮 (X100) (X100)
在图1中性红染色的洋葱鳞茎内表皮细胞中可见表皮细胞中央液泡所占据被染至砖红色，细胞核被挤至旁边
图2是经詹纳斯绿B 染色的洋葱鳞茎内表皮细胞，图中细胞被染成蓝色可以看见有许多蓝色颗粒状物体，这就是经染色的线粒体。

五液泡系和线粒体的活体染色2017.10.206 结果与分析6.1液泡1.洋葱鳞茎外表皮细胞液泡（1）结果描述：洋葱鳞茎外表皮细胞液泡为紫红色，几乎均匀地充盈于整个细胞中；细胞壁清晰可见，为透明的白色。

（2）结果分析：由于洋葱鳞茎外表皮细胞为成熟细胞，所以细胞中央有大液泡几乎充盈整个细胞，又因为洋葱鳞茎外表皮细胞液泡的色素为紫红色，所以细胞呈现出紫红色。

图1洋葱鳞茎外表皮细胞液泡（物镜×10）细胞壁；大液泡2.洋葱鳞茎内表皮细胞液泡（1）结果描述：成功染色的洋葱鳞茎内表皮细胞的液泡为橙红色，颜色如洋葱鳞茎外表皮一样均匀地分布于细胞中，细胞壁为比液泡更浓的橙红色，细胞质无色。

（2）结果分析讨论：由于中性红为液泡的特殊染色剂，只能把液泡染成橙红色，所以图2洋葱鳞茎内表皮细胞液中性红染色（成功）质及细胞核为无色，但细胞壁或是细胞膜被染细胞壁；大液泡；成了深橙红色，可能与其PH值有关，因为中细胞质，细胞核性红为酸碱指示剂，变色范围pH值6.8（红）~8.0（橙黄），又有可能是染料残留于细胞壁中，因为细胞壁有丰富的纤维。

（1）结果描述：整个细胞呈现不均匀的橙红色，不能明显看到大液泡，细胞壁为砖红色。

（2）结果分析：由于液泡染色不成功，所以颜色分布不均匀，也看不到中央大液泡。

同样的步骤，同样的试剂，但却有的同学染色成功，有些却不成功，可能与取材有关或图3洋葱鳞茎内表皮细胞液中性红染色（失败）是与实验操作能力有关，又或者说与机遇有关。

细胞壁；细胞质3.绿豆根尖不同部位液泡观察结果描述：分生区中细胞为排列整齐的正方形；液泡被染成玫红色，细胞的液泡体积较小圆形但数目较多。

图4绿豆根尖分生区液泡中性红染色液泡；细胞壁结果描述：伸长区中细胞为长方形，液泡被染成枚红色，细胞的液泡只有一个或两个，位于细胞的中央但不充盈于整个细胞。

结果描述：成熟区中细胞为较长的长方形，细胞液泡被染成橙红色，液泡只有一个且较大。

图5绿豆根尖伸长区液泡中性红染色液泡；细胞壁图6绿豆根尖成熟区液泡中性红染色液泡；细胞壁结果分析讨论：绿豆根尖细胞液泡系中，生长点即分生区的细胞胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。

细胞生物学实验四液泡系和线粒体的活体染色【实验目的】1.通过制片掌握活体染色方法2.熟悉在耳缘静脉用空气栓塞处死兔子的方法3.了解线粒体及液泡系在光镜及电镜下的基本形态结构【理论基础】1.活体染色的基本概念和实际应用，常见的活体染色剂2.生物体内线粒体的基本形态与功能（特别是线粒体所含的酶类），重点联系理论课“线粒体”一章中结构与功能部分3.液泡系的组成及在光镜和电镜下的形态特点，可参照理论课“细胞的内膜系统”的内容【实验内容】（一）兔肝细胞线粒体的活体染色[操作技能要求]1.学会静脉空气栓塞处死兔子的方法2.熟悉线粒体活体染色方法及注意事项[讲解和明确的内容]1.詹纳斯绿B进行线粒体活体染色的原理2.用詹纳斯绿B进行染色时为何让组织块上表面露在染液外面3.为什么要取兔肝边缘较薄的肝组织4.空气栓塞处死兔子的要点：注意兔子的固定方法，耳缘静脉的选择，注射的方向，针头进入血管的标志，注射的空气量以及注射器的选择[观察要点]1.注意观察光镜下肝脏线粒体的形状与分布2.观察电镜照片上线粒体嵴的数目与分布方式（二）蟾蜍胸骨剑突软骨细胞液泡系活体染色及观察[操作技能要求]1.捣髓法处死蟾蜍的方法2.学会液泡系的活体染色方法[讲解和明确的内容]1.为什么要选取蟾蜍胸骨剑突软骨最薄部分的一小片2.中性红作为液泡系活体染色剂的特点：在生活状态下中性红染色可能与液泡中的蛋白有关[观察要点]注意观察软骨细胞液泡系的形态及与周围软骨细胞的区别[相关理论内容]1.光镜下观察到的液泡系包括哪些细胞内结构2.细胞内膜系统的组成（三）依据提纲讲解线粒体及溶酶体的理论内容。