下载文档原格式
第二章菌种及种子制备目录第一节、菌种选育第二节、菌种的衰退、复壮及保藏第三节、国内外菌种保藏机构第四节、种子制备菌种选育的理论基础：微生物遗传学、分子遗传学质粒（plasmid)：有时也称作核外基因，为非核染色体的共价闭环状DNA分子，具有自主复制功能，并带有某些特殊遗传性状的基因。
质粒据其所具有的性状分为致育因子（F因子）、耐药因子（R因子）等基因(gene)：一个含有特定的遗传信息的核苷酸序列，是遗传物质最小功能单位，其物质基础是DNA或RNA自然选育：利用微生物在一定条件下产生自发变异，通过分离、筛选，排除劣质性状的菌株，选择出维持原有生产水平或具有更优良生产性能的高产菌株，达到纯化与复壮菌种、保持稳定生产性能的目的。
其主要原理是把微生物群体分离。
自然选育的方法与步骤：（1）通过表现形态淘汰不良菌株（2）考察目的代谢产物产量（3）进行遗传基因型纯度试验，考察菌种纯度（4）传代稳定性试验：斜面传3-5代诱变育种：指人为地、有意识地将对象生物置于诱变因子中，使该生物体发生突变，从这些突变体中筛选具有优良性状的突变株的过程（提高了菌种发生突变的频率和变异幅度，提高获优机率）常用的诱变剂：物理诱变因子：紫外线、X射线、快中子等化学诱变因子：硫酸二乙酯（DES）、亚硝酸、吖啶橙生物诱变因子：噬菌体、转座子等影响诱变效果的因素：外部环境条件：如温度、氧气、pH、水分出发菌株的选择：生产菌株、野生菌株合适的诱变剂量：大多采用70-80%或更低的致死剂量出发菌株的生理状态：细菌-对数生长期；幼年孢子；营养体; 湿态敏感（106 个/mL孢子悬浮液或108个/mL的菌液）诱变效应的测定：直接法和浓缩法，培养后测定菌株的目的代谢产物量诱变方法：单因子、复合诱变优良突变株的筛选方法：随机筛选或半理性化筛选杂交育种：两个基因型不同的菌株通过接合使遗传重新组合，从中分离和筛选具有新性状的菌株。
原始亲本：用来杂交的野生型菌株，可以是不同谱系的，也可以是相同谱系但代数相差较多的，遗传基础差别要大，特性清楚，遗传标记明显。
二、三级菌种制作技术二、三级菌种营养条件相同，制作方法一致，所不同的是二级菌种(原种)是由一级菌种(母种)扩大培养来的，而三级菌种(栽培种)是由二级菌种扩大培养来的。
因此，相同内容一起介绍。
二、三级菌种生产的工艺流程为：配料(配制培养基)→装瓶(栽培种可以用塑料袋) →灭菌→接种→培养一、二、三级菌种培养基的配制(一)二、三级菌种培养基配制原则1．选择适宜的营养物质。
2．营养物质间配制的比例要恰当。
3．选择经济实用、来源广泛的原料。
4．适宜的pH值和含水量。
(二)二、三级菌种培养基常用的配方1．木屑培养基：阔叶树木屑78%，麸皮(或米糠)20%，蔗糖1%，石膏粉1%。
这是常见的木屑培养基配方。
适于制作香菇、平菇、黑木耳、金针菇、滑菇、灵芝、猴头菇等多种木腐型菌种。
2．棉籽壳培养基：棉籽壳78%，麸皮(或米糠) 20%，蔗糖1%，石膏粉1%。
适用于制作金针菇、平菇、凤尾菇、草菇、银耳、黑木耳、猴头菇等菌种。
注：其它配方参见课本。
(三)二、三级菌种培养基配制的具体方法及步骤1．称料：先称主料，再称辅料2．拌料：(1)将不溶性主料和辅料拌匀。
(2)将可溶性辅料加水制成母液，用时稀释。
(3)二者混合均匀，堆放片刻，使其吸足水分。
(4)检查含水量(手测法、称重法)3．调节pH值：因灭菌和代谢酸会使pH值下降，故灭菌前应将pH值比指定要求调高1左右。
pH值测定方法：用pH试纸测定并用1%的石灰水上清液或1%过磷酸钙澄清液调节。
4．分装培养料：分装容器：750ml菌种瓶，500ml罐头瓶，菌种袋分装要求：上紧下松，外紧内松，中间一个洞(直径 1～1.5cm)5. 清洁(洗或擦)瓶、袋外壁。
6．封口：菌种瓶用二层报纸或一层牛皮纸外加一层薄膜封口；菌种袋用袋口环套封口。
二、二、三级菌种培养基的灭菌1．灭菌方法及要求高压蒸汽灭菌：压力1.5kg/cm3，温度126～128℃，时间1～1.5h(谷粒和经过堆制发酵的粪草培养基应达到2～2.5h)。
