二级菌种和三级菌种的制备

菌种怎么制作，菌种保藏方法1、将土豆切成块，放入烧杯中煮半个多小时，煮好后过滤溶液备用。

2、将琼脂放入溶液中，然后重新将其烧开，琼脂完全溶化后继续煮一段时间。

3、煮好后将汁液分放至试管内，并用高压锅消毒杀菌，消毒后斜放试管，待凝固后开始接种。

4、用酒精对嫩蘑菇进行杀菌，并在无菌箱内将其切成小块，切好后可接种至琼脂基质上。

5、堵上试管口，将琼脂基质放入培养箱，长满菌丝后便可形成一级菌种。

一、菌种怎么制作1、一级菌种（1）向烧杯内放入切成块的土豆，然后煮30多分钟，煮好后过滤溶液备用。

（2）向溶液内放入琼脂，再将其烧开，待琼脂完全溶化后继续煮一段时间。

（3）煮好后，将汁液分放至试管，再用高压锅消毒杀菌。

消毒后将试管斜放，直到冷凉凝固后即可开始接种。

（4）用酒精对嫩蘑菇做杀菌处理，然后在无菌箱内切成小块，接种至琼脂基质上面。

（5）用塞子堵上试管口，再将琼脂基质放入培养箱内，待长满菌丝后即可形成一级菌种。

2、二级菌种（1）将煮熟的大豆和谷粒置于无菌的条件下晾干，再装入经过高温杀菌的玻璃瓶内。

（2）将瓶子封口，放入高压锅中，经高压灭菌后放在无菌室冷凉。

（3）将培养瓶放至无菌箱内，再放入一级菌种，用的小匙挖出黄豆大小的菌种接种入玻璃瓶。

（4）接种后要封口，再将玻璃瓶放到培养室中，待长满菌丝后即可备用。

3、三级菌种（1）制备方法与二级菌种基本一致，培养基可使用煮熟的麦粒、玉米粒及棉籽。

（2）三级菌种的菌丝长满后即可取出来培育，经历三级菌种的培育后可完全制成平菇菌。

二、菌种保藏方法1、斜面低温保藏法将菌种接种至适宜的固体斜面培养基上，待菌种充分生长后用油纸将棉塞部分包扎好，然后放入冰箱，温度控制在2-8°C即可。

2、甘油管保存法（1）将80%甘油用高压蒸汽做灭菌处理，再将菌种放置在斜面培养基上培养，用无菌水制成高浓度的菌悬液。

（2）将1毫升甘油与菌液混匀，使甘油的浓度达到10-30%，然后放在-70°C的环境中冻存。

食用菌菌种分级和生产的基本工艺流程一、菌种分级食用菌的菌种分为三级，即母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)。

1、母种(一级种) 通过孢子或组织分离培养获得，并经鉴定为种性优良，遗传和生理性状相对稳定的在试管斜面上生长和保存的纯菌丝体。

也有人称之为试管种。

2、原种(二级种) 由母种转接到天然基质(培养基)上经培养而成的菌种。

这是菌丝体和天然基质的混合体。

3、栽培种(三级种) 由原种转接在天然基质(培养基)上扩大繁殖而成的菌种。

栽培种也是菌丝体和天然基质的混合体。

栽培种常作为栽培用菌种，或直接出菇。

也有人称之为生产种。

二、菌种生产的基本工艺流程作为栽培用的菌种，国内外均采用固体培养，使用固体菌种。

其大致工艺流程为：母种→母种扩繁(培养基制备→接种→培养检查→成品)↓↓←原种成品←(培养检查←冷却接种←灭菌←配料分装)原种制作栽培种制作(配料分装→灭菌→冷却接种→培养检查) →栽培种成品三、母种(一级种)制作母种制作的基本工艺流程为母种(由科研单位、大专院校、菌种保藏专门机构引进)一培养基制备一接种一培养检查一成品。

(一)、常用培养基及配方培养基是食用菌菌种生长所需营养的基质。

培养基要具备四个条件，第一，要含有所培养的菌株生长所需要的各种营养物质，如糖类、有机氮、矿物质等。

第二，所含养分浓度和状态要利于食用菌的吸收和利用。

如食用菌母种培养基使用葡萄糖的浓度多在2％左右，过高和过低都不利于菌丝的生长；食用菌对氮素的吸收优先吸收有机氮，因此，原种和栽培种的培养基中应添加有机氮源，如麦麸、米糠等。

第三，要有适宜的酸碱度(pH)，食用菌多数喜偏酸性，pH5.0～6.5。

第四，经过严格灭菌，保持无菌状态。

这最后一点是要通过灭菌才能达到的，然而，灭菌的高温能破坏培养基中的许多化学成分，并能降低pH。

这一点必须在配制时就考虑到。

这就要求从使用的营养型药品试剂上，要尽量选用热稳定性好的种类，配制时，灭菌前的pH要略高于使用时所需的适宜酸碱度。

二级菌种的制作流程
先说准备工作吧，咱得把工具啥的都准备齐全。

像培养皿、接种针，这可一个都不能少！我跟你说，我刚开始干这活的时候，有一次居然忘准备接种针了，那叫一个手忙脚乱！
然后就是接种环节。

这可得小心再小心，动作得轻柔，就跟伺候小宝宝似的。

有一次我手重了点，哇，那菌种都被我弄伤啦！
制作过程中，温度和湿度的控制也特别重要。

我记得有段时间，天气特别怪，温度忽高忽低的，可把我愁坏了！
对了，还有消毒这个步骤，千万不能马虎！要是消毒不彻底，那可就全完喽。

我好像听说过有人因为消毒没做好，整个一批菌种都废了，多可惜呀！
我这说着说着都跑题啦！咱接着说，等菌种培养好了，还得仔细观察，看看有没有啥异常。

有一次我发现有个菌种颜色不太对，嗯...我心里就“咯噔”一下，好在及时处理，没出大问题。

朋友，你说这制作二级菌种是不是挺不容易的？只要咱用心，肯定能弄好！要是你在做的过程中有啥问题，随时来问我，咱一起琢磨琢磨！我这水平也就这样啦，哈哈，希望能对你有点帮助！。

1,母种:又叫一级种,用直径18-22cm的试管制备.常用配方:去皮马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂10-20克,水1000毫升,先把土豆去皮称重,切成小块煮至熟而不烂,过滤加水至1000毫升,再把琼脂剪成小段,放入锅内,边搅边煮,待琼脂溶化后加入葡萄糖,由于琼脂质量各有不同加入份量要看情况而定，装管前取一小勺浮在凉水中冷却观察其硬度适合然后分袋试管,用棉花塞塞住试管口,放入小高压锅内灭菌,当压力表达到个压力时,再灭菌30分钟,取出试管放成斜面,放置2-3 天后,无杂菌感染再放入接种箱内接种,接了种的试管放入培养室内进行培养,温度要求25℃左右,相对湿度75%以下.2,原种:二级种,一般采用原种瓶和罐头瓶.培养料不要装的太满,装至瓶肩.原种的制备多采用谷粒种,锯沫种和棉子壳种.①谷料种:用玉米,小麦为原料,精选后煮沸,使种子变软即成,不要煮的太熟,开花.熟后离火泡5分钟（不开盖而能吸足水份）而后装瓶,用小型或中型高压锅灭菌,放至温度25℃左右接入母种,放培养室内培养.一般25-30天即成.②木屑种:木屑78%,麦麸20%,石膏1%,糖1%,料:水=1:,拌匀装瓶,灭菌,接种培养.一般25-30天即成.③棉子皮:因棉子皮各种营养丰富,一般不需要加其它物质,只加1%的糖和石膏,用料倍的水拌匀即可,而后装瓶,灭菌,接种,培养即可.推荐通用配方：木屑（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤糠夫：6斤糖：斤菇耳壮：两石膏：1斤3,生产种:三级种可用木屑,玉米,棉籽皮,菌草,麦秸等为原料,根据所栽培的品种,采用不同的配方,用聚乙烯或聚丙烯,直径15-28cm塑料袋装料,然后用常压灭菌锅灭菌,达到100℃后,再维持100℃8-10小时.待袋稍凉后出锅,使栽培袋温度降至25℃左右再用原种接种,而后放到培养室的培养架上培养.推荐配方：■地栽木耳配方锯沫（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤糠夫：5斤豆粉：2斤菇耳壮：两白灰：1斤■平菇猴头香菇金针菇配方锯沫（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤菇耳壮：两糠夫：5斤白灰：1斤。

Z i x u n t a i在进行香菇生产栽培时香菇三级菌种的制作成为香菇技术当中的重中之重，三级菌生长的好坏，将直接影响到播种的成败，现将三级菌种的制作过程简要叙述如下：1、配料比例：木屑78%、麸皮8%、稻糠12%，石膏1%，多菌灵1%，白糖1%，锯沫选择阔叶林树种，以柞木、楸木、桦树等硬杂木的锯沫最好，尽量少用、不用杨柳椴木锯沫。

针叶林树种禁用。

2、配料制作（1000斤单位）：将锯沫、麸皮、稻糠、石膏，放在光滑干净的水泥地面上（如果没有水泥地条件的，用砖铺平也可以）四合一充分拌匀，再将多菌灵白糖放入水中充分溶解后，加在拌匀的干料中，加水多少，以手捏培养料，指缝间见水渗出而不滴下为度。

因锯沫干、湿度不同，所以加水量要因此调整，一般加水标准桶25桶（1000公斤）为宜。

但要将料充分拌匀，一般拌3—4遍即可。

这时拌好的培养料要把它装入33cm×17cm的三级菌袋内，每袋重量2.1—2.2斤为宜。

装适量后，要用自行车内胎剪成的皮套扎起来（以26车胎为准），在袋口缠3—4圈为宜（也可用尼龙绳扎袋口）。

干料加水后，可达到2100斤左右，可装1000袋，一万棒做800袋三级菌即可。

3、消毒灭菌：主要利用锅炉来蒸制。

料袋装锅时要有一定的空隙或者“#”字型排垒在灭菌锅里，这样便于空气流通，灭菌时不易出现死角。

一是采用高压蒸汽灭菌时，料袋必须是聚丙烯塑料袋，加热灭菌随着温度的升高，锅内的冷空气要放净，当压力表指向1.5公斤/平方厘米时，维持压力2小时不变，停止加热。

自然降温，让压力表指针慢慢回落到0位时，先打开放气阀，再开锅出锅。

二是采用常压蒸汽灭菌锅，开始加热升温时，火要旺要猛，从生火到锅内温度达到100℃的时间最好不超过4小时，否则会把料蒸酸蒸臭。

当温度到100℃后，要用中火维持8～10小时，中间不能降温，最后用旺火猛攻一会儿，再停火焖一夜后出锅。

出锅前先把冷却室或接种室进行空间消毒。

以上工序注意事项：①配好料后要马上装袋，防止时间长失水变酸。

食用菌三级菌种是由二级菌种进行移接扩大繁殖而成的，是直接用于栽培的菌种，因此又叫栽培种。

其制作方法基本上与原种相同。

菇类不同，制备栽培种所用培养基的成分也有差异，常用的培养料有木屑、棉籽壳、粪草和菇木等。

栽培种既可用瓶装，也可以用聚丙烯塑料袋装。

袋装具有装量多，便于携带和容易挖菌等优点，但使用塑料袋时要仔细检查，有时塑料袋有沙眼或封口不严，容易污染。

一、实验目的通过实验，使同学们掌握栽培种的制作方法和接种技术。

二、实验材料接种室(箱)、培养室、高压灭菌锅、棉籽壳(或木屑)、麦麸(或米糠)、过磷酸钙、石膏、水桶、盘称、搪瓷量杯、锥形木棒、聚丙烯塑料袋或菌种瓶、颈圈、棉花、防潮纸(或牛皮纸)、细线绳、接种勺(或大镊子、接种铲)、小镊子、酒精灯、75％消毒酒精瓶、75％消毒酒精棉球瓶、火柴、记号笔等。

三、实验内容与方法(一) 培养基的制作1．配方：棉籽壳78％、麦麸或米糠20％、过磷酸钙1％、糖1％。

料：水=1：1.3～1.4。

2．拌料：根据制种需要按各种营养成分的配比称量各种原料。

然后将棉籽壳和麦麸等不溶于水的原料干拌均匀。

过磷酸钙、蔗糖等溶于水的原料先混溶在拌料用的水中，再泼洒到棉籽壳等干料上搅拌均匀。

3．测培养料水分：培养料拌好后，用手抓一把料握在手中，用力捏紧。

以手指缝中有水渗出但无水滴滴下为宜，这时的含水量为62％～64％。

若含水量不足，可再加少量的水，充分搅拌均匀，再检测，直至含水量合适为止。

4．装袋：将拌好的培养料装入聚丙烯塑料袋中，边装边压实，一直装到塑料袋容积的3/5左右。

5．打孔：:装好培养料后，从袋中央用锥形木棒打1孔，孔深距袋底部2～3 cm。

6．封袋口：将塑料颈圈或无棉盖体的环套在塑料袋口上，然后将袋口外翻，塞上棉塞或盖上无棉盖体的盖子。

棉塞的外面还要包一层防潮纸(或牛皮纸)，用线绳扎好。

擦净塑料袋外面所粘的培养料。

(二) 灭菌由于栽培种数量大，小型灭菌锅不合适，有条件的单位可以购置大型立式或卧式电热高压蒸汽灭菌锅。

食用菌二级菌种和三级菌种培养基配制的工艺流程资料艾特贸易网手机版1．称料按照培养料配方准确将所需原料分别称取，并对不同原料按照不同方法进行预处理。

如使用稻草为原料，则先将稻草切成小段并且水中浸泡使其充分吸收水分后使用。

2．拌料对于难溶性物质，如麸皮、米糠、玉米粉、豆饼粉、石膏、碳酸钙、过磷酸钙等应在加水前和主料干拌均匀；对于易溶性化合物如蔗糖、红糖、尿素、硫酸镁、KH2PO4等应先化在水盆中溶化成为母液，然后按照比例随水拌入料内。

拌料用水常采用河水、井水或自来水。

培养料的含水量依原料种类和物理性状、菇类的生物学特性而定，其变动幅度一般在45%～65%之间，通常在55%～62%以内。

因为制种时，菌丝体是在瓶内发育的，通气差，水分不易蒸发。

如果培养料过湿，则菌丝向下延伸慢，菌丝少，且易衰老。

一般来说，二级菌种的培养料含水量比三级菌种培养料含水量还要偏少些，可延缓菌种衰老。

拌匀后将料堆积起来，一般闷30～60min，使培养料吃透水分。

培养料内不能含有干料块，以免出现“夹心料”，“夹心料”在灭菌时容易造成“死角”，导致接种后杂菌污染。

3．调节酸碱度多数食用菌适宜在偏酸的环境中生长，一般最适pH为5～6.5。

配制培养料时，pH往住调高1.5左右，若不合适时，可用5%的过磷酸钙或5%石灰水调至合适。

因为培养料配好后，在灭菌的过程中会使pH降低；此外，在菌丝的生长过程中，菌丝会产生一些酸性物质造成培养料pH下降，如乙酸、柠檬酸、草酸等。

因此，培养料的pH应该适当调高。

二级菌种和三级菌种的很多培养料中都添加石灰、石膏等成分，也能够有效地抑制pH的下降，保持其偏酸性环境。

4．分装培养料培养料拌好后要迅速分装入特定的二级菌种和三级菌种瓶（袋）内，以免料堆放置时间过长，造成酸败。

装料前，必须把空瓶清洗干净，并倒出瓶内水分。

装瓶时，一手持瓶一手填料，装料时，先装到瓶高的2／3处，再用手握瓶口并轻轻敲打瓶底使瓶内培养料下沉压实。

食用菌母种、原种、栽培种制作步骤食用菌菌种的质量对食用菌生产至关重要。

菌种的好坏，菌种的保存直接影响到食用菌的产品质量和产量、效益和成败，所以我们要制作优良的食用菌菌种，更要有优良的菌种保存方法，以保存菌种的生活力和优良性状，确保菌种纯种、无污染。

一、菌种制作食用菌菌种分三种即母种（一级种）、原种（二级种）、栽培种（三级种）1.制作母种（一级种）1.1菌种采集选择健壮无病虫害的食用菌子实体。

经表面消毒后，放在无菌的厚纸上，使子实体菌褶向下，在通风条件下经过12--24h，等子实体放出孢子后，将纸折叠起来风干，放入塑料袋中，里面放几粒干硅胶，封好口，放入2--4℃冰箱中，可保存起来长期备用。

1.2母种培养基制作配方：马铃薯200g、琼脂20g、葡萄糖20g、纯净水1000ml。

先把马铃薯切成大约1cm大的小方块，放入1000ml 纯净水中煮30min，过滤后加入琼脂、0.2-0.3%的磷酸二氢钾、再加入20g葡萄糖，溶解后分别装入试管，每个试管装量1/5-1/4，用棉塞封好试管口，外加塑料膜扎紧，放入压力灭菌锅1.3㎏/cm灭菌30min，待温度降至60℃将试管摆成30-35度倾斜面，冷却后观察几天，无受到杂菌污染即可接种，孢子液用灭菌的自来水将孢子稀释，在无菌操作环境下将孢子悬浮液移到试管琼脂斜面上，在25℃下培养，很容易萌发生长成菌丝，然后用石蜡封口置于4-5℃恒温箱中可保存6个月。

2.制作原种（二级种）将木屑78%、麦麸20%、糖1%、石膏1%加入水拌匀（100kg料加125kg水），培养基原料拌匀后拿试纸测ph 值，ph值在6-7为宜，然后装入大口的罐头瓶至瓶肩部，将培养料压平压紧，抹干净瓶的培养料，拿完好无破损的塑料薄膜扎紧瓶口，放入压力灭菌锅1.4-1.5㎏/cm灭菌1.5-2h，冷却至25℃即可进行无菌接种，用接种针从母种试管斜面上挑取少量菌丝体接入瓶中，接种后在25℃恒温箱中培养30d菌丝可长满，即可作为原种（二级种）。

食用菌制种工艺流程图随着食用菌产业的蓬勃发展，菌种需要量随之增加，而现有菌种生产单位明显偏少，许多菇农不得不向外引种。

长途购运菌种不仅花费大，成本高而且菌种因破瓶而易引起杂菌污染，从而严重影响栽培食用菌的经济效益。

菇农若能掌握菌种生产程序和制种技术，自行制种，逐步发展成制种专业户，也是一项很好的致富门路。

菌种生产程序，通常分为母种、原种和栽培种，也就是通常所说的一级、二级、三级菌种。

其中母种的分离选育技术性强，要求精化；而原种和栽培种的制作则比较简单。

下面介绍各级菌种的制作技术：一、母种的分离选育：母种主要采用人工选择、诱变育种、杂交育种和原生质融合等手段获得。

作为一般制种专业户，可以采用人工选择方式分离培育母种，具体步骤与操作方法如下。

1、采集种源从野生成人工栽培群体中，选择有代表性的优良菇体作为种源。

种菇的标准是：八成熟，朵形圆正、肉质肥厚，无病虫害。

采集1--2朵符合上述标准的种菇编上号码，作为分离母种的材料。

从栽培室采集的应标有原菌株代号。

2、培养基配制琼脂培养基又叫PDA培养基，常用配方为：马铃薯200--250克，琼脂15--20克，葡萄糖20--25克，清水1000毫升。

也可以加硫酸镁1--1．5克，维生素B1微量，磷酸二氢钾2--3克。

先将马铃薯洗净去皮，挖去芽眼，切成薄片，置于铝锅内加水煮沸30分钟，捞起后用4层纱布过滤，取汁。

然后将琼脂加入汁内，边加热边搅拌，让琼脂充分溶化；再将葡萄糖等加入，稍煮几分钟后，同样用4层纱布过滤，取其汁液。

将汁液趁热装入玻璃试管内。

装至管长的1／5，管口用棉花塞紧，或将汁液装入玻璃三角瓶内，装量20毫升。

然后置于高压锅内，在98--108千帕／厘米的压力下灭菌30分钟左右。

灭菌后及时取出，趁热将试管斜排于桌面上，冷却后即成为固体斜面培养基。

3、母种分离方法有孢子弹射分离、组织分离和基内分离3种方法。

(1)孢子弹射法。

将种菇表面消毒，吸干水分后，将菇体悬挂于装有琼脂培养基的三角瓶内，让菇体内的袍子自然散落在培养基上萌发菌丝。

二、三级菌种制作技术二、三级菌种营养条件相同，制作方法一致，所不同的是二级菌种(原种)是由一级菌种(母种)扩大培养来的，而三级菌种(栽培种)是由二级菌种扩大培养来的。

因此，相同内容一起介绍。

二、三级菌种生产的工艺流程为：配料(配制培养基)→装瓶(栽培种可以用塑料袋) →灭菌→接种→培养一、二、三级菌种培养基的配制(一)二、三级菌种培养基配制原则1．选择适宜的营养物质。

2．营养物质间配制的比例要恰当。

3．选择经济实用、来源广泛的原料。

4．适宜的pH值和含水量。

(二)二、三级菌种培养基常用的配方1．木屑培养基：阔叶树木屑78%，麸皮(或米糠)20%，蔗糖1%，石膏粉1%。

这是常见的木屑培养基配方。

适于制作香菇、平菇、黑木耳、金针菇、滑菇、灵芝、猴头菇等多种木腐型菌种。

2．棉籽壳培养基：棉籽壳78%，麸皮(或米糠) 20%，蔗糖1%，石膏粉1%。

适用于制作金针菇、平菇、凤尾菇、草菇、银耳、黑木耳、猴头菇等菌种。

注：其它配方参见课本。

(三)二、三级菌种培养基配制的具体方法及步骤1．称料：先称主料，再称辅料2．拌料：(1)将不溶性主料和辅料拌匀。

(2)将可溶性辅料加水制成母液，用时稀释。

(3)二者混合均匀，堆放片刻，使其吸足水分。

(4)检查含水量(手测法、称重法)3．调节pH值：因灭菌和代谢酸会使pH值下降，故灭菌前应将pH值比指定要求调高1左右。

pH值测定方法：用pH试纸测定并用1%的石灰水上清液或1%过磷酸钙澄清液调节。

4．分装培养料：分装容器：750ml菌种瓶，500ml罐头瓶，菌种袋分装要求：上紧下松，外紧内松，中间一个洞(直径 1～1.5cm)5. 清洁(洗或擦)瓶、袋外壁。

6．封口：菌种瓶用二层报纸或一层牛皮纸外加一层薄膜封口；菌种袋用袋口环套封口。

二、二、三级菌种培养基的灭菌1．灭菌方法及要求高压蒸汽灭菌：压力1.5kg/cm3，温度126～128℃，时间1～1.5h(谷粒和经过堆制发酵的粪草培养基应达到2～2.5h)。