HPLC结合紫外光谱法快速定性定量分析四种竹叶黄酮碳苷

通过大孔树脂柱层析和制备HPLC分离和纯化竹叶中具有抗氧化活性的4种C-糖苷黄酮摘要：目前已研究了4种C-糖苷黄酮，即荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷的制备方法,而这些C-糖苷黄酮是从乙醇提取物水溶液(即竹叶抗氧化物AOB)里通过AB-8大孔树脂和制备HPLC(流动相:10%和15%(V/V)/1%醋酸)制得的。

近而通过用甲醇和水分别作为抗溶剂和盐析剂的结晶法来纯化得到这些C-糖苷黄酮。

纯度是由分析HPLC谱图来估算的，而化学结构的确定是由IR，MS,NMR和UV谱图来确定的。

由5LAOB浓缩液得到的6.5g原料柱层析部分制得了荭草苷（49mg）、异荭草苷（142mg）、牡荆苷(15mg)、异牡荆苷(62mg)。

这些方法比较适用于制备纯C-糖苷黄酮的可利用的量，也适用于在竹叶中的荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷的量。

关键词：C-糖苷黄酮；大孔树脂；制备HPLC；结晶作用；竹叶抗氧化物1.简介在生物学上，二级植物代谢物是有活性的与人体的蛋白质有关联的非营养物。

黄酮——植物多酚二级代谢物的一大类——广泛分布于药草、果实、茶叶等中。

黄酮，存在于人类的食物中，对人体健康产生了特殊的作用，包括抗氧化活性，心脏血管疾病的防治，癌症的预防等。

C-糖苷黄酮是黄酮家族的一个重要的一类，在一些植物中被发现，例如，紫檀树和葫芦科果实中。

C-糖苷黄酮的多种生物活性已被报道过，包括异荭草苷（毛地黄黄酮-6-糖苷）和牡荆苷（芹菜素-8-糖苷）的抵抗金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌，绿脓杆菌的抗菌活性，也包括毛地黄黄酮-7-糖苷对于抵抗由CCl4引起的肝伤。

竹叶抗氧化物（AOB）是一种从竹叶中提取出来的灰褐色粉末，能够阻碍液体自动氧化的链反应，这种自动氧化会螯化过渡态的金属离子，净化亚硝酸化合物和阻碍亚硝胺的合成，另外，AOB已被证明对于过渡金属离子和自由基（包括在体外的高分子的衰减）具有强的抗氧化活性和抑制功效。

在中国，AOB已被证明是一种新的食物抗氧化剂，它能够被加进疏松的食品，水产品，肉类，可食用油，谷类，面包，水果及蔬菜汁，茶饮料和油炸食品中，这些都已经过中国卫生部门认证。

HPLC法测定不同主产地黄芪饮片的4种黄酮的含量蒲清荣;黄锐;赵剑;明俊男;罗群;李静【摘要】目的采用HPLC法同时测定不同主产地黄芪饮片中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素的含量.方法色谱柱固定相为Inertsil ODS-SPC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相乙腈-水(含0.2％甲酸),梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,紫外检测波长260 nm,柱温为40℃.结果毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素在0.00569 ～0.0569、0.00448 ～0.0448、0.00257～0.0257、0.00265～0.0265mg/mL时与色谱峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为98.72％、99.32％、100.03％、99.78％,RSD为1.06％、2.32％、2.86％、1.08％.结论该方法准确灵敏,可作为评价不同产地黄芪饮片的质量控制方法.【期刊名称】《云南中医中药杂志》【年(卷),期】2016(037)003【总页数】3页(P63-65)【关键词】黄芪饮片;毛蕊异黄酮葡萄糖苷;芒柄花苷;毛蕊异黄酮;芒柄花素;HPLC 【作者】蒲清荣;黄锐;赵剑;明俊男;罗群;李静【作者单位】四川医科大学附属中医医院,四川泸州646000;四川医科大学附属中医医院,四川泸州646000;四川医科大学附属中医医院,四川泸州646000;四川医科大学附属中医医院,四川泸州646000;四川医科大学附属中医医院,四川泸州646000;四川医科大学附属中医医院,四川泸州646000【正文语种】中文【中图分类】R284.2【Abstract】Objective: To determine the contents of calycosin-glucoside, ononin, calycosin and formononetin in Astragalus Pieces of different main origins by HPLC. Methods: Column stationary phase was Inertsil ODS-SPC18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm) and mobile phase was acetonitrile-water (containing 0.2% formic acid), by gradient elute, with 1.0 mL·min-1 of flow rate and 260 nm of ultraviolet detector wavelength, at 40℃ of column temperature. Results: The calycosin-glucoside, ononin, calycosin and formononetin showed a good linear relationship with chromatographic peak areas at the range of 0.00569-0.0569, 0.00448-0.0448, 0.00257-0.0257 and 0.00265-0.0265mg/mL. The average recovery was 98.72%, 99.32%, 100.03% and 99.78%, and RSD was 1.06%, 2.32%, 2.86% and 1.08%. Conclusion: The method is accurate and sensitive and can be valued as a quality control method for Astragalus Pieces of different origins.【Key words】Astragalus Pieces, calycosin-glucoside, ononin, calycosin, formononetin, HPLC黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao.或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。

银杏叶中总黄酮醇苷成分定量分析方法研究曹便利;王荞薇;连琦;谢媛媛;王义明;罗国安【期刊名称】《中药与临床》【年(卷),期】2016(0)6【摘要】目的:建立银杏叶药材中总黄酮醇苷类成分含量测定方法。

方法:分别采用高效液相色谱法(HPLC法)和紫外-可见分光光度法(UV法)测定银杏叶中黄酮类成分的含量,所测得结果进行比较。

HPLC法为改良药典方法,采用PhenomenexC_(18)(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,柱温35℃,流动相为0.4%磷酸-甲醇(50:50),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长为360nm。

结果:HPLC法测定山柰酚、槲皮素和异鼠李素分别在1.20-120 mg·L^(-1),1.50-150 mg·L^(-1),0.68-68mg·L^(-1)浓度范围内,线性关系良好(r=1.000);UV法芦丁在8.84-26.52 mg·L^(-1)浓度范围内,线性关系良好(r=0.9993),加样回收率为102.4%。

采用HPLC法测定银杏叶中总黄酮含量(上述3种成分含量之和×2.51)显著低于UV法测定结果,说明银杏叶药材中含有其他酚酸类成分。

结论:该方法简便、准确、重现性好。

【总页数】5页(P17-21)【关键词】银杏叶;总黄酮;山柰酚;鼠李素;槲皮素;高效液相色谱法;含量测定【作者】曹便利;王荞薇;连琦;谢媛媛;王义明;罗国安【作者单位】江西中医药大学;清华大学化学系【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.银杏叶口服液中总黄酮醇苷含量测定方法研究 [J], 张鹤婷2.银杏叶口服液中总黄酮醇苷含量测定方法研究 [J], 张鹤婷;3.不同生长季节银杏叶中总黄酮醇苷和总内酯的含量变化 [J], 孙兴力;周金彩;龙红萍;韩立路因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高效液相色谱法测定苦竹叶中总黄酮一、概述高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种用于分离和分析混合物中的微量成分的技术，它将被分离的物质分子通过非溶剂性的溶液以及固定相承载体配合使用，利用毛细管内壁的层析作用，在一定时间内实现对混合物中各组分的分离。

本文主要介绍利用高效液相色谱法测定苦竹叶中总黄酮的方法。

二、原理高效液相色谱仪是利用毛细管内壁表面的层析作用，将混合溶液中的各组分分离出来，并以不同的时间进入检测器，以此来实现分离的目的。

高效液相色谱的检测器常用的有UV/vis检测器、离子色谱检测器、极谱检测器、紫外分光光度检测器等。

三、试剂1. 苦竹叶样品: 取500mg的苦竹叶样品，经研磨成细粉，放入50mL的无水乙醇中，煮沸10min，放凉，过0.45um的滤纸，得到提取液。

2. 标准品: 以5, 10, 20, 30, 40, 50μg/mL 的标准品溶液构成标准曲线。

3. HPLC仪器: Agilent 1290 HPLC系统，包括：G1312A 全自动柱型机、G1315B DAD光度检测器。

4. 毛细管: Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm, 5μm)柱。

5. 溶液：甲醇-水-乙酸乙酯（0.1%）=50∶50∶0.1 (V/V/V)。

四、实验步骤1. 将毛细管装入柱型机，然后用预先准备的溶液进行洗脱，洗脱时间为30min，流速为1.0mL/min，然后升温到25℃，保持20min，将柱型机中的溶液收集，待用。

2. 将标准曲线溶液分别加入到上游和下游，然后以0.8mL/min的流速进行洗脱，检测UV/Vis，检测波长为295nm。

3. 将苦竹叶样品提取液加入到上游，然后以0.8mL/min的流速进行洗脱，检测UV/Vis，检测波长为295nm。

4. 用标准曲线求出苦竹叶样品中总黄酮的浓度值。

基金项目:云南省吴良如专家工作站项目(２０２３０５ＡＦ１５００５０)ꎻ云南省景谷县林业和草原技术推广中心云南省赵一鹤专家基层科研㊀㊀㊀㊀㊀工作站项目ꎮ第一作者:李翱翔(１９９７－)ꎬ男ꎬ硕士研究生ꎬ主要从事竹类植物资源的化学与利用研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:１９０７０４９５３８＠ｑｑ ｃｏｍꎮ通信作者:赵一鹤(１９７０－)ꎬ博士ꎬ研究员ꎬ博士生导师ꎬ主要从事竹资源高效利用研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:９０３７９６２５９＠ｑｑ ｃｏｍꎮ竹叶黄酮提取纯化及其在轻工业中的应用研究进展李翱翔１ꎬ２㊀赵一鹤２∗(１西南林业大学材料与化学工程学院昆明６５０２２４ꎻ２云南省林业和草原科学院昆明６５０２０１)摘㊀要:竹叶富含黄酮类物质ꎬ竹叶黄酮具有多种生物活性ꎬ可广泛应用于农业㊁日化产品㊁医药㊁功能性食品等行业ꎬ开发利用竹叶黄酮已成为近年来的研究热点ꎮ文章综述了国内外竹叶黄酮提取和纯化方法以及在轻工业领域的应用现状ꎬ以期为竹叶黄酮工业化开发利用提供依据和参考ꎮ目前ꎬ竹叶黄酮的提取方法可归纳为化学提取法㊁生物提取法㊁物理提取法和联合提取法ꎻ其纯化方法按照理化性质可归为柱层析法㊁大孔树脂吸附法以及超滤膜法３类ꎻ而检测竹叶黄酮的主要方法有分光光度法和高效液相色谱法(ＨＰＬＣ)ꎮ竹叶黄酮在很多领域都有较好的应用前景ꎬ但目前产业化应用仍存在许多尚待解决的问题ꎬ今后应在竹叶黄酮的提取和检测方法以及快速高效的产业化方面进行深入研究ꎮ关键词:竹叶ꎻ黄酮ꎻ提取方法ꎻ纯化方法ꎻ检测方法ꎻ工业化应用ＤＯＩ:１０.１２１６８/ｓｊｚｔｔｘ.２０２３.０９.２４.００１ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｎＥｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＦｌａｖｏｎｏｉｄｓＦｒｏｍＢａｍｂｏｏＬｅａｖｅｓａｎｄＩｔｓＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎＬｉｇｈｔＩｎｄｕｓｔｒｙＬｉＡｏｘｉａｎｇ１ꎬ２ꎬＺｈａｏＹｉｈｅ２∗(１ ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＭａｔｅｒｉａｌｓａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌꎬＳｏｕｔｈｗｅｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＫｕｎｍｉｎｇ６５０２２４ꎬＣｈｉｎａꎻ２ ＹｕｎｎａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙａｎｄＧｒａｓｓｌａｎｄꎬＫｕｎｍｉｎｇ６５０２０１ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｂａｍｂｏｏｌｅａｖｅｓａｒｅｒｉｃｈｉｎｆｌａｖｏｎｏｉｄｓꎬｗｈｉｃｈｈａｖｅａｖａｒｉｅｔｙｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄｃａｎｂｅｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬｄａｉｌｙｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｄｕｃｔｓꎬｍｅｄｉｃｉｎｅꎬｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｆｏｏｄａｎｄｏｔｈｅｒｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ.Ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｂａｍｂｏｏｌｅａｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｈａｓｂｅｃｏｍｅａｒｅｓｅａｒｃｈｈｏｔｓｐｏｔｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ.Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒꎬｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｏｆｂａｍｂｏｏｌｅａｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｔｈｏｍｅａｎｄａｂｒｏａｄａｎｄｔｈｅｉｒａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｌｉｇｈｔｉｎｄｕｓｔｒｙｗｅｒｅｒｅｖｉｅｗｅｄｔｏｐｒｏｖｉｄｅｂａｓｉｓａｎｄｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｂａｍｂｏｏｌｅａｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ.Ａｔｐｒｅｓｅｎｔꎬｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍｂａｍｂｏｏｌｅａｖｅｓｃａｎｂｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄａｓｃｈｅｍｉｃａｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎꎬｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎꎬｐｈｙｓｉｃａｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｃｏｍｂｉｎｅｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ.Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｐｈｙｓｉｃａｌａｎｄｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓꎬｔｈｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｃａｎｂｅｃｌａｓｓｉｆｉｅｄｉｎｔｏｃｏｌｕｍｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙꎬｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎａｄｓｏｒｐｔｉｏｎａｎｄｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｍｅｍｂｒａｎｅｍｅｔｈｏｄ.Ｔｈｅｍａｉｎｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎｂａｍｂｏｏｌｅａｖｅｓａｒｅｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙａｎｄｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ(ＨＰＬＣ).Ｂａｍｂｏｏｌｅａｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｈａｖｅｇｏｏｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｓｐｅｃｔｓｉｎｍａｎｙｆｉｅｌｄｓꎬｂｕｔｔｈｅｒｅａｒｅｓｔｉｌｌｍａｎｙｐｒｏｂｌｅｍｓｔｏｂｅｓｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｉｎｄｕｓｔｒｉａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ.Ｉｎｔｈｅｆｕｔｕｒｅꎬｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｏｆｂａｍｂｏｏｌｅａｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｓｗｅｌｌａｓｔｈｅｒａｐｉｄａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｉｚａｔｉｏｎｓｈｏｕｌｄｂｅｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｉｅｄ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ｂａｍｂｏｏｌｅａｆꎬｆｌａｖｏｎｏｉｄｓꎬｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄꎬｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄꎬｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄꎬｉｎｄｕｓｔｒｉａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ７９㊀㊀竹叶作为一种可食用和药用的植物资源ꎬ在中国乃至其他国家都有着悠久的历史记录ꎮ竹叶提取物具有多种生理活性ꎬ对于保护人体健康具有重要作用[１]ꎬ１９９８年中国卫生部认定竹叶是一种草药ꎮ竹叶中富含黄酮类化合物ꎬ该类化合物也是植物中最重要的次生代谢产物之一[２]ꎮ文献分析显示ꎬ现已发现竹叶中有２１种黄酮类化合物ꎬ主要以糖苷的形式存在于竹叶中ꎬ分为Ｏ苷和Ｃ苷２种ꎬ并以黄酮Ｃ苷为主[３]ꎮ黄酮Ｃ苷主要有４种活性化合物[４]ꎮ魏琦等[５]通过高效液相色谱法同时测定竹叶中的１３种黄酮类化合物ꎬ并用同样方法与牡竹属１０个竹种的竹叶黄酮类化合物进行比较ꎬ结果发现不同竹种竹叶黄酮类化合物组成和含量存在差异ꎻ李翱翔等[６]采用４种黄酮碳苷标品分析了５种竹叶的黄酮类成分及含量[６]ꎬ印证了该结果ꎮ已有研究表明ꎬ黄酮类化合物表现出一系列生物活性ꎬ包括抗氧化[７]㊁抗真菌活性[８]㊁调节血脂血糖和抑制肿瘤活性[９]㊁阻断亚硝化反应㊁消除溃疡以及降低患动脉粥样硬化㊁老年痴呆症㊁帕金森综合征病的风险[１０]等ꎮ竹叶中提取的黄酮类化合物由于其独特的生物理化活性ꎬ可用于医药产品㊁功能保健产品以及日用化妆品ꎬ也可进一步制成抗氧化剂㊁抑菌防腐剂㊁天然营养性低甜度甜味剂等食品添加剂ꎮ然而ꎬ到目前为止竹叶黄酮在轻工业上的应用并未取得实质性进展ꎮ本文综述了国内外竹叶黄酮提取和纯化方法以及在轻工业领域的应用现状ꎬ以期为竹叶黄酮工业化开发利用提供依据和参考ꎮ１㊀竹叶黄酮类化合物的提取方法常见的竹叶黄酮类化合物提取方法有煎煮法㊁共沉淀法㊁超临界流体萃取法(ＳＰＥ)㊁表面活性剂法㊁微波辅助提取法(ＭＡＥ)㊁双水相法㊁超声波萃取法㊁离子液体提取法㊁生物酶解提取法㊁闪蒸提取法等ꎬ根据提取原理可将这些方法归纳为化学提取法㊁生物提取法㊁物理提取法以及联合提取法４类[１１]ꎮ１ １㊀化学提取法化学提取法是将竹叶原料进行粉碎过筛后ꎬ选择合适的溶剂在最佳的提取工艺下进行提取的方法ꎮ常用的溶剂为水或有机溶剂ꎬ即选择黄酮类化合物和非目标物质之间具有极性差异的有机溶剂(例如常用的有丙酮㊁乙醇㊁甲醇㊁乙酸乙酯及某些极性较大的混合有机溶剂)进行提取ꎮ何春雷等[１２]采用水提取法分析了１０个不同竹种的竹叶黄酮ꎬ其最佳提取工艺条件为:固液比１ʒ２０㊁提取温度８０ħ(水浴加热)㊁提取时间３０ｍｉｎꎮ水提取法具有经济环保㊁设备简单㊁工业生产成本低的优点ꎬ但提取率较低ꎬ也会附带多种水溶性杂质ꎬ给分离纯化带来一定困难ꎬ得到的产物含量少ꎮ李坤平等[１３]使用不同的有机溶剂对竹叶黄酮进行提取ꎬ认为酒精为最合适的提取溶剂ꎮ有机溶剂提取法便于操作㊁经济适用㊁得率较高㊁易处理ꎬ相对于水提法更加常用ꎬ但工业化生产耗量较大ꎬ相对于水来说ꎬ有机溶剂存在环境污染和回收困难等问题ꎮＷａｎｇ等[１４]开发了以离子液体为溶剂提取竹叶黄酮的方法ꎬ提出的最佳工艺条件为１ ５ｍｏｌ/Ｌ[ＢＭＩＭ]Ｂｒ水溶液㊁固液比１ʒ４１ꎮ１ ２㊀生物提取法生物提取法主要是酶解法ꎬ即利用酶来分解植物细胞壁和果胶质等ꎬ加快提取溶剂进入细胞内部ꎬ从而提高目标化合物的提取率ꎮ赵洪等[１５]利用纤维素酶提取竹叶黄酮ꎬ最佳提取工艺为:酶添加量０ ５％ꎬ提取温度４５ħꎬ固液比１５倍ꎬ提取时间１ ５ｈ㊁ｐＨ值为５ꎮ罗春连[１６]在赵洪等的基础上加入了一定比例的果胶酶ꎬ用２种混合酶优化提取工艺ꎬ得到的最佳工艺条件为:０ ０５％的果胶酶㊁０ ０８％的纤维素酶ꎬ固液比１ʒ２０ꎬ酶解温度４８ħꎬ酶解时间２ｈꎬｐＨ值为５ꎻ在该条件下提取效果最佳ꎬ总黄酮的提取率可以达到８５％~９５％ꎬ比传统提取法的提取率提高了１０％左右ꎮ采用酶解法提取竹叶黄酮所应用到的设备较为简易ꎬ工艺简单ꎬ操作简便ꎬ成本低廉ꎬ效率８９高ꎬ而且相对有机溶剂提取更加环保安全ꎮ１ ３㊀物理提取法物理提取法主要是借助外力作用创造出高温㊁高压㊁高频等提取条件ꎬ从而获取竹叶黄酮的方法ꎮ物理提取方法主要有超临界流体法㊁破碎提取法等ꎮ陶清等[１７]利用超临界流体ＣＯ２萃取技术进一步优化竹叶黄酮的提取工艺ꎬ得到的最优提取条件为:萃取压力４０Ｍｐａ㊁夹带剂用量１ｍＬ/ｇ㊁萃取温度６０ħ㊁萃取时间６０ｍｉｎꎬ最终的竹叶总黄酮提取量为４ ９７８ｍｇ/ｇꎮ与化学提取方法相比ꎬ物理提取法不仅提高了目标产物的得率ꎬ而且节能省时ꎮ１ ４㊀联合提取法联合提取法就是将几种提取方法相结合进行提取竹叶黄酮ꎮ李烨等[１８]利用响应面法优化超声波提取竹叶黄酮ꎬ最佳工艺条件为:７０％乙醇ꎬ超声功率１９０ｋＷꎬ超声时间３０ｍｉｎꎻ在该条件下竹叶黄酮提取率为５ ４６３％ꎮ许子竞[１９]以毛竹叶为原料ꎬ通过响应面法优化微波提取毛竹叶黄酮的工艺ꎬ在固定微波功率３ ０ｋＷ和以８０％乙醇为溶剂条件下提取竹叶黄酮ꎬ得出最佳提取工艺为:固液比１ʒ２４(ｇʒｍＬ)ꎬ在８１ħ条件下提取２１ｍｉｎꎬ黄酮的提取率为５ ７８％ꎮ王博文等[２０]应用Ｄｅｓｉｇｎ￣Ｅｘｐｅｒｔ法得到提取的最优条件下(８０％乙醇溶液作为溶剂ꎬ固液比１ʒ１７㊁提取温度８２ħ㊁提取时间８６ｍｉｎ㊁氧化石墨烯加入量为１ ５ｍｇ/ｇ)竹叶黄酮的提取率可达８８ ４％ꎬ相比只用乙醇回流提取提高约１０ ６％ꎮ此外ꎬ联合提取法还有表面活性剂辅助超声提取法[２１]㊁超声波辅助双水相提取法[２２]㊁超声－微波协同辅助酶提取法[２３]等都应用在黄酮类化合物的提取上ꎬ但这些方法尚未应用在竹叶黄酮的提取上ꎬ将来可能成为竹叶黄酮一种比较理想的提取方法ꎮ２㊀竹叶黄酮类化合物的纯化和含量测定方法㊀㊀黄酮类化合物分离的传统方法主要有配位反应法[２４]㊁溶剂萃取法[２５]㊁醇沉法[２６]等ꎬ最近较为先进的技术主要有高速逆流色谱技术(ＨＳＣＣＣ)㊁分子印迹技术(ＭＩＴ)㊁液滴逆流色谱技术(ＤＣＣＣ)ꎬ以及较早方法中的压液相色谱法(ＭＰＬＣ)㊁循环液相色谱技术(ＣＬＣ)和离心制备薄层色谱法(ＣＰＴＬＣ)ꎮ目前ꎬ应用在竹叶黄酮的纯化分离的方法主要有聚酰胺柱层析法㊁大孔径树脂吸附法㊁硅胶柱层析法以及超滤膜法４种ꎮ根据各方法的理化性质可归为３类:柱层析法㊁大孔树脂吸附法以及超滤膜法ꎮ２ １㊀竹叶黄酮类化合物的纯化方法２ １ １㊀柱层析法可采用聚酰胺柱层析法㊁硅胶柱层析法等方法ꎮ郭雪峰等[２７]通过对比６种纯化工艺ꎬ认为聚酰胺柱吸附法为最佳工艺ꎬ纯化后竹叶黄酮浓度可达０ ５９~０ ６０ｍｇ/ｍＬꎮ张春娟等[２８]对比３种聚酰胺树脂的纯化效果ꎬ发现竹叶黄酮的４种黄酮碳苷在聚酰胺纯化后在竹叶黄酮粗品中纯度达７６ ９３９ｍｇ/ｇꎬ以选择６０~１００目的聚酰胺树脂效果最佳ꎮ孙武兴等[２９]采用薄层色谱法㊁反向色谱柱(ＯＤＳ)法等方法进行分离纯化竹叶提取化合物ꎬ效果良好ꎮ郭雪峰等在用有机溶剂提取竹叶黄酮粗产物之后ꎬ先用硅胶柱进行一次纯化ꎬ用ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ￣２０凝胶柱和ＲＰ￣１８反相硅胶柱进行二次纯化分离ꎬ发现硅胶柱层析法操作复杂耗时长ꎬ而且硅胶的吸附性较大ꎬ对黄酮分离效果较差ꎮ２ １ ２㊀大孔树脂吸附法姚林娜等[３０]采用ＡＢ￣８大孔树脂吸附法对竹叶黄酮粗品进行纯化ꎬ并确定了最佳工艺条件ꎬ纯化后竹叶黄酮纯度比纯化前约提高２ ７倍ꎮ周建飞等[３１]对比了８种大孔径树脂对竹叶黄酮的静态吸附与解吸效果ꎬ筛选出２种较好的树脂Ｄ１０１￣１和ＡＢ￣８ꎬ并采用混用技术进行分离纯化竹叶黄酮ꎬ分离纯化效果得到较好提升ꎬ样品中黄酮纯度在原有的基础上提升了１９ ７％ꎮ由于竹叶黄酮碳苷极性较大ꎬ与其他纯化方法相比ꎬ大孔树脂吸附法的纯化效果并非特别理想ꎬ可以结合其他的纯化方法进行二次纯化ꎮ９９２ １ ３㊀超滤膜法近年来ꎬ作为现代药物纯化工业中取代传统分离法的重要方法ꎬ超滤(ＵＦ)膜分离被应用于分离植物提取物中的不同组分ꎬ该方法具有操作简便㊁在常温常压即可进行㊁不需要剧烈反应条件等优点ꎬ但存在膜污染的问题ꎮ唐浩国等[３２]用５种常见的超滤膜对麻竹叶黄酮进行纯化ꎬ从中选择出了分离纯化效果较好的聚砜纤维膜ＰＳＦ￣５００ꎬ得到的竹叶黄酮的纯度达到４４ １３２％ꎮ王文渊等[３３]利用微滤－超滤二级膜联用分离技术对竹叶黄酮提取液进行处理ꎬ去除部分杂质后竹叶黄酮纯度达到４１ ６１％ꎬ竹叶黄酮回收率超过９１％ꎮ２ ２㊀竹叶黄酮含量测定方法２ ２ １㊀分光光度法分光光度法具有灵敏度高㊁快速㊁便于操作等优点ꎬ是目前竹叶黄酮成分测定最常用的方法ꎬ但由于竹叶黄酮粗提取液中杂质的存在ꎬ使得最终测定值偏高ꎬ因此应先分离出杂质再利用分光光度法测定竹叶黄酮成分含量ꎬ以获得较为理想的测定结果ꎮ该方法的基本原理是黄酮类物质的基本结构上都有酚羟基或还原性羰基ꎬ这些基团能够与金属盐离子形成有色络合物ꎬ从而在特定的紫外波长下具有一定的吸光度ꎮ池玉梅等[３４]通过亚硝酸钠－硝酸铝－氢氧化钠法和氯化铝－乙酸钾法比较了１２种黄酮类化合物的紫外和可见光谱ꎬ分析了分光光度法对于测定黄酮类化合物的适用性ꎬ结果认为该方法只适用于部分黄酮类成分分析ꎮ２ ２ ２㊀高效液相色谱法高效液相色谱(ＨＰＬＣ)是生物化学㊁药理学和环境科学等各个研究领域中应用最广泛的分析方法之一ꎮ一些学者采用ＨＰＬＣ－外标法测定了４种丛生竹中总黄酮[３５]ꎮ张春娟等[２８]采用高效液相色谱法结合紫外光谱法ꎬ同时测定了４种竹叶黄酮碳苷ꎬ测得的结果分别为荭草苷１３ ７３ｍｇ/ｇ㊁异荭草苷４９ ６８ｍｇ/ｇ㊁牡荆素７ ８５ｍｇ/ｇ和异牡荆素３０ ７０ｍｇ/ｇꎮ高效液相色谱也可与其他技术联用ꎬ如Ｇａｏ等[３６]采用高效液相色谱法与二极管阵列检测技术和离子交换技术相结合ꎬ以高效液相色谱仪为基础ꎬ从猪笼草中提取了１４种黄酮类化合物ꎮ３㊀竹叶黄酮在轻工业中的应用竹叶黄酮由于具有多种生物学活性如抗氧化㊁抗肿瘤活性㊁抗辐射㊁抗病毒㊁提高免疫力㊁抑菌抗炎等而日益受到关注ꎬ被广泛应用于食品㊁医药㊁日化产品以及其他轻工业领域中ꎮ１)在功能食品中的应用ꎮ目前ꎬ与竹叶相关的各种类型用于增强免疫力㊁清热解毒的药品及保健品等系列功能产品(如片剂㊁口服饮品㊁胶囊等)已经上市ꎮ例如ꎬ浙江大学张英教授带头研制成功了竹叶黄酮类产品(竹康宁胶囊)ꎬ２００２年新时代集团在原有基础上进行技术改进研制出片剂型竹康宁产品ꎬ该产品在当年被国家卫生部批准为国产保健品ꎮ竹啤是在啤酒中加入一定量的竹叶黄酮ꎬ添加剂量在１００ｍｇ/Ｌ以上ꎬ这种啤酒不仅具有独特的竹叶清香ꎬ还具有增强免疫力㊁缓解疲劳㊁清除体内过氧化物㊁降低酒精对肝脏的伤害㊁促进新陈代谢和降低血糖血脂等得功效[３７]ꎮ２)在天然药物开发中的应用ꎮ早在汉代的«神农本草经»中竹叶就被作为一味中草药ꎬ具有清热解毒㊁轻身益气的功效ꎮ３０多年前ꎬ日本学者福山伍郎研究发现ꎬ屋久岛竹叶提取物对细胞产生的赘生物细胞群(肿瘤)具有良好的抑制作用[３８]ꎮ也有学者研究了竹叶提取物的药理学作用ꎬ并将其应用在治疗癌症上ꎬ取得了良好效果ꎮ随着医疗科技的进步和人们对天然药物的需求ꎬ竹叶黄酮作为新生代天然化学产物将是未来的一大研究方向ꎮ郑州大学第一附属医院王兆斌[３９]等通过体外㊁体内和动物模型以及药理实验ꎬ研究了竹叶黄酮在心脑血管诊断中的作用ꎬ研究发现竹叶黄酮对防止脑缺血有一定的作用ꎮ竹叶黄酮有潜力成为预防心脑血管疾病的天然药物ꎮ３)在日化产品中的应用ꎮ竹叶黄酮可以清除自由基㊁抗辐射㊁抑菌和抑制酪氨酸酶活性ꎬ加快细胞的新陈代谢ꎬ延缓表皮组织细胞衰老ꎬ将００１自由基对人体细胞的伤害降到最低ꎻ另外ꎬ皮肤上的色素沉着主要是因为酪氨酸酶会促进酪氨酸转化为多巴色素ꎬ经一系列转化变为黑色素ꎬ竹叶黄酮抑制酪氨酸酶活性ꎬ可以达到美白皮肤等效果ꎮＬｕ等[４０]研究表明竹叶黄酮在皮肤上使用时不会刺激人体的粘膜和皮肤ꎬ绿色安全ꎬ无任何毒副作用ꎬ因此可以将竹叶黄酮抗衰老㊁抗氧化等功能性因子作为一种添加剂应用在护手霜和防晒霜等日化产品中ꎬ达到实物化利用ꎮ４)在其他方面的应用ꎮ竹叶黄酮作为一种具有多重生理功效的新型天然活性物质ꎬ也可应用在畜牧养殖业和农业生产中ꎬ杨仕群等[４１]对竹叶黄酮在养殖业中的应用做了较为详细的阐述ꎮ张运红等[４２]以液体溶剂的形式对辣椒幼苗喷洒一定浓度的竹叶黄酮水溶液ꎬ发现在辣椒发育过程中竹叶黄酮能提高辣椒的抗寒性并促进辣椒的生长ꎮ４㊀竹叶黄酮工业化利用的发展趋势竹叶黄酮类化合物具有独特的生物活性ꎬ在很多行业领域都有较好的应用前景ꎬ因此竹叶黄酮的研究开发一直都是学术界关注的热点ꎮ然而ꎬ在相关研究领域还存在许多尚待解决的问题ꎬ比如竹叶黄酮类化合物的提取率较低ꎬ含量测定方法不完善和应用难以领域产业化等ꎮ下一步研究的重点和方向应是:一是联合提取法或者不同方法协同使用ꎮ目前提取和纯化分离竹叶黄酮的各种方法各有利弊ꎬ可结合各类方法的优点组合成更多的联合提取法或是不同方法协同使用ꎬ筛选出更优㊁更适合的提取和纯化分离的方法ꎬ并应用现代提取㊁分离新工艺进行竹叶黄酮等活性成分的提取和精制ꎬ提高竹叶黄酮提取得率和质量ꎬ增强产品的生物活性和生理功能ꎬ减少杂质和无效成分的副作用ꎮ二是建立高效㊁准确测定竹叶黄酮类化合物含量的方法ꎮ目前竹叶黄酮的测定方法一般采用比色法或液相色谱法ꎬ比色法更为普遍ꎬ经过改进后的比色法能克服一些常规比色法的弊端ꎬ测量结果与ＨＰＬＣ法相当ꎬ但目前还没见到改进比色法和ＨＰＬＣ法二者比较的报道ꎮ三是竹叶黄酮工业化和规模化生产应用ꎮ竹叶黄酮类化合物具有优良的清除氧自由基㊁降低血脂㊁抑制细菌生长繁殖㊁降低表皮组织细胞老化速度和降低心肌缺血风险等功效ꎬ为科研工作者提供了丰富的想象空间ꎬ也为竹叶黄酮类化合物应用于保健食品功能因子㊁膳食补充剂和天然药物的开发及功能定位提供了独到的着力点ꎮ虽然国内外已经有大量关于竹叶黄酮提取方法的研究成果ꎬ但是这些成果存在一定的局限性ꎬ还无法实现工业量产化应用ꎬ未能将其应用到民生领域ꎮ如何快速㊁高效地将竹叶黄酮产业化和规模化也将是下一步研究的重点ꎮ参考文献[１]㊀ＰＥＮＧＰꎬＳＨＥＤ.Ｉｓｏｌａｔｉｏｎꎬｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎꎬａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｈｅｍｉｃｅｌｌｕｌｏｓｅｓｆｒｏｍｂａｍｂｏｏ:ａｒｅｖｉｅｗ[Ｊ].ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＰｏｌｙｍｅｒｓꎬ２０１４ꎬ１１２:７０１－７２０.[２]ＨＡＶＳＴＥＥＮＢ.Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓꎬａｃｌａｓｓｏｆｎａｔｕｒａｌｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆｈｉｇｈｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｐｏｔｅｎｃｙ[Ｊ].ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ１９８３ꎬ３２(７):１１４１－１１４８.[３]夏玉红ꎬ董普文ꎬ钟耕.竹叶提取物的研究开发现状[Ｊ].中国食品添加剂ꎬ２００９ꎬ７(８):７７－８０.[４]ＸＩＥＪꎬＬＩＮＹＳꎬＳＨＩＸＪꎬｅｔａｌ.Ｍｅｃｈａｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ￣ａｓｓｉｓｔｅｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍｂａｍｂｏｏ(Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓｅｄｕｌｉｓ)ｌｅａｖｅｓ[Ｊ].ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＣｒｏｐｓａｎｄＰｒｏｄｕｃｔｓꎬ２０１３ꎬ４３:２７６－２８２.[５]魏琦ꎬ王淑英ꎬ汤锋ꎬ等.高效液相色谱法同时测定竹叶中１３种黄酮类化合物(英文)[Ｊ].林业科学ꎬ２０１５ꎬ５１(８):８１－８７.[６]李翱翔ꎬ张加研ꎬ赵一鹤.滇产５种经济竹种竹叶黄酮含量比较及体外抗氧化活性研究[Ｊ].西部林业科学ꎬ２０２３ꎬ５２(４):１５４－１６０.[７]ＺＨＡＮＧＹꎬＬＵＯＺꎬＳＨＡＯＺꎬｅｔａｌ.Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓｏｆｂａｍｂｏｏｌｅａｖｅｓａｎｄｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｏｎ２￣ａｍｉｎｏ￣１￣ｍｅｔｈｙｌ￣６￣ｐｈｅｎｙｌｉｍｉｄａｚｏ[４ꎬ５￣ｂ]ｐｙｒｉｄｉｎｅ(ＰｈＩＰ)ｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎｃｈｅｍｉｃａｌｍｏｄｅｌｓｙｓｔｅｍｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２０１４ꎬ６２(２０):４７９８－４８０２.[８]ＳＡＬＡＳＭＰꎬＣÉＬＩＺＧꎬＧＥＲＯＮＡＺＺＯＨꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｎａｔｕｒａｌａｎｄｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙ￣ｍｏｄｉｆｉｅｄｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｃｉｔｒｕｓｓｐｅｃｉｅｓ[Ｊ].ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２０１１ꎬ１２４(４):１４１１－１４１５.[９]ＫＲＩＳ￣ＥＴＨＥＲＴＯＮＰＭꎬＫＥＥＮＣＬ.Ｅｖｉｄｅｎｃｅｔｈａｔｔｈｅａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎｔｅａａｎｄｃｏｃｏａａｒｅｂｅｎｅｆｉｃｉａｌｆｏｒｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｈｅａｌｔｈ[Ｊ].ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＬｉｐｉｄｏｌｏｇｙꎬ２００２ꎬ１３(１):４１－４９.[１０]ＤＡＳＷＡＤＡＫꎬＳＨＥＮＤＡＲＫＡＲＧＲꎬＳＨＥＬＫＥＤＰꎬｅｔａｌ.１０１ＰｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｅｖａｌｕａｔｉｏｎａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓｔｕｄｙｏｆＤｅｎｄｒｏｃａｌａｍｕｓｓｔｒｉｃｔｕｓｌｅａｆｅｘｔｒａｃｔｓ[Ｊ].ＷｏｒｌｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌａｎｄＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈꎬ２０１７ꎬ３(３):１４７－１５２.[１１]李云琴ꎬ赵一鹤.竹笋膳食纤维的研究进展及发展趋势[Ｊ].竹子学报ꎬ２０２２ꎬ４０(４):４４－４９.[１２]何春雷ꎬ罗学平ꎬ李丽ꎬ等.竹叶黄酮提取工艺的研究[Ｊ].四川农业大学学报ꎬ２００６ꎬ２４(４):４０９－４１２.[１３]李坤平ꎬ杨国恩ꎬ潘天玲.正交试验法优化竹叶总黄酮提取工艺研究[Ｊ].广东药学院学报ꎬ２００４ꎬ２０(２):１０２－１０３.[１４]ＷＡＮＧＬꎬＢＡＩＭꎬＱＩＮＹꎬｅｔａｌ.Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｉｏｎｉｃｌｉｑｕｉｄ￣ｂａｓｅｄｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ￣ａｓｓｉｓｔｅｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍｂａｍｂｏｏｌｅａｖｅｓ[Ｊ].Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓꎬ２０１８ꎬ２３(９):２３０９.ＤＯＩ:１０.３３９０/ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ２３０９２３０９.[１５]赵洪ꎬ欧秀蓉.纤维素酶提取竹叶黄酮工艺初步研究[Ｊ].广州化工ꎬ２０１５ꎬ４３(１５):８０－８１.[１６]罗春连.复合酶－微波提取绿竹叶黄酮技术及产品开发[Ｊ].福建轻纺ꎬ２００９(９):５２－５４.[１７]陶清ꎬ吕鉴泉.ＣＯ２超临界流体萃取法提取竹叶黄酮的研究[Ｊ].湖北师范学院学报(自然科学版)ꎬ２０１０ꎬ３０(１):９６－９９.[１８]李烨ꎬ朱志强ꎬ集贤ꎬ等.响应面优化超声波法提取竹叶黄酮[Ｊ].西华大学学报(自然科学版)ꎬ２０１９ꎬ３８(５):７８－８３.[１９]许子竞.响应面法优化微波提取毛竹叶黄酮工艺研究[Ｊ].农产品加工ꎬ２０２１(１０):４４－４８.[２０]王博文ꎬ李静静ꎬ巩秋艳ꎬ等.氧化石墨烯辅助乙醇提取竹叶黄酮[Ｊ].过程工程学报ꎬ２０１７ꎬ１７(４):７０９－７１５.[２１]ＷＡＮＮꎬＫＯＵＰꎬＰＡＮＧＨꎬｅｔａｌ.Ｅｎｚｙｍｅｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ￣ｍｉｃｒｏｗａｖｅ￣ａｓｓｉｓｔｅｄｓｕｒｆａｃｔａｎｔｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌａｎｄｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＢａｅｃｋｅａｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ[Ｊ].ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＣｒｏｐｓａｎｄＰｒｏｄｕｃｔｓꎬ２０２１ꎬ１７４:１１４１７３.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｉｎｄｃｒｏｐ.２０２１.１１４１７３.[２２]ＪＩＹꎬＲＡＯＧꎬＸＩＥＧ.Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ￣ａｓｓｉｓｔｅｄａｑｕｅｏｕｓｔｗｏ￣ｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＴｒｅｍｅｌｌａｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ[Ｊ].ＰｒｅｐａｒａｔｉｖｅＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ２０２２ꎬ５２(９):１０６０－１０６８.[２３]ＸＵＬꎬＨＥＷꎬＬＵＭꎬｅｔａｌ.Ｅｎｚｙｍｅ￣ａｓｓｉｓｔｅｄｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ￣ｍｉｃｒｏｗａｖｅｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄＵＰＬＣ￣ＱＴＯＦ￣ＭＳａｎａｌｙｓｉｓｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＣｈｉｎｅｓｅｗａｔｅｒｃｈｅｓｔｎｕｔｐｅｅｌｓ[Ｊ].ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＣｒｏｐｓａｎｄＰｒｏｄｕｃｔｓꎬ２０１８ꎬ１１７:１７９－１８６.[２４]ＺＨＡＮＧＪꎬＹＵＥＬꎬＨＡＹＡＴＫꎬｅｔａｌ.ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｆｒｏｍＧｉｎｇｋｏｂｉｌｏｂａｅｘｔｒａｃｔｂｙｚｉｎｃｃｏｍｐｌｅｘａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｏｎａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙ[Ｊ].ＳｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ２０１０ꎬ７１(３):２７３－２７８.[２５]ＭＡＸꎬＺＨＡＮＧＴꎬＷＥＩＹꎬｅｔａｌ.ＰｒｅｐａｒａｔｉｖｅｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃａｌｙｃｏｓｉｎｆｒｏｍＡｓｔｒａｇａｌｕｓｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓＢｇｅ.ｖａｒ.ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓ(Ｂｇｅ.)Ｈｓｉａｏｂｙｈｉｇｈ￣ｓｐｅｅｄｃｏｕｎｔｅｒ￣ｃｕｒｒｅｎｔｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＡꎬ２００２ꎬ９６２(１/２):２４３－２４７.[２６]ＪＩＮＸꎬＬＩＵＭꎬＣＨＥＮＺꎬｅｔａｌ.Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ￣３￣ｇａｌｌａｔｅ(ＥＧＣＧ)ｆｒｏｍｇｒｅｅｎｔｅａｕｓｉｎｇｃｏｍｂｉｎｅｄｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎａｎｄｐｏｌｙａｍｉｄｅｃｏｌｕｍｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＢꎬ２０１５ꎬ１００２:１１３－１２２.[２７]郭雪峰ꎬ岳永德.竹叶黄酮的提取纯化工艺及含量测定方法比较研究[Ｊ].安徽农业大学学报ꎬ２００７ꎬ３４(２):２７９－２８２.[２８]张春娟ꎬ孟志芬ꎬ郭雪峰ꎬ等.ＨＰＬＣ结合紫外光谱法快速定性定量分析四种竹叶黄酮碳苷[Ｊ].光谱学与光谱分析ꎬ２０１４ꎬ３４(９):２５６８－２５７２.[２９]孙武兴ꎬ李铣ꎬ李宁ꎬ等.毛金竹叶提取物化学成分的分离与鉴定[Ｊ].沈阳药科大学学报ꎬ２００８ꎬ２５(１):３９－４３.[３０]姚林娜ꎬ张瑞华ꎬ张爱莲ꎬ等.ＡＢ￣８树脂纯化竹叶黄酮工艺及其抗氧化活性研究[Ｊ].浙江林业科技ꎬ２０２２ꎬ４２(２):１－７.[３１]周健飞ꎬ陶文亮.大孔树脂混用技术分离纯化竹叶黄酮的工艺研究[Ｊ].广州化工ꎬ２０１６ꎬ４４(９):６９－７３.[３２]唐浩国ꎬ李叶ꎬ向进乐ꎬ等.超滤分离纯化麻竹叶黄酮的研究[Ｊ].食品科学ꎬ２００８ꎬ２９(５):１７７－１８０.[３３]王丈渊ꎬ龙红萍ꎬ唐守勇.膜技术耦合酶法提取竹叶总黄酮的研究[Ｊ].中国酿造ꎬ２０１１(７):７４－７７.[３４]池玉梅ꎬ居羚ꎬ邓海山ꎬ等.分光光度测定总黄酮法的适用性[Ｊ].分析化学ꎬ２０１０ꎬ３８(６):８９３－８９６.[３５]华梅ꎬ陈剑ꎬ毕玮ꎬ等.ＨＰＬＣ测定丛生竹中总黄酮及(异)牡荆苷㊁(异)荭草苷的含量[Ｊ].西部林业科学ꎬ２０１８ꎬ４７(３):８６－９０ꎬ９５.[３６]ＧＡＯＺꎬＷＡＮＧＹＣꎬＣＨＡＮＧＹＸ.ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｎｄａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓｉｎＮｉｔｒａｒｉａｔａｎｇｕｔｏｒｕｍｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈｔａｎｄｅｍｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ[Ｊ].ＰｒｏｔｅｉｎａｎｄＰｅｐｔｉｄｅＬｅｔｔｅｒｓꎬ２０１６ꎬ２３(５):４２４－４３２.[３７]杨抚林ꎬ邓放明ꎬ黄群ꎬ等.竹叶提取物中功能性成分及效用[Ｊ].中国食物与营养ꎬ２００４(５):５３－５５.[３８]张凌云.竹叶黄酮的研究与应用进展[Ｊ].现代食品科技ꎬ２００６ꎬ２２(２):２４７－２４９.[３９]ＷＡＮＧＺꎬＨＡＮＺꎬＱＩＵＣꎬｅｔａｌ.ＲｅｓｅａｒｃｈｏｎａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＥＯＢ￣Ｆａｎｄｉｔｓｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｈｅａｒｔａｎｄｃｅｒｅｂｒａｌｖｅｓｓｅｌｓ[Ｊ].ＰａｋｉｓｔａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓꎬ２０１４ꎬ２７(５):１６２７－１６３１.[４０]ＬＵＢꎬＷＵＸꎬＳＨＩＪꎬｅｔａｌ.Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙａｎｄｓａｆｅｔｙｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｏｆｂａｍｂｏｏｌｅａｖｅｓ:ｐａｒｔ２:Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｔｏｘｉｃｉｔｙｔｅｓｔｉｎｒａｔｓｗｉｔｈａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｏｆｂａｍｂｏｏｌｅａｖｅｓ[Ｊ].ＦｏｏｄａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙꎬ２００６ꎬ４４(１０):１７３９－１７４３.[４１]杨仕群ꎬ阳刚ꎬ邓茗月.竹叶黄酮的作用及其在养殖业中的应用[Ｊ].养殖与饲料ꎬ２０２１ꎬ３(３):６５－６７.[４２]张运红ꎬ任珊露ꎬ和爱玲ꎬ等.喷施竹叶黄酮对辣椒生长及抗寒性的影响[Ｊ].长江蔬菜ꎬ２０１５(２４):６５－６９.２０１。

利用带紫外线二极管阵列探测仪的反相高效液相色谱对在竹叶抗氧化剂(AOB)强化食品中的黄酮C－苷的鉴定摘要：利用带紫外线二极管阵列的反相高效液相色谱同时检测四种黄酮C-苷，即荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷，而它们存在于一些应用竹叶抗氧化剂（AOB）强化的食物系统（例如高温灭菌牛奶，向日葵籽油和压缩年糕）中。

方法包括用甲醇水溶液提取竹叶抗氧化剂强化食品中的黄酮C－苷，用饱和乙酸铅溶液和草酸钾除去其中的蛋白质，用n-己烷脱脂以及用带Phenomenex C18柱的固相萃取技术（SPE）来纯化。

分析物用以乙腈和1% (v/v)乙酸(pH3.0)为流动相的Luna C18 5μm 250mm×4.6mm柱分离。

由于可重复性（相对标准偏差(RSD) < 2.2%）和恢复性(81.4–91.8%)取得了好的结果，这些都符合了欧洲联盟法规定的要求。

四种黄酮C－苷在高温灭菌牛奶，向日葵籽油和彭化米饼中的干重分别是12.56 μg/100 mL, 881.08 μg/100mL and 1420.83 μg/100 g。

这种方法将成功地应用于分析AOB-强化样品中的黄酮C－苷。

这些优化的程序也可以为在其他强化食品中分离黄酮C-苷作参考。

关键词：竹叶抗氧化剂（AOB）；黄酮C-苷；反相高效液相色谱；同时鉴定1．绪论类黄酮，植物多酚二次代谢物中的一大类，广泛地分布在药用植物，果汁，茶叶和高人群消费的保健饮料中。

4000多种不同的自然类黄酮已被识别，而且新品种数目还在不断的上升。

虽然类黄酮曾被认为是无营养价值的，但最近几年在人们的食物中存在的类黄酮对人体的健康影响已经引起了很多的注意。

先前的研究表明它们作为一种抗氧化剂，且从流行病的研究的一些迹象中显示了类黄酮引入量和心血管病的风险、各种类型癌症之间的一种反面关系。

黄酮C-苷，类黄酮家族中一种重要要素，在一些植物中被发现，如印度吉纳树和葫芦等。

经证明黄酮C-苷的各种的生物活性包括异荭草苷（毛地黄黄酮-6-苷）与牡荆苷（芹黄素-8-苷）对葡萄状球菌、杆菌、假单胞菌的抗菌性和毛地黄黄酮-7-苷对由四氯化碳引起的肝损坏的保护效应等。

安徽农业大学学报,2007,34(2):2792282Journal of Anhui Agricultural University竹叶黄酮的提取纯化工艺及含量测定方法比较研究3郭雪峰,岳永德3(国际竹藤网络中心　国家林业局竹藤科学与技术重点开放实验室,北京100102)摘　要:对6个纯化竹叶黄酮工艺以及测量竹叶黄酮含量的分光光度法和高效液相色谱法进了比较研究。

结果表明,工艺4聚酰胺柱吸附法为最佳工艺,纯化后竹叶黄酮浓度达0159mg·mL-1(分光光度法)和0160mg·mL-1(HP LC)。

两种方法测定的竹叶黄酮浓度值差异不大,结果稳定可靠。

分光光度法操作简单方便,测定结果略微偏高,HP LC法重复性、稳定性均较好。

关键词:竹叶黄酮;提取纯化;分光光度法;高效液相色谱法 中图分类号:Q94618;S79517文献标识码:A文章编号:16722352X(2007)022*******Com para ti ve study on extracti on2pur i f i ca ti on techn i cs and con ten tdeterm i n a ti on m ethod for bam boo2leaf2fl avono i dsG UO Xue2feng,Y UE Yong2de(I nternati onal Centre f or Ba mboo and Rattan,SF A Key Open Laborat ory on Ba mboo and Rattan Science and Technol ogy,Beijing100102)Abstract:Six techinics t o purify ba mboo2leaf2flavonoids and s pectr ophot ometric method were compared with high2perf or mance liquid chr omat ography method.The results showed that technics four was the best one,na mely polycap r olacta m colu mn ads or p ti on method,concentrati on of purified ba mboo2leaf2flavonoids hit0159mg·mL-1 (s pectr ophot ometric method)and0160mg·mL-1(HP LC).Ba mboo2leaf2flavonoids concentrati ons deter m ined by t w o methods were al m ost the sa me,deter m ining result was stable and credible.Spectr ophot ometric method was si m2 p le and convenient.Key words:ba mboo2leaf2flavonoids;extracti on2purificati on;s pectr ophot ometric method;high2perfor mance liq2 uid chr omat ography method. 中国素有“竹子王国”之称,现有竹类植物48个属500余种,竹类植物面积、蓄积量及年产竹材量均占世界1/3左右,拥有极为丰富的竹类资源。