高效液相色谱分析方法的建立

高效液相色谱检测葡萄及葡萄酒中7种有机酸方法的建立沈 燕1，张正文1，刘兴凯1，王福成2，邵学东1*（1.君顶酒庄有限公司，山东烟台 265607；2.烟台市蓬莱区葡萄与葡萄酒产业发展服务中心，山东烟台 265699）摘 要：目的：建立了利用高效液相色谱测定葡萄及葡萄酒中7种有机酸的检测方法。

方法：色谱条件为Hi-Plex H色谱柱（300 mm×7.7 mm，8 μm），PL Hi-Plex H保护柱（50 mm×7.7 mm，8 μm）；紫外检测波长210 nm；流动相为0.006 mol·L-1的硫酸；流速0.6 mL·min-1；柱温55 ℃；进样量10 μL。

结果：草酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸和乙酸出峰时间均在20 min以内；标准曲线线性关系良好，相关系数（R2）在0.999 9～1.000 0；检出限在0.031 4～0.722 3 mg·L-1；加标回收率在95.24%～102.04%，其相对标准偏差在0.16%～1.87%。

结论：该方法操作简单，检测时间短，具有较高的准确性和精确性。

关键词：有机酸；葡萄；葡萄酒；高效液相色谱；检测方法Establishment the Method of Seven Kinds of OrganicAcids in Grape and Wine by High Performance LiquidChromatographySHEN Yan1, ZHANG Zhengwen1, LIU Xingkai1, WANG Fucheng2, SHAO Xuedong1*(1.Junding Castle Co., Ltd., Yantai 265607, China; 2.Yantai Penglai District Grape and Wine Industry DevelopmentService Center, Yantai 265699, China)Abstract: Objective: To establish a HPLC method for the determination of 7 organic acids in grape and wine. Method: The chromatographic conditions were Hi-Plex H column (300 mm×7.7 mm, 8 μm) and PL Hi-Plex H protective column (50 mm×7.7 mm, 8 μm). UV detection wavelength 210 nm; sulfuric acid with 0.006 mol·L-1 mobile phase; flow rate 0.6 mL·min-1; column temperature 55 ℃. The sample size was 10 μL. Result: The peak time of oxalic acid, citric acid, tartaric acid, malic acid, succinic acid, lactic acid and acetic acid were all within 20 min. The standard curve has a good linear relationship with the correlation coefficient（R2） ranging from 0.999 9 to 1.000 0. The detection limit was 0.031 4～0.722 3 mg·L-1. The recoveries ranged from 95.24% to 102.04%, and the relative standard deviations ranged from 0.16% to 1.87%. Conclusion: The method is simple to operate, short detection time, and has high accuracy and accuracy.Keywords: organic acid; grape; wine; high performance liquid chromatography; detection method有机酸是葡萄果实及葡萄酒中体现风味的主要物质之一，其含量是衡量葡萄果实成熟度和品质的重要参数，在葡萄酒的酿造中发挥着关键作用，对酒的感官质量有一定的影响，与酒的物理化学以及微生物稳定性有着紧密联系[1-4]。

液相色谱方法开发（实例讲解）2010© 未经许可，不得复制。

转载请注明出处。

色谱分离与在线检测技术已经成为当今分析化学的一门重要学科，而因其衍生出的相关产品也日益丰富。

对色谱工作者来说，在面对具体方法开发中如何获得适当的分离度则成为关注的焦点。

本文仅从网络上的资源收集简要介绍反相液相色谱法的建立思路。

一、 基本术语基本术语读者可跳过本部分内容，直接阅读实例讲解部分在评价色谱分离的品质时，通常用以下相关术语来反映色谱特征（如图1.）：图1. 典型色谱图1. 保留因子(k)：t t t k R −=(1) 用于反映化合物的色谱保留性质，跟化合物性质有密切关系。

如图1，设t R1 =3.65min, t 0 =1.20min, 则峰1的保留因子为：(3.65-1.20)/1.20=2.042. 拖尾因子(T f )液相色谱方法开发（实例讲解）2010© 未经许可，不得复制。

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aba f W W W T 2+=(2)图2. 典型拖尾峰在理想情况下，色谱峰为高斯型对称峰，其拖尾因子为1.0，但在实际情况中，由于化合物的二次保留等其他因素，色谱峰大多会呈现一定程度的拖尾。

如图2中，该色谱峰的拖尾因子可计算得：{(41.5-37.0)+(37.0-35.0)}/{2*(37.0-35.0)}=1.63.3. 理论塔板数（N ）液相色谱方法开发（实例讲解）2010© 未经许可，不得复制。

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图3. 峰高与峰宽的关系2(16Wt N R= (3) 或2(54.55.0W t N R= (4) 注意：在上式中W 为图3中的W b ，为基线峰宽(4σ)，W 0.5 为峰高一半处的峰宽W h (2.335σ), 并非峰宽的一半(2σ)。

设图1中峰1的基线峰宽为0.25min, 则塔板数为：16*(3.65/0.25)^2=34104. 分离因子(α)10212t t t t k k R R −−==α (5) 又称两个色谱峰的相对保留值。

高效液相色谱实验报告一、实验目的。

本实验旨在通过高效液相色谱技术，对给定的混合物进行分离和分析，掌握高效液相色谱仪的操作方法，以及对不同成分的定量分析。

二、实验原理。

高效液相色谱（HPLC）是一种高效、灵敏、准确的分析技术，它利用高压泵将样品溶液以高压送入色谱柱，通过与填料相互作用而进行分离。

在色谱柱中，不同成分将因其在填料中的亲和力不同而被分离开来。

通过检测器检测各个组分的峰面积或峰高，从而进行定量分析。

三、实验步骤。

1. 样品制备，将待分析的混合物溶解于适当的溶剂中，并进行过滤处理。

2. 色谱柱准备，连接色谱柱，并进行平衡处理。

3. 仪器调试，将色谱仪的流动相、检测器等参数进行调试。

4. 样品进样，将处理好的样品通过自动进样器送入色谱柱。

5. 数据采集，通过色谱仪软件进行数据采集和记录。

6. 数据分析，根据色谱图进行各组分的峰识别和定量分析。

四、实验结果。

通过本次实验，我们成功地对给定的混合物进行了分离和定量分析。

得到了混合物中各组分的峰面积和峰高，并通过标准曲线进行了定量分析。

实验结果表明，本实验的色谱分离效果良好，各组分分离度高，定量分析结果准确可靠。

五、实验总结。

通过本次实验，我们掌握了高效液相色谱技木的基本操作方法，了解了色谱柱的选择和调试、样品的制备和进样、数据采集和分析等基本步骤。

同时，我们也认识到了高效液相色谱技术在化学分析中的重要性和广泛应用性。

希望通过今后的实验操作，能够进一步提高我们的操作技术和分析能力。

六、参考文献。

1. Skoog, D. A., Holler, F. J., & Crouch, S. R. (2017). Principles of instrumental analysis. Cengage Learning.2. Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Glajch, J. L. (2011). Practical HPLC method development. John Wiley & Sons.以上就是本次高效液相色谱实验的全部内容，希望对大家有所帮助。

赛默飞高效液相色谱使用方法
赛默飞高效液相色谱（HPLC）是一种用于分离和分析样品的精密仪器。

具体的使用方法如下：
1.准备工作：
○确保仪器电源已开启。

○安装∗∗谱柱和其他相关配件。

○准备样品和流动相。

2.建立方法：
○进入液相色谱仪的操作界面，选择适宜的色谱柱。

○设置流动相的种类、比例和流速。

○设置样品进样体积和积分时间。

3.进样：
○将样品溶液注入进样器。

○按下开始按钮，液相色谱仪会自动进行分离和检测。

4.数据处理：
○分析结束后，仪器会自动生成色谱图。

○通过数据分析软件对色谱图进行处理，获取目标物质的保留时间、峰面积等数据。

5.清洗和维护：
○实验结束后，关闭仪器电源。

○清洗色谱柱和其他配件。

○定期检查仪器状态，确保正常运行。



需要注意的是，具体操作步骤可能因仪器型号和实验需求而有所不同。

在使用液相色谱仪时，请务必参考相应的说明书并进行培训。


。

高效液相色谱法标准操作规程1. 目的建立高效液相色谱法标准操作规程，规范高效液相色谱法检验操作，保证检验操作规范化。

2. 范围适用于高效液相色谱法检验操作。

3. 术语或定义N/A4. 职责质量控制部对本规程的实施负责。

5. 程序5.1依据《中国药典》2020年四部及2019年版《中国药品检验标准操作规范》。

5.2 简述高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

5.3 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局“液相色谱仪检定规程”定期检定并符合有关规定。

5.3.1色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。

反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等) 也有使用。

正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。

离子交换色谱系统使用离子交换填充剂; 分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。

填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。

孔径在15nm(lnm=10A)以下的填料适于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。

除另有规定外，分析柱的填充剂粒径一般在3～10μm之间。

粒径更小(约2μm)的填充剂常用于填装微径柱（内径约2mm) 。

使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。

当对其测定结果产生争议时，应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。

一. 方法建立的步骤二．开始前应知道1. 样品的性质在开始方法建立之前，我们应该检查自己对样品的了解程度，并明确分离目标。

表 1 有关样品组分和性质的重要信息所含化合物的数目化合物的化学结构（官能团）化合物的分子量化合物的pKa值化合物的UV光谱图化合物在样品中的浓度范围样品的溶解度样品的化学成分能够为选择HPLC分离的最佳初始条件提供有价值的线索根据已知的样品信息，HPLC方法建立有两种不甚相同的模式。

一种模式依据样品的“化学性质”选择最佳初始条件，色谱工作者需很大程度依赖于过去的经验（如类似结构化合物的分离）和/或用文献资料补充现有信息而另一种模式则直接开始色谱分离，而对样品的性质不大注意这两种HPLC的方法建立模式可分别称为理沦型与经验型初始分离一旦开始，可以根据类似的思路（理论的与经验的）选择进一步的实验。

2.分离的目的HPLC分离的目的必须十分明确，下面的问题在建立方法之初就应确定：（1）主要目的是什么？定量或定性，还是定性、定量同时做？；（2）是否有必要解析出样品的所有成分？譬如可能有必要分离出产品中的所有降解物或杂质，以使含量测定结果更加可靠，但却没必要将它们彼此完全分开。

（3）如要求定量分析，准确度与精密度需多大？样品主要成分的精密度通常能达到±1—2%，特别是不需样品预处理的情况。

（4）特殊化合物可能会以不同的样品形式出现（如：原料药，一种或多种形态，环保样品等）。

是否需要一种以上的HPLC方法？单一方法分离不同形态样品是否理想？（5）一次将分析多少样品？当必须同时处理大量样品时，运行时间将变得非常重要。

有时甚至为了缩短运行时间而以牺牲样品分离度作代价，如缩短柱长或加快流速。

当一次分析的样品数目超过10个，运行时间一般应控制在20min以内。

（6）将要使用该方法的实验室中，有哪些HPLC设备？色谱柱能否恒温系统能否做梯度洗脱？该方法是否可在不同设计与生产的设备上运行？方法建立实验开始之前，应明确对方法的这些要求。

液相色谱方法开发（实例讲解）2010© 未经许可，不得复制。

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色谱分离与在线检测技术已经成为当今分析化学的一门重要学科，而因其衍生出的相关产品也日益丰富。

对色谱工作者来说，在面对具体方法开发中如何获得适当的分离度则成为关注的焦点。

本文仅从网络上的资源收集简要介绍反相液相色谱法的建立思路。

一、 基本术语基本术语读者可跳过本部分内容，直接阅读实例讲解部分在评价色谱分离的品质时，通常用以下相关术语来反映色谱特征（如图1.）：图1. 典型色谱图1. 保留因子(k)：t t t k R −=(1) 用于反映化合物的色谱保留性质，跟化合物性质有密切关系。

如图1，设t R1 =3.65min, t 0 =1.20min, 则峰1的保留因子为：(3.65-1.20)/1.20=2.042. 拖尾因子(T f )液相色谱方法开发（实例讲解）2010© 未经许可，不得复制。

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aba f W W W T 2+=(2)图2. 典型拖尾峰在理想情况下，色谱峰为高斯型对称峰，其拖尾因子为1.0，但在实际情况中，由于化合物的二次保留等其他因素，色谱峰大多会呈现一定程度的拖尾。

如图2中，该色谱峰的拖尾因子可计算得：{(41.5-37.0)+(37.0-35.0)}/{2*(37.0-35.0)}=1.63.3. 理论塔板数（N ）液相色谱方法开发（实例讲解）2010© 未经许可，不得复制。

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图3. 峰高与峰宽的关系2(16Wt N R= (3) 或2(54.55.0W t N R= (4) 注意：在上式中W 为图3中的W b ，为基线峰宽(4σ)，W 0.5 为峰高一半处的峰宽W h (2.335σ), 并非峰宽的一半(2σ)。

设图1中峰1的基线峰宽为0.25min, 则塔板数为：16*(3.65/0.25)^2=34104. 分离因子(α)10212t t t t k k R R −−==α (5) 又称两个色谱峰的相对保留值。

建立液相色谱仪分析方法的一般步骤1. 前言液相色谱法是现代分析化学中常用的一种分析方法，它具有灵敏度高、选择性好、分离速度快等优点。

如何建立一种良好的液相色谱分析方法，对于有机合成和中药研究等领域的研究工作都具有重要意义。

本文将介绍建立液相色谱仪分析方法的一般步骤，希望能够对初学者和相关工作者有所帮助。

2. 样品制备液相色谱仪分析方法的第一步是样品制备。

样品的制备过程要充分考虑样品的性质和分析方法的需要，以保证样品能够被完全溶解并且保证分析结果的准确性和可重复性。

在样品制备时，应注意以下几点：•样品的制备要按照分析方法的要求进行，不同的样品需要不同的制备方式。

•样品的制备过程一定要控制好温度和pH值。

•样品制备后要进行过滤或离心，以去除悬浮物和大分子物质。

3. 建立液相色谱仪分析方法的步骤步骤一：选定色谱柱选定合适的色谱柱对于建立一种良好的液相色谱分析方法非常重要。

根据样品的性质和分析目的，可以选择不同的色谱柱。

色谱柱的选择要具体考虑以下因素：•样品性质，如分子量、极性、酸碱性等。

•分析目的，如官能团分析、含量测定、结构鉴定等。

•色谱柱的反相或正相特性。

步骤二：选择适当的移动相移动相是液相色谱分析中的重要组成部分，它通过色谱柱与样品相互作用，使样品分离出来。

在选择适当的移动相的时候，需要考虑以下几点：•移动相的极性和pH值。

•移动相的流速。

•移动相的稳定性和可重复性。

步骤三：建立分离程序建立分离程序是液相色谱仪分析方法的核心部分之一。

在建立分离程序的时候，需要考虑以下几点：•分离程序中每个组分的波长和保留时间。

•分离程序中的流速和温度。

（流速和温度都对分析结果有很大影响）•是否需要预柱或后柱来减小杂质的干扰。

步骤四：校准检测器校准液相色谱仪检测器是保证分析结果准确性的重要步骤。

在校准检测器时，需要注意以下几点：•校准曲线的线性范围。

•校准曲线的斜率和截距。

•校准曲线的相关系数和检测限。

4. 结语建立液相色谱仪分析方法是一项需要熟练掌握才能从事的技术。

高效液相色谱测定含量的方法
高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种广泛用于测定化合物含量的分析技术。

以下是一般的HPLC测定含量的步骤和方法：
1.样品制备：根据分析的目的，准备含有目标化合物的样品。

样
品制备可能涉及提取、溶解、过滤等步骤。

2.标准曲线制备：准备一系列已知浓度的标准溶液，用于建立标
准曲线。

标准曲线上的点数通常越多越好，以提高测定的准确
性。

3.HPLC系统设置：设置HPLC系统，包括选择合适的色谱柱、
移动相（流动相）和检测器。

根据样品性质和目标分析物，选
择适当的柱和检测条件。

4.进样：将标准溶液和待测样品注入HPLC系统。

通常使用自动
进样器，以提高精度和重复性。

5.色谱条件优化：通过调整流速、温度等条件，优化色谱分离，
使目标化合物得到良好的分离和峰形。

6.数据采集和分析：使用检测器（如紫外-可见（UV-Vis）检测
器）记录样品在色谱柱中的吸收峰，并使用标准曲线计算目标
化合物的浓度。

7.质量控制：包括在分析中加入质量控制样品，以确保实验的准
确性和可靠性。

8.结果报告：报告目标化合物的浓度，通常以样品中目标化合物
的峰面积或峰高度与标准曲线的关系来表示。

需要注意的是，HPLC分析的方法会因分析的具体目的和分析物的性质而有所不同。

因此，在进行HPLC分析之前，建议参考相关的方法学文献、标准操作程序（SOP）或咨询有经验的分析师。

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高效液相色谱质谱联用仪的使用方法高效液相色谱质谱联用仪（LC-MS）是一种广泛应用于生化分析、药物代谢研究、环境监测等领域的分析工具。

本文将详细介绍高效液相色谱质谱联用仪的使用方法，包括样品准备、设备操作和数据分析等方面。

一、样品准备1. 样品的选择与制备在进行LC-MS分析前，首先需要选择适合的样品进行测试。

样品的选择应基于实验的目的和研究对象。

样品制备要注意避免污染和失真，一般要进行样品提取、纯化和浓缩等步骤。

2. 样品溶解与稀释对于固体样品，可以选择合适的溶剂将其溶解，并根据需要进行稀释。

溶解和稀释过程中要注意保持样品的稳定性和一致性，避免对分析结果产生影响。

二、设备操作高效液相色谱质谱联用仪的操作步骤如下：1. 仪器开机与系统准备打开仪器电源，同时进行系统的准备工作。

包括启动色谱柱热箱和质谱仪，检查气源和溶剂供应等情况。

2. 参数设置与方法建立根据实验需要，设置合适的色谱条件和质谱参数。

包括进样量、流动相组成、流速、柱温等参数。

方法建立时要充分考虑分析物的性质和要求，确保分离和检测的准确性。

3. 样品进样与洗脱将预处理好的样品注入进样器进行进样。

根据方法要求进行样品洗脱，通常包括梯度洗脱、等温洗脱等步骤。

注意控制流速和温度，保证洗脱效果和色谱分离的质量。

4. 质谱检测与数据采集确保质谱仪的工作状态正常，进行质谱检测和数据采集。

根据实验要求选择合适的离子模式和检测模式，确保检测的准确性和灵敏度。

三、数据分析完成LC-MS分析后，需要对数据进行处理和分析，以获得所需的结果。

数据分析的步骤主要包括质谱图解析、峰识别和峰面积积分等。

1. 质谱图解析根据样品的特点和分析目的，对质谱图进行解析。

观察和分析相应的质谱峰，确定目标化合物的质量信息和碎片产物等。

2. 峰识别与峰面积积分通过峰识别算法，识别出样品中的不同成分并测量其峰面积。

根据峰面积可以计算出物质的相对含量。

3. 结果分析与报告根据实验目的和要求，对数据进行进一步的分析和解释。

高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，用于分离
和定量分析化合物的混合物。

以下是HPLC的基本使用方法：
1. 样品准备：将待分析的混合物或溶液准备好，通常需要进行前处理，例如过滤、稀释或提取。

2. 系统准备：打开色谱仪的电源，启动仪器，确保所有组件处于正常工作状态。

检查液相、气相和其他溶剂的供应，并确保其质量良好。

3. 进样：将样品注射器连接到色谱柱，并根据实验要求设置注射器体积。

将样品注射器插入进样口，并将样品注入到色谱柱。

4. 创建梯度：根据分析要求，创建一个梯度程序。

这涉及到设置流动相的组成和梯度变化的速率。

5. 运行分析：点击开始按钮，启动分析过程。

色谱系统将自动进行溶剂梯度变化，使样品中的化合物逐步从色谱柱中分离出来。

6. 数据采集和分析：在分离过程中，色谱仪将采集到一系列数据点，包括峰高、峰面积、保留时间等。

使用相关的数据处理软件，可以对这些数据进行处理和分析。

7. 清洗和维护：在分析完成后，需要进行系统的清洗和维护。

这包括冲洗色谱柱、清理进样器和其他组件，并储存色谱仪在
正确的环境条件下。

以上是高效液相色谱仪的基本使用方法。

具体的使用流程和操作步骤可能会有细微的差异，取决于具体的仪器品牌和型号。

建议在使用前仔细阅读和理解相关的操作手册和使用说明。