高效液相色谱定性定量分析方法==

高效液相色‎谱法的计算‎方法高效液相色‎谱法是用高‎压输液泵将‎具有不同极‎性的单一溶‎剂或不同比‎例的混合溶‎剂、缓冲液等流‎动相泵入装‎有固定相的‎色谱柱，经进样阀注‎入供试品，由流动相带‎入柱内，在柱内各成‎分被分离后‎，依次进入检‎测器，色谱信号由‎记录仪或积‎分仪记录。

1、对仪器的一‎般要求所用的仪器‎为高效液相‎色谱仪。

色谱柱的填‎料和流动相‎的组分应按‎各品种项下‎的规定。

常用的色谱‎柱填料有硅‎胶和化学键‎合硅胶。

后者以十八‎烷基硅烷键‎合硅胶最为‎常用，辛基键合硅‎胶次之，氰基或氨基‎键合硅胶也‎有使用；离子交换填‎料，用于离子交‎换色谱；凝胶或玻璃‎微球等，用于分子排‎阻色谱等。

注样量一般‎为数微升。

除另有规定‎外，柱温为室温‎，检测器为紫‎外吸收检测‎器。

在用紫外吸‎收检测器时‎，所用流动相‎应符合紫外‎分光光度法‎（附录ⅣA）项下对溶剂‎的要求。

正文中各品‎种项下规定‎的条件除固‎定相种类、流动相组分‎、检测器类型‎不得任意改‎变外，其余如色谱‎柱内径、长度、固定相牌号‎、载体粒度、流动相流速‎、混合流动相‎各组分的比‎例、柱温、进样量、检测器的灵‎敏度等，均可适当改‎变，以适应具体‎品种并达到‎系统适用性‎试验的要求‎。

一般色谱图‎约于20分‎钟内记录完‎毕。

2、系统适用性‎试验按各品种项‎下要求对仪‎器进行适用‎性试验，即用规定的‎对照品对仪‎器进行试验‎和调整，应达到规定‎的要求；或规定分析‎状态下色谱‎柱的最小理‎论板数、分离度和拖‎尾因子。

(1) 色谱柱的理‎论板数(N，用于定量表‎示色谱柱的‎分离效率，简称柱效)。

在选定的条‎件下，注入供试品‎溶液或各品‎种项下规定‎的内标物质‎溶液，记录色谱图‎，量出供试品‎主成分或内‎标物质峰的‎保留时间t‎R（以分钟或长‎度计，下同，但应取相同‎单位）和半高峰宽‎(W h/2)，按n＝5.54(t R/W h/2)2计算色谱‎柱的理论板‎数，如果测得理‎论板数低于‎各品种项下‎规定的最小‎理论板数，应改变色谱‎柱的某些条‎件（如柱长、载体性能、色谱柱充填‎的优劣等），使理论板数‎达到要求。

高效液相色谱法的计算方法高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。

1、对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪。

色谱柱的填料和流动相的组分应按各品种项下的规定。

常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。

后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用；离子交换填料，用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等，用于分子排阻色谱等。

注样量一般为数微升。

除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。

在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法（附录ⅣA）项下对溶剂的要求。

正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。

一般色谱图约于20分钟内记录完毕。

2、系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子。

(1) 色谱柱的理论板数(N，用于定量表示色谱柱的分离效率，简称柱效)。

在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t R（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半高峰宽(W h/2)，按n＝5.54(t R/W h/2)2计算色谱柱的理论板数，如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。

(2) 分离度(R)定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。

高效液相色谱测定原理
高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析方法，它基于样品在液相中的分配
行为以及在固定相上的吸附和解吸行为。

它能够对样品中的物质进行分离、定量和定性分析。

高效液相色谱的原理如下：
1. 选择性分离：高效液相色谱中，样品混合物被注入装有固定相（柱填充物）的色谱柱中。

不同物质在柱填充物上的吸附和解吸速度不同，因此可以通过调整流动相的组成、温度和流速等参数来实现对样品中物质的选择性分离。

2. 吸附-解吸过程：在高效液相色谱中，样品溶解于流动相中，与固定相表面发生相互作用。

这个过程涉及吸附和解吸，吸附过程发生在固定相表面，解吸过程发生在固定相表面和流动相中物质的分配行为。

通过控制流动相的性质和柱填充物的特性，可以实现对不同物质的选择性吸附和解吸。

3. 柱填充物：高效液相色谱柱的填充物通常是多孔性固体颗粒，如硅胶或石英。

填充物的选择与样品的性质和分离的目的有关。

柱填充物的粒径、孔径和表面性质将影响色谱分离的效果。

4. 检测器：高效液相色谱的结果通过检测器进行检测和记录。

常见的检测器包括紫外可见光检测器、荧光检测器、电化学检测器等，根据待分析物的性质和浓度选择适当的检测器。

总之，高效液相色谱是利用样品在液相中的分配和在固定相上的吸附解吸过程进行分离和定量分析的方法。

通过调整柱填充物、流动相和检测器等参数，可以实现对样品中不同物质的选择性分离和定量测定。

药学专业中药学的定性与定量分析方法探讨药学专业中的中药学是研究中药的性质、成分、功效和应用的学科。

在中药学研究中，定性与定量分析是非常重要的方法。

本文将探讨药学专业中药学的定性与定量分析方法，以及其在中药研究中的应用。

一、定性分析方法定性分析是通过观察和比较样品的性质、形态、色泽等特征，来确定其成分和性质的方法。

在中药学中，定性分析常用于鉴别中药材的真伪和质量。

以下是几种常见的定性分析方法：1. 宏观鉴别法：通过观察中药材的外观特征，如形状、大小、颜色等，来判断其真伪和质量。

例如，黄芩的外观应为黄色，若发现颜色异常，则可能为假冒品。

2. 显微镜鉴别法：利用显微镜观察中药材的细胞结构和组织特征，来鉴别其真伪和质量。

例如，黄连的表皮细胞应有明显的蓝色细胞壁，若观察到细胞壁缺失或变形，则可能为假冒品。

3. 化学试剂鉴别法：通过与特定化学试剂的反应，来鉴别中药材的成分和性质。

例如，用碘液滴在地黄片上，若出现紫色或蓝色反应，则说明含有甾体类化合物。

二、定量分析方法定量分析是通过测定样品中特定成分的含量，来确定其质量和功效的方法。

在中药学中，定量分析常用于评估中药制剂的含量和药效。

以下是几种常见的定量分析方法：1. 薄层色谱法：将样品溶解后，在薄层色谱板上进行分离，然后用特定显色剂显色，并通过比色法测定色斑的强度，来计算样品中目标成分的含量。

2. 高效液相色谱法：将样品溶解后，通过高效液相色谱仪进行分离，然后根据峰面积或峰高来计算样品中目标成分的含量。

该方法具有灵敏度高、分离效果好的优点。

3. 气相色谱法：将样品挥发后，通过气相色谱仪进行分离，然后根据峰面积或峰高来计算样品中目标成分的含量。

该方法适用于挥发性物质的定量分析。

三、定性与定量分析方法的应用定性与定量分析方法在中药学研究中有着广泛的应用。

定性分析方法可以用于鉴别中药材的真伪和质量，确保中药材的安全有效；定量分析方法可以用于评估中药制剂的含量和药效，指导中药的合理使用。

高效液相色谱法测定萘乙酸的含量一、实验目的1、学习高效液相色谱仪的操作。

2、了解高效液相色谱法测定萘乙酸的基本原理。

3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。

二、实验原理将已配制的浓度不同的萘乙酸标准溶液进入色谱系统。

如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间t R和峰高A后，可直接用t R定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定未知浓度萘乙酸的含量。

三、仪器和试剂1、Agilent 1100高效液相色谱仪。

2、色谱柱：Zorbax C8，5µm，250×4.6mm，20μL定样环。

3、流动相：H2O和CH3OH4、萘乙酸标准溶液：精密称取萘乙酸标准品制成浓度(mg/L)分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、2、5、8、10、15、20 mg/L的对照品溶液，放入冰箱备用。

5、未知物萘乙酸6、平头微量注射器。

四、实验步骤1、开机(1) 检查流动相、废液瓶和色谱柱；(2) 打开打印机和计算机的电源；(3) 自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符）；(4) 打开工作站。

2、编辑方法(1) 选择“Method”菜单，然后“EDIT METHOD”依屏幕提示进入以下设定：(a）泵对话框：设定泵的流速：1.0mL/min；H2O和CH3OH线性梯度洗脱：H2O 0 min：10%；1 min：20%；3 min：30%；4 min：30%；(b）检测器对话框：设定波长337 nm。

(2) 单击“Method”菜单，选中“Save Method As…”，输入方法名，单击OK。

(3) 从“Run Control”菜单中选择“Sample Info…”选项，输入操作者名称，在“Data file”中选择“Manual”或“Prefix”。

(4) 单击Ok，等仪器Ready，基线平稳。

高效液相色谱1．高效液相色谱法的特点特点：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量准确度高，应用围广。

适用于分析高沸点、大分子、强极性、热不稳定有机及生化试样的高效别离分析方法。

2.高效液相色谱与气相色谱的主要区别可归结于以下几点：(1)进样方式的不同：高效液相色谱只要将样品制成溶液，而气相色谱需加热气化或裂解；(2)流动相不同，在被测组分与流动相之间、流动相与固定相之间都存在着一定的相互作用力；(3)由于液体的粘度较气体大两个数量级，使被测组分在液体流动相中的扩散系数比在气体流动相中约小4~5个数量级；(4)由于流动相的化学成分可进展广泛选择，并可配置成二元或多元体系，满足梯度洗脱的需要，因而提高了高效液相色谱的分辨率〔柱效能〕；(5)高效液相色谱采用5~10Lm细颗粒固定相，使流体相在色谱柱上渗透性大大缩小，流动阻力增大，必须借助高压泵输送流动相；(6)高效液相色谱是在液相中进展，对被测组分的检测，通常采用灵敏的湿法光度检测器，例如，紫外光度检测器、示差折光检测器、荧光光度检测器等。

3.高效液相色谱的定性和定量分析的方法定性：〔1〕利用纯物质定性的方法利用保存值定性：通过比照试样中具有与纯物质一样保存值的色谱峰，来确定试样中是否含有该物质及在色谱图中位置。

不适用于不同仪器上获得的数据之间的比照。

利用参加法定性：将纯物质参加到试样中，观察各组分色谱峰的相对变化。

〔2〕利用文献保存值定性相对保存值r21：相对保存值r21仅与柱温和固定液性质有关。

在色谱手册中都列有各种物质在不同固定液上的保存数据，可以用来进展定性鉴定。

定量：有归一法、标法、外标法在定量分析中，采用测量峰面积的归一化法、标法或外标法等，但高效液相色谱在别离复杂组分式样时，有些组分常不能出峰，因此归一化法定量受到限制，而标法定量则被广泛使用。

4．高效液相色谱实验时，选择流动相时应注意的几个问题〔1〕尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。

高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，用于分离
和定量分析化合物的混合物。

以下是HPLC的基本使用方法：
1. 样品准备：将待分析的混合物或溶液准备好，通常需要进行前处理，例如过滤、稀释或提取。

2. 系统准备：打开色谱仪的电源，启动仪器，确保所有组件处于正常工作状态。

检查液相、气相和其他溶剂的供应，并确保其质量良好。

3. 进样：将样品注射器连接到色谱柱，并根据实验要求设置注射器体积。

将样品注射器插入进样口，并将样品注入到色谱柱。

4. 创建梯度：根据分析要求，创建一个梯度程序。

这涉及到设置流动相的组成和梯度变化的速率。

5. 运行分析：点击开始按钮，启动分析过程。

色谱系统将自动进行溶剂梯度变化，使样品中的化合物逐步从色谱柱中分离出来。

6. 数据采集和分析：在分离过程中，色谱仪将采集到一系列数据点，包括峰高、峰面积、保留时间等。

使用相关的数据处理软件，可以对这些数据进行处理和分析。

7. 清洗和维护：在分析完成后，需要进行系统的清洗和维护。

这包括冲洗色谱柱、清理进样器和其他组件，并储存色谱仪在
正确的环境条件下。

以上是高效液相色谱仪的基本使用方法。

具体的使用流程和操作步骤可能会有细微的差异，取决于具体的仪器品牌和型号。

建议在使用前仔细阅读和理解相关的操作手册和使用说明。

华南师范大学实验报告学生姓名：杨秀琼学号：20082401129专业：化学年级班级：08化二课程名称：仪器分析实验实验项目：液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯实验类型：综合实验时间：2010/416一、[实验目的:]1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法2、了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术二、[实验原理:]高效液相色谱法：以液体作为流动相的色谱法。

它是在经典液相色谱实验基础上，引入气相色谱的理论，在技术上采用高压输液泵，高效固定相和高灵敏的检测器，而发展起来的快速分离分析技术。

具有分离效能高，检出限低，操作自动化和应用范围广的特点。

其基本原理：利用欲分配的诸组分在固定相和流动相间的分配有差异（即由不同的分配系数），当两相做相对运动时，这些组分在此两相中分配反复进行，从几千次到百万次，即使组分的分配系数只有微小差异，随着液体流动相却可以有明显的差异，最后使这些组分都得到分离，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。

三、[仪器和试剂:]1.主要仪器：岛津液相色谱仪(LC-10AT)[配有紫外检测PhenomenexO柱]；10μL微量注射器2、试剂：甲醇、水苯和甲苯混合待测溶液苯标准溶液：2.0μL/mL甲苯标准溶液：2.0μL/mL苯、甲苯混合标准溶液：1.0μL/mL、2.0μL/mL、5.0μL/mL、10.0μL/mL 四、[实验步骤]1、按操作规程开机。

2、.选择合适的流动相配比，优化色谱条件通过调节溶剂甲醇和水的混合比例，从而来优化色谱调剂。

调好最佳色谱条件，控制流速为1ml/min 。

柱温30℃，检测波长354nm 3、苯、甲苯定性分析在最佳条件下，待基线走稳后，用10μL 微量注射器分别进样10μL 苯和 甲 苯混合待测溶液，10μL 苯标准溶液（2.0μL/mL）和10μL 甲苯标准溶液（2.0μL/mL）(微量注射器用甲醇润洗3～5遍)，观察并记录色谱图上显示的保留时间，确定苯和甲苯的峰。