下载文档原格式
实验二番茄红素和β-胡萝卜素的提取及薄层层析法分离一、实验目的（1）理解薄层层析的分析原理（2）学习从番茄中提取番茄红素和β-胡萝卜素的方法（3）掌握薄层层析法基本操作（4）学会用薄层层析法鉴定番茄中的番茄红素和β-胡萝卜素二、实验原理番茄红素主要来源于番茄（西红柿）、南瓜、西瓜、柿子、桃、芒果、葡萄、草莓、柑橘等果实，茶的叶子及胡萝卜、甘蓝等根部也含有番茄红素。
由于番茄红素具有抗氧化、抑制突变、降低核酸损伤、减少心血管疾病及预防癌症等多种功能，因此，番茄红素日益受到营养界的关注。
番茄红素β-胡萝卜素存在于黄、红色蔬菜中，以胡萝卜中含量尤富。
番茄中也含有一些β-胡萝卜素。
它是维生素A的前体，人体中缺乏维生素A可引起夜盲症，而且会影响正常的生长发育。
β-胡萝卜素番茄红素和β-胡萝卜素都是类胡萝卜素。
本实验先用乙醇将番茄脱水，然后用环乙烷提取，最后利用二者的极性差异用薄层层析法（TLC法）鉴定。
三、实验步骤（一）、番茄中番茄红素和β-胡萝卜素的提取1、除水分称取番茄4g于研体中→捣烂→在漏斗中沥去水分→用纸巾包裹残渣→在研体中滤去水分→加3ml95%乙醇→搅拌→压出乙醇液并弃去→重复一次除水操作→得到残渣2、提取番茄红素和β-胡萝卜素置残渣于研体中→加2ml环己烷→搅拌→提取液移至干燥的小试剂管中→加少量的无水硫酸钠→充分振摇→试管口塞上棉花，置于暗处备用（二）薄层层析1、点样TLC板→画起点线、终点线和标记样品点→点样2、展开层析缸（底部垫滤纸）→加适量环己烷后展开→取出TLC板→立即用铅笔标记溶剂前沿和圈出斑点3、计算计算比移值Rf四、思考题（一）拖尾现象产生之原因及解决方法：1、点样量太多，展开剂不能全部负载。
解决方法：寻出合适之点样量后，再进行层析。
2、展开剂pH值偏高。
如以中性展开剂层析酸性物质时，常形成斑点拖尾。
解决方法：在展开剂中加入酸，使解离受到抑制，即可防止斑点拖尾。
3、展开剂的pH值偏低。
研究型、综合性大学化学实验的设计与探讨——番茄红素和β-胡萝卜素的提取及含量的分析测定
梁少敏;罗亚红;周炽晖;陈志豪;梅俊超;樊亚鸣
【期刊名称】《化工高等教育》
【年(卷),期】2007(24)6
【摘要】我们设计了一套综合性的大学化学实验--番茄酱中天然色素的提取、分离及含量测定.其中通过三种实验技术的组合,四个可调控位点(A-D)的设计,构成了一整套实验方案.从而将传统分块的化学实验有机地结合起来,在训练实验操作技能的同时,还使学生感受到了科学研究中的多种思路与最佳解决方案.
【总页数】4页(P83-86)
【作者】梁少敏;罗亚红;周炽晖;陈志豪;梅俊超;樊亚鸣
【作者单位】广州大学,化学化工学院,广东,广州,510006;广州大学,化学化工学院,广东,广州,510006;广州大学,化学化工学院,广东,广州,510006;广州大学,化学化工学院,广东,广州,510006;广州大学,化学化工学院,广东,广州,510006;广州大学,化学化工学院,广东,广州,510006
【正文语种】中文
【中图分类】G64
【相关文献】
1.从番茄提取番茄红素与β-胡萝卜素的工艺研究 [J], 王襄宾;孔明航;刘玲
2.红肉脐橙果肉中番茄红素和β-胡萝卜素含量的变化及外源ABA对其含量的影响
[J], 王贵元;夏仁学;张红艳;周开兵
3.教学研究型大学综合性设计性实验的深层次探讨 [J], 范海燕;解利群
4.《从番茄中提取番茄红素和β-胡萝卜素》实验综述报告 [J], 邹影;王洪涛
5.番茄红素原料及保健食品中番茄红素、β-胡萝卜素含量测定通用方法的建立 [J], 李彬;于佳;侯俐南;刘慧锦;何欢;张伟清;王海燕
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
β―胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定β—胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定一、实验目的1、学习从天然产物中提取有机化合物的方法。
2、学习用薄层层析法检验有机化合物的基本原理，点样，展开和计算Rf 值的方法。
二．仪器和试剂仪器三角瓶（50ml）、分液漏斗（150ml）、蒸馏瓶（50ml）、普通蒸馏装置（或减压蒸馏装置）、漏斗、色谱柱、硅胶薄层板、量筒、烧杯、层析缸。
试剂胡萝卜、丙酮、石油醚（bp30~60℃）、硅胶（层析用，200~300目）、无水硫酸钠、石油醚（bp60~90℃）、丙酮：石油醚（1：9）（V/V）。
三．实验方案1、含类胡萝卜素石油醚溶液的制备将新鲜胡萝卜洗净、擦干,切去尾部，切碎。
称取碎鲜胡萝卜【1】10g于小研钵中,研碎。
碎胡萝卜移至50mL三角烧瓶中，每次用丙酮10mL萃取2次，再用石油醚（bp30~60℃）萃取固体两次，每次10mL。
把石油醚溶液加到丙酮液中。
在分液漏斗中将混合液与50mL饱和氯化钠溶液【2】振荡，分去下层，用蒸馏水洗涤上层液两次，每次50mL，分去水，用无水硫酸钠干燥石油醚液（约1h）,把混合液倒入50mL圆底烧瓶中，热水浴加热蒸馏，除去溶剂，得固体。
在制得的固体物加入3mL石油醚（bp60~90℃）拌硅胶1g，在通风橱内抽干，得黄色硅胶颗粒，待上柱。
2、装柱和分离取20cm*1cm色谱柱一根，垂直装置，以50ml三角烧瓶作洗脱液的接受器。
用镊子取少许脱脂棉【3】放于干净的色谱柱底部，轻轻塞紧，再在脱脂绵上盖一层厚0."5cm的海石砂（或用一张比柱内径略小的滤纸代替），关闭活塞，向柱内倒入石油醚（bp60－90℃）至约为柱高的3／4处，打开活塞，控制流出速度为1滴/s。
通过一干燥的玻璃漏斗慢慢加入层析硅胶。
用洗耳球轻轻敲打柱身，使填装紧密。
当装填到3/4时，再在上面加一层0."5cm厚的海石砂，操作时一直保持上述流速，注意不能使液面低于砂子的上层。
番茄酱中番茄红素和β—胡萝卜素的提取别离及分析测定一、实验目的1、理解有机溶剂提取番茄红素和β—胡萝卜素的方法及原理2、掌握萃取别离过程的根本操作3、掌握层析柱的操作4、掌握分光光度法的测定色素含量的方法5、掌握实验数据的处理及色素含量的计算方法二、实验原理番茄酱浓缩了番茄中的番茄红素和β-胡萝卜素，二者的构造均属于类胡萝卜素。
因而在构造上极为相似。
番茄红素构造化学式如下：β-胡萝卜素构造化学式如下：类胡萝卜素为多烯类色素，不溶于水而溶于脂溶性有机溶剂。
本实验先用较高极性的溶剂提取较高极性的色素，同时脱去样品中的存在的少量水分；再用较低极性的溶剂补充提取较低极性的色素。
因为低极性溶剂不与水混溶，故先除去水分后才能有效地从组织中较完全地萃取类胡萝卜素。
根据番茄红素与β-胡萝卜素极性的差异，用柱层析可以将它们别离。
番茄红素在不同的有机溶剂里均有类似的吸收峰,最大吸收峰的波长在500nm附近，将别离后的样品溶解在适当的溶剂中,在最大吸收峰处用分光光度计测定溶液的吸光度；番茄红素标准品价格昂贵,且本身稳定性差,不宜长期保存。
根据苏丹红〔Ⅰ〕在500nm附近和番茄红素、β-胡萝卜素具有一样的吸收特性，以苏丹红代替番茄红素作为标准品，用氯仿作为溶剂及参比液，在500nm 附近测定苏丹红的系列吸光度，绘制标准曲线；用番茄红素的提取液的吸光度值在此标准曲线上查取相应浓度，以此来表征番茄红素的浓度。
通过换算得到番茄酱中该色素的含量。
β-胡萝卜素的含量采用色价的测定及计算方法。
色价是色素在商业上的浓度计量方式，定义为单位质量原料的提取物在1％浓度、以1cm比色皿在其最大吸收峰处的吸光度。
色价的特点是不需要校准样，也不需作标准曲线，简单快速。
具体操作是取样品m克，在天平上准确称重，用Vml石油醚溶解，以石油醚作参比液，在λmax下测量样品溶液的吸光度A，样品色价E按下式计算：三、物理常数名称分子式相对分子质量外观熔点℃溶解度最大吸收波长λ水乙醇氯仿石油醚番茄红素536.88针状深红色晶体174不溶微溶可溶可溶485～500nmβ-胡萝卜素536.88紫红或暗红色结晶或结晶性粉末176～182不溶微溶可溶可溶 480nm四、试剂和仪器1、试剂及原料亨氏番茄酱、95%乙醇〔C.P〕、二氯甲烷〔C.P〕、石油醚〔60-90℃〕、氯仿〔A.R〕、中性氧化铝〔C.P〕、氯化钠〔C.P〕、无水硫酸钠〔C.P〕、苏丹红Ⅰ〔C.P〕2、仪器回流装置、恒温磁力搅拌器、层析柱(15cm左右内径为1-1.2cm)、分析天平, 移液管、容量瓶、VIS-7220分光光度计五、实验步骤1、混合色素的提取称取新鲜番茄浆[1]10g于50ml枯燥的圆底烧瓶中，加极性的试剂(建议用95%乙醇)［A］20ml，摇匀，装上回流冷凝管及恒温磁力搅拌器，在相应温度的水浴中加热，回流5分钟，冷却后抽滤，滤液直接进入一个的50ml锥形瓶中。
从番茄提取番茄红素与β-胡萝卜素的工艺研究
王襄宾;孔明航;刘玲
【期刊名称】《江西食品工业》
【年(卷),期】2009(000)002
【摘要】研究从番茄中提取、分离番茄红素与β-胡萝卜素的工艺技术.结果表明:在丙酮、石油醚、正己烷、乙酸乙酯4种溶剂中,丙酮对β-胡萝卜素和番茄红素的提取率最高.丙酮提取的次数以3次较为适宜.用中性氧化铝柱色谱,依次用石油醚与氯仿洗脱,可分离β-胡萝卜素与番茄红素.丙酮提取番茄类胡萝卜素的适宜工艺条件为:温度60℃、时间4 h、pH值5、料液比1∶5.
【总页数】4页(P39-42)
【作者】王襄宾;孔明航;刘玲
【作者单位】长江大学生命科学学院,湖北,荆州,434025;湖北省国营大垸农场,大垸,433300;长江大学生命科学学院,湖北,荆州,434025
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.番茄酱中八氢番茄红素的提取工艺研究 [J], 吴增宝;彭代萍;陈文
2.研究型、综合性大学化学实验的设计与探讨——番茄红素和β-胡萝卜素的提取及含量的分析测定 [J], 梁少敏;罗亚红;周炽晖;陈志豪;梅俊超;樊亚鸣
3.《从番茄中提取番茄红素和β-胡萝卜素》实验综述报告 [J], 邹影;王洪涛
4.番茄酱中八氢番茄红素的提取工艺研究 [J], 吴增宝;彭代萍;陈文
5.番茄酱中八氢番茄红素的提取工艺研究 [J], 吴增宝;彭代萍;陈文;
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实验五：从番茄酱中提取番茄红素和β胡萝卜素
一、实验目的
1.学习从天然产物中提取有机化合物的方法。
2.学习用薄层层析法检验有机化合物的基本原理，点样，展开和计算R f值的方法。
二、提取方法
1.浸取法：选用合适的溶剂，根据相似相溶原理，直接把溶剂加到固体样品上加热回流提取，
本次试验就用的是此法。
平时熬中药也是使用的该方法。
用水煮中药就是把中药的有效成分提取出来。
2.水蒸汽蒸馏法：天然动植物中含有一些较易挥发的成分。
利用水蒸汽可以把这些物质蒸出
提取。
天然的很多香料的提取（如橙油的提取）就是用的此法。
3.连续提取法：原理同第一种方法，但是使用了一种特殊的装置—索氏提取器。
使用少量的
溶剂能重复用来浸取达到浓缩的目的。
如：茶叶种咖啡因的提取就是用此法。
三、本实验中的具体方法
1.取一平勺番茄酱于50ml圆底烧瓶中，加5 ml 95％的乙醇，装上冷凝管，回流3-5分钟，冷
却。
用玻璃漏斗垫棉花过滤。
滤液置于带塞子的锥形瓶内，滤渣放回原烧瓶。
加入乙醇的目的是破坏细胞壁，为下一步用石油醚的提取创造条件。
2.上部的滤渣及棉花一起放入烧瓶中，加入10 ml石油醚，加热回流10分钟，冷却，过滤。
滤
液和上面滤液合并，滤渣扔掉。
3.将合并的滤液倒入分液漏斗中，加入5 ml饱和食盐水，萃取，分层。
其中有机层进行薄板
层析，无机层作对比用。
加入饱和食盐水的目的：1）盐析，分层快且清；2）因为NaCl溶液是饱和水溶液，所以溶解有效成分少，即损失小。
4.有机相加入少量Na2SO4干燥—很重要。
β-胡萝卜素是合成VB6的原料，极性小，Rf值大，
在上边。
番茄红素极性大，Rf值小，在下边。
四、本实验中薄板层析的爬板
1.介绍色谱法包括薄层法，柱色谱，纸色谱气相色谱和液相色谱。
今天只作薄层色谱。
2.色谱法是分离和鉴定有机化合物的常用方法。
3.原理：利用混合物个组分在固定相和流动相的溶解度不同，即在两相间分配系数的不同而
使各组分分开。
4.特点：时间短；分离效果好；需要样品量少；适用于在较高温度下容易发生化学变化的化
合物。
5.事先准备：用铅笔和尺子轻轻画出起始线和终止线；
6.点样：用直径1mm的平头毛细管点取提取物，先在废纸上点一下（快速），然后在起始线
线上少量多次地点样（保证一定浓度，一般需要50次以上）。
待溶剂挥发以后，轻放到装好展开剂地展开缸内，不要让展开剂溅起或倾斜；
7.展开（爬板）：当展开剂爬到终止线时，停止爬行，取出。
因为β-胡萝卜素（黄点）易挥
发，所以要尽快画出黄点的位置；
8.Rf值的计算：分离效果好时Rf应为0.15 ~ 0.75之间。
9.意义：定性鉴定，监测化学反应等等。
10.点样：再薄板一端10mm（下）及另一端5mm（上）处用铅笔轻轻画一道痕迹，用直径小于
1mm的毛细管（平口）点样，点样时要做到少量多次，保证样品点小而又有一定的浓度，一块板上可以点两个点。
11.展开剂的选择：根据样品的极性而定，极性大的化合物可选用极性较大的展开剂。
为达到
较好的分离效果，可用混合溶剂。
做多次展开后可确定一合适的配比。
展开时，溶剂前沿离板顶5mm停止。
12.显示方法：A)有色化合物可直接观察；B)无色的，用显色剂显色，如碘熏法；紫外光显色，
用硅胶GF254，有样品点的位置再紫外灯光照射下发暗。
13.R f值计算公式：R f = 样品中某组份移动离开原点的距离/ 展开剂前沿距离原点中心的距离
五、注意事项
•本次实验使用95％乙醇和石油醚提取。
两种混合后用NaCl水溶液洗涤。
乙醇主要进入水相，建议水相不要弃去。
点样时在一块板上点两点：一为有机相，一为水相。
观察比较有何不同。
•展开剂的配比控制在石油醚:丙酮=9:1。
同时可以做一个比较，采用12:1。
在混合展开剂中丙酮的极性大于石油醚，因此如果丙酮含量增大，极性增大，使得分离效果很差。
如果增加石油醚的含量，使展开剂的极性变小，分离效果较好。
•观察：如果红点紧追黄点，且Rf>0.75，则要增加石油醚的用量如达到12:1。
•番茄红素为红色，β-胡萝卜素为黄色，展开后的薄板放置一段时间后，样品颜色褪去。
因为β-胡萝卜素极易氧化，故在提取和展开过程中，注意不要敞开口，要用瓶盖盖住。
•番茄红素的双键比β-胡萝卜素的双键多，因此番茄红素的极性大，在爬板时爬地慢，在下面，β-胡萝卜素的极性小，爬地快，且易氧化。
•展开缸用后不要用水洗！
•薄板展开后临摹在实验报告上，板用后洗干净放回窗台上地塑料筐内。
•在实验报告临摹一块走好的薄板—最理想的。
六、所用仪器
1．50ml圆底烧瓶
2．球形冷凝管
3．25ml锥形瓶
4．50ml锥形瓶
5．14#/19#变口
6．梨形分液漏斗
7．5ml量筒
8．10ml量筒
9．滴管
10．药勺
11．搅拌棒
12．展开缸
13．塞子2个
14．普通漏斗共15件。
