主动外排泵oqxAB基因在肠球菌中检测及药物敏感性分析

鲍曼不动杆菌RND主动外排泵的表达与耐药性的关系陈娇;刘康;李剑平;吴秀珍;胡雪飞;陈开森;陈贺【摘要】目的检测鲍曼不动杆菌耐药结节分化家族(RND)外排系统的分布,探索其表达与耐药性的关系.方法对南昌大学第一附属医院临床标本分离的59株多重耐药鲍曼不动杆菌进行细菌的鉴定与药敏分析,采用PCR技术检测鲍曼不动杆菌中RND主动外排系统的分布情况,比较不同耐药表型的鲍曼不动杆菌间外排泵基因的表达情况,分析其表达量与耐药的关系,并对RND外排系统的扩增产物进行测序.结果鲍曼不动杆菌对氨苄西林/舒巴坦、亚胺培南、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星耐药率高达 93.2%、94.9%、88.1%、96.6%、52.5%.59株鲍曼不动杆菌经外排泵及整合子基因 PCR扩增检测,adeR、adeS、adeB、adeJ、adeG基因的携带率分别为81.4%、91.5%、93.2%、100.0%、61.0%.不同菌株外排泵基因的表达均不相同,其中庆大霉素、亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦耐药组与非耐药组鲍曼不动杆菌adeB、adeJ基因的表达量相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05).adeABC 外排泵的调控基因ade R、ade S的碱基序列未出现基因突变或插入序列.结论RND外排系统在鲍曼不动杆菌中普遍存在,RND外排系统中ade B、ade J基因的表达水平升高与细菌对庆大霉素、亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦的耐药性有关.%Objective To detect the distribution of resistance-nodulation (RND)efflux pump system of Acineto-bacter baumannii (AB),and explore the r elationship between its’expression and antimicrobial resistance.Methods Fifty-nine strains of multidrug-resistant AB isolated from clinical specimens in The First Affiliated Hospital of Nan-chang University were identified and performed antimicrobial susceptibility analysis,distribution of RND efflux sys-tem of AB was detected bypolymerase chain reaction(PCR),expression of efflux pump genes in different drug-re-sistant phenotypes of AB was compared,relationship between the expression level and drug resistance was analyzed, amplified products of RND efflux system were sequenced.Results Resistance rates of AB to ampicillin/sulbactam, imipenem,gentamicin,ciprofloxacin,and levofloxacin were 93.2%,94.9%,88.1%,96.6%,and 52.5% respec-tively.PCR detection results of efflux pump and integron genes of 59 AB strains revealed that the carrying rates of adeR,adeS,adeB,adeJ,and adeG genes were 81.4%,91.5%,93.2%,100.0%,and 61.0% respectively.The expression of efflux pump genes in different strains was different,expression levels of ade B and adeJ genes among gentamicin,imipenem,ampicillin/sulbactam resistant AB group and non-resistant AB group were significantly dif- ferent (all P＜0.05).There was no mutation or insertion sequence in the base sequences of regulatory genes ade R and ade S of adeABC efflux pump.Conclusion RND efflux pump system is universally present in AB,the expres-sion upregulation of ade B and ade J genes in RND efflux pump system is related with antimicrobial resistance of bacteria to gentamycin,imipenem,and ampicillin-sulbactam.【期刊名称】《中国感染控制杂志》【年(卷),期】2018(017)011【总页数】7页(P951-957)【关键词】鲍曼不动杆菌;耐药性;RND外排系统;adeR;adeS;adeB;adeJ;adeG【作者】陈娇;刘康;李剑平;吴秀珍;胡雪飞;陈开森;陈贺【作者单位】江西卫生职业学院,江西南昌 330052;江西卫生职业学院,江西南昌330052;江西卫生职业学院,江西南昌 330052;江西卫生职业学院,江西南昌330052;南昌大学第一附属医院,江西南昌 330006;南昌大学第一附属医院,江西南昌 330006;南昌大学第二附属医院,江西南昌 330006【正文语种】中文【中图分类】R378鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii，AB)是医院感染的常见病原菌之一，广泛分布在医院环境中，可引起严重的肺炎、尿路感染、血流感染等多种医院感染，特别易引起免疫力低下重症患者的感染[1-3]。

最新：耐多黏菌素肺炎克雷伯菌的诊治进展摘要近年来，多耐药及泛耐药的肺炎克雷伯菌检出率日益上升，因此，多黏菌素作为对大多数多耐药菌株依然敏感的抗生素，获得了越来越多的关注。

然而，多黏菌素的广泛使用可能会对肺炎克雷伯菌产生诱导作用，使其产生耐药性。

同时，异质性耐药现象的出现也增加了临床上对耐多黏菌素肺炎克雷伯菌的防治难度。

目前临床上除了依赖多黏菌素联合其他抗生素来治疗耐多黏菌素肺炎克雷伯菌感染之外，新型抗菌药物的研发也成为研究的热点。

同时探索对多黏菌素耐药性的早期检出方法有助于优化和完善耐多黏菌素肺炎克雷伯菌的诊疗策略。

本文综述了近年来有关耐多黏菌素肺炎克雷伯菌的流行现状、产生机制、检出方法及其防治措施。

肺炎克雷伯菌是一种革兰阴性菌，属肠杆菌科(Enterobacteriaceaefami1y\克雷伯菌属(KIebSiei1aSPeCieS),主要存在于人类肠道、呼吸道及泌尿生殖道中，可与宿主共生，也可作为机会性病原体或病原体引发感染。

根据中国疾控中心发布的2009-2023年间全国急性呼吸道感染患者的病原学检测结果，肺炎克雷伯菌是我国常见的呼吸道革兰阴性致病菌之一[11肺炎克雷伯菌引发的感染多为机会性感染的医疗相关感染,死亡率较高，为临床诊治带来了较大困难，因此，对肺炎克雷伯菌防治措施的研究成为了临床上关注的重点。

目前针对肺炎克雷伯菌的经验性治疗仍常用β-内酰胺类、氨基糖苗类及喋诺酮类抗生素，然而由于抗生素滥用带来的选择压力，近些年来肺炎克雷伯菌的耐药问题日益严重。

根据中国细菌耐药监测网（CHINET）公布的2005—2023年的监测数据，肺炎克雷伯菌的耐药性逐年上升，耐药谱逐渐变广，这一现象大大限制了抗生素的使用。

为了应对临床上愈发严重的耐药现象，多黏菌素作为一类对目前大多数多重耐药菌株敏感的抗生素，在临床上得到了广泛的应用。

它是一种由多黏芽泡杆菌产生的环肽类阳离子抗生素，包括A s B、C、D、E五种类型,目前临床上仅使用多黏菌素B和多黏菌素E进行抗菌治疗［21多黏菌素可与革兰阴性菌外膜脂多糖（1PS）中脂质A的磷酸基团结合，将自身疏水部分插入细胞膜，改变其通透性，随后通过自发摄取机制透过外膜并将其破坏，导致细胞渗透失衡，达到杀菌目的。

主动外排泵oqxAB基因在大肠杆菌中的流行调查及其传播机制兽医临床常见致病菌对抗菌药物的耐药率正呈逐年上升趋势,且呈多重耐药性。

致使细菌获得多重耐药的因素有很多,最常见的是主动外排泵耐药机制。

其中,21世纪初新发现的oqxAB基因可编码主动外排泵,介导多重耐药,致使致病菌对喹嗯啉类、氟喹诺酮类及氯霉素类等抗菌药物敏感性降低。

前期研究发现其在国内养殖厂中广泛流行,主要存在于肠杆菌科的大肠杆菌、肺炎克雷伯菌和沙门氏菌中,近几年oqxAB在人医临床也得以发现,怀疑因喹噁啉类药物在动物的使用过程中选择出对喹噁啉类、喹诺酮类耐药的细菌,并通过食物链传递给人类病原菌；近年来研究学者将其归入质粒介导的喹诺酮类药物耐药(PMQR)家族,属于RND家族。

由质粒编码可在不同种细菌间水平传播和转移,增强了oqxAB主动外排基因的广泛流行,而当前国内外对主动外排泵oqxAB基因的研究仍处于发展阶段,相关资料报道较少,存在许多研究空白。

而加强oqxAB主动外排耐药基因的流行调查及其传播机制研究,将具有较强的现实意义和创新价值：一是丰富和补充oqxAB的流行病学内容,有助于掌握oqxAB基因在人医和兽医临床的分布情况；二是探索oqxAB主动外排泵对多重耐药现象的贡献作用；三是探索或掌握其传播机制,有利于切断传播途径或控制传染源,降低多重耐药菌株的传播和扩散,其意义深远,更对公共卫生安全、人类健康保护作用重大。

基于此,本课题开展以下多项研究：(一)采用VITEK-32全自动细菌鉴定系统,从河南省郑州、焦作、登封、济源等不同地区的不同养殖厂和宠物医院进行临床致病菌的分离、鉴定。

并对获得的临床菌株按照CLSI(2010)提供的方法和标准进行常用抗菌药物的最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concertration,MIC)值测定,判定临床致病菌对常用药物的敏感率和耐药率,对比分析不同源菌株的多重耐药情况。

结果共分离、鉴定获得136株动物源大肠杆菌,其中宠物犬源53株、猫源4株、兔源32株、鸵鸟源25株和鸭源22株；另外自河南省人民医院医学检验科获赠50株河南省人源致病性大肠杆菌。

替加环素临床有效性及耐药机制研究进展摘要替加环素是一种独特的甘氨酰环素类半合成抗菌剂，用于治疗由多重耐药革兰氏阳性和革兰氏阴性病原体引起的多种微生物感染。

通过在米诺环素的9 位添加甘环酰胺部分，替加环素避开了主要的四环素抗性遗传机制，例如四环素特异性外排泵获取和核糖体保护。

胃肠外形式的替加环素被批准用于成人复杂的皮肤和皮肤结构感染（不包括糖尿病足感染）、复杂的腹内感染和社区获得性细菌性肺炎。

新证据还表明替加环素治疗严重艰难梭菌的有效性感染。

替加环素在体外对Coxiella sPP.、立克次体sPP.和多药耐药淋病奈瑟菌菌株表现出易感性，这表明替加环素可能用于治疗由这些病原体引起的感染。

除了某些革兰氏阴性菌固有的或经常报告的耐药性外，替加环素对多种多重耐药的医院内病原体有效。

在此，我们总结了目前关于替加环素药代动力学和药效学、其作用机制、替加环素耐药流行病学及其临床有效性的可用数据。

介绍耐多药 (MDR) 或广泛耐药 (XDR) 细菌病原体的发病率不断增加，这是一个主要的公共卫生问题，由于住院时间延长、发病率和死亡率升高，给医疗保健系统带来了经济负担。

替加环素是一种四环素类抗菌剂，用于治疗多种微生物 MDR 感染，包括革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。

替加环素，称为 GAR-936 或 Tygacil，是第一个独特的甘氨酰环素类半合成药物，以肠胃外形式给药，并于 2005 年获得美国食品和药物管理局 (FDA) 的批准。

后来，在 2010 年，FDA 发布了一项警告，称使用替加环素治疗严重感染和败血症与全因死亡风险增加显着相关。

目前，替加环素已被批准作为成人单药治疗三种适应症，包括复杂性皮肤和皮肤结构感染 (cSSTI)，不包括糖尿病足感染、复杂性腹腔内感染 (cIAI) 和社区获得性细菌性肺炎 (CAP) ，最近的证据表明替加环素可能有效治疗严重的艰难梭菌感染。

对替加环素的耐药性包括染色体或辅助基因编码机制。

2021版：临床重要耐药菌感染传播防控策略专家共识（全文）摘要：耐药菌的传播严重威胁人类健康，目前耐药问题日益加剧，给医疗卫生造成极大负担。

加强耐药菌感染的预防、控制和诊疗能力建设是医疗机构防控耐药菌感染传播的重要内容。

本共识分析当前临床重要耐药菌的流行病学、耐药机制及实验室检测现状，并提出耐药菌感染传播防控的专家推荐意见，旨在提高防控意识，规范临床重要耐药菌感染传播防控策略，明确防控流程。

关键词：耐药菌多重耐药菌流行病学耐药机制感染防控耐药监测医院感染在过去的二十年，抗菌药物耐药病原菌已经成为全球重大公共卫生威胁。

根据《中国抗菌药物管理和细菌耐药现状报告(2019)》[1]公布的数据，全国细菌耐药监测网(China Antimicrobial Resistance Surveillance System, CARSS)2018年耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)、耐万古霉素屎肠球菌(VREM)、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)、耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IPM-R-PA)、耐亚胺培南鲍曼不动杆菌(IPM-R-AB)的分离率已达30.9%、1.8%、1.4%、10.1%、18.4%和52.6%。

各种病原菌可在人与人之间传播，且主要通过接触传播，医院内患者尤其是免疫缺陷患者往往是泛耐药菌的易感人群。

泛耐药菌感染者和定植者均是传染源，医务人员也可能因为泛耐药菌的定植而成为新的传染源，导致在一定范围内的暴发流行。

世界卫生组织(WHO)等国际组织已提出综合防控措施，包括病原菌监测、手卫生、接触预防、患者隔离、环境消毒等措施[2-4]，但国内尚缺乏完善的、针对中国自身国情的临床重要耐药菌综合防控措施技术体系。

本共识组织相关专家撰写了临床重要耐药菌感染传播防控策略，涉及通用策略和个性化策略，供临床参考。

1 术语定义1.1 耐药(resistance)微生物对临床治疗(常规)使用的关键药物的敏感性减弱、丧失[5]。

外排泵在肺炎克雷伯菌对左氧氟沙星耐药中的作用江培涛;吴钧;方敏;马超;李琛泽【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2022(43)15【摘要】目的探讨肺炎克雷伯菌(KP)中外排泵OqxAB、AcrAB和QepA介导的左氧氟沙星(LVX)耐药机制。

方法选择分离自南京鼓楼医院集团仪征医院2018年7月至2020年12月的门诊和住院患者的106株KP(剔除同一患者相同部位的重复分离株),采用微量肉汤稀释法检测KP对常用抗菌药物的敏感性,根据药物敏感试验结果随机选择24株对LVX耐药的KP作为试验组,27株LVX非耐药的KP作为对照组。

采用羰基氰氯苯腙泵抑制法检测KP的外排泵表型,采用实时定量反转录PCR检测外排泵OqxAB、AcrAB和QepA相应表达基因OqxA、acrB和QepA 的表达水平,采用常规PCR及测序检测acrR基因突变。

分析两组KP外排泵基因表达水平的差异,LVX最低抑菌浓度(MIC)与外排泵基因表达水平间的关联性,以及两组KP外排泵表型的差异。

结果试验组与对照组KP外排泵表型试验结果差异无统计学意义(P>0.05)。

两组KP外排泵基因OqxA、QepA表达水平差异无统计学意义(P>0.05),而acrB表达水平差异有统计学意义(P<0.05),且试验组acrB表达水平与LVX的log 2MIC呈正相关(r=0.544,P<0.05)。

试验组调控因子acrR突变率为58.3%(14株),携带突变型acrR基因的KP(14株)与携带野生型acrR基因的KP(10株)之间acrB表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。

结论外排泵是介导KP 对LVX耐药的机制之一,AcrAB在外排泵介导KP对LVX耐药中具有明显作用;OqxAB和QepA虽广泛分布于KP中,但并不是介导KP对LVX耐药的主要机制。

【总页数】7页(P1874-1880)【作者】江培涛;吴钧;方敏;马超;李琛泽【作者单位】南京鼓楼医院集团仪征医院/扬州大学医学院附属医院检验科;南京医科大学附属脑科医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R446.5;R378.996【相关文献】1.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌外排泵转录水平与耐药的关系2.多耐药肺炎克雷伯菌外排泵基因研究3.肺炎克雷伯菌外排泵基因研究与耐药性的关系4.主动外排系统与肺炎克雷伯菌耐药关系研究5.外排泵抑制剂用于肺炎克雷伯菌耐药逆转的研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大肠杆菌主动外排泵与抗生素多重耐药性研究进展周黎明;王正荣;王浴生【期刊名称】《四川生理科学杂志》【年(卷),期】2003(025)004【摘要】@@ 细菌对抗生素的耐药性是感染性疾病治疗失败的重要原因之一.细菌可对某类抗菌药物产生耐药性,也可同时对多种化学结构各异的抗菌药物耐药即多重耐药性(Multiple antibiotic resistance 或 Multidrug resistance).细菌多重耐药性可表现在细菌对抗生素的原发耐药性,即细菌固有的天然耐药性(Intrinsic resistance),如常见于革兰阴性细菌及分枝杆菌.细菌也可能通过基因突变等机制进一步提高原有的耐药水平而形成继发耐药性(Acquired resistance).细菌多重耐药性的研究在过去的几年中是颇为活跃的研究领域,有关研究日渐细致深入,并已用于指导新药的开发研制.【总页数】2页(P163-164)【作者】周黎明;王正荣;王浴生【作者单位】四川大学华西医学中心基础药理教研室,成都,610044;四川大学华西医学中心基础药理教研室,成都,610044;四川大学华西医学中心基础药理教研室,成都,610044【正文语种】中文【中图分类】R96【相关文献】1.幽门螺杆菌多重耐药性与其外排泵抑制剂研究进展 [J], 郑鹏远;刘志强;张展2.多重耐药鲍曼不动杆菌的主动外排泵基因对β-内酰胺类抗菌药物耐药性的影响[J], 孙静娜;杨继章;王国欣;赵帅;刘泽世;张征3.铜绿假单胞菌主动外排泵介导的多重抗生素耐药性 [J], 李显志4.苦丁茶和小飞扬草对多重耐药性大肠杆菌外排泵acrA基因表达的影响 [J], 刘坤友;周艳;陈桂生;刘凤玲;李明5.铜绿假单胞菌多重药物主动外排泵与抗生素耐药 [J], 吴安华;罗晓燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

替加环素耐药机制的研究现状王健;沈继录【期刊名称】《中国感染与化疗杂志》【年(卷),期】2017(017)002【总页数】5页(P219-223)【关键词】替加环素;耐药机制;外排系统;双组分系统;细胞膜【作者】王健;沈继录【作者单位】安徽医科大学第一附属医院检验科,合肥 230022;安徽医科大学第一附属医院检验科,合肥 230022【正文语种】中文【中图分类】R978.1替加环素（TGC）是FDA批准的用于治疗复杂性皮肤和软组织感染、复杂性腹腔感染和社区相关细菌性肺炎的抗生素。

随着应用越来越广泛，替加环素产生耐药性不可避免。

替加环素是一种新型甘氨酰环素类抗菌药物，全称为9-叔丁基甘氨酰氨基米诺环素，是继多西环素、米诺环素、美他环素后开发的新一代四环素类衍生抗生素。

该药通过可逆地结合于16S rRNA，阻断tRNA进入A位点，抑制了翻译过程。

替加环素与核糖体的亲和力高于其他四环素类抗生素20倍[1]。

同时，替加环素克服了四环素的耐药机制，如核糖体保护蛋白（tetM、tetO等）和外排泵（tetK、tetA等）[2]，使得替加环素对四环素和米诺环素耐药菌均有作用。

本文通过介绍替加环素耐药性机制，我们可以更加主动地确定相关基因的转移并通过当前的新型“反突变”药物前瞻性的阻止耐药性的产生。

1.1 耐药结节化细胞分化家族（resistance nodulation cell division, RND）1.1.1 AdeABC外排泵 AdeABC是第1个在替加环素耐药的鲍曼不动杆菌中发现的RND型外排泵，是由AdeA、AdeB和AdeC 组成的三联体，其中AdeA是膜融合蛋白，AdeB是外排蛋白，AdeC是外膜通道蛋白。

AdeB从细胞内膜或细胞质中摄取底物，通过AdeC转运到细胞外[3]，在此过程中，AdeA起协调作用，它可使细菌细胞内膜与细胞外膜接近，并能稳定外膜蛋白的结构。

编码泵蛋白的adeABC基因无论在敏感或耐药株中均普遍存在，与耐药株的高表达相比，敏感菌株的表达却很低[4]，提示其可能是细菌产生获得性耐药的原因之一。

多重耐药泵基因oqxAB 的研究进展黄俊红1，谷宇锋1，安博宇1，戴梦红1，程古月1,2,*(1 华中农业大学农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室，武汉 430070;2 华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品兽药残留检测重点实验室，武汉 430070)摘要：耐药节结化细胞分化家族(RND)外排泵蛋白OqxAB 对氟喹诺酮类、喹噁啉类、氨基糖苷类和氯霉素类等多种抗生素以及部分消毒剂类物质具有外排作用，并可由质粒介导传播。

近年来，oqxAB 基因的广泛流行及传播逐渐引发人们的担忧。

本文通过对oqxAB 基因的结构功能、表达调控和流行特征等方面的研究进行综述，旨在说明采取有关措施加强防控oqxAB 基因传播的必要性。

同时，本文也指出结合临床条件的耐药转移调控研究可作为未来的研究热点。

关键词：oqxAB ；流性特征；转移条件中图分类号：R378 文献标志码：A 文章编号：1001-8751(2020)06-0441-13Advances in Multiple Drug Resistance Pump Genes of oqxABHuang Jun-hong 1, Gu Yu-feng 1, An Bo-yu 1, Dai Meng-hong 1, Cheng Gu-yue 1,2(1 MOA Laboratory for Risk Assessment of Quality and Safety of Livestock and Poultry Products (HZAU), Wuhan, 43007; 2 National Reference Laboratory of Veterinary Drug Residues (HZAU) and MOA Key Laboratory for Detection of Veterinary Drug Residues, Wuhan, 43007)Abstract: The oqxAB is a multidrug-resistant efflux gene encoding the OqxAB efflux pump. This pump has efflux effects on fluoroquinolones, quinoxalines, aminoglycosides, chloramphenicol and other antibiotics as well as some disinfectants, and the oqxAB gene is often carried by plasmids. In recent years, the widespread prevalence and spread of oqxAB gene has gradually aroused people’s concern. In this article, the structure, function, expression regulation and epidemic characteristics of oqxAB gene were reviewed to illustrate that measures should be taken to strengthen the prevention and control of oqxAB gene transmission. At the same time, this paper also points out that the study of transfer of drug resistance combined with clinical conditions can be a future research focus.Keywords: oqxAB ; epidemiological characteristics; transfer conditions 收稿日期：2020-05-05基金项目：国家重点研发计划(2017YFC1600100、2018YFD0500300)；国家自然科学基金(31502115)。