乳酸对粪肠球菌的抑菌作用及作用机制
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粪肠球菌生产技术乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。
凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。
这是一群相当庞杂的细菌,目前至少可分为18个属,共有200多种。
除极少数外,其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群,其广泛存在于人体的肠道中。
一、生物学形态:粪链球菌又叫粪肠球菌,其菌体形态为链球或球状,菌体直径大小0.3 μm~0.7μm ,二、菌落形态:在肉汤琼脂平板上形成的菌落圆形、乳白色,表面凸起湿润,有光泽,边缘整齐三、显微镜下形态革兰氏阳性菌,大多数成双或短链状排列,通常不运动,无芽孢。
四、生理特性:(1)粪链球菌分泌的乳酸为L型乳酸,又称为自然乳酸,可全被动物吸收利用。
乳酸杆菌分泌的乳酸L型和D型都有,但D型则不能被动物吸收利用。
在动物的肠道里,粪链球菌可在肠内形成生物薄膜附着在肠道粘膜上,可以在肠道内发育、生长、繁殖,繁殖时问很短,19min分裂一次。
粪链球菌还可把部分蛋白质分解成酰胺和氨基酸,把大部分的碳水化合物的无氮浸出物转化为乳酸,而且能使饲料里的纤维变软,所以饲料的转化吸收率就比较高。
粪链球菌分解的这些特殊营养成分弥补了常规饵料的营养缺陷,对各种养殖动物幼体起到了十分重要的营养强化和促生长作用。
(2)粪链球菌产生的抗菌物质大多是肽或蛋白质,被称为细菌素。
粪链球菌可分泌两类细菌素,一类仅只是对相关的菌有抑制作用,抗菌谱较窄,可阻碍病原微生物接触肠粘膜细胞;另一类具有广谱抗菌活性,它们对致病菌如:沙门氏菌、致贺氏病和假单孢菌都有很好的抑制作用。
所以,长期在饲料中添加粪链球菌可以减少养殖动物肠炎等疾病的发生。
粪链球菌在生长和代谢过程中产生对养殖动物有益的营养物质,如乳酸、氨基酸、维生素、酶及抑菌物质。
在畜禽养殖过程中,添加了粪链球菌不仅有利于提高饲料的消化率,同时也相应降低了排泄物中的氨态氮的浓度,减少了排泄物的不消化物,改善了饲养环境,减少了污染,既有防腐作用又增加饲料的风味,促进养殖动物的食欲。
粪链球菌是什么
一、粪链球菌是什么二、粪链球菌的检验三、粪链球菌作用机理
粪链球菌是什么1、粪链球菌是什么
根据最新分类原则,粪链球菌又叫粪肠球菌。
应用C多糖抗原,根据兰氏血清学分类,可将链球菌分成许多群。
粪链球菌属于D群。
粪肠球菌是革兰氏阳性,过氧化氢阴性球菌,是人和动物肠道内主要菌群之 ,其能产生天然抗生素,有利于机体健康 ;同时还能产生细菌素等抑菌物质,抑制大肠杆菌和沙门氏菌等病原菌的生长,改善肠道微环境 ;还能抑制肠道内产尿素酶细菌和腐败菌的繁殖,减少肠道尿素酶和内毒素的含量,使血液中氨和内毒素的含量下降。
粪肠球菌作为一种益生菌,在医学和食品工程领域得到广泛应用。
另外,肠球菌为消化道内正常存在的一类微生物,在肠黏膜具有较强的耐受和定植能力,并且是一种兼性厌氧的乳酸菌,与厌氧、培养保存条件苛刻的双歧杆菌相比,更适合于生产和应用。
2、粪链球菌的生理特性
2.1、粪链球菌分泌的乳酸为L型乳酸, 又称为自然乳酸或生理乳酸, 可完全被动物吸收利用。
2.2、粪链球菌产生的抗菌物质大多是肽或蛋白质,被称为细菌素。
粪链球菌可分泌两类细菌素, 一类仅只是对相关的菌有抑制作用, 抗菌谱较窄, 可阻碍病原微生物接触肠粘膜细胞;另一类具有广谱抗菌活性, 它们对致病菌如: 沙门氏菌、致辞贺氏病和假单孢菌都有很好的抑制作用。
2.3、饲料中添加粪链球菌可减少养殖中有机物质排泄量,有较地减少水质污染。
在水产养殖水体中,添加了粪链球菌不仅有利于提高饲料的。
乳酸链球菌素抑菌原理
乳酸链球菌素,又称为乳链菌肽(Nisin),是由乳酸链球菌发酵产生的一种天然生物抗菌肽。
它具有广谱抗菌作用,能够有效抑制大部分革兰氏阳性菌及其芽孢的生长和繁殖,特别是对常见的金黄色葡萄球菌、溶血链球菌、肉毒杆菌等细菌抑制作用明显。
因此,乳酸链球菌素被广泛应用于食品行业作为防腐剂。
乳酸链球菌素的抑菌原理主要基于其对细胞膜的干扰作用。
乳酸链球菌素能够吸附到细胞膜上,并在细胞膜上形成孔洞,导致细胞内的物质泄漏和胞外水分子的进入。
这种作用会引起细胞自溶,养分流失和膜电位下降,最终导致致病菌和腐败菌细胞的死亡。
值得注意的是,乳酸链球菌素对革兰氏阴性菌、酵母和霉菌没有抑制作用,专门针对革兰氏阳性菌,特别是细菌芽孢。
此外,在人体肠道内,乳酸链球菌素很快被胰凝乳蛋白酶水解成氨基酸,不会对人体肠道内正常菌群产生不良影响,也不会产生如其他抗菌素所出现的抗性问题或交叉抗性。
因此,乳酸链球菌素被认为是一种高效、无毒、安全、无副作用的天然食品防腐剂。
乳酸链球菌素在乳制品、罐头制品、鱼类制品和酒精饮料等食品中得到了广泛应用,以确保食品的卫生质量和延长保质期。
同时,由于其安全性和有效性,乳酸链球菌素也被认为是未来食品防腐剂的重要发展方向之一。
乳酸菌的原理和应用有哪些1. 乳酸菌的原理乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌,主要以乳酸发酵为代谢特征。
乳酸菌通过发酵糖类产生乳酸,将可消化的物质转化为有机酸,从而抑制有害菌的生长。
以下是乳酸菌的原理:1.1 产酸作用乳酸菌具有产酸的能力,能够将碳水化合物(如葡萄糖)通过发酵转化为乳酸。
乳酸的产生使环境变得酸性,从而抑制了一些有害菌和微生物的生长。
此外,乳酸还能提高认识成熟度、降低胃酸的pH值,起到保护胃壁的作用。
1.2 竞争作用乳酸菌在消化道内与其他微生物竞争营养和生存空间,从而起到抑制有害菌生长的作用。
它们通过占据黏膜表面,使有害菌无法附着并定殖,防止其繁殖滋生。
1.3 抗菌作用乳酸菌不仅能够通过产酸和竞争作用抑制有害菌的生长,还能产生一些抗菌物质,如抗菌酶和抗菌多肽,具有抑制致病菌生长的能力。
2. 乳酸菌的应用乳酸菌广泛应用于食品、饮料和保健品等领域,以下是乳酸菌的一些主要应用:2.1 发酵食品的生产乳酸菌是许多发酵食品的关键成分,如酸奶、酸豆奶、酸味黄油和酸黄瓜等。
乳酸菌能够将乳糖转化为乳酸,使食品呈现出酸性风味,提高食品的风味性和品质。
2.2 益生菌制剂乳酸菌被广泛应用于制备益生菌制剂。
益生菌制剂是指蕴含活性益生菌的产品,能够改善肠道菌群平衡,增强免疫力,改善消化系统功能。
乳酸菌制剂适用于各个年龄段的人群,包括婴儿、儿童、成年人和老年人。
2.3 护肤品乳酸菌被应用于各类护肤品中。
乳酸菌可调节皮肤的酸碱平衡,维持皮肤的自然PH值,有助于改善皮肤保湿、提亮肤色等功效。
乳酸菌护肤品通常以发酵产生的乳酸菌液、乳酸菌提取物等作为活性成分。
2.4 环保领域乳酸菌还可应用于环保领域。
例如,乳酸菌可利用纤维素等有机废弃物进行发酵产乳酸,进一步制备可降解的塑料和生物柴油,减少对环境的污染。
2.5 医药领域乳酸菌在医药领域应用广泛。
乳酸菌能调节肠道菌群平衡,改善肠道健康,对于防治腹泻、便秘等疾病有一定的疗效。
粪肠球菌
产品特点
1.菌种严格筛选
产品所用菌种来源于健康的幼龄动物,针对饲用微生态制剂的要求进行严格筛选,保证产品活力高、抗逆性强,在动物肠道内定植力好,增殖迅速。
2.微囊包被
乳酸菌经独特的微囊包被处理,保证菌体在贮存运输过程中的稳定性和造粒过程中的耐热性,保证菌体能顺利到达肠道作用位点迅速释放并定植。
3.领先的工艺
产品采用国际先进的液态深层发酵工艺和低温干燥制剂工艺,确保产品活性高、稳定性好、无杂菌污染。
作用机制:
1.补充肠道有益菌,抑制有害菌:
添加乳酸菌能够快速促进其它有益菌生长,通过产生细菌素、有机酸、过氧化氢、占位等作用能够有效抑制肠道大肠杆菌、沙门氏菌和产气荚膜梭菌等有害菌的生长繁殖。
2.促进肠绒毛发育和粘膜修复,促进动物生长:
乳酸菌能够合成有机酸、B族维生素和有益的细胞因子。
特别是幼龄阶段,增加肠道绒毛数量,增加绒毛长度,增加肠道吸收面积,提高动物生产性能。
3.提高动物免疫功能:
参与皮肤和粘膜免疫,刺激免疫系统,巩固动物机体三大免疫防线。
4.与药物协同增效:。
粪肠球菌的作用机制及其在养猪业中的应用杨培培刘虎传郝海玉刘开东戴正浩(山东省青岛市畜牧兽医研究所266100)中图分类号:S855.1+1 文献标识码:A 文章编号:1007-1733(2020)04-0074-02粪肠球菌是人类和动物体内的正常菌群之一,也是仔猪生产中常用的益生菌之一,有维持猪肠道菌群平衡、增强肠道屏障功能、增强机体免疫力等多种益生功效。
本文主要对粪肠球菌作用机制及其在养猪生产中的应用进行综述。
1 粪肠球菌的作用机制1.1 调节肠道菌群平衡肠道微生物与宿主之间相互作用,形成一个相互依赖、相互制约和相对稳定的微生态体系。
若肠道菌群平衡受到破坏,导致乳酸菌等有益菌数量降低,大肠杆菌等有害菌数量增加,进而导致出现各种疾病。
Lee等[1]研究发现,粪肠球菌能通过调节肠道黏液成分来抑制致病菌的黏附,同时也能够刺激机体免疫系统来降低大肠杆菌的黏附能力。
粪肠球菌能够产生细菌素、有机酸和挥发性脂肪酸等多种物质,调节肠道内环境[2]。
1.2 增强肠道上皮屏障功能肠道上皮是病原微生物入侵的一道重要防线,也是一道重要的免疫屏障,抑制病原菌及内毒素通过肠道粘膜进入机体。
粪肠球菌能够在动物肠道内形成生物薄膜附着在动物肠道粘膜上,进行正常发育、生长和繁殖,形成乳酸菌屏障,抵御外来毒素和致病菌侵入,这是芽孢杆菌和酵母菌等所没有的功能[3]。
Chichlowskietai等[4]研究发现,粪肠球菌有利于杯状细胞的生长和成熟,杯状细胞分泌的黏液素能促进机体黏附蛋白的分泌,提高菌的黏附力,从而抑制毒素对肠道上皮细胞的侵害。
1.3 增强机体免疫能力 粪肠球菌能够显著增强巨嗜细胞的活性,促进免疫器官的发育,提高动物的免疫反应能力,促进抗体的产生及细胞因子的分泌,从而增强机体的免疫力[5]。
Gill等[6]研究也表明粪肠球菌和嗜酸乳酸杆菌能明显提高脾脏细胞对T细胞与B细胞的增殖反应能力,增加血液中抗体和INF-γ的含量。
乳酸菌抑菌机制论文素材1. 引言乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌,它们被广泛应用于食品工业、农业和医药领域。
乳酸菌具有抑制病原微生物生长的能力,然而,其抑菌机制尚不完全清楚。
本文旨在综述乳酸菌抑菌机制的研究进展,为进一步揭示乳酸菌抗菌作用提供理论依据。
2. 乳酸菌的分类和特性乳酸菌是一类革兰氏阳性菌,主要产生乳酸,并具有以下特性:耐低pH值、耐胆盐、产生抗菌物质、调节肠道菌群、增强免疫力等。
根据不同的分类标准,乳酸菌可分为乳酸杆菌属、双歧杆菌属、嗜热链球菌属等。
3. 乳酸菌的抑菌机制3.1 产生有益抑菌物质乳酸菌通过产生有益抑菌物质来抑制病原微生物的生长。
其中,乳酸是最重要的抗菌物质之一。
乳酸降低环境pH值,使得病原微生物难以生存和繁殖。
此外,乳酸还能通过改变病原微生物的细胞膜结构,导致其死亡。
3.2 竞争性排除乳酸菌在生长过程中占据肠道或其他生态环境的位置,通过与病原微生物竞争营养物质和附着位点,阻断病原微生物的生长和繁殖。
此外,乳酸菌还能产生抗菌酶,如乳酸菌的干扰素,能够降低病原菌的毒力。
3.3 调节免疫功能乳酸菌能够通过调节机体的免疫功能,增强机体对病原微生物的抵抗力。
乳酸菌可以激活巨噬细胞和自然杀伤细胞,促进免疫球蛋白的产生,并提高肠道黏膜屏障的免疫功能。
4. 乳酸菌抑菌机制的研究方法4.1 体外实验体外实验是研究乳酸菌抑菌机制的常用方法之一。
通过将乳酸菌与病原微生物共同培养于培养基中,观察乳酸菌对病原微生物生长的影响,并通过测定抑菌物质的浓度、pH值等参数,来进一步了解乳酸菌的作用机制。
4.2 分子生物学分析分子生物学方法如PCR、基因克隆和基因敲除技术等,可用于研究乳酸菌抑菌机制中的关键基因和代谢途径。
通过研究乳酸菌的基因组和转录组变化,可以揭示乳酸菌在抑制病原微生物生长中的关键分子过程。
5. 乳酸菌抑菌机制的应用乳酸菌作为一种安全、有效的抗菌剂,广泛应用于食品工业、农业和医药领域。
粪肠球菌的作用及功能主治粪肠球菌的介绍粪肠球菌(Fusobacterium nucleatum)是一种常见的肠道细菌,被广泛存在于人类的口腔和胃肠道中。
它属于厌氧菌,可以在缺氧环境中存活和繁殖。
粪肠球菌以其特殊的形态和功能,在人类身体中扮演着重要的角色。
粪肠球菌的主要功能粪肠球菌在人体内发挥以下主要功能:1.消化食物:粪肠球菌参与食物的消化,特别是对于纤维素的分解和吸收具有重要作用。
它可以分解纤维素和其他复杂多糖,产生有益的短链脂肪酸,如丙酸、丁酸和乳酸等,为人体提供能量和营养物质。
2.调节免疫系统:粪肠球菌参与调控人体的免疫系统,维持肠道免疫的平衡。
它能够与肠道黏膜上的免疫细胞相互作用,促进免疫细胞的成熟和功能的调节,增强肠道的抵抗力,预防炎症和感染。
3.保持肠道平衡:粪肠球菌与其他肠道菌群一起维持肠道的微生态平衡。
它可以抑制一些有害菌的生长,防止其过度繁殖,从而保护肠道健康。
此外,粪肠球菌还可以与其他益生菌相互作用,促进其生长和功能,进一步增强肠道的益菌群落。
4.抗肿瘤作用:最近的研究表明,粪肠球菌可能具有一定的抗肿瘤活性。
它可以诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞的增殖,对一些肿瘤类型具有一定的杀伤效果。
这一发现为粪肠球菌在肿瘤治疗中的潜在应用提供了新的思路。
粪肠球菌的功能主治粪肠球菌的多种功能使其具备一定的功能主治能力,主要包括以下方面:1.促进肠道健康:粪肠球菌可以促进肠道的蠕动,减少便秘和消化不良等症状。
它还能够减少肠道内有害菌的数量,预防肠道感染和炎症。
2.增强免疫力:粪肠球菌可以调节人体免疫系统的平衡,增强免疫力,预防感冒、流感和其他感染性疾病。
3.改善口腔健康:粪肠球菌存在于口腔中,与口腔健康密切相关。
它可以抑制一些致病菌的生长,减少口腔感染和龋齿的发生。
4.调节肠道菌群:粪肠球菌可以与其他肠道菌群相互作用,维持肠道微生态的平衡。
它能够促进有益菌的生长,减少有害菌的数量,预防肠道菌群失调导致的相关疾病。
粪肠球菌的生物学特性及其在养殖业中的应用安玉亭;胡浩;王智刚;周新秀【摘要】粪肠球菌(Enterococcus faecalis)是乳酸菌的一类,属于链球菌科(Streptococcaceae)肠球菌属(Enterococcus),细胞呈球形,链状排列,无芽孢,兼性厌氧,为革兰氏阳性菌,是人类和动物肠道中重要菌群之一.粪肠球菌能够调节动物肠道菌群平衡,增强机体免疫力,促进肠道上皮细胞生长与修复,提高饲料转化率,促进动物体生长.该菌容易在动物肠道中定植并发挥作用,具有广阔的应用前景.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2015(000)027【总页数】3页(P115-117)【关键词】粪肠球菌;养殖业;微生态制剂【作者】安玉亭;胡浩;王智刚;周新秀【作者单位】江苏远山生物技术有限公司,江苏盐城224001;南京农业大学,江苏南京210095;江苏远山生物技术有限公司,江苏盐城224001;盐城市亭湖区农业委员会,江苏盐城224001【正文语种】中文【中图分类】S816.1The Biological Characteristics ofEntemcoccusfaecalis and Its Application in Breeding IndustryAN Yu-ting1, HU Hao2*, WANG Zhi-gang1 et al(1. Jiangsu Yuanshan Biological Technology Co., Ltd., Yancheng, Jiangsu 22 4001; 2. Nanjing Agricultural University, Nanjing, Jiangsu 210095)Key wordsEntemcoccusfaecalis; Breeding industry; Microecological agents近年来,我国畜牧水产业飞速发展,提高了居民营养水平,改善了人民生活。
乳酸杆菌产生抗菌物质及其机制研究近年来,乳酸杆菌在益生菌领域中备受关注。
人们发现,乳酸杆菌能够产生抗菌物质,并在某些情况下发挥抗菌作用。
这一发现不仅丰富了人们对乳酸杆菌的认识,同时也为现代医学提供了新的研究方向。
一、乳酸杆菌的产生抗菌物质的研究背景乳酸杆菌被广泛应用于乳制品、饮料、膳食补充剂、动物饲料等领域。
这是因为它能够帮助人体增强免疫力,改善肠道菌群平衡等。
事实上,乳酸杆菌对人类的健康有着广泛的显著作用。
在过去的研究中,人们已经发现了乳酸杆菌产生抗菌物质的事实。
但是,这些物质的种类、机制等方面的研究还没有得到充分的探索。
二、乳酸杆菌能够产生哪些抗菌物质乳酸杆菌产生的抗菌物质主要有四种,分别是乳酸、乳酸菌素、过氧化氢和醋酸。
其中,乳酸和乳酸菌素是较为常见的两种抗菌物质。
乳酸是一种有机酸,常见于酸奶、发酵食品等。
乳酸能够调节菌群的平衡,抑制有害细菌的生长,从而起到抗菌的作用。
研究发现,乳酸能够通过抑制细菌的基本代谢过程来抑制细菌的生长,具有广谱性抗菌作用。
乳酸菌素是乳酸杆菌分泌的一种蛋白质,也是一种较为常见的抗菌物质。
乳酸菌素对一些常见的致病菌具有很强的抗菌作用,例如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等。
乳酸菌素能够破坏致病菌的细胞膜、细胞壁甚至是核酸,从而杀死或抑制细菌的生长。
除了乳酸和乳酸菌素外,过氧化氢和醋酸也具有一定的抗菌作用。
过氧化氢能够通过氧化致病菌的代谢产物来杀死细菌;醋酸则能够降低肠道微生态中有害细菌的数量。
三、乳酸杆菌产生抗菌物质的机制乳酸杆菌产生抗菌物质的机制主要有两个方面:一是对有害细菌造成的促进作用的对抗,二是对有害细菌的主动攻击。
1、对有害细菌造成的促进作用的对抗乳酸杆菌能够对肠道内菌群平衡产生积极的调节作用。
而一些有害细菌正是由于肠道内环境的失衡而导致的。
因此,乳酸杆菌的存在可以促进肠道菌群的平衡,从而抵抗有害细菌的生长。
另外,乳酸杆菌可以利用糖类、蛋白质等物质,转化成乳酸等有害细菌难以适应的代谢产物,从而拉低有害细菌的数量。
条件致病菌肠球菌摘要:肠球菌不像大多数的乳酸菌一样,它不被认为是“安全可靠”(GRAS)。
对于肠球菌的安全评价仍存有争议。
虽然肠球菌被认为是“积极“或在奶酪技术中有用,但它的隔离种群已经作为对人类的条件致病菌出现。
因此,这些细菌对发酵乳制品是否有益处于似是而非的地位,以为它存在有潜在的危险。
本篇综述是概述了肠球菌的积极的和消极的两种特性,并举例说明这个菌的具有争议的特性。
根据食品安全评价准则,我们提出对于每个潜在的技术应变逐个进行评估,并且建议肠球菌在发酵食品中使用前进行个别研究。
1.简介肠球菌最初列为D群链球菌,这种分类可以追溯到由兰斯菲尔德建立的计划。
1984年,肠球菌给予了新的位置被列为肠球菌属,在经过DNA-DNA和DNA-RNA杂交的研究后证明它与链球菌属有较远的关系(Schleifer and Kilpper-Balz, 1984)。
到目前为止32种已被提议列入肠球菌属(2005年10月26号)。
肠球菌种适宜在6.5%氯化钠,40%胆汁盐且pH值在9.6,并可以在60°C的环境下生存30分钟。
大多数品种也可以在10℃至45℃之间生长(Moellering,1992;Flahautet al.,1996)。
粪肠球菌和屎肠球菌都是人类消化道微生物自然存在的菌种,在胃肠道中因为个体差异其含量差异变化很大(在每克消化系统内容物中含有102和108)。
肠球菌通常从食品、植物、水和土壤中分离,可能由于它的来源是粪便使得他们的天性在恶劣环境中比较耐受(Giraffa,2002)。
在牛奶和奶酪制品中通常会找到粪肠球菌、屎肠球菌和少量的坚忍肠球菌,偶然也会发现小肠肠球菌和铅黄肠球菌。
不同于其他乳酸菌,肠球菌不能被认为是“一般认为安全”(GRAS),并且它在水中检测是作为粪便污染物的指标的(Godfree et al.,1997)。
一般认为对于肠球菌的安全评价程序是一个模棱两可的状况。
一方面,肠球菌在作为奶酪技术中作为发酵培养物被认为是由积极作用的(Giraffa,2003);另一方面,它们被认为是新兴的人类病原体(Moellering,1992)。
浅谈乳酸菌代谢产物对微生物生长的抑制作用乳酸菌是一类常见的有益菌,它们属于革兰氏阳性菌,能够产生大量的乳酸作为代谢产物。
乳酸菌在许多食品和饮料中都有广泛的应用,因为它们能够改善食品的口感、延长食品的保质期,并且对人体有益处。
除了这些有益作用以外,乳酸菌代谢产物还对其他微生物的生长产生抑制作用,这一点也是乳酸菌产生的乳酸的重要作用之一乳酸菌产生的乳酸是一种弱酸,这种弱酸能够对微生物的生长产生直接的抑制作用。
乳酸能够降低环境PH值,使得环境酸化,从而使得微生物的生长受到抑制。
大多数微生物对环境PH值都有一定的适应范围,当环境酸化到微生物的适应范围之外时,微生物的生长就会受到抑制。
乳酸酸化环境后能使其他微生物处于不适应环境并无法生存的状态。
此外,乳酸还能干扰微生物的代谢过程,从而对其生长产生抑制作用。
乳酸能够通过负影响微生物的细胞膜功能和营养摄取来抑制微生物的生长。
对于细菌来说,乳酸能够干扰其细胞膜的透性,使得细胞内的物质无法正常摄取和排出,导致细胞的代谢功能受到破坏。
对于酵母菌来说,乳酸能够抑制其对葡萄糖的摄取,使得酵母菌无法正常进行能量代谢,从而导致酵母菌的生长受到抑制。
此外,乳酸菌还能产生其他具有抑制微生物生长作用的代谢产物。
例如,乳酸菌能够产生一些具有抗菌作用的物质,如乳酸菌素、乳酸菌酸等,这些物质能够直接击败其他微生物,并抑制其生长。
此外,乳酸菌还能够产生一些气体,如二氧化碳和酒精等,这些气体能够改变微生物的生长环境,从而对其生长产生抑制作用。
需要注意的是,乳酸菌的抑菌效果并非完全一致,不同的乳酸菌株和不同的微生物对乳酸的抗性有所不同。
有些微生物能够通过适应乳酸环境来增强自身的耐受性,从而降低乳酸菌的抑制作用。
因此,在实际应用中,需要考虑乳酸菌与目标微生物之间的相互作用,选择适当的菌株和条件来达到预期的抑菌效果。
综上所述,乳酸菌代谢产物对微生物生长具有抑制作用。
乳酸菌产生的乳酸能够通过酸化环境、干扰微生物的代谢以及产生具有抗菌作用的物质等方式,抑制其他微生物的生长。
肠道基础菌-乳酸菌之粪肠球菌摘要:粪肠球菌是生物体的正常菌群,直接参与宿主的生理代谢活动,是宿主正常生理活动不可缺少的重要组成部分。
益生肠球菌必须具备某种特性如安全、黏附、竞争排斥、占位和产生抑制物等,才能在微环境中保持优势。
高等动物的胚胎通常是无菌的,出生后数小时内,便可在胎儿的肠道中检出大肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌、棒状杆菌、酵母菌等需氧菌和兼性厌氧菌。
随后厌氧菌逐渐取代需氧菌和兼性厌氧菌,最终占肠道细菌总数的90%,甚至99%以上。
各种动物建立起较稳定和完善的正常菌群所需的时间不等,与各种动物发育的特点及饲养管理密切相关,通常至断奶一段时间才完成。
正常菌群一旦建立,虽然不同生态区内细胞的种类和数量会随着食物的不同和年龄的增长等生理因素而有所改变。
但正常菌群的种类,每种细菌的数量及所占的比例,不同细菌所定居的部位等在每一种动物则是相对稳定的。
正常菌群中的各种细菌依据其特性及其与宿主形成的适应性,定位于不同生态多系统的环境、微环境中,形成各自的群落。
有的细菌经常能从宿主体内分离到,而且数量较多,被称为常住菌。
反之,不能经常从动物和人体分离出来,称为过路菌(外籍菌)。
消化道的不同部位的细菌数量不同:胃内的菌落数低于每克103个(内容物),小肠约在每克104-107个(内容物),大肠约为每克1011-1012个。
动物肠道正常微生物菌群具有重要的生物学作用:①帮助消化:肠道微生物群的主要作用是将上消化道未消化的物质发酵并转化为能量。
如肠球菌、乳杆菌能产生肽酶、可将蛋白质分解为氨基酸,同时乳酸菌能够产生乳酸,降低肠道pH值,增加蛋白酶的活性,孢杆菌能产生蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等,可将不溶性蛋白、脂肪和糖等变为可溶性。
②合成维生素:有益细菌可产生B族维生素例如生物素等,从而加强动物体的营养代谢。
③合成短链:脂肪酸是细菌发酵的主要产物,包括乙酸、丙酸、丁酸。
合成短链脂肪酸可在肠道被迅速吸收,提供给机体能量,并促进营养物质的吸收。
粪肠球菌抑制蜡样芽孢杆菌的原理全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:粪肠球菌和蜡样芽孢杆菌是大肠道菌群中重要的细菌之一,它们在人体内扮演着重要的角色。
粪肠球菌通常存在于大肠道中,参与食物的消化和吸收,同时还能产生一系列对人体有益的物质。
而蜡样芽孢杆菌则是一种潜在的致病菌,能够产生多种毒素,引起食物中毒等疾病。
对蜡样芽孢杆菌的抑制是非常重要的。
粪肠球菌抑制蜡样芽孢杆菌的原理主要包括以下几个方面:1. 竞争营养物质:粪肠球菌和蜡样芽孢杆菌在生长过程中需要吸收营养物质,包括碳源、氮源等。
在共生体系中,当两种细菌同时存在时,它们会竞争有限的营养资源。
由于粪肠球菌生长速度较快,能够更快地利用营养物质,从而减少了蜡样芽孢杆菌的生长空间,进而抑制其繁殖。
2. 分泌抑菌物质:粪肠球菌能够产生一些具有杀菌效果的物质,例如乳酸、醋酸等。
这些物质能够改变环境的PH值,从而导致蜡样芽孢杆菌生长环境的改变,不利于其繁殖。
3. 形成生物膜:粪肠球菌能够在表面形成一层生物膜,通过粘附其他菌种来形成复杂的生物群落。
这种生物膜不仅可以阻隔外界有害物质的进入,还能够限制其他细菌的生长和繁殖,包括蜡样芽孢杆菌。
4. 扰乱代谢途径:粪肠球菌可能通过一些代谢产物来扰乱蜡样芽孢杆菌的代谢途径,从而影响其正常生长和繁殖。
粪肠球菌可能产生一些对蜡样芽孢杆菌有毒性的代谢产物,使其无法正常生长。
粪肠球菌抑制蜡样芽孢杆菌的原理是通过竞争营养物质、分泌抑菌物质、形成生物膜和扰乱代谢途径等多种方式来限制蜡样芽孢杆菌的生长和繁殖。
这种抑制机制在人体内的肠道菌群中起着至关重要的作用,能够维持人体内菌群的平衡,保持健康状态。
了解这些原理对于预防和治疗肠道感染和相关疾病具有重要意义。
【字数:458】第二篇示例:粪肠球菌和蜡样芽孢杆菌是两种常见的细菌,它们在我们的生活和环境中都扮演着重要的角色。
粪肠球菌是一种革兰氏阳性菌,它存在于人体的肠道中,参与了食物消化和营养吸收过程。
乳酸的作用和功能主治1. 乳酸的作用乳酸是一种由乳酸菌发酵产生的有机酸,具有多种重要的作用和功能。
以下是乳酸的主要作用:•食品发酵剂: 乳酸菌发酵工艺中产生的乳酸可以用作食品发酵剂,使食品保持新鲜,并赋予食品特殊的口感和风味。
•抗菌作用: 乳酸具有抗菌作用,可以抑制和杀灭一些有害菌的生长,有助于保持肠道和阴道的微生态平衡,预防感染病的发生。
•调节PH值: 乳酸是一种弱酸,可以在体内调节PH值,维持生理平衡。
例如,乳酸可以帮助调节肌肉酸碱平衡,减少乳酸堆积,延缓肌肉疲劳。
•改善消化: 乳酸可以促进肠道蠕动,增加益生菌的数量,改善消化功能,增强对营养物质的吸收。
2. 乳酸的功能主治乳酸在医学和保健领域有着广泛的应用,具有多种功能主治。
以下是乳酸的主要功能和对应的主治:2.1 缓解乳糖不耐症乳糖不耐症是指由于小肠乳糖酶活性不足而导致的对乳糖消化吸收能力减弱的病症。
乳酸可以帮助分解乳糖,转化为乳酸和其他易于消化的物质,从而缓解乳糖不耐症引起的不适感。
2.2 改善消化功能乳酸菌发酵产生的乳酸可以增加肠道益生菌的数量,促进肠道蠕动,改善消化功能。
乳酸还有助于维持肠道的酸碱平衡,减少有害菌的生长,预防和缓解腹泻和便秘等消化系统疾病。
2.3 增强免疫力乳酸可以激活免疫细胞,促进免疫功能的提高,增强机体的免疫力。
乳酸还可以调节免疫系统的平衡,降低过敏反应的发生。
2.4 促进肌肉恢复乳酸可以帮助调节肌肉酸碱平衡,减少乳酸堆积,促进肌肉恢复。
乳酸还可以提供肌肉燃料,提高运动能力和耐力。
2.5 抗菌消炎乳酸具有抗菌作用,可以抑制和杀灭一些有害菌的生长。
乳酸还可以调节炎症反应,具有一定的抗炎作用。
2.6 维护阴道健康乳酸可以维护阴道的酸碱平衡,减少有害菌的生长,预防和缓解阴道感染和炎症,保持阴道的健康状态。
结论乳酸是一种重要的有机酸,具有多种作用和功能。
它可以用作食品发酵剂,具有抗菌作用,调节PH值,改善消化功能等。
在医学和保健领域,乳酸的功能主治包括缓解乳糖不耐症,改善消化功能,增强免疫力,促进肌肉恢复,抗菌消炎和维护阴道健康等。
乳酸的防腐抑菌机理乳酸是一种广泛存在于自然界中的有机酸,具有抑制微生物生长和防止食品腐败的功效。
乳酸及其盐类,如乳酸钠、乳酸钙等,在食品工业中被广泛应用作为防腐剂和抑菌剂。
其防腐抑菌作用的机理主要包括以下几个方面:1. 降低环境pH值:乳酸在水中能够解离为阳离子和阴离子,其中阴离子Lactate-在水中会与H+结合形成乳酸,这会使得食品的酸度增加,降低环境pH值。
大多数微生物生长的最适宜环境pH范围为6.0-7.5,当环境pH值降低到酸性范围时,微生物的生理活性受到抑制,无法繁殖生长,从而达到防腐抑菌的效果。
2. 抑制微生物代谢:乳酸能够进入微生物细胞膜,干扰微生物的细胞代谢过程。
乳酸能够降低葡萄糖代谢产生的ATP,使微生物能量供应减少,细胞无法维持正常的代谢活性,从而抑制微生物生长。
3. 干扰微生物细胞膜结构:乳酸能够改变微生物细胞膜的结构和功能,从而破坏微生物细胞膜的完整性。
乳酸可以干扰细菌细胞膜上的脂肪酸的合成和组装,导致细菌细胞膜缺陷,使细胞内容物渗漏,最终导致微生物死亡。
4. 产生抗菌作用的副产物:乳酸发酵产生的抑菌剂也可以起到防腐抑菌的作用。
当乳酸发酵时,会产生一系列的副产物,如乳酸菌、醋酸等。
这些副产物具有抑制其他微生物生长的作用,从而进一步增强乳酸的防腐抑菌效果。
综上所述,乳酸的防腐抑菌机理主要包括降低环境pH值、抑制微生物代谢、干扰微生物细胞膜结构以及产生抗菌作用的副产物等。
乳酸及其盐类在食品工业中广泛应用的原因之一就是其抑菌抗菌效果好,能够有效延长食品的保鲜期,并且具有较高的安全性。
然而,需要注意的是,在使用乳酸及其盐类作为防腐剂和抑菌剂时,要根据不同的食品类型和工艺要求确定使用浓度和处理方法,以确保其有效性和安全性。
乳酸杆菌作用机理与运用成效乳酸菌是我国最早公布的可以直接用作饲料添加剂的菌种之一,是畜禽肠道中的优势菌群之一,在动物生长过程中产生的乳酸菌素具有调整胃肠道功能、提高免疫力、改善机体营养状况等作用。
因此其在幼年畜禽消化道中出现和定植的早晚,是影响机体生长和抵抗疾病的重要因素之一[1-4]。
虽然乳酸杆菌只是乳酸菌中的一种,但在动物饲养上的应用相对于球菌却广泛很多,主要是制成乳酸杆菌制剂饲喂给畜禽,以增强畜禽(特别是幼畜)的抗病力[5]。
给初生畜禽饲喂乳酸杆菌制剂后,可使乳酸杆菌在最早的时间内成为消化道内的优势菌群,便于其尽早的发挥抗病作用,是目前较有效的饲喂方法之一[6]。
本文主要就乳酸杆菌的作用机理、影响使用效果的因素及其在单胃动物生产中的应用效果进行综述,旨在为乳酸杆菌在单胃动物生产中的合理应用提供科学依据。
1乳酸杆菌的作用机理1.1优势菌群学说优势菌群指在正常微生物群与动物及环境之间所构成的微生态中,微生物群中对整个微生态系统起决定性作用的菌群[7]。
乳酸杆菌便是肠道中的优势菌种,其可以在动物肠道中迅速的生长繁殖,占统治地位,进而抑制致病菌的定植。
当外界环境变化时便有可能打破菌群处于一种相互协作的平衡状态,有害菌便趁机进入体内快速繁殖,导致出现腹泻等疾病。
若在此时给动物饲喂益生菌制剂,则可以使菌群优势重新在体内形成,恢复体内的菌群平衡,也达到了不使用抗生素便能防治疾病的目的。
此外益生菌还可消耗掉流至肠道后段的有限的营养物质(维生素、矿物质及氨基酸等),从营养竞争角度抑制致病菌生长繁殖。
1.2生物屏障学说生物屏障学说又称为生物颉颃理论,即益生菌黏附在胃肠上皮细胞上占据了上面的黏附位点,形成一层保护性生物膜,使病原菌不能黏附在胃肠上皮。
近年来的研究发现,微生态制剂可对肠道内的正常菌群形成的微生物屏障起到更好的稳固作用,减少环境变化对肠道微生态平衡的影响。
生成的致密性菌群膜,很大程度上减少了病原菌对肠道的破坏;肠道受损上皮细胞还可加速修复。
乳酸的作用和功能主治1. 乳酸的作用乳酸是一种有机酸,由细胞内的葡萄糖通过乳酸发酵代谢产生。
在生物体内,乳酸具有多种重要的作用:•能量供应:乳酸是产生细胞能量的重要途径之一,尤其是在无氧条件下。
当氧气不充足时,肌肉组织中的葡萄糖通过乳酸发酵产生乳酸,作为一种替代能源供应给肌肉细胞。
•抗菌作用:乳酸具有抑制细菌和真菌生长的作用。
在肠道中,乳酸能够降低肠道内的pH值,从而抑制有害菌的生长。
此外,乳酸还能够通过竞争性抑制机制,减少有害菌的黏附和生长,维持肠道菌群的平衡。
•抗氧化作用:乳酸通过增加抗氧化酶的活性,提高细胞的抗氧化能力。
研究表明,乳酸能够减轻氧化应激对细胞的损伤,保护细胞免受自由基的侵害。
•调节免疫功能:乳酸可以调节免疫细胞的活性和功能。
研究发现,乳酸能够增加免疫细胞的活性,促进免疫细胞的增殖和分化,增强机体的免疫功能。
2. 乳酸的功能主治乳酸在医学领域具有多种功能主治,下面将介绍乳酸常见的功能主治及其相关研究:2.1 乳酸在运动中的应用•延缓疲劳:乳酸能够提供运动所需的能量,帮助减轻肌肉疲劳感。
研究表明,通过乳酸的补充,可以延缓疲劳的发生,提高运动能力和耐力。
•促进康复:乳酸有助于运动后的康复和肌肉组织的修复。
研究发现,乳酸能够促进伤口的愈合,减轻运动后的肌肉酸痛,加速肌肉组织的恢复和生长。
2.2 乳酸在肠道健康中的应用•促进肠道菌群平衡:乳酸是肠道益生菌的产物,能够促进有益菌的生长和繁殖,调节肠道菌群平衡。
研究发现,适当补充乳酸可以提高肠道的免疫功能,预防肠道疾病的发生。
•改善消化问题:乳酸具有促进食物消化和吸收的作用,可以改善消化问题,减少胃肠道症状。
研究表明,乳酸能够增加肠道蠕动,促进食物在消化道的运动和吸收。
2.3 乳酸在美容领域的应用•提高皮肤保湿:乳酸具有良好的保湿效果,能够增加皮肤水分含量,改善皮肤干燥和粗糙问题。
研究发现,乳酸能够加强皮肤屏障的功能,减少水分的流失。
•抗皱和美白:乳酸能够促进皮肤细胞的再生和增生,增加胶原蛋白的合成,减少皮肤的皱纹和色斑。
乳酸对粪肠球菌的抑菌作用及作用机制王凤婷;靳盼盼;刘芳;孙芝兰;吴海虹;王道营;许晓曦;徐为民【摘要】目前乳酸常被用来控制食品中腐败菌的生长,但是有关其对食品优势腐败菌抑菌机制方面的研究较少.本试验以一株从肉制品中分离得到的腐败菌粪肠球菌R612-Z1为目标菌株,研究乳酸对其的杀菌效果及作用机制.结果表明,各浓度(0.25%、0.50%、1.00%)的乳酸均有杀菌效果而且作用明显,通过激光共聚焦显微镜及流式细胞仪检测发现,处理后细胞膜通透性增强.扫描电镜及腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)浓度的测定结果说明,胞内物质流出聚集在细胞外侧,胞外ATP浓度和核酸类物质浓度明显上升,膜电势快速升高.因此,乳酸通过破坏粪肠球菌的细胞壁,增加细胞膜通透性,改变细胞内外电势,导致内容物流出,从而达到杀菌效果.%Lactic acid(LA) is widely used to control the growth of contaminating bacteria in food,but there are few reports about the antibacterial mechanism of it. The antimicrobial activity of LA against a dominated spoilage bacterium, Enterococcus faecalis R612-Z1,isolated from water-boiled salted duck was studied. The results showed that all the selected concentrations of LA (0.25%,0.50%, 1.00%) had obvious bactericidal action. The permeability of cell membranes was increased for the bacterial cells treated with 1.00% LA, which was detected using the laser scanning confocal microscope and flow cytometry. The intracellular substances were leaked according to the results of scanning electron micrographs and the detection of extracellular ATP and UV-absorbing materials. The membrane potentials were found to be increased. There-fore,the antibacterial effect of LA on E. faecalis was mainly completed by the massive leakage of intracellular component,which was caused by damaging the cell membrane and membrane potential.【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2018(034)001【总页数】7页(P200-206)【关键词】粪肠球菌;乳酸;抑菌机理【作者】王凤婷;靳盼盼;刘芳;孙芝兰;吴海虹;王道营;许晓曦;徐为民【作者单位】江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨150030;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨150030;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨150030;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014【正文语种】中文【中图分类】TS201.3食品的安全、质量及营养价值是人们密切关注的问题[1]。
食品在收获、加工、运输、储藏过程中容易变质[2],产生有害物质或滋生新的致病菌[3]危害人体健康。
肠球菌存在于人或动物消化道内,特定条件下会成为病原体引发感染性疾病[4],人感染会引起泌尿系统感染、心内膜炎、伤口感染等,动物感染会引发脑炎、关节炎等[5]。
粪肠球菌(Enterococcus faecalis)为肠球菌属革兰氏阳性菌,属于消化道内正常菌群,但污染食品后会引发疾病发生,作为食源性致病菌已在生的猪肉、鸡肉、牛肉及其他动物源食品中检出[6-7]。
由于抗生素的大量使用,粪肠球菌已经对其产生耐药性,因此在临床治疗中有一定难度[8]。
吴悠[9]等使用齐墩果酸和二甲基亚砜有效抑制了粪肠球菌的生长,Tong等[10]研究了多西环素、枸橼酸和去污剂组成的混合物(MTAD)与乳酸链球菌素(Nisin)复配对粪肠球菌的抑菌机理。
在肉类和家禽加工厂中使用最普遍的消毒剂即为有机酸[11],乳酸作为三大有机酸之一[12],能够参与人体正常的代谢[13],在达到杀菌目的的同时不对人体产生危害。
乳酸具有很强的防腐保鲜功能,可作为食品添加剂用于果酒、饮料、肉类、食品等的加工中,具有调节pH、抑菌、调味、保持色泽等作用[14]。
乳酸并非食物[15],广泛存在于发酵类食品中[16],如酸奶、干酪、泡菜等。
国内外有很多关于乳酸菌及其细菌类产物抑菌特性及机理的报道[17-18],但关于乳酸抑菌效果及机理的研究较少。
本研究拟以一株从肉制品中分离得到的粪肠球菌为试验菌株,研究乳酸对其的杀菌作用及机理,以期为今后以乳酸为基础杀菌剂和保鲜剂的研究提供依据。
1 材料与方法1.1 材料与试剂所用菌株为粪肠球菌(Enterococcus faecalis R612-Z1),由江苏省农业科学院农产品加工研究所保存。
试验用的脑心浸液肉汤(BHI)培养基购自北京陆桥生物公司。
乳酸购自天津科密欧生物技术公司,荧光探针羧基荧光素双乙酸酯[5(6)-cFDA]和3,3-Dipropylthiadicarbocyanine iodide[DiSC3(5)]均购自Sigma公司,碘化丙啶(PI)购自生工生物工程公司,腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)检测试剂盒购自碧云天公司。
1.2 仪器与设备所用仪器和设备主要有Accuri C6流式细胞仪(BD公司产品),PE(Ultra View VOX)转盘式激光共聚焦显微镜(铂金埃尔默公司产品),EVO-LS10扫描电子显微镜(蔡司公司产品)和BioPhotometer plus核酸蛋白测定仪(Eppendorf公司产品)。
1.3 方法1.3.1 菌株培养将冻存管中的粪肠球菌R612-Z1接种于新鲜的BHI培养基中,37 ℃、200 r/min培养,待生长至对数期时再次转接于新鲜培养基中,重复3次,备用。
1.3.2 细菌活性试验按培养基体积1.00%接种活化后的粪肠球菌R612-Z1菌液于BHI液体培养基中,37 ℃摇床培养到OD600值为1.0时,取20 ml菌液分别置于不同的离心管中,4 ℃下6 000 g离心10 min,收集菌体沉淀,然后在各管中分别加入相同体积的乳酸溶液,其浓度分别为0.25%、0.50%、1.00%。
将菌悬液放入摇床中,分别在0 min、10 min、30 min、60 min、120 min、180 min取样,使用0.1 mol/L PBS缓冲液按照10倍递增稀释法[19]稀释样品至相应浓度,取100 μl均匀涂布于BHI固体平板上,37 ℃培养24 h,记录菌数。
1.3.3 扫描电镜按培养基体积1.0%接种活化后的粪肠球菌R612-Z1菌液于BHI液体培养基中,在37 ℃摇床中培养至对数期,4 ℃下6 000 g离心10 min,收集菌体沉淀,用0.01 mol/L PBS缓冲液(pH 7.4)洗涤,去掉上清,加入同体积且质量浓度为1.0%的乳酸,以只加入相同体积PBS缓冲液为对照。
37 ℃处理2 h,4 ℃下6 000 g离心10 min,收集菌体沉淀,再用PBS缓冲液洗涤3次,除净上清,4 ℃下用2.5%的戊二醛固定12 h[20]。
在扫描电子显微镜下观察菌体表面形态的变化。
1.3.4 细胞膜渗透性试验1.3.4.1 激光共聚焦显微镜检测使用羧基荧光素双乙酸酯[5(6)-cFDA]和碘化丙啶(PI)来区分活细胞与死细胞[21]。
取对数期的菌液在4 ℃下6 000 g离心10 min,收集菌体沉淀,用0.85%NaCl溶液洗涤菌泥后,其中一份加入同体积质量浓度为1.00%的乳酸,另一份加入同体积生理盐水的菌悬液作为对照,室温下处理2 h,每15 min振荡1次。
收集菌泥重新悬浮在500 μl的生理盐水中,加入荧光探针cFDA(终浓度为100 μmol/L),避光保存10 min,然后加入PI(终浓度为30μmol/L),避光反应10 min。
混合液离心后用500 μl生理盐水悬浮菌泥,取3 μl 菌液到载玻片上,加上盖玻片,置于激光扫描共聚焦显微镜下观察并拍照。
1.3.4.2 胞外ATP及紫外吸收物质的检测取对数期的菌液在4 ℃下6 000 g离心10 min,收集菌泥,使用0.01 mol/L PBS缓冲液(pH 7.4)洗涤3次,将菌泥悬浮在质量浓度为1%的乳酸溶液中,25 ℃下处理,分别在0 min、10 min、30 min、60 min、120 min、180 min取样。
将样品于4 ℃、10 000 g下离心1 min,取上清测定其胞外小分子ATP浓度和紫外吸收物质(主要为核酸和蛋白质等)浓度的变化。
按照ATP测定试剂盒说明书测定样品中ATP的含量,先测出ATP浓度与荧光值的标准曲线,然后在样品中加入ATP检测试剂,混合均匀后通过测定其化学发光值来确定ATP的浓度[22]。
紫外吸收物质的浓度以紫外分光光度计测定的OD260值来表示。
1.3.5 流式细胞仪使用方法1.3.4.1中处理好的菌液,依次用cFDA和PI染色[23],于4 ℃下6 000 g离心10 min,收集菌体,除去多余的荧光探针后,重悬于0.01 mol/L PBS缓冲液中。
在检测过程中以低速率(1 s 400~600个)收集50 000个细胞,分别在525 nm和620 nm处检测样品绿色荧光和红色荧光,然后转化为数字信号。
通过分析每个区域细胞的百分比来确定粪肠球菌的损伤程度。